富硒高蟲(chóng)草素含量的蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種富硒高蟲(chóng)草素含量的蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)方法，依次包括菌種的活化、液體菌種的制備、制備大米培養(yǎng)基、滅菌、接種、菌絲體的培養(yǎng)、轉(zhuǎn)色、子實(shí)體的培養(yǎng)、采收等步驟。本發(fā)明培養(yǎng)出的蟲(chóng)草子實(shí)體不僅硒元素的含量高，還能使培養(yǎng)出的蟲(chóng)草藥用價(jià)值更高且安全性好。
【專利說(shuō)明】
富砸高蟲(chóng)草素含量的蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及一種蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)，一般采用亞砸酸鈉為砸源，具有一定的不安全性。
[0003]白海參又名白玉參，是極為稀有的海參，是由刺參遺傳變異而來(lái)，在自然界極為罕見(jiàn)。據(jù)檢驗(yàn)其體內(nèi)砸的含量高達(dá)630微克/100克，是普通海參的10倍，并且90%以上為有機(jī)砸。目前砸普遍被科學(xué)家稱為人體微量元素中的“防癌之王”，因此白海參對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)有很好的抑制作用，能有效抗癌。另外，海參中鈣、鋅等各種元素含量也很高，蛋白質(zhì)、各種氨基酸含量豐富，尤其是可以補(bǔ)充人體內(nèi)各種必需氨基酸。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種培養(yǎng)出的蟲(chóng)草子實(shí)體不僅砸元素的含量高，還能使培養(yǎng)出的蟲(chóng)草藥用價(jià)值更高且安全性好的富砸高蟲(chóng)草素含量的蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)方法。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:
一種富砸高蟲(chóng)草素含量的蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)方法，其特征是:依次包括下列步驟:
(1)菌種的活化:將蛹蟲(chóng)草菌種接在以下組分的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行活化和優(yōu)化:葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素BI 0.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，瓊脂粉15-20克，加水至1000毫升;將上述液體培養(yǎng)基在121°C，0.1MPa條件下滅菌30分鐘，待冷卻后倒入培養(yǎng)皿中；將蛹蟲(chóng)草菌種接入培養(yǎng)皿中，22°C黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，菌落再轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22°C黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，所得菌種即所需蟲(chóng)草菌種；
(2)液體菌種的制備:
首先按下列配方配制營(yíng)養(yǎng)液A:葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素BI 0.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3_5克，加水至1000毫升;將營(yíng)養(yǎng)液A分裝在500毫升的錐形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121°C，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘，待冷卻后在超凈臺(tái)上接入經(jīng)步驟(I)活化的蟲(chóng)草菌種，再在130轉(zhuǎn)/分鐘，22 °C的搖床中震蕩培養(yǎng)5-9天；
(3)制備大米培養(yǎng)基:
先按以下配方配置營(yíng)養(yǎng)液B:葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素BI 0.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；
大米培養(yǎng)基的制備:用350毫升的廣口培養(yǎng)瓶，每瓶按下列比例裝入培養(yǎng)料:大米35-40克，營(yíng)養(yǎng)液B 40?50毫升，用帶通氣孔的蓋子蓋緊或用聚乙烯塑料膜扎緊培養(yǎng)瓶瓶口 ；
(4)滅菌:將培養(yǎng)瓶放在121°C，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘；
(5)接種:在無(wú)菌條件下，每個(gè)培養(yǎng)瓶接入5毫升液體菌種，封口； (6)菌絲體的培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)瓶移入黑暗條件下培養(yǎng);開(kāi)始溫度保持16°C>18°C4?6天;待培養(yǎng)瓶表面長(zhǎng)滿白色菌絲后將溫度升至20°C>24 °C條件下再培養(yǎng)4?6天，待菌絲吃透培養(yǎng)基后，將培養(yǎng)瓶移到光下培養(yǎng)；
(7 )轉(zhuǎn)色:保持室內(nèi)溫度20 0C-22 °C,濕度60%?70%，光照強(qiáng)度800勒克斯，光照時(shí)間每天12?14小時(shí)；將培養(yǎng)瓶培養(yǎng)3?5天后可見(jiàn)菌絲由白色逐漸轉(zhuǎn)為橘黃色，之后將夜間溫度降至10°C~15°C保持晝夜有5?10°C的溫差，待菌絲表面布滿米粒大小的突起時(shí)，停止晝夜溫差轉(zhuǎn)為恒溫培養(yǎng)；
