專利名稱:具有抑制癌細胞生長功能的新的人蛋白及其編碼序列的制作方法
技術領域:
本發(fā)明屬于生物技術領域,具體地說,本發(fā)明涉及新的編碼具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸,以及此多核苷酸編碼的多肽。本發(fā)明還涉及此多核苷酸和多肽的用途和制備。
人基因組學研究目前是國際上的熱點,除人染色體DNA大規(guī)模測序,表達序列測序(EST)的方法外,還缺少從功能開始的篩選具有功能基因的高通量的方法。
癌癥是危害人類健康的主要疾病之一。為了有效地治療和預防腫瘤,目前人們已越來越關注腫瘤的基因治療。因此,本領域迫切需要開發(fā)研究具有抑癌功能的人蛋白及其激動劑/抑制劑。
本發(fā)明的目的是提供一類新的具有抑癌功能的人蛋白多肽以及其片段、類似物和衍生物。
本發(fā)明的另一目的是提供編碼這些多肽的多核苷酸。
本發(fā)明的另一目的是提供生產這些多肽的方法以及該多肽和編碼序列的用途。
在本發(fā)明的第一方面,提供新穎的分離出的具有抑癌功能的蛋白多肽,它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26;或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
較佳地,該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:26。
在本發(fā)明的第二方面,提供了一種分離的多核苷酸,它包含一核苷酸序列,該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85%相同性(a)編碼上述的具有抑癌功能的蛋白多肽的多核苷酸;(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。較佳地,該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26。更佳地,該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27的編碼區(qū)序列或全長序列。
在本發(fā)明的第三方面,提供了含有上述多核苷酸的載體,以及被該載體轉化或轉導的宿主細胞或者被上述多核苷酸直接轉化或轉導的宿主細胞。
在本發(fā)明的第四方面,提供了制備具有抑癌功能的蛋白活性的多肽的制備方法,該方法包含(a)在適合表達具有抑癌功能的蛋白的條件下,培養(yǎng)上述被轉化或轉導的宿主細胞;(b)從培養(yǎng)物中分離出具有抑癌功能的蛋白活性的多肽。
在本發(fā)明的第五方面,提供了與上述的具有抑癌功能的蛋白多肽特異性結合的抗體。還提供了可用于檢測的核酸分子,它含有上述的多核苷酸中連續(xù)的10-800個核苷酸。
在本發(fā)明的第六方面,提供了一種藥物組合物,它含有安全有效量的本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白多肽以及藥學上可接受的載體。這些藥物組合物可治療癌癥以及細胞異常增殖等病癥。
本發(fā)明的其它方面由于本文的技術的公開,對本領域的技術人員而言是顯而易見的。
本發(fā)明采用大規(guī)模cDNA克隆轉染癌細胞,在獲得具有抑癌作用的基礎上,經測序證明為新的基因,進一步得到全長cDNA克隆。DNA轉染試驗證明,本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白對癌細胞(肝癌細胞)具有抑制克隆形成的作用,其抑制率在50%或50%以上。
如本文所用,“分離的”是指物質從其原始環(huán)境中分離出來(如果是天然的物質,原始環(huán)境即是天然環(huán)境)。如活體細胞內的天然狀態(tài)下的多聚核苷酸和多肽是沒有分離純化的,但同樣的多聚核苷酸或多肽如從天然狀態(tài)中同存在的其他物質中分開,則為分離純化的。
如本文所用,“分離的具有抑癌功能的蛋白或多肽”是指具有抑癌功能的蛋白多肽基本上不含天然與其相關的其它蛋白、脂類、糖類或其它物質。本領域的技術人員能用標準的蛋白質純化技術純化具有抑癌功能的蛋白。基本上純的多肽在非還原聚丙烯酰胺凝膠上能產生單一的主帶。具有抑癌功能的蛋白多肽的純度能用氨基酸序列分析。
本發(fā)明的多肽可以是重組多肽、天然多肽、合成多肽,優(yōu)選重組多肽。本發(fā)明的多肽可以是天然純化的產物,或是化學合成的產物,或使用重組技術從原核或真核宿主(例如,細菌、酵母、高等植物、昆蟲和哺乳動物細胞)中產生。根據(jù)重組生產方案所用的宿主,本發(fā)明的多肽可以是糖基化的,或可以是非糖基化的。本發(fā)明的多肽還可包括或不包括起始的甲硫氨酸殘基。
本發(fā)明還包括具有抑癌功能的人蛋白的片段、衍生物和類似物。如本文所用,術語“片段”、“衍生物”和“類似物”是指基本上保持本發(fā)明的天然具有抑癌功能的人蛋白相同的生物學功能或活性的多肽。本發(fā)明的多肽片段、衍生物或類似物可以是(ⅰ)有一個或多個保守或非保守性氨基酸殘基(優(yōu)選保守性氨基酸殘基)被取代的多肽,而這樣的取代的氨基酸殘基可以是也可以不是由遺傳密碼編碼的,或(ⅱ)在一個或多個氨基酸殘基中具有取代基團的多肽,或(ⅲ)成熟多肽與另一個化合物(比如延長多肽半衰期的化合物,例如聚乙二醇)融合所形成的多肽,或(ⅳ)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前導序列或分泌序列或用來純化此多肽的序列或蛋白原序列)。根據(jù)本文的教導,這些片段、衍生物和類似物屬于本領域熟練技術人員公知的范圍。
本發(fā)明的多核苷酸可以是DNA形式或RNA形式。DNA形式包括cDNA、基因組DNA或人工合成的DNA。DNA可以是單鏈的或是雙鏈的。DNA可以是編碼鏈或非編碼鏈。以PP4277蛋白(在本申請中,蛋白質的命名采用其克隆編號)(在本申請中,蛋白質的命名采用其克隆編號)為例,編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO:3所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡并的變異體。如本文所用,“簡并的變異體”在本發(fā)明中是指編碼具有SEQ ID NO:2的蛋白質,但與SEQ ID NO:3所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。以PP4377蛋白(在本申請中,蛋白質的命名采用其克隆編號)(在本申請中,蛋白質的命名采用其克隆編號)為例,編碼成熟多肽的編碼區(qū)序列可以與SEQ ID NO:6所示的編碼區(qū)序列相同或者是簡并的變異體。如本文所用,“簡并的變異體”在本發(fā)明中是指編碼具有SEQ ID NO:5的蛋白質,但與SEQ ID NO:6所示的編碼區(qū)序列有差別的核酸序列。對于其他具有抑癌功能的蛋白,可依此類推。對于其他具有抑癌功能的蛋白,可依此類推。
編碼成熟多肽的多核苷酸包括只編碼成熟多肽的編碼序列;成熟多肽的編碼序列和各種附加編碼序列;成熟多肽的編碼序列(和任選的附加編碼序列)以及非編碼序列。
術語“編碼多肽的多核苷酸”可以是包括編碼此多肽的多核苷酸,也可以是還包括附加編碼和/或非編碼序列的多核苷酸。
本發(fā)明還涉及上述多核苷酸的變異體,其編碼與本發(fā)明有相同的氨基酸序列的多肽或多肽的片段、類似物和衍生物。此多核苷酸的變異體可以是天然發(fā)生的等位變異體或非天然發(fā)生的變異體。這些核苷酸變異體包括取代變異體、缺失變異體和插入變異體。如本領域所知的,等位變異體是一個多核苷酸的替換形式,它可能是一個或多個核苷酸的取代、缺失或插入,但不會從實質上改變其編碼的多肽的功能。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交且兩個序列之間具有至少50%,較佳地至少70%,更佳地至少80%相同性的多核苷酸。本發(fā)明特別涉及在嚴格條件下與本發(fā)明所述多核苷酸可雜交的多核苷酸。在本發(fā)明中,“嚴格條件”是指(1)在較低離子強度和較高溫度下的雜交和洗脫,如0.2×SSC,0.1%SDS,60℃;或(2)雜交時加有變性劑,如50%(v/v)甲酰胺,0.1%小牛血清/0.1%Ficoll,42℃等;或(3)僅在兩條序列之間的相同性至少在95%以上,更好是97%以上時才發(fā)生雜交。并且,可雜交的多核苷酸編碼的多肽與SEQ ID NO:2所示的成熟多肽有相同的生物學功能和活性。
本發(fā)明還涉及與上述的序列雜交的核酸片段。如本文所用,“核酸片段”的長度至少含15個核苷酸,較好是至少30個核苷酸,更好是至少50個核苷酸,最好是至少100個核苷酸以上。核酸片段可用于核酸的擴增技術(如PCR)以確定和/或分離編碼具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸。
本發(fā)明中的多肽和多核苷酸優(yōu)選以分離的形式提供,更佳地被純化至均質。
本發(fā)明的DNA序列能用幾種方法獲得。例如,用本領域熟知的雜交技術分離DNA。這些技術包括但不局限于1)用探針與基因組或cDNA文庫雜交以檢出同源性核苷酸序列,和2)表達文庫的抗體篩選以檢出具有共同結構特征的克隆的DNA片段。
編碼具有抑癌功能的蛋白的特異DNA片段序列產生也能用下列方法獲得1)從基因組DNA分離雙鏈DNA序列;2)化學合成DNA序列以獲得所需多肽的雙鏈DNA。
上述提到的方法中,分離基因組DNA最不常用。當需要的多肽產物的整個氨基酸序列已知時,DNA序列的直接化學合成是經常選用的方法。如果所需的氨基酸的整個序列不清楚時,DNA序列的直接化學合成是不可能的,選用的方法是cDNA序列的分離。分離感興趣的cDNA的標準方法是從高表達該基因的供體細胞分離mRNA并進行逆轉錄,形成質?;蚴删wcDNA文庫。提取mRNA的方法已有多種成熟的技術,試劑盒也可從商業(yè)途徑獲得(Qiagene)。而構建cDNA文庫也是通常的方法(Sambrook,et al.,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory.New York,1989)。還可得到商業(yè)供應的cDNA文庫,如Clontech公司的不同cDNA文庫。當結合使用聚合酶反應技術時,即使極少的表達產物也能克隆。
可用常規(guī)方法從這些cDNA文庫中篩選本發(fā)明的基因。這些方法包括(但不限于)(1)DNA-DNA或DNA-RNA雜交;(2)標志基因的功能出現(xiàn)或喪失;(3)測定具有抑癌功能的蛋白的轉錄本的水平;(4)通過免疫學技術或測定生物學活性,來檢測基因表達的蛋白產物。上述方法可單用,也可多種方法聯(lián)合應用。
在第(1)種方法中,雜交所用的探針是與本發(fā)明的多核苷酸的任何一部分同源,其長度至少15個核苷酸,較好是至少30個核苷酸,更好是至少50個核苷酸,最好是至少100個核苷酸。此外,探針的長度通常在2kb之內,較佳地為1kb之內。此處所用的探針通常是在本發(fā)明的基因DNA序列信息的基礎上化學合成的DNA序列。本發(fā)明的基因本身或者片段當然可以用作探針。DNA探針的標記可用放射性同位素,熒光素或酶(如堿性磷酸酶)等。
在第(4)種方法中,檢測具有抑癌功能的蛋白基因表達的蛋白產物可用免疫學技術如Western印跡法,放射免疫沉淀法,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)等。
應用PCR技術擴增DNA/RNA的方法(Saiki,et al.Science 1985;230:1350-1354)被優(yōu)選用于獲得本發(fā)明的基因。特別是很難從文庫中得到全長的cDNA時,可優(yōu)選使用RACE法(RACE-cDNA末端快速擴增法),用于PCR的引物可根據(jù)本文所公開的本發(fā)明的序列信息適當?shù)剡x擇,并可用常規(guī)方法合成??捎贸R?guī)方法如通過凝膠電泳分離和純化擴增的DNA/RNA片段。
