專利名稱：人工培育冬蟲夏草的方法
技術領域：
本發(fā)明屬真菌人工培育技術，涉及一種人工培育冬蟲夏草的方法。
冬蟲夏草是一種極其珍貴的藥食兩用真菌，在真菌學上分類為子囊菌綱、肉座菌目、麥角菌科、草蟲屬。野生冬蟲夏草均寄生在鱗翅目昆蟲體內(nèi)，且對生長環(huán)境要求較高，所以其產(chǎn)量受到極大限制。隨著社會的發(fā)展和人們生活水平的提高，特別是對冬蟲夏草醫(yī)藥作用的進一步挖掘，它的需求量越來越大，僅靠采集野生冬蟲夏草遠不能滿足社會的需要。目前，人工培育的報道很少，僅是在實驗室試管條件下，或是采用發(fā)酵方法生產(chǎn)冬蟲夏草菌絲的方法。如CN1197843A公開的“中國冬蟲夏草真菌的發(fā)酵生產(chǎn)方法”，就是采用液體培養(yǎng)基進行發(fā)酵生產(chǎn)，其產(chǎn)品無子實體。
本發(fā)明的目的是用人工模擬其生長條件的方法，來培育冬蟲夏草子實體，以提高產(chǎn)量，滿足人們的需要。
本發(fā)明采用的培養(yǎng)基原料為大米、玉米、谷糠、蠶蛹粉及由水、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸三銨、維生素B1配制而成的營養(yǎng)液。營養(yǎng)液的配方是每1000毫升水中加葡萄糖10克、蛋白胨5克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、檸檬酸三銨1克、維生素B110毫克。培養(yǎng)基原料組分重量配比為大米20-25％、玉米10-15％、谷糠4-8％、蠶蛹粉1-2％、營養(yǎng)液50-55％。
本發(fā)明的培育方法(步驟)1、培養(yǎng)基的制作。在容器中按上述比例加入大米、玉米、谷糠、蠶蛹粉及營養(yǎng)液，容器封口，用常規(guī)方法滅菌后冷卻備用。
2、接種。在無細菌條件下操作，將冬蟲夏草菌接入培養(yǎng)基中。
3、養(yǎng)菌。將接入菌的容器置于12-17攝氏度的避光環(huán)境下培養(yǎng)20-25天，直至白色菌絲長滿培養(yǎng)基2/3以上。
4、轉(zhuǎn)色。在200勒克斯以上的光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)10天左右，菌絲由白色轉(zhuǎn)為黃色。
5、刺激子實體原基的產(chǎn)生。轉(zhuǎn)色后在晝夜溫差10攝氏度以上的條件下予以刺激10天，培養(yǎng)基表面產(chǎn)生大量子實體原基。晝夜溫差范圍5-25攝氏度，同時在封口處穿孔，使培養(yǎng)空間適度通風，以供給充足的氧氣。
6、子實體生長。在18-25攝氏度、相對濕度85-90％的條件下，穩(wěn)定培養(yǎng)20-25天，子實體長滿容器，長度達6-7cm。
7、摘收。打開封口，用帶彎頭的小鐵鏟將子實體從根部輕輕鏟下，置于陰涼處涼干或烘干。
本發(fā)明的顯著優(yōu)點及積極效果1、人工培育的冬蟲夏草經(jīng)中國綠色食品學會檢驗，與天然冬蟲夏草的化學成分基本相同；氨基酸種類完全相同，其含量大部分比天然冬蟲草高出一倍。具體成分見附表1。
無機元素 在測定的26種無機元素中有15種元素與天然冬蟲草相同，含量甚微；其余11種元素的含量較高，具體含量列入附表2。其中Ca、Al、Si、Zn、Cr略高于天然冬蟲夏草，Ti、Cu略低于天然冬蟲夏草，F(xiàn)e比天然冬蟲夏蟲低270ppm，Mn低45ppm，重金屬含量不超過15ppm。
核苷 人工與天然冬蟲夏草的核苷類化合物含量比較接近，但人工蟲草多含腺苷。具體含量列入附表3。
麥角甾醇和D-甘露醇。送檢樣品的麥角甾醇含量比天然蟲草高出一倍，分別為0.15％和0.069％；D-甘露醇含量則比天然蟲草低30％，分別為5.5％和8.1％。
維生素核黃素含量基本相同，為1.25mg/100g；硫胺素含量比天然蟲草高得多，分別為0.34mg/100g和0.018mg/100g；β-類葫蘿卜素含量為0.76mg/100g，而天然蟲草中未檢出；維生素C含量大大低于天然蟲草，分別為4mg/100g和23.1mg/100g。
2、人工培育的冬蟲夏草與天然冬蟲夏草的藥理功能無明顯差異。
選用美國小白鼠進行動物試驗，分為三組I空白、II人工蟲草、III天然蟲草。以一定劑量連續(xù)分別喂養(yǎng)45天，對其12項生理指標測試，結(jié)果表明II、III組明顯優(yōu)于I組，II、III組之間無明顯差異。證明人工冬蟲夏草在藥理藥效上與天然冬蟲夏草基本一樣，屬藥食兩用高級滋補品。
3、人工培育冬蟲夏草的方法具有較高的產(chǎn)量，采用室內(nèi)立體培育，單位平方米每周可采150-200g，具有較好的經(jīng)濟效益。
4、本發(fā)明可極大地滿足人們?nèi)找嬖龃蟮膶Χx夏草的需求，保護野生冬蟲夏草資源，具有較大的社會效益。