(8)子實(shí)體的培養(yǎng):保持室內(nèi)溫度200C-220C，濕度60%?70%，光照強(qiáng)度600?800勒克斯，光照時(shí)間每天12?14小時(shí)，待子實(shí)體長(zhǎng)至1」3?4厘米后將室內(nèi)濕度提高到75%?85%，溫度和光照時(shí)間不變；
(9)采收:待子實(shí)體長(zhǎng)到6?8厘米時(shí)，用鑷子將子實(shí)體從培養(yǎng)瓶中夾出，放在通風(fēng)干燥處自然風(fēng)干或65°C烘箱中烘干，將干的子實(shí)體裝在密閉的塑料袋中避光保存。
[0006]步驟(I)中菌落轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上時(shí)，是選取生長(zhǎng)速度快，菌絲致密，顏色純正的菌落轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上。
[0007]本發(fā)明用白海參作為砸源，避免了加亞砸酸鈉的不安全性，培養(yǎng)出的蟲(chóng)草子實(shí)體不僅砸元素的含量高，還能使海參中豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸及其它微量元素作為蟲(chóng)草的營(yíng)養(yǎng)源，使培養(yǎng)出的蟲(chóng)草藥用價(jià)值更高。子實(shí)體粗壯，色澤鮮艷，砸含量可達(dá)到117微克/克，蟲(chóng)草素含量可達(dá)到4.3毫克/克。
[0008]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
【具體實(shí)施方式】
[0009]—種富砸高蟲(chóng)草素含量的蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)方法，其特征是:依次包括下列步驟:
(1)菌種的活化:將蛹蟲(chóng)草菌種接在以下組分的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行活化和優(yōu)化:葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素BI 0.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，瓊脂粉15-20克，加水至1000毫升;將上述液體培養(yǎng)基在121°C，0.1MPa條件下滅菌30分鐘，待冷卻后倒入培養(yǎng)皿中；將蛹蟲(chóng)草菌種接入培養(yǎng)皿中，22°C黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，菌落再轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22°C黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，所得菌種即所需蟲(chóng)草菌種；
(2)液體菌種的制備:
首先按下列配方配制營(yíng)養(yǎng)液A:葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素BI 0.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3_5克，加水至1000毫升;將營(yíng)養(yǎng)液A分裝在500毫升的錐形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121°C，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘，待冷卻后在超凈臺(tái)上接入經(jīng)步驟(I)活化的蟲(chóng)草菌種，再在130轉(zhuǎn)/分鐘，22 °C的搖床中震蕩培養(yǎng)5-9天;待液體中出現(xiàn)均勻的菌球且較粘稠狀可用。
[0010](3)制備大米培養(yǎng)基:
先按以下配方配置營(yíng)養(yǎng)液B:葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素BI 0.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；
大米培養(yǎng)基的制備:用350毫升的廣口培養(yǎng)瓶，每瓶按下列比例裝入培養(yǎng)料:大米35-40克，營(yíng)養(yǎng)液B 40~50毫升，用帶通氣孔的蓋子蓋緊或用聚乙烯塑料膜扎緊培養(yǎng)瓶瓶口 ； (4)滅菌:將培養(yǎng)瓶放在121°C，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘；
(5)接種:在無(wú)菌條件下，每個(gè)培養(yǎng)瓶接入5毫升液體菌種，封口；
(6)菌絲體的培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)瓶移入黑暗條件下培養(yǎng);開(kāi)始溫度保持16°C>18°C4?6天;待培養(yǎng)瓶表面長(zhǎng)滿白色菌絲后將溫度升至20°C>24 °C條件下再培養(yǎng)4?6天，待菌絲吃透培養(yǎng)基后，將培養(yǎng)瓶移到光下培養(yǎng)；
(7 )轉(zhuǎn)色:保持室內(nèi)溫度20 0C-22 °C,濕度60%?70%，光照強(qiáng)度800勒克斯，光照時(shí)間每天12?14小時(shí)；將培養(yǎng)瓶培養(yǎng)3?5天后可見(jiàn)菌絲由白色逐漸轉(zhuǎn)為橘黃色，之后將夜間溫度降至10°C~15°C保持晝夜有5?10°C的溫差，待菌絲表面布滿米粒大小的突起時(shí)，停止晝夜溫差轉(zhuǎn)為恒溫培養(yǎng)；
(8)子實(shí)體的培養(yǎng):保持室內(nèi)溫度200C-220C，濕度60%?70%，光照強(qiáng)度600?800勒克斯，光照時(shí)間每天12?14小時(shí)，待子實(shí)體長(zhǎng)至1」3?4厘米后將室內(nèi)濕度提高到75%?85%，溫度和光照時(shí)間不變；