如上所述得到的本發(fā)明的基因,或者各種DNA片段等的核苷酸序列的測定可用常規(guī)方法如雙脫氧鏈終止法(Sanger et al. PNAS,1977,74:5463-5467)。這類核苷酸序列測定也可用商業(yè)測序試劑盒等。為了獲得全長的cDNA序列,測序需反復進行。有時需要測定多個克隆的cDNA序列,才能拼接成全長的cDNA序列。
本發(fā)明也涉及包含本發(fā)明的多核苷酸的載體,以及用本發(fā)明的載體或具有抑癌功能的蛋白編碼序列經基因工程產生的宿主細胞,以及經重組技術產生本發(fā)明所述多肽的方法。
通過常規(guī)的重組DNA技術,可利用本發(fā)明的多聚核苷酸序列可用來表達或生產重組的具有抑癌功能的蛋白多肽(Science,1984;224:1431)。一般來說有以下步驟(1).用本發(fā)明的編碼具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸(或變異體),或用含有該多核苷酸的重組表達載體轉化或轉導合適的宿主細胞;(2).在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的宿主細胞;(3).從培養(yǎng)基或細胞中分離、純化蛋白質。
本發(fā)明中,具有抑癌功能的人蛋白多核苷酸序列可插入到重組表達載體中。術語“重組表達載體”指本領域熟知的細菌質粒、噬菌體、酵母質粒、植物細胞病毒、哺乳動物細胞病毒如腺病毒、逆轉錄病毒或其他載體。在本發(fā)明中適用的載體包括但不限于在細菌中表達的基于T7的表達載體(Rosenberg,et al.Gene,1987,56:125);在哺乳動物細胞中表達的pMSXND表達載體(Lee and Nathans,J Bio Chem.263:3521,1988)和在昆蟲細胞中表達的來源于桿狀病毒的載體??傊灰茉谒拗黧w內復制和穩(wěn)定,任何質粒和載體都可以用。表達載體的一個重要特征是通常含有復制起點、啟動子、標記基因和翻譯控制元件。
本領域的技術人員熟知的方法能用于構建含具有抑癌功能的人蛋白編碼DNA序列和合適的轉錄/翻譯控制信號的表達載體。這些方法包括體外重組DNA技術、DNA合成技術、體內重組技術等(Sambroook,et al.Molecular Cloning,a Laboratory Manual,cold SpringHarbor Laboratory.New York,1989)。所述的DNA序列可有效連接到表達載體中的適當啟動子上,以指導mRNA合成。這些啟動子的代表性例子有大腸桿菌的lac或trp啟動子;λ噬菌體PL啟動子;真核啟動子包括CMV立即早期啟動子、HSV胸苷激酶啟動子、早期和晚期SV40啟動子、反轉錄病毒的LTRs和其他一些已知的可控制基因在原核或真核細胞或其病毒中表達的啟動子。表達載體還包括翻譯起始用的核糖體結合位點和轉錄終止子。
此外,表達載體優(yōu)選地包含一個或多個選擇性標記基因,以提供用于選擇轉化的宿主細胞的表型性狀,如真核細胞培養(yǎng)用的二氫葉酸還原酶、新霉素抗性以及綠色熒光蛋白(GFP),或用于大腸桿菌的四環(huán)素或氨芐青霉素抗性。
包含上述的適當DNA序列以及適當啟動子或者控制序列的載體,可以用于轉化適當?shù)乃拗骷毎?,以使其能夠表達蛋白質。
宿主細胞可以是原核細胞,如細菌細胞;或是低等真核細胞,如酵母細胞;或是高等真核細胞,如哺乳動物細胞。代表性例子有大腸桿菌,鏈霉菌屬;鼠傷寒沙門氏菌的細菌細胞;真菌細胞如酵母;植物細胞;果蠅S2或Sf9的昆蟲細胞;CHO、COS或Bowes黑素瘤細胞的動物細胞等。
本發(fā)明的多核苷酸在高等真核細胞中表達時,如果在載體中插入增強子序列時將會使轉錄得到增強。增強子是DNA的順式作用因子,通常大約有10到300個堿基對,作用于啟動子以增強基因的轉錄??膳e的例子包括在復制起始點晚期一側的100到270個堿基對的SV40增強子、在復制起始點晚期一側的多瘤增強子以及腺病毒增強子等。
本領域一般技術人員都清楚如何選擇適當?shù)妮d體、啟動子、增強子和宿主細胞。
用重組DNA轉化宿主細胞可用本領域技術人員熟知的常規(guī)技術進行。當宿主為原核生物如大腸桿菌時,能吸收DNA的感受態(tài)細胞可在指數(shù)生長期后收獲,用CaCl2法處理,所用的步驟在本領域眾所周知。可供選擇的是用MgCl2。如果需要,轉化也可用電穿孔的方法進行。當宿主是真核生物,可選用如下的DNA轉染方法磷酸鈣共沉淀法,常規(guī)機械方法如顯微注射、電穿孔、脂質體包裝等。
獲得的轉化子可以用常規(guī)方法培養(yǎng),表達本發(fā)明的基因所編碼的多肽。根據(jù)所用的宿主細胞,培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基可選自各種常規(guī)培養(yǎng)基。在適于宿主細胞生長的條件下進行培養(yǎng)。當宿主細胞生長到適當?shù)募毎芏群?,用合適的方法(如溫度轉換或化學誘導)誘導選擇的啟動子,將細胞再培養(yǎng)一段時間。
在上面的方法中的重組多肽可包被于細胞內、細胞外或在細胞膜上表達或分泌到細胞外。如果需要,可利用其物理的、化學的和其它特性通過各種分離方法分離和純化重組的蛋白。這些方法是本領域技術人員所熟知的。這些方法的例子包括但并不限于常規(guī)的復性處理、用蛋白沉淀劑處理(鹽析方法)、離心、滲透破菌、超處理、超離心、分子篩層析(凝膠過濾)、吸附層析、離子交換層析、高效液相層析(HPLC)和其它各種液相層析技術及這些方法的結合。
重組的具有抑癌功能的人蛋白或多肽有多方面的用途。這些用途包括(但不限于)直接做為藥物治療具有抑癌功能的蛋白功能低下或喪失所致的疾病,和用于篩選促進或對抗具有抑癌功能的蛋白功能的抗體、多肽或其它配體。例如,抗體可用于激活或抑制具有抑癌功能的人蛋白的功能。用表達的重組具有抑癌功能的人蛋白篩選多肽庫可用于尋找有治療價值的能抑制或刺激具有抑癌功能的人蛋白功能的多肽分子。
本發(fā)明也提供了篩選藥物以鑒定提高(激動劑)或阻遏(拮抗劑)具有抑癌功能的人蛋白的藥劑的方法。激動劑提高具有抑癌功能的人蛋白刺激細胞增殖等生物功能,而拮抗劑阻止和治療與細胞過度增殖有關的紊亂如各種癌癥。例如,能在藥物的存在下,將哺乳動物細胞或表達具有抑癌功能的人蛋白的膜制劑與標記的具有抑癌功能的人蛋白一起培養(yǎng)。然后測定藥物提高或阻遏此相互作用的能力。
具有抑癌功能的人蛋白的拮抗劑包括篩選出的抗體、化合物、受體缺失物和類似物等。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗劑可以與具有抑癌功能的人蛋白結合并消除其功能,或是抑制具有抑癌功能的人蛋白的產生,或是與多肽的活性位點結合使多肽不能發(fā)揮生物學功能。具有抑癌功能的人蛋白的拮抗劑可用于治療用途。
在篩選作為拮抗劑的化合物時,可以將具有抑癌功能的蛋白加入生物分析測定中,通過測定化合物影響具有抑癌功能的蛋白和其受體之間的相互作用來確定化合物是否是拮抗劑。用上述篩選化合物的同樣方法,可以篩選出起拮抗劑作用的受體缺失物和類似物。
本發(fā)明的多肽可直接用于疾病治療,例如,各種惡性腫瘤、和細胞異常增殖等。
本發(fā)明的多肽,及其片段、衍生物、類似物或它們的細胞可以用來作為抗原以生產抗體。這些抗體可以是多克隆或單克隆抗體。多克隆抗體可以通過將此多肽直接注射動物的方法得到。制備單克隆抗體的技術包括雜交瘤技術,三瘤技術,人B-細胞雜交瘤技術,EBV-雜交瘤技術等。
可以將本發(fā)明的多肽和拮抗劑與合適的藥物載體組合后使用。這些載體可以是水、葡萄糖、乙醇、鹽類、緩沖液、甘油以及它們的組合。組合物包含安全有效量的多肽或拮抗劑以及不影響藥物效果的載體和賦形劑。這些組合物可以作為藥物用于疾病治療。
本發(fā)明還提供含有一種或多種容器的藥盒或試劑盒,容器中裝有一種或多種本發(fā)明的藥用組合物成分。與這些容器一起,可以有由制造、使用或銷售藥品或生物制品的政府管理機構所給出的指示性提示,該提示反映出生產、使用或銷售的政府管理機構許可其在人體上施用。此外,本發(fā)明的多肽可以與其它的治療化合物如TNF等結合使用。
藥物組合物可以以方便的方式給藥,如通過局部、靜脈內、腹膜內、肌內、皮下、鼻內或皮內的給藥途徑。具有抑癌功能的蛋白以有效地治療和/或預防具體的適應癥的量來給藥。施用于患者的具有抑癌功能的蛋白的量和劑量范圍將取決于許多因素,如給藥方式、待治療者的健康條件和診斷醫(yī)生的判斷。
具有抑癌功能的人蛋白的多聚核苷酸也可用于多種治療目的?;蛑委熂夹g可用于治療由于具有抑癌功能的蛋白的無表達或異常/無活性的具有抑癌功能的蛋白的表達所致的細胞增殖、發(fā)育或代謝異常。重組的基因治療載體(如病毒載體)可設計成表達變異的具有抑癌功能的蛋白,以抑制內源性的具有抑癌功能的蛋白活性。例如,一種變異的具有抑癌功能的蛋白可以是縮短的、缺失了信號傳導功能域的具有抑癌功能的蛋白,雖可與下游的底物結合,但缺乏信號傳導活性。因此重組的基因治療載體可用于治療具有抑癌功能的蛋白表達或活性異常所致的疾病。來源于病毒的表達載體如逆轉錄病毒、腺病毒、腺病毒相關病毒、單純皰疹病毒、細小病毒等可用于將具有抑癌功能的蛋白基因轉移至細胞內。構建攜帶具有抑癌功能的蛋白基因的重組病毒載體的方法可見于已有文獻(Sambrook,et al.)。另外重組具有抑癌功能的人蛋白基因可包裝到脂質體中轉移至細胞內。
抑制具有抑癌功能的人蛋白mRNA的寡聚核苷酸(包括反義RNA和DNA)以及核酶也在本發(fā)明的范圍之內。核酶是一種能特異性分解特定RNA的酶樣RNA分子,其作用機制是核酶分子與互補的靶RNA特異性雜交后進行核酸內切作用。反義的RNA和DNA及核酶可用已有的任何RNA或DNA合成技術獲得,如固相磷酸酰胺化學合成法合成寡核苷酸的技術已廣泛應用。反義RNA分子可通過編碼該RNA的DNA序列在體外或體內轉錄獲得。這種DNA序列已整合到載體的RNA聚合酶啟動子的下游。為了增加核酸分子的穩(wěn)定性,可用多種方法對其進行修飾,如增加兩側的序列長度,核糖核苷之間的連接應用磷酸硫酯鍵或肽鍵而非磷酸二酯鍵。
多聚核苷酸導入組織或細胞內的方法包括將多聚核苷酸直接注入到體內組織中;或在體外通過載體(如病毒、噬菌體或質粒等)先將多聚核苷酸導入細胞中,再將細胞移植到體內等。
本發(fā)明的多肽還可用作肽譜分析,例如,多肽可用物理的、化學或酶進行特異性切割,并進行一維或二維或三維的凝膠電泳分析。
本發(fā)明還提供了針對具有抑癌功能的人蛋白抗原決定簇的抗體。這些抗體包括(但不限于)多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段和Fab表達文庫產生的片段。
抗具有抑癌功能的人蛋白的抗體可用于免疫組織化學技術中,檢測活檢標本中的具有抑癌功能的人蛋白。
與具有抑癌功能的人蛋白結合的單克隆抗體也可用放射性同位素標記,注入體內可跟蹤其位置和分布。這種放射性標記的抗體可作為一種非創(chuàng)傷性診斷方法用于腫瘤細胞的定位和判斷是否有轉移。
本發(fā)明中的抗體可用于治療或預防與具有抑癌功能的人蛋白相關的疾病。給予適當劑量的抗體可以刺激或阻斷具有抑癌功能的人蛋白的產生或活性。
抗體也可用于設計針對體內某一特殊部位的免疫毒素。如具有抑癌功能的人蛋白高親和性的單克隆抗體可與細菌或植物毒素(如白喉毒素,蓖麻蛋白,紅豆堿等)共價結合。一種通常的方法是用巰基交聯(lián)劑如SPDP,攻擊抗體的氨基,通過二硫鍵的交換,將毒素結合于抗體上,這種雜交抗體可用于殺滅具有抑癌功能的人蛋白陽性的細胞。
多克隆抗體的生產可用具有抑癌功能的人蛋白或多肽免疫動物,如家兔,小鼠,大鼠等。多種佐劑可用于增強免疫反應,包括但不限于弗氏佐劑等。