實施例1培養(yǎng)基為大米20％、玉米10％、谷糠4％、蠶蛹粉1％、營養(yǎng)液50％。其中營養(yǎng)液的配方為1000毫升水中加葡萄糖10克、蛋白胨5克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、檸檬酸三胺1克、維生素B110毫克。培育步驟1、將上述培養(yǎng)基裝入容器中，用聚丙烯塑料膜封口，置于0.1Mpa、120攝氏度下滅菌1.5小時后冷卻備用；2、將冬蟲夏草菌接入培養(yǎng)基中(在無菌條件下操作)；3、將接入菌種的容器置于12攝氏度的避光環(huán)境下培養(yǎng)20天，生長菌絲；4、在200勒克斯以上的光照條件下培養(yǎng)10天轉(zhuǎn)色；5、將轉(zhuǎn)色后的菌絲體在晝夜溫差10攝氏度以上(白天5攝氏度，夜晚15攝氏度)的條件下刺激10天，并用牙簽在封口處穿孔通風，產(chǎn)生大量的子實體原基；6、在18攝氏度、85％的相對濕度良好通風條件下，穩(wěn)定培養(yǎng)20天，子實體長滿容器(達6-7cm長)；7、打開封口，摘收子實體。
實施例2培養(yǎng)基為大米25％、玉米15％、谷糠8％、蠶蛹粉2％、營養(yǎng)液55％。其中營養(yǎng)液的配方同例1。培育步驟1、制備培養(yǎng)基(同例1)，2、接種(同例1)，3、養(yǎng)菌環(huán)境溫度17攝氏度，避光培養(yǎng)25天，4、轉(zhuǎn)色(同例1)，5、刺激子實體原基產(chǎn)生。晝夜溫差10攝氏度(白天15攝氏度，夜晚25攝氏度)刺激10天，其余同例1，6、子實體生長在溫度25攝氏度，相對濕度90％通風條件下培養(yǎng)25天，7、摘收子實體。
附表1人工蟲草與天然蟲草氨基酸成分比較氨基酸種類 天然蟲草(％) 人工蟲草(％)天門冬氨酸 1.646 3.449蘇氨酸 0.911 1.715絲氨酸 1.080 1.424谷氨酸 2.360 4.172甘氨酸 0.954 10886丙氨酸 1.140 2.698胱氨酸 0.381 0.333纈氨酸 0.719 1.634蛋氨酸 0.285 0.543異亮氨酸 2.280 5.529亮氨酸 0.937 2.821酪氨酸 0.853 0.384苯丙氨酸 0.781 1.008賴氨酸 0.913 2.114氨 0.339 0.527組氨酸 0.791 0.680精氨酸 1.426 0.479脯氨酸 1.029 1.465附表2人工蟲草與天然蟲草無機離子含量比較元素名稱 天然蟲草(％) 人工蟲草(％)P0.92 0.093Mg0.068 0.057Fe0.022 0.006Ca0.013 0.013Al0.0006 0.0051Si0.0034 0.0054Zn0.0031 0.0041Mn0.0014 0.0012Cu0.0005 0.0004Ti0.0002 未檢出Cr0.0001 0.0002附表3人工蟲草與天然蟲草苷類含量比較(單位mg/g/％)尿嘧啶尿苷腺嘌呤 腺苷 脫氧腺苷天然蟲草 0.243/33.2 0.308/42.1 0.162/22.1 -- 0.0183/2.5人工蟲草 0.215/34.7 0.275/44.4 0.105/17.0 0.0116/1.9 0.0121/2.0
權利要求
1.一種人工培育冬蟲夏草的方法，其特征在于首先將菌種接入以大米、玉米、谷糠、蠶蛹粉及由水、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸三胺、維生素B1配成的營養(yǎng)液的培養(yǎng)基中，然后將接入冬蟲夏草菌的容器置于12-17攝氏度的避光環(huán)境下，培養(yǎng)20-25天，生出白色菌絲，再在光照條件下繼續(xù)培養(yǎng)10天，菌絲體由白色轉(zhuǎn)為黃色，轉(zhuǎn)色后在晝夜溫差10攝氏度的條件下刺激10天，產(chǎn)生子實體原基，在溫度18-25攝氏度，相對濕度85-90％的條件下，穩(wěn)定培養(yǎng)20-25天，子實體長大、摘收；培養(yǎng)基的組分重量配比為大米20-25％、玉米10-15％、谷糠4-8％、蠶蛹粉1-2％、營養(yǎng)液50-55％，其中營養(yǎng)液的配方為每1000毫升水中加葡萄糖10克、蛋白胨5克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、檸檬酸三胺1克、維生素B110毫克。
2.按照權利要求1所述的人工培育冬蟲夏草的方法，其特征在于所述的光照條件大于200勒克斯。
3.按照權利要求1所述的人工培育冬蟲夏草的方法，其特征在于所述的刺激子實體原基產(chǎn)生的條件，晝夜溫差應在5-25攝氏度范圍內(nèi)，并在容器封口處穿孔通風。
4.按照權利要求1所述的人工培育冬蟲夏草的方法，其特征在于所述的培養(yǎng)基的最佳組分重量配比為大米25％、玉米13％、谷糠6％、蠶蛹粉1％、營養(yǎng)液55％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種人工培育冬蟲夏草的方法,首先將菌種接入以大米、玉米、谷糠、蠶蛹粉及由水、葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、檸檬酸三胺、維生素B
文檔編號C12N1/14GK1274006SQ0010848
公開日2000年11月22日 申請日期2000年6月9日 優(yōu)先權日2000年6月9日
發(fā)明者高平, 劉寶琦, 于艷琴, 冉翠香, 王莉, 李紅衛(wèi) 申請人:車振明