(9)采收:待子實(shí)體長(zhǎng)到6?8厘米時(shí)，用鑷子將子實(shí)體從培養(yǎng)瓶中夾出，放在通風(fēng)干燥處自然風(fēng)干或65°C烘箱中烘干，將干的子實(shí)體裝在密閉的塑料袋中避光保存。
[0011 ]步驟(I)中菌落轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上時(shí)，是選取生長(zhǎng)速度快，菌絲致密，顏色純正的菌落轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上。
[0012]白海參研磨液的制作:將新鮮的白海參去除內(nèi)臟或泡發(fā)好的白海參放入料理機(jī)中打成勻漿。
[0013]富砸的白海參雖然珍貴稀有，但目前已經(jīng)能夠規(guī)?；斯ゐB(yǎng)殖，生產(chǎn)成本并不高。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種富砸高蟲(chóng)草素含量的蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)方法，其特征是:依次包括下列步驟: (1)菌種的活化:將蛹蟲(chóng)草菌種接在以下組分的液體培養(yǎng)基中進(jìn)行活化和優(yōu)化:葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素BI 0.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，瓊脂粉15-20克，加水至1000毫升;將上述液體培養(yǎng)基在121°C，0.1MPa條件下滅菌30分鐘，待冷卻后倒入培養(yǎng)皿中；將蛹蟲(chóng)草菌種接入培養(yǎng)皿中，22°C黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，菌落再轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上，22°C黑暗條件下培養(yǎng)5-10天，所得菌種即所需蟲(chóng)草菌種； (2)液體菌種的制備: 首先按下列配方配制營(yíng)養(yǎng)液A:葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素BI 0.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3_5克，加水至1000毫升;將營(yíng)養(yǎng)液A分裝在500毫升的錐形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121°C，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘，待冷卻后在超凈臺(tái)上接入經(jīng)步驟(I)活化的蟲(chóng)草菌種，再在130轉(zhuǎn)/分鐘，22 °C的搖床中震蕩培養(yǎng)5-9天； (3)制備大米培養(yǎng)基: 先按以下配方配置營(yíng)養(yǎng)液B:葡萄糖15-20克，硫酸鎂1-2克，磷酸二氫鉀1-2克，維生素BI 0.1-0.5毫克，白海參研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升； 大米培養(yǎng)基的制備:用350毫升的廣口培養(yǎng)瓶，每瓶按下列比例裝入培養(yǎng)料:大米35-40克，營(yíng)養(yǎng)液B 40~50毫升，用帶通氣孔的蓋子蓋緊或用聚乙烯塑料膜扎緊培養(yǎng)瓶瓶口 ； (4)滅菌:將培養(yǎng)瓶放在121°C，0.1MPa條件下，滅菌30分鐘； (5 )接種:在無(wú)菌條件下，每個(gè)培養(yǎng)瓶接入5毫升液體菌種，封口； (6)菌絲體的培養(yǎng):將接種后的培養(yǎng)瓶移入黑暗條件下培養(yǎng);開(kāi)始溫度保持16°C>18°C4?6天;待培養(yǎng)瓶表面長(zhǎng)滿白色菌絲后將溫度升至20°C>24 °C條件下再培養(yǎng)4?6天，待菌絲吃透培養(yǎng)基后，將培養(yǎng)瓶移到光下培養(yǎng)； (7)轉(zhuǎn)色:保持室內(nèi)溫度200C-220C，濕度60%?70%，光照強(qiáng)度800勒克斯，光照時(shí)間每天12?14小時(shí)；將培養(yǎng)瓶培養(yǎng)3?5天后可見(jiàn)菌絲由白色逐漸轉(zhuǎn)為橘黃色，之后將夜間溫度降至10°C~15°C保持晝夜有5?10°C的溫差，待菌絲表面布滿米粒大小的突起時(shí)，停止晝夜溫差轉(zhuǎn)為恒溫培養(yǎng)； (8)子實(shí)體的培養(yǎng):保持室內(nèi)溫度20°022°C，濕度60%?70%，光照強(qiáng)度600?800勒克斯，光照時(shí)間每天12?14小時(shí)，待子實(shí)體長(zhǎng)至1」3?4厘米后將室內(nèi)濕度提高到75%?85%，溫度和光照時(shí)間不變； (9)采收:待子實(shí)體長(zhǎng)到6?8厘米時(shí)，用鑷子將子實(shí)體從培養(yǎng)瓶中夾出，放在通風(fēng)干燥處自然風(fēng)干或65°C烘箱中烘干，將干的子實(shí)體裝在密閉的塑料袋中避光保存。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的富砸高蟲(chóng)草素含量的蟲(chóng)草子實(shí)體的培養(yǎng)方法，其特征是:步驟(I)中菌落轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上時(shí)，是選取生長(zhǎng)速度快，菌絲致密，顏色純正的菌落轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基上。
【文檔編號(hào)】C05G1/00GK106069177SQ201610404341
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月12日
【發(fā)明人】周美紅, 程顯好, 王仲禮
【申請(qǐng)人】魯東大學(xué)