具有抑癌功能的人蛋白單克隆抗體可用雜交瘤技術生產(Kohler and Milstein.Nature,1975,256:495-497)。將人恒定區(qū)和非人源的可變區(qū)結合的嵌合抗體可用已有的技術生產(Morrison et al,PNAS,1985,81:6851)。而已有的生產單鏈抗體的技術(U.S.PatNo.4946778)也可用于生產抗具有抑癌功能的人蛋白的單鏈抗體。
能與具有抑癌功能的人蛋白結合的多肽分子可通過篩選由各種可能組合的氨基酸結合于固相物組成的隨機多肽庫而獲得。篩選時,必須對具有抑癌功能的人蛋白分子進行標記。
本發(fā)明還涉及定量和定位檢測具有抑癌功能的人蛋白水平的診斷試驗方法。這些試驗是本領域所熟知的,且包括FISH測定和放射免疫測定。試驗中所檢測的具有抑癌功能的人蛋白水平,可以用作解釋具有抑癌功能的人蛋白在各種疾病中的重要性和用于診斷具有抑癌功能的蛋白起作用的疾病。
具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于具有抑癌功能的蛋白相關疾病的診斷和治療。在診斷方面,具有抑癌功能的蛋白的多聚核苷酸可用于檢測具有抑癌功能的蛋白的表達與否或在疾病狀態(tài)下具有抑癌功能的蛋白的異常表達。如具有抑癌功能的蛋白DNA序列可用于對活檢標本的雜交以判斷具有抑癌功能的蛋白的表達異常。雜交技術包括Southern印跡法,Northern印跡法、原位雜交等。這些技術方法都是公開的成熟技術,相關的試劑盒都可從商業(yè)途徑得到。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列(Microarray)或DNA芯片(又稱為“基因芯片”)上,用于分析組織中基因的差異表達分析和基因診斷。用具有抑癌功能的蛋白特異的引物進行RNA-聚合酶鏈反應(RT-PCR)體外擴增也可檢測具有抑癌功能的蛋白的轉錄產物。
檢測具有抑癌功能的蛋白基因的突變也可用于診斷具有抑癌功能的蛋白相關的疾病。具有抑癌功能的蛋白突變的形式包括與正常野生型具有抑癌功能的蛋白DNA序列相比的點突變、易位、缺失、重組和其它任何異常等??捎靡延械募夹g如Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測突變。另外,突變有可能影響蛋白的表達,因此用Northern印跡法、Western印跡法可間接判斷基因有無突變。
本發(fā)明的序列對染色體鑒定也是有價值的。該序列會特異性地針對某條人染色體具體位置且并可以與其雜交。目前,需要鑒定染色體上的各基因的具體位點。現(xiàn)在,只有很少的基于實際序列數(shù)據(jù)(重復多態(tài)性)的染色體標記物可用于標記染色體位置。根據(jù)本發(fā)明,為了將這些序列與疾病相關基因相關聯(lián),其重要的第一步就是將這些DNA序列定位于染色體上。
簡而言之,根據(jù)cDNA制備PCR引物(優(yōu)選15-35bp),可以將序列定位于染色體上。然后,將這些引物用于PCR篩選含各條人染色體的體細胞雜合細胞。只有那些含有相應于引物的人基因的雜合細胞會產生擴增的片段。
體細胞雜合細胞的PCR定位法,是將DNA定位到具體染色體的快捷方法。使用本發(fā)明的的寡核苷酸引物,通過類似方法,可利用一組來自特定染色體的片段或大量基因組克隆而實現(xiàn)亞定位??捎糜谌旧w定位的其它類似策略包括原位雜交、用標記的流式分選的染色體預篩選和雜交預選,從而構建染色體特異的cDNA庫。
將cDNA克隆與中期染色體進行熒光原位雜交(FISH),可以在一個步驟中精確地進行染色體定位。此技術的綜述,參見Verma等,Human Chromosomes:a Manual of BasicTechniques,Pergamon Press,New York(1988)。
一旦序列被定位到準確的染色體位置,此序列在染色體上的物理位置就可以與基因圖數(shù)據(jù)相關聯(lián)。這些數(shù)據(jù)可見于例如,V.Mckusick,Mendelian Inheritance in Man(可通過與Johns Hopkins University Welch Medical Library聯(lián)機獲得)。然后可通過連鎖分析,確定基因與業(yè)已定位到染色體區(qū)域上的疾病之間的關系。
接著,需要測定患病和未患病個體間的cDNA或基因組序列差異。如果在一些或所有的患病個體中觀察到某突變,而該突變在任何正常個體中未觀察到,則該突變可能是疾病的病因。比較患病和未患病個體,通常涉及首先尋找染色體中結構的變化,如從染色體水平可見的或用基于cDNA序列的PCR可檢測的缺失或易位。根據(jù)目前的物理作圖和基因定位技術的分辨能力,被精確定位至與疾病有關的染色體區(qū)域的cDNA,可以是50至500個潛在致病基因間之一種(假定1兆堿基作圖分辨能力和每20kb對應于一個基因)。
本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白核苷酸全長序列或其片段通??梢杂肞CR擴增法、重組法或人工合成的方法獲得。對于PCR擴增法,可根據(jù)本發(fā)明所公開的有關核苷酸序列,尤其是開放閱讀框序列來設計引物,并用市售的cDNA庫或按本領域技術人員已知的常規(guī)方法所制備的cDNA庫作為模板,擴增而得有關序列。當序列較長時,常常需要進行兩次或多次PCR擴增,然后再將各次擴增出的片段按正確次序拼接在一起。
一旦獲得了有關的序列,就可以用重組法來大批量地獲得有關序列。這通常是將其克隆入載體,再轉入細胞,然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細胞中分離得到有關序列。
此外,還可用人工合成的方法來合成有關序列,尤其是片段長度較短時。通常,通過先合成多個小片段,然后再進行連接可獲得序列很長的片段。
目前,已經可以完全通過化學合成來編碼本發(fā)明蛋白(或其片段,或其衍生物)的DNA序列。然后可將該DNA序列引入本領域中的各種DNA分子(如載體)和細胞中。此外,還可通過化學合成將突變引入本發(fā)明蛋白序列中。
此外,由于本發(fā)明的具有抑癌功能的蛋白具有源自人的天然氨基酸序列,因此,與來源于其他物種的同族蛋白相比,預計在施用于人時將具有更高的活性和/或更低的副作用(例如在人體內的免疫原性更低或沒有)。
下面結合具體實施例,進一步闡述本發(fā)明。應理解,這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法,通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人,分子克隆實驗室手冊(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的條件,或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1cDNA基因的獲得及對癌細胞克隆形成的抑制作用PP4277,PP4377,PP4522,PP4583,PP4664,PP4748,PP4762,PP5242,PP5656是通過用常規(guī)方法構建人胎盤cDNA文庫獲得的。取3、6、10月齡的胎盤組織,用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說明書提取總RNA,用mRNA提純試劑盒(Pharmacia公司)提取mRNA。用pCMV-script TMXR cDNA文庫構建試劑盒(Stratagene公司)構建上述mRNA的cDNA文庫。其中反轉錄酶改用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL),反轉錄反應在42℃進行。轉化XL10-Gold感受細胞,獲得了1×106cfu/μg cDNA滴度的cDNA文庫。第一輪隨機挑取cDNA克隆,其后以高豐度cDNA克隆和已證明有抑癌細胞生長功能的cDNA克隆為探針,雜交篩選cDNA文庫,挑取弱陽性及陰性克隆。用Qiagen96孔板質粒抽提試劑盒,按廠家說明書進行質粒DNA的提取。質粒DNA和空載體同時轉染肝癌細胞系7721。100ng DNA酒精沉淀干燥后,加6μl H2O溶解,待轉染。每份DNA樣品中加0.74μl脂質體及9.3μl無血清培液,混勻后,室溫放置10分鐘。每管中加150μl無血清培液,均分加入3孔生長于96孔板的7721細胞中,37℃放置2小時,每孔再加50μl無血清培液,37℃24小時。每孔換100μl全培液,37℃ 24小時,換含G418的全培液100μl,37℃24~48小時,邊觀察,邊換G418濃度不等的培液。約2~3次后,直到鏡檢細胞有克隆形成,計數(shù)。發(fā)現(xiàn)以上克隆有抑制細胞克隆形成作用,結果如下表所示。cDNA克隆轉染細胞(7721)克隆形成情況
對cDNA克隆采用雙脫氧終止法,在ABI377 DNA自動測序儀上測定其一端近500bp的核苷酸序列。分析后,確定為新基因克隆,進行另一端測序。如仍未獲得全長cDNA序列,則設計引物,再次進行測序,直到獲得全長序列(SEQ ID NO:1、4、7、10、13、16、19、22、24)。
實施例2從胎盤cDNA中PCR獲得基因克隆取3、6、10月齡的胎盤組織,用Trizol試劑(GIBCO BRL公司)按廠方說明書提取總RNA,用mRNA提純試劑盒(pharmacia公司)提取mRNA。用MMLV-RT-SuperscriptⅡ(GIBCO BRL),反轉錄酶在42℃進行反轉錄反應,獲得胎盤cDNA。利用各個基因的轉異引物(如下表所示),按97℃3′1個循環(huán)。94℃30″60℃30″72℃1′,35個循環(huán),72℃10′1個循環(huán)進行PCR擴增,獲得各個基因的擴增產物。擴增產物經測序驗證,與實施例1測得的序列相符,隨后用常規(guī)技術將擴增產物轉入宿主細胞,從而獲得重組蛋白。
基因特異引物序列
實施例3cDNA克隆序列分析1.PP4277蛋白A核苷酸序列(SEQ ID NO:1)長度1915bpCACTAAGGCG CAAGGCAGCT GCACATCCAC GGCCAGCCTC GTTGTCTTCA GGGATTTGTT60CAAAGTTCAT TCTGAATTGT AAGGTAACCA CTGCAGAACA CGAGCCTTTC CTGGGTATGT 120GTGGTTATTT CTGCCCTTCA CGGTCCCACT CAAGTCCTGC CTCCCTCAGG GAGACCTCCC 180AGACCTCACC AAGCCGTGGG CACGTGGACC AGAAGCCGTG GACCCCAGAG GCTCATTTAG 240GGATCTGCTT TCTGAACCCA GGTCCTAACA TCTGCACTGC AGCGAGCATT TCTGGTGCCT 300CAAGTGAGTC ACTCCAACTT CCAGCTCACT GAGAGGCGAT GGAGCACTGA GTGCCAGCAT 360CTTCCAGCAC CAGAGGAGCT GACTCTGAAT AGACAGCTCG GCAGCGGCCT CAGCACAGAG 420CAGGGGAGCC ACCAGCCACA GGCAGCCACT GAGCCCTTGG CATGTAACCC GGTAACCCAT 480GCAACAGAAG ACCTGAGCGT CCAGTGTTGC TAGCTTGAAG TAACTTCAGT GGTGTTCCCC 540AGCGTTTTTC TCATCCCCCT CCCTTCCCTT CCCCTACAGC TTTCTTCCTC TTTCCCCTCC 600TTCTGAGTCT TTTGTCCCCA GTCCTGGGAA CCTTTTTTCT GACTTGGTGT TTTCTCCTGA 660ATGCCTCCTT CCTGGCCCCC TAATCAGAAA TGCAGAAGCC ACCTGCCCCA CACAGGGGGC 720CGCTTTCCCT GCATCTGGCA CTCACCAGGA CAGTCATAGA ACTGGCCTTG GGTGCTTGGG 780GAGAGTGGAG AGGTCTGGGG GGCATCCACT GGCCTCAGCC TCAGAGCTTC TCATCAGTAA 840CCCAGGAGGC AAAGGCCCAG CTCGAGATTA GCCCAGGCCA CTGTATCTGT GCCAAGACCT 900ACAGCTGTCC CTGCAGGGCG TGCATCTCCT GCAGCCCAGG CTATCACAAT GGTGTCCCTT 960TTGGTGGGGA TGTGAGGCCT GCTGCCTGCC TGGGAAGAAG CTGACAGGAT TGTTGGTGCT 1020GTGGGGAGAA GCTGGTGTAA CTGAGACCCA TGAGGGAGGC CCTTTGTGGG TCTGTGGCTG 1080GGAGGAGCTC TGGGGAAGAT GGGCCTTGAG AAATCCCAGC TTAGCACCTT TGACAGTTGC 1140TCCACTGAGT CACCCTAGAC TGCAATCTCA CAGATGTTCT AACCACCCTC TCCCTGGGGA 1200GCCCTTGGGG GTGCTGCAAG CCCAGTCCTC ACTCACTGGC TTTGTGCTTC TCTTCCCGAC 1260TTCCTTTTTT TGCTCCTGTT GAGAAATGTG GGTCCAGGGC TGCGTGCTCC AGTGTGCGGA 1320AGGAAGGGCA GCGTGCTCTT TGGACTGAGC TGGCTCAAGG GAAGCTGGGT CTGAGGGGAG 1380ACTGACCTCG ACCCTTCTTA AATGAAACAC CTTTTCCCTG CGTCTCAGTC ACCAGTTACC 1440TGGCCTGATC ACTGTGTGCC ACACCCCATC ACATCCATCC CCACAAGAAT GCCAGGAGGA 1500GGGGTCATTG GCCTTTTTGC CAGCACAAAC CTCTGGAGGC CAGCTCCCAA GACCCGCCAG 1560GCACACCTGC CAGAGTGCCT TAACTTGGGA TGTCTGCAAA CCTCTGTCCA TGGCCGAACC 1620CACCCCACTG CCTGTTACTG TAAATAAAGG TCTATTAGCA TGCCACCATG CCCCTCCTCC 1680GATGCATACA GTGCCCAGCT CAGCACCTGG TGCAAAGTAA GCACAATCTG GCTTCCAGCC 1740ATCACTGCTG TTGCTACTAT CACAAATATT AGGCCCCTTC TAGAATGCAA AGATAACCCA 1800GGGCTGCTCG TTCTGTGTCC AGATCACAGA GTTTTTCTTT TTATCCTTAT CAACTTTATT 1860GAGGGATAAT TTACAGGCAA TAAATCATAT CCATTTAAAA AAAAAAAAAA AAAAA 1915B氨基酸序列(SEQ ID NO:2)長度104個氨基酸1 MQKPPAPHRG PLSLHLALTR TVIELALGAW GEWRGLGGIH WPQPQSFSSV TQEAKAQLEI61 SPGHCICAKT YSCPCRACIS CSPGYHNGVP FGGDVRPAAC LGRSC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:3)克隆號PP4277起始編碼子690 ATG終止編碼子1004 TGA蛋白質分子量110761 CA CTA AGG CGC AAG GCA GCT GCA CAT CCA CGG CCA GCC TCG TTG TCT 4748 TCA GGG ATT TGT TCA AAG TTC ATT CTG AAT TGT AAG GTA ACC ACT GCA 9596 GAA CAC GAG CCT TTC CTG GGT ATG TGT GGT TAT TTC TGC CCT TCA CGG 143144 TCC CAC TCA AGT CCT GCC TCC CTC AGG GAG ACC TCC CAG ACC TCA CCA 191192 AGC CGT GGG CAC GTG GAC CAG AAG CCG TGG ACC CCA GAG GCT CAT TTA 239240 GGG ATC TGC TTT CTG AAC CCA GGT CCT AAC ATC TGC ACT GCA GCG AGC 287288 ATT TCT GGT GCC TCA AGT GAG TCA CTC CAA CTT CCA GCT CAC TGA GAG 335336 GCG ATG GAG CAC TGA GTG CCA GCA TCT TCC AGC ACC AGA GGA GCT GAC 383384 TCT GAA TAG ACA GCT CGG CAG CGG CCT CAG CAC AGA GCA GGG GAG CCA 431432 CCA GCC ACA GGC AGC CAC TGA GCC CTT GGC ATG TAA CCC GGT AAC CCA 479480 TGC AAC AGA AGA CCT GAG CGT CCA GTG TTG CTA GCT TGA AGT AAC TTC 527528 AGT GGT GTT CCC CAG CGT TTT TCT CAT CCC CCT CCC TTC CCT TCC CCT 575576 ACA GCT TTC TTC CTC TTT CCC CTC CTT CTG AGT CTT TTG TCC CCA GTC 623624 CTG GGA ACC TTT TTT CTG ACT TGG TGT TTT CTC CTG AAT GCC TCC TTC 671672 CTG GCC CCC TAA TCA GAA ATG CAG AAG CCA CCT GCC CCA CAC AGG GGG 7191 Met Gln Lys Pro Pro Ala Pro His Arg Gly 10720 CCG CTT TCC CTG CAT CTG GCA CTC ACC AGG ACA GTC ATA GAA CTG GCC 76711 Pro Leu Ser Leu His Leu Ala Leu Thr Arg Thr Val Ile Glu Leu Ala 26768 TTG GGT GCT TGG GGA GAG TGG AGA GGT CTG GGG GGC ATC CAC TGG CCT 81527 Leu Gly Ala Trp Gly Glu Trp Arg Gly Leu Gly Gly Ile His Trp Pro 42816 CAG CCT CAG AGC TTC TCA TCA GTA ACC CAG GAG GCA AAG GCC CAG CTC 86343 Gln Pro Gln Ser Phe Ser Ser Val Thr Gln Glu Ala Lys Ala Gln Leu 58864 GAG ATT AGC CCA GGC CAC TGT ATC TGT GCC AAG ACC TAC AGC TGT CCC 91159 Glu Ile Ser Pro Gly His Cys Ile Cys Ala Lys Thr Tyr Ser Cys Pro 74912 TGC AGG GCG TGC ATC TCC TGC AGC CCA GGC TAT CAC AAT GGT GTC CCT 95975 Cys Arg Ala Cys Ile Ser Cys Ser Pro Gly Tyr His Asn Gly Val Pro 90960 TTT GGT GGG GAT GTG AGG CCT GCT GCC TGC CTG GGA AGA AGC TGA CAG100791 Phe Gly Gly Asp Val Arg Pro Ala Ala Cys Leu Gly Arg Ser *** 1051008 GAT TGT TGG TGC TGT GGG GAG AAG CTG GTG TAA CTG AGA CCC ATG AGG10551056 GAG GCC CTT TGT GGG TCT GTG GCT GGG AGG AGC TCT GGG GAA GAT GGG11031104 CCT TGA GAA ATC CCA GCT TAG CAC CTT TGA CAG TTG CTC CAC TGA GTC11511152 ACC CTA GAC TGC AAT CTC ACA GAT GTT CTA ACC ACC CTC TCC CTG GGG11991200 AGC CCT TGG GGG TGC TGC AAG CCC AGT CCT CAC TCA CTG GCT TTG TGC12471248 TTC TCT TCC CGA CTT CCT TTT TTT GCT CCT GTT GAG AAA TGT GGG TCC12951296 AGG GCT GCG TGC TCC AGT GTG CGG AAG GAA GGG CAG CGT GCT CTT TGG13431344 ACT GAG CTG GCT CAA GGG AAG CTG GGT CTG AGG GGA GAC TGA CCT CGA13911392 CCC TTC TTA AAT GAA ACA CCT TTT CCC TGC GTC TCA GTC ACC AGT TAC14391440 CTG GCC TGA TCA CTG TGT GCC ACA CCC CAT CAC ATC CAT CCC CAC AAG14871488 AAT GCC AGG AGG AGG GGT CAT TGG CCT TTT TGC CAG CAC AAA CCT CTG15351536 GAG GCC AGC TCC CAA GAC CCG CCA GGC ACA CCT GCC AGA GTG CCT TAA15831584 CTT GGG ATG TCT GCA AAC CTC TGT CCA TGG CCG AAC CCA CCC CAC TGC16311632 CTG TTA CTG TAA ATA AAG GTC TAT TAG CAT GCC ACC ATG CCC CTC CTC16791680 CGA TGC ATA CAG TGC CCA GCT CAG CAC CTG GTG CAA AGT AAG CAC AAT17271728 CTG GCT TCC AGC CAT CAC TGC TGT TGC TAC TAT CAC AAA TAT TAG GCC17751776 CCT TCT AGA ATG CAA AGA TAA CCC AGG GCT GCT CGT TCT GTG TCC AGA18231824 TCA CAG AGT TTT TCT TTT TAT CCT TAT CAA CTT TAT TGA GGG ATA ATT18711872 TAC AGG CAA TAA ATC ATA TCC ATT TAA AAA AAA AAA AAA AAA AA 19152.PP4377蛋白A核苷酸序列(SEQ ID NO:4)長度2132bpGGACGAGACT TGATGGAGCC ACCTATACAG TGCTGTTCAT TGGCACAGGA GACGGCTGGC 60TGCTCAAGGC TGTGAGCCTG GGGCCCTGGG TTCACCTGAT TGAGGAGCTG CAGCTGTTTG 120ACCAGGAGCC CATGAGAAGC CTGGTGCTAT CTCAGAGCAA GAAGCTGCTC TTTGCCGGCT 180CCCGCTCTCA GCTGGTGCAG CTGCCCGTGG CCGACTGCAT GAAGTATCGC TCCTGTGCAG 240ACTGTGTCCT CGCCCGGGAC CCCTATTGCG CCTGGAGCGT CAACACCAGC CGCTGTGTGC 300CATGGGTGGC CACTCTGGAT CTCTACTGAT CCAGCATGTG ATGACCTCGG ACACTTCAGG 360CATCTGCAAC CTCCGTGGCA GTAAGAAAGT CAGGCCCACT CCCAAAAACA TCACGGTGGT 420GGCGGGCACA GACCTGGTGC TGCCCTGCCA CCTCTCCTCC AACTTGGCCC ATGCCCGCTG 480GACCTTTGGG GGCCGGGACC TGCCTGCGGA ACAGCCCGGG TCCTTCCTCT ACGATGCCCG 540GCTCCAGGCC TGGTTGTGAT GGCTGCCCAG CCCCGCCATG CCGGGGCCTA CCACTGCTTT 600TCAGAGGAGC AGGGGGCGCG GCTGGCTGCT GAAGGCTACC TTGTGGCTGT CGTGGCAGGC 660CCTGTCGGTG ACCTTGGAGG CCCGGCCCCC CCTGGAAAAC CTGGGGCTGG TGTGGCTGGC 720GGTGGTGGCC CTGGGGGCTG TGTGCCTGGT GCTGCTGCTG CTGGTGCTGT CATTGCGCCG 780GCGGCTGCGG GAAGAGCTGG AGAAAGGGGC CAAGCTACTG AGAGGACCTT GGTGTACCCC 840CTGGAGCTGC CCAAGGAGCC CACCAGTCCC CCCTTCCGCC CTGTCCTGAA CCAGATGAGA 900AACTTTGGGA TCCTGTCGTT ACTACTATTC AGATGGCTCC CTTAAGATAG TACCTGGGCA 960TGCCCGGTGC CAGCCCGGTG GGGGGCCCCC TTCGCCACCT CCAGGCATCC CAGGCCAGCC 1020TCTGCCTTCT CCAACTCGGC TTCACCTGGG GGGTGGGCGG AACTCAAATG CCAATGGTTA 1080CGTGCGCTTA CAACTAGGAG GGGAGGACCG GGGAGGGCTC GGGCACCCCC TGCCTGAGCT 1140CGCGGATGAA CTGAGACGCA AACTGCAGCA ACGCCAGCCA CTGCCCGACT CCAACCCCGA 1200GGAGTCATCA GTATGAGGGG AACCCCCACC GCGTCGGCGG GAAGCGTGGG AGGTGTAGCT 1260CCTACTTTTG CACAGGCACC AGCTACCTCA GGGACATGGC ACGGGCACCT GCTCTGTCTG 1320GGACAGATAC TGCCCAGCAC CCACCCGGCC ATGAGGACCT GCTCTGCTCA GCACGGGCAC 1380TGACCTTGGT GTGGCTCACC AGGGCACCAG CCTCGCAGAA GGCATCTTCC TCCTCTCTGT 1440GAATCACAGA CACGCGGGAC CCCAGCCGCC AAAACTTTTC AAGGCAGAAG TTTCAAGATG 1500TGTGTTTGTC TGTATTTGCA CATGTGTTTG TGTGTGTGTG TATGTGTGTG TCCACGCGCG 1560TGCGCGCTTG TGGCATAGCC TTCCTGTTTC TGTCAAGTCT TCCCTTGGCC TGGGTCCTCC 1620TGGTGAGTCA TTGGAGCTAT GAAGGGGAAG GGGTCGTATC ACTTTGTCTC TCCTACCCCC 1680ACTGCCCCGA GTGTCGGGCA GCGATGTACA TATGGAGGTG GGGTGGACAG GGTGCTGTGC 1740CCCTTCAGAG GGAGTGCAGG GCTTGGGGTG GGCCTAGTCC TGCTCCTAGG GCTGTGAATG 1800TTTTCAGGGT GGGGGGAGGG AGATGGAGCC TCCTGTGTGT TTGGGGGGAA GGGTGGGTGG 1860GGCCTCCCAC TTGGCCCCGG GGTTCAGTGG TATTTTATAC TTGCCTTCTT CCTGTACAGG 1920GCTGGGAAAA GCTGTGTGAA GGGAGAGAAG GGAAAGGGTG GGCCTGCTGT GGACAATGGC 1980ATACTCTCTT CCAGCCCTAG GAGGAGGGCT CCTAACAGTG TAACTTATTG TGTCCCCGCG 2040TATTTATTTG TTGTAAATAT TTGAGTATTT TTATATTGCC AAATAAAATG GGAAAAAAAA 2100AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 2132B氨基酸序列(SEQ ID NO:5)長度152個氨基酸1 MCVSTRVRAC GIAFLFLSSL PLAWVLLVSH WSYEGEGVVS LCLSYPHCPE CRAAMYIWRW61 GGQGAVPLQR ECRAWGGPSP APRAVNVFRV GGGRWSLLCV WGEGWVGPPT WPRGSVVFYT121 CLLPVQGWEK LCEGREGKGW ACCGQWHTLF QPC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:6)克隆號PP4377起始編碼子1542 ATG 終止編碼子2000 TAG蛋白質分子量169141 GG ACG AGA CTT GAT GGA GCC ACC TAT ACA GTG CTG TTC ATT GGC ACA 4748 GGA GAC GGC TGG CTG CTC AAG GCT GTG AGC CTG GGG CCC TGG GTT CAC 9596 CTG ATT GAG GAG CTG CAG CTG TTT GAC CAG GAG CCC ATG AGA AGC CTG 143144 GTG CTA TCT CAG AGC AAG AAG CTG CTC TTT GCC GGC TCC CGC TCT CAG 191192 CTG GTG CAG CTG CCC GTG GCC GAC TGC ATG AAG TAT CGC TCC TGT GCA 239240 GAC TGT GTC CTC GCC CGG GAC CCC TAT TGC GCC TGG AGC GTC AAC ACC 287288 AGC CGC TGT GTG CCA TGG GTG GCC ACT CTG GAT CTC TAC TGA TCC AGC 335336 ATG TGA TGA CCT CGG ACA CTT CAG GCA TCT GCA ACC TCC GTG GCA GTA 383384 AGA AAG TCA GGC CCA CTC CCA AAA ACA TCA CGG TGG TGG CGG GCA CAG 431432 ACC TGG TGC TGC CCT GCC ACC TCT CCT CCA ACT TGG CCC ATG CCC GCT 479480 GGA CCT TTG GGG GCC GGG ACC TGC CTG CGG AAC AGC CCG GGT CCT TCC 527528 TCT ACG ATG CCC GGC TCC AGG CCT GGT TGT GAT GGC TGC CCA GCC CCG 575576 CCA TGC CGG GGC CTA CCA CTG CTT TTC AGA GGA GCA GGG GGC GCG GCT 623624 GGC TGC TGA AGG CTA CCT TGT GGC TGT CGT GGC AGG CCC TGT CGG TGA 671672 CCT TGG AGG CCC GGC CCC CCC TGG AAA ACC TGG GGC TGG TGT GGC TGG 719720 CGG TGG TGG CCC TGG GGG CTG TGT GCC TGG TGC TGC TGC TGC TGG TGC 767768 TGT CAT TGC GCC GGC GGC TGC GGG AAG AGC TGG AGA AAG GGG CCA AGC 815816 TAC TGA GAG GAC CTT GGT GTA CCC CCT GGA GCT GCC CAA GGA GCC CAC 863864 CAG TCC CCC CTT CCG CCC TGT CCT GAA CCA GAT GAG AAA CTT TGG GAT 911912 CCT GTC GTT ACT ACT ATT CAG ATG GCT CCC TTA AGA TAG TAC CTG GGC 959960 ATG CCC GGT GCC AGC CCG GTG GGG GGC CCC CTT CGC CAC CTC CAG GCA10071008 TCC CAG GCC AGC CTC TGC CTT CTC CAA CTC GGC TTC ACC TGG GGG GTG10551056 GGC GGA ACT CAA ATG CCA ATG GTT ACG TGC GCT TAC AAC TAG GAG GGG11031104 AGG ACC GGG GAG GGC TCG GGC ACC CCC TGC CTG AGC TCG CGG ATG AAC11511152 TGA GAC GCA AAC TGC AGC AAC GCC AGC CAC TGC CCG ACT CCA ACC CCG11991200 AGG AGT CAT CAG TAT GAG GGG AAC CCC CAC CGC GTC GGC GGG AAG CGT12471248 GGG AGG TGT AGC TCC TAC TTT TGC ACA GGC ACC AGC TAC CTC AGG GAC12951296 ATG GCA CGG GCA CCT GCT CTG TCT GGG ACA GAT ACT GCC CAG CAC CCA13431344 CCC GGC CAT GAG GAC CTG CTC TGC TCA GCA CGG GCA CTG ACC TTG GTG13911392 TGG CTC ACC AGG GCA CCA GCC TCG CAG AAG GCA TCT TCC TCC TCT CTG14391440 TGA ATC ACA GAC ACG CGG GAC CCC AGC CGC CAA AAC TTT TCA AGG CAG14871488 AAG TTT CAA GAT GTG TGT TTG TCT GTA TTT GCA CAT GTG TTT GTG TGT15351536 GTG TGT ATG TGT GTG TCC ACG CGC GTG CGC GCT TGT GGC ATA GCC TTC15831 Met Cys Val Ser Thr Arg Val Arg Ala Cys Gly Ile Ala Phe 141584 CTG TTT CTG TCA AGT CTT CCC TTG GCC TGG GTC CTC CTG GTG AGT CAT163115 Leu Phe Leu Ser Ser Leu Pro Leu Ala Trp Val Leu Leu Val Ser His 301632 TGG AGC TAT GAA GGG GAA GGG GTC GTA TCA CTT TGT CTC TCC TAC CCC167931 Trp Ser Tyr Glu Gly Glu Gly Val Val Ser Leu Cys Leu Ser Tyr Pro 461680 CAC TGC CCC GAG TGT CGG GCA GCG ATG TAC ATA TGG AGG TGG GGT GGA172747 His Cys Pro Glu Cys Arg Ala Ala Met Tyr Ile Trp Arg Trp Gly Gly 621728 CAG GGT GCT GTG CCC CTT CAG AGG GAG TGC AGG GCT TGG GGT GGG CCT177563 Gln Gly Ala Val Pro Leu Gln Arg Glu Cys Arg Ala Trp Gly Gly Pro 781776 AGT CCT GCT CCT AGG GCT GTG AAT GTT TTC AGG GTG GGG GGA GGG AGA182379 Ser Pro Ala Pro Arg Ala Val Asn Val Phe Arg Val Gly Gly Gly Arg 941824 TGG AGC CTC CTG TGT GTT TGG GGG GAA GGG TGG GTG GGG CCT CCC ACT187195 Trp Ser Leu Leu Cys Val Trp Gly Glu Gly Trp Val Gly Pro Pro Thr 1101872 TGG CCC CGG GGT TCA GTG GTA TTT TAT ACT TGC CTT CTT CCT GTA CAG1919111 Trp Pro Arg Gly Ser Val Val Phe Tyr Thr Cys Leu Leu Pro Val Gln 1261920 GGC TGG GAA AAG CTG TGT GAA GGG AGA GAA GGG AAA GGG TGG GCC TGC1967127 Gly Trp Glu Lys Leu Cys Glu Gly Arg Glu Gly Lys Gly Trp Ala Cys 1421968 TGT GGA CAA TGG CAT ACT CTC TTC CAG CCC TAG GAG GAG GGC TCC TAA2015143 Cys Gly Gln Trp His Thr Leu Phe Gln Pro *** 1532016 CAG TGT AAC TTA TTG TGT CCC CGC GTA TTT ATT TGT TGT AAA TAT TTG20632064 AGT ATT TTT ATA TTG CCA AAT AAA ATG GGA AAA AAA AAA AAA AAA AAA21112112 AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA21323.PP4522蛋白A核苷酸序列(SEQ ID NO:7)長度2035bpGGCACCTCGA GTTTTTTTTT TTTTTATTCC CAGGACATCA AGGAGACTTT CAATAGGTGT60GTTCCCAGTC TTTGCCCTTC GTGACCCAGT GGCATCTGGT TCCCTGTCCC TGCTTCTCTT 120CGGTATCCCT CTCCTCTCCT TCCTTCCCCA GGACCTGAGT TTCCATCTCC TGGACCCTCC 180TCTCCTTCCC CTCAGCTTTT GCTTTTCCCT CTGGGAATAT CGTGGTCCCA CCCCCTGCCC 240GGTCCCCTTC CTCCAGGTGT GAAGAGGTAC AGCTGCAGCC CCCAGAGGTC TGGTCCCCTG 300ACCCGTGCCA ACCCCATAGC CATGACTTCC TGACAGATGC CATCGTGAGG AAAATGAGCC 360GGATGTTCTG TCAGGCTGCG AGAGTGGACC TGACGCTGGA CCCTGACACG GCTCACCCGG 420CCCTGATGCT GTCCCCTGAC CGCCGGGGGG TCCGCCTGGC AGAGCGGCGG CAGGAGGTTG 480CTGACCATCC CAAGCGCTTC TCGGCCGACT GCTGCGTACT GGGGGCCCAG GGCTTCCGCT 540CCGGCCGGCA CTACTGGGAG GTAGAGGTGG GCGGGCGGCG GGGCTGGGCG GTGGGTGCTG 600CCCGTGAATC AACCCATCAT AAGGAAAAGG TGGGCCCTGG GGGTTCCTCC GTGGGCAGCG 660GGGATGCCAG CTCCTCGCGC CATCACCATC GCCGCCGCCG GCTCCACCTG CCCCAGCAGC 720CCCTGCTCCA GCGGGAAGTG TGGTGCGTGG GCACCAACGG CAAACGCTAT CAGGCCCAGA 780GCTCCACAGA ACAGACGCTG CTGAGCCCCA GTGAGAAACC AAGGCGCTTT GGTGTGTACC 840TGGACTATGA AGCTGGGCGC CTGGGCTTCT ACAACGCAGA GACTCTAGCC CACGTGCACA 900CCTTCTCGGC TGCCTTCCTG GGCGAGCGTG TCTTTCCTTT CTTCCGGGTG CTCTCCAAGG 960GCACCCGCAT CAAGCTCTGC CCTTGATTAT CCTGCCACCC GCAGGGGCCC CTCTGTCAGC 1020ACTTGGGGGG TGGGTGGTGG AGGGTGGCCC GTAAGTTTGA GGGCTCAAAG GCTCTTCCCA 1080CTGCTTGTTA CTGTGTTGCT TCCCACTCCC CCTTGACCCC AGGCCCCTGC TTCTCCCTCT 1140AGGAGCCTAA AGAACCCTCC TGGCCTCCAG CTCAGCCTTC TCTCACCTAC TATGTCTGTC 1200CAACAGGTCT GCATGGGTCC CTGATAATGA GAACAGCTGC CTGGTCTTCT CTCCCAGTCT 1260GCCTAGCCCA GCCCTGGGAC TGGAATTTGA GTAGGGGATG AGGGGAAATT GTAATTTCAT 1320TCCTTAACTT CCTTTTCCCC ACCCCTGCTC TTCAACCTCT TTATCAGTTC TGAGGCTGGA 1380GGGTTTGGGC AAGGCAACAT CCCCATTCCA ATTCCATTTT CTGATGCAGA TTTTAGCTGA 1440GGGATTTGGA AGCCATTTGG GGAGGCAGGC TGGGCCAAAG GGTAGAGCTG GGTAATAAAT 1500GTCTATTCTC CTGGGGAGGA GGGATTCTAA ACTTTCCTTC CGTCCTCAAT TTCTACCTCC 1560ATAGACCGGC CAGAATTTAG CTTCACTTGA GAGAGATCTG GAATGGTCGC CATGATTGAA 1620ACCACGCACC ATTACATCAT CATTACATTA ATTACATCAA CATAAATTAT TTCTTCCCCC 1680TTCCCTTTTC CAGCACTCAA CCAAGGAGCA AAGCTCATCC CACCCCACAC CCCTCCCAGG 1740TCTGCTCACT GCCAGGCTCC TCTCCCCTTT GTTCAGTGGA GCTGGCTTTT CTCCCAGCCC 1800CTTTCCATGC CTTTCACTCC ATTTGGCAAG CTCTGAGGGG GAGCCTGGGG ACGGGTTTGG 1860GTCCCCAGGA GGAGAGCCTT GGGTATAATC TATTTTTCTA GGAGCCTCTT GCCTTGTCAC 1920TTGCAGCTTT CGCCCTCTGC TTTGATGGCT GAGGTGAACT CATGTTCTTT GGGAAAAGGG 1980AAGGCGTGCT GTGGAAATAA AATGTTTATT TGCTTCTAAA AAAAAAAAAA AAAAA 2035B氨基酸序列(SEQ ID NO:8)長度210個氨基酸1 MSRMFCQAAR VDLTLDPDTA HPALMLSPDR RGVRLAERRQ EVADHPKRFS ADCCVLGAQG61 FRSGRHYWEV EVGGRRGWAV GAARESTHHK EKVGPGGSSV GSGDASSSRH HHRRRRLHLP121 QQPLLQREVW CVGTNGKRYQ AQSSTEQTLL SPSEKPRRFG VYLDYEAGRL GFYNAETLAH181 VHTFSAAFLG ERVFPFFRVL SKGTRIKLCPC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:9)克隆號PP4522起始編碼子354 ATG終止編碼子986 TGA蛋白質分子量236071 GG CAC CTC GAG TTT TTT TTT TTT TTA TTC CCA GGA CAT CAA GGA GAC 4748 TTT CAA TAG GTG TGT TCC CAG TCT TTG CCC TTC GTG ACC CAG TGG CAT 9596 CTG GTT CCC TGT CCC TGC TTC TCT TCG GTA TCC CTC TCC TCT CCT TCC 143144 TTC CCC AGG ACC TGA GTT TCC ATC TCC TGG ACC CTC CTC TCC TTC CCC 191192 TCA GCT TTT GCT TTT CCC TCT GGG AAT ATC GTG GTC CCA CCC CCT GCC 239240 CGG TCC CCT TCC TCC AGG TGT GAA GAG GTA CAG CTG CAG CCC CCA GAG 287288 GTC TGG TCC CCT GAC CCG TGC CAA CCC CAT AGC CAT GAC TTC CTG ACA 335336 GAT GCC ATC GTG AGG AAA ATG AGC CGG ATG TTC TGT CAG GCT GCG AGA 3831 Met Ser Arg Met Phe Cys Gln Ala Ala Arg 10384 GTG GAC CTG ACC CTG GAC CCT GAC ACG GCT CAC CCG GCC CTG ATG CTG 43111 Val Asp Leu Thr Leu Asp Pro Asp Thr Ala His Pro Ala Leu Met Leu 26432 TCC CCT GAC CGC CGG GGG GTC CGC CTG GCA GAG CGG CGG CAG GAG GTT 47927 Ser Pro Asp Arg Arg Gly Val Arg Leu Ala Glu Arg Arg Gln Glu Val 42480 GCT GAC CAT CCC AAG CGC TTC TCG GCC GAC TGC TGC GTA CTG GGG GCC 52743 Ala Asp His Pro Lys Arg Phe Ser Ala Asp Cys Cys Val Leu Gly Ala 58528 CAG GGC TTC CGC TCC GGC CGG CAC TAC TGG GAG GTA GAG GTG GGC GGG 57559 Gln Gly Phe Arg Ser Gly Arg His Tyr Trp Glu Val Glu Val Gly Gly 74576 CGG CGG GGC TGG GCG GTG GGT GCT GCC CGT GAA TCA ACC CAT CAT AAG 62375 Arg Arg Gly Trp Ala Val Gly Ala Ala Arg Glu Ser Thr His His Lys 90624 GAA AAG GTG GGC CCT GGG GGT TCC TCC GTG GGC AGC GGG GAT GCC AGC 67191 Glu Lys Val Gly Pro Gly Gly Ser Ser Val Gly Ser Gly Asp Ala Ser 106672 TCC TCG CGC CAT CAC CAT CGC CGC CGC CGG CTC CAC CTG CCC CAG CAG 719107 Ser Ser Arg His His His Arg Arg Arg Arg Leu His Leu Pro Gln Gln 122720 CCC CTG CTC CAG CGG GAA GTG TGG TGC GTG GGC ACC AAC GGC AAA CGC 767123 Pro Leu Leu Gln Arg Glu Val Trp Cys Val Gly Thr Asn Gly Lys Arg 138768 TAT CAG GCC CAG AGC TCC ACA GAA CAG ACG CTG CTG AGC CCC AGT GAG 815139 Tyr Gln Ala Gln Ser Ser Thr Glu Gln Thr Leu Leu Ser Pro Ser Glu 154816 AAA CCA AGG CGC TTT GGT GTG TAC CTG GAC TAT GAA GCT GGG CGC CTG 863155 Lys Pro Arg Arg Phe Gly Val Tyr Leu Asp Tyr Glu Ala Gly Arg Leu 170864 GGC TTC TAC AAC GCA GAG ACT CTA GCC CAC GTG CAC ACC TTC TCG GCT 911171 Gly Phe Tyr Asn Ala Glu Thr Leu Ala His Val His Thr Phe Ser Ala 186912 GCC TTC CTG GGC GAG CGT GTC TTT CCT TTC TTC CGG GTG CTC TCC AAG 959187 Ala Phe Leu Gly Glu Arg Val Phe Pro Phe Phe Arg Val Leu Ser Lys 202960 GGC ACC CGC ATC AAG CTC TGC CCT TGA TTA TCC TGC CAC CCG CAG GGG1007203 Gly Thr Arg Ile Lys Leu Cys Pro *** 2111008 CCC CTC TGT CAG CAC TTG GGG GGT GGG TGG TGG AGG GTG GCC CGT AAG10551056 TTT GAG GGC TCA AAG GCT CTT CCC ACT GCT TGT TAC TGT GTT GCT TCC11031104 CAC TCC CCC TTG ACC CCA GGC CCC TGC TTC TCC CTC TAG GAG CCT AAA11511152 GAA CCC TCC TGG CCT CCA GCT CAG CCT TCT CTC ACC TAC TAT GTC TGT11991200 CCA ACA GGT CTG CAT GGG TCC CTG ATA ATG AGA ACA GCT GCC TGG TCT12471248 TCT CTC CCA GTC TGC CTA GCC CAG CCC TGG GAC TGG AAT TTG AGT AGG12951296 GGA TGA GGG GAA ATT GTA ATT TCA TTC CTT AAC TTC CTT TTC CCC ACC13431344 CCT GCT CTT CAA CCT CTT TAT CAG TTC TGA GGC TGG AGG GTT TGG GCA13911392 AGG CAA CAT CCC CAT TCC AAT TCC ATT TTC TGA TGC AGA TTT TAG CTG14391440 AGG GAT TTG GAA GCC ATT TGG GGA GGC AGG CTG GGC CAA AGG GTA GAG14871488 CTG GGT AAT AAA TGT CTA TTC TCC TGG GGA GGA GGG ATT CTA AAC TTT15351536 CCT TCC GTC CTC AAT TTC TAC CTC CAT AGA CCG GCC AGA ATT TAG CTT15831584 CAC TTG AGA GAG ATC TGG AAT GGT CGC CAT GAT TGA AAC CAC GCA CCA16311632 TTA CAT CAT CAT TAC ATT AAT TAC ATC AAC ATA AAT TAT TTC TTC CCC16791680 CTT CCC TTT TCC AGC ACT CAA CCA AGG AGC AAA GCT CAT CCC ACC CCA17271728 CAC CCC TCC CAG GTC TGC TCA CTG CCA GGC TCC TCT CCC CTT TGT TCA17751776 GTG GAG CTG GCT TTT CTC CCA GCC CCT TTC CAT GCC TTT CAC TCC ATT18231824 TGG CAA GCT CTG AGG GGG AGC CTG GGG ACG GGT TTG GGT CCC CAG GAG18711872 GAG AGC CTT GGG TAT AAT CTA TTT TTC TAG GAG CCT CTT GCC TTG TCA19191920 CTT GCA GCT TTC GCC CTC TGC TTT GAT GGC TGA GGT GAA CTC ATG TTC19671968 TTT GGG AAA AGG GAA GGC GTG CTG TGG AAA TAA AAT GTT TAT TTG CTT20152016 CTA AAA AAA AAA AAA AAA AA 20354.PP4583蛋白A核苷酸序列(SEQ ID NO:10)長度2142bpCCGAAACGGG GAAGTTGTCT TGTGTGGAGA GGTTAGTAGA GCAGCGCGCG CGTCACCAGA 60GTCGTTTCTC TTCGGAGTCT TAGGTGATCG AGGGTGTGCC CAGGGGGCGG GACTTGTTTG120CGCCTCCCGT TCCCTCCCAA TTTCCAAACG TGTCACCCCG GCGCCGACGG CCCTGTGCAG180GGGAAGCAGA TGGAGTTCAA GCTGGAGGCT CATCGCATCG TCAGCATCTC TCTGGGCAAG240ATCTACAACT CGCGGGTCCA GCGCGGCGGC ATCAAGCTGC ATAAGAACCT CCTGGTCTCG300CTGGTGCTGC GCAGCGCCCG CCAAGTCTAC CTGAGCGACC CGTGCCCCGG CCTCTACCTG360GCCGGTCCCG CTGGGACCCC GGCGCCGCCA CCGCAGCAGC AGCCCGGGGA GCCGGCGGCC420GGGCCACCCG CCGGCTGGGG AGAGCCGCCC CCGCCCGCCG CTCATGCCTC TTGGCCGGAG480ACCGAGCCGC AGCCGGAGCG CTCCTCCGTC TCAGACGCGC CGCGGGTAGG GGACGAGGTG540CCGGTGGCCA CGGTGACTGG AGTCGGGGAC GTTTTTCAGG GCGGAGAGGC GGACGCGACG600GAAGCTGCCT GGAGCCGCGT GGAGGGGCCG CGCCAGGCGG CGGCCAGAGA AGCCGAGGGT660ACCGCCGGAG GCTGGGGCGT CTTCCCCGAG GTATCTCGTG CCGCGCGCCG CCCCTGCGGC720TGCCCCCTAG GCGGGGAGGA CCCGCCGGGT ACACCGGCCG CGACCCCCGG CGCTGCCTGC780TGCTGCGCGC CGCGACCAGC GGAGGACGAG CCCCCCGCGC CGCCCGCGGT GTGCCCCAGG840AAGCGCTGCG CGGCGGGGGT GGGCGGCGGC CCAGCGGGCT GCCCGGCGCC CGGCTCGACC900CCGCTCAAGA AGCCCCGCCG GAACTTAGAG CAGCCGCCGA GTGGAGGAGA GGACGACGAC960GCGGAGGAGA TGGAGACCGG GAACGTGGCT AACCTCATCA GCATCTTCGG TTCCAGTTTC 1020TCGGGACTCC TACGGAAAAG CCCCGGGGGC GGCAGAGAGG AAGAGGAGGG AGAGGAGAGC 1080GGTCCGGAAG CCGCCGAGCC CGGGCAGATC TGCTGCGATA AGCCGGTGCT GAGAGACATG 1140AACCCCTGGA GCACAGCCAT CGTGGCCTTC TGAGCCCTTG GCCCCCCTGC GGGGAGGAGG 1200TGGAGCAGCG GGCGTCCCCG AAGTGAGGGC CAGGCCCTTC CCGGCTGCGA GGACGCCCAG 1260AGACCGCGGG CGCTGAGCGC GTTGGGCAGA CTGGTTGCCT CTGGGCATCG CAAACTGCCC 1320CCGGGCGCAT CTGGCTTATC TGGAGACCTG GGAGCTTGAG GCTCATTGGA AGAGGACGAT 1380CGTTAACTTT TGTGTTTGTG TATGTCTGTG TATGTAAGTT TGTCTTGTGG CATTAAGACT 1440ATTTTGCTCT TCTGGAATGC ACCACTCCTT CCCCAGGGTT TAAGAGATTG GGGGCAGACA 1500GGGACTTTCC TCTGCCGGCT GCGTGGAGAA GGAAGCGGCT AAAAGGTTTG GGCCGGGGAG 1560TTCCCCATTC GTTCTCCGGG GAGGGAGGGA CTTTACACCT ACCCCTCACC GGAAAGCTAG 1620ACCCGCTTCA GGGCCAGGAG TGGCGTTTCC GCACAGGATT TCCTAAGACG AGAGGGATTT 1680AGCCAAGAGC ACAGACTTGG ATTCCTTCTG TCCCTCCCCA CCTTTCTCTC CCAATGAAGA 1740AACGTTTATA TCCTGTGATT ACTCTAGGAA AGGGGCGTAT TAACGGTCCT TTGCTTCCCC 1800GCAGGGGAGA AAAAGCTTGA CGAACTTCAC AGAAGAGTTC AAGCTTGGAA ATAATGGAGT 1860TTATAGAGAA AAGATATATT TTTAAAAGCT CTAGGTCAGA AGTACTACAC AGTGCTTTTA 1920AAAAGTGTTT AATGAGAGTT TACAGACAGA AGCCCGAAGT GGAAAGACCT TATGGTTTTG 1980TAGATATGGT GACTCCAGTC TTTGTTGTAT AAAGGTTGGG GGAGCTGATA AGGTTTTTGT 2040ACAGTATTTT CTCCTTCGTT GTATTGATTT TTGTATAAAA ATGTAACTTC TACGTGTCTA 2100ACACGTATTA AATATTTTGA AGCAAAAAAA AAAAAAAAAA AA 2142B氨基酸序列(SEQ ID NO:11)長度327個氨基酸1 MEFKLEAHRI VSISLGKIYN SRVQRGGIKL HKNLLVSLVL RSARQVYLSD PCPGLYLAGP61 AGTPAPPPQQ QPGEPAAGPP AGWGEPPPPA AHASWPETEP QPERSSVSDA PRVGDEVPVA121 TVTGVGDVFQ GGEADATEAA WSRVEGPRQA AAREAEGTAG GWGVFPEVSR AARRPCGCPL181 GGEDPPGTPA ATPGAACCCA PRPAEDEPPA PPAVCPRKRC AAGVGGGPAG CPAPGSTPLK241 KPRRNLEQPP SGGEDDDAEE METGNVANLI SIFGSSFSGL LRKSPGGGRE EEEGEESGPE301 AAEPGQICCD KPVLRDMNPW STAIVAFC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:12)克隆號PP4583起始編碼子190 ATG終止編碼子1173 TGA蛋白質分子量336121 CCG AAA CGG GGA AGT TGT CTT GTG TGG AGA GGT TAG TAG AGC AGC GCG 4849 CGC GTC ACC AGA GTC GTT TCT CTT CGG AGT CTT AGG TGA TCG AGG GTG 9697 TGC CCA GGG GGC GGG ACT TGT TTG CGC CTC CCG TTC CCT CCC AAT TTC 144145 CAA ACG TGT CAC CCC GGC GCC GAC GGC CCT GTG CAG GGG AAG CAG ATG 1921 Met 1193 GAG TTC AAG CTG GAG GCT CAT CGC ATC GTC AGC ATC TCT CTG GGC AAG 2402 Glu Phe Lys Leu Glu Ala His Arg Ile Val Ser Ile Ser Leu Gly Lys 17241 ATC TAC AAC TCG CGG GTC CAG CGC GGC GGC ATC AAG CTG CAT AAG AAC 28818 Ile Tyr Asn Ser Arg Val Gln Arg Gly Gly Ile Lys Leu His Lys Asn 33289 CTC CTG GTC TCG CTG GTG CTG CGC AGC GCC CGC CAA GTC TAC CTG AGC 33634 Leu Leu Val Ser Leu Val Leu Arg Ser Ala Arg Gln Val Tyr Leu Ser 49337 GAC CCG TGC CCC GGC CTC TAC CTG GCC GGT CCC GCT GGG ACC CCG GCG 38450 Asp Pro Cys Pro Gly Leu Tyr Leu Ala Gly Pro Ala Gly Thr Pro Ala 65385 CCG CCA CCG CAG CAG CAG CCC GGG GAG CCG GCG GCC GGG CCA CCC GCC 43266 Pro Pro Pro Gln Gln Gln Pro Gly Glu Pro Ala Ala Gly Pro Pro Ala 81433 GGC TGG GGA GAG CCG CCC CCG CCC GCC GCT CAT GCC TCT TGG CCG GAG 48082 Gly Trp Gly Glu Pro Pro Pro Pro Ala Ala His Ala Ser Trp Pro Glu 97481 ACC GAG CCG CAG CCG GAG CGC TCC TCC GTC TCA GAC GCG CCG CGG GTA 52898 Thr Glu Pro Gln Pro Glu Arg Ser Ser Val Ser Asp Ala Pro Arg Val 113529 GGG GAC GAG GTG CCG GTG GCC ACG GTG ACT GGA GTC GGG GAC GTT TTT 576114 Gly Asp Glu Val Pro Val Ala Thr Val Thr Gly Val Gly Asp Val Phe 129577 CAG GGC GGA GAG GCG GAC GCG ACG GAA GCT GCC TGG AGC CGC GTG GAG 624130 Gln Gly Gly Glu Ala Asp Ala Thr Glu Ala Ala Trp Ser Arg Val Glu 145625 GGG CCG CGC CAG GCG GCG GCC AGA GAA GCC GAG GGT ACC GCC GGA GGC 672146 Gly Pro Arg Gln Ala Ala Ala Arg Glu Ala Glu Gly Thr Ala Gly Gly 161673 TGG GGC GTC TTC CCC GAG GTA TCT CGT GCC GCG CGC CGC CCC TGC GGC 720162 Trp Gly Val Phe Pro Glu Val Ser Arg Ala Ala Arg Arg Pro Cys Gly 177721 TGC CCC CTA GGC GGG GAG GAC CCG CCG GGT ACA CCG GCC GCG ACC CCC 768178 Cys Pro Leu Gly Gly Glu Asp Pro Pro Gly Thr Pro Ala Ala Thr Pro 193769 GGC GCT GCC TGC TGC TGC GCG CCG CGA CCA GCG GAG GAC GAG CCC CCC 816194 Gly Ala Ala Cys Cys Cys Ala Pro Arg Pro Ala Glu Asp Glu Pro Pro 209817 GCG CCG CCC GCG GTG TGC CCC AGG AAG CGC TGC GCG GCG GGG GTG GGC 864210 Ala Pro Pro Ala Val Cys Pro Arg Lys Arg Cys Ala Ala Gly Val Gly 225865 GGC GGC CCA GCG GGC TGC CCG GCG CCC GGC TCG ACC CCG CTC AAG AAG 912226 Gly Gly Pro Ala Gly Cys Pro Ala Pro Gly Ser Thr Pro Leu Lys Lys 241913 CCC CGC CGG AAC TTA GAG CAG CCG CCG AGT GGA GGA GAG GAC GAC GAC 960242 Pro Arg Arg Asn Leu Glu Gln Pro Pro Ser Gly Gly Glu Asp Asp Asp 257961 GCG GAG GAG ATG GAG ACC GGG AAC GTG GCT AAC CTC ATC AGC ATC TTC1008258 Ala Glu Glu Met Glu Thr Gly Asn Val Ala Asn Leu lle Ser Ile Phe 2731009 GGT TCC AGT TTC TCG GGA CTC CTA CGG AAA AGC CCC GGG GGC GGC AGA1056274 Gly Ser Ser Phe Ser Gly Leu Leu Arg Lys Ser Pro Gly Gly Gly Arg 2891057 GAG GAA GAG GAG GGA GAG GAG AGC GGT CCG GAA GCC GCC GAG CCC GGG1104290 Glu Glu Glu Glu Gly Glu Glu Ser Gly Pro Glu Ala Ala Glu Pro Gly 3051105 CAG ATC TGC TGC GAT AAG CCG GTG CTG AGA GAC ATG AAC CCC TGG AGC1152306 Gln Ile Cys Cys Asp Lys Pro Val Leu Arg Asp Met Asn Pro Trp Ser 3211153 ACA GCC ATC GTG GCC TTC TGA GCC CTT GGC CCC CCT GCG GGG AGG AGG1200322 Thr Ala Ile Val Ala Phe *** 3281201 TGG AGC AGC GGG CGT CCC CGA AGT GAG GGC CAG GCC CTT CCC GGC TGC12481249 GAG GAC GCC CAG AGA CCG CGG GCG CTG AGC GCG TTG GGC AGA CTG GTT12961297 GCC TCT GGG CAT CGC AAA CTG CCC CCG GGC GCA TCT GGC TTA TCT GGA13441345 GAC CTG GGA GCT TGA GGC TCA TTG GAA GAG GAC GAT CGT TAA CTT TTG13921393 TGT TTG TGT ATG TCT GTG TAT GTA AGT TTG TCT TGT GGC ATT AAG ACT14401441 ATT TTG CTC TTC TGG AAT GCA CCA CTC CTT CCC CAG GGT TTA AGA GAT14881489 TGG GGG CAG ACA GGG ACT TTC CTC TGC CGG CTG CGT GGA GAA GGA AGC15361537 GGC TAA AAG GTT TGG GCC GGG GAG TTC CCC ATT CGT TCT CCG GGG AGG15841585 GAG GGA CTT TAC ACC TAC CCC TCA CCG GAA AGC TAG ACC CGC TTC AGG16321633 GCC AGG AGT GGC GTT TCC GCA CAG GAT TTC CTA AGA CGA GAG GGA TTT16801681 AGC CAA GAG CAC AGA CTT GGA TTC CTT CTG TCC CTC CCC ACC TTT CTC17281729 TCC CAA TGA AGA AAC GTT TAT ATC CTG TGA TTA CTC TAG GAA AGG GGC17761777 GTA TTA ACG GTC CTT TGC TTC CCC GCA GGG GAG AAA AAG CTT GAC GAA18241825 CTT CAC AGA AGA GTT CAA GCT TGG AAA TAA TGG AGT TTA TAG AGA AAA18721873 GAT ATA TTT TTA AAA GCT CTA GGT CAG AAG TAC TAC ACA GTG CTT TTA19201921 AAA AGT GTT TAA TGA GAG TTT ACA GAC AGA AGC CCG AAG TGG AAA GAC19681969 CTT ATG GTT TTG TAG ATA TGG TGA CTC CAG TCT TTG TTG TAT AAA GGT20162017 TGG GGG AGC TGA TAA GGT TTT TGT ACA GTA TTT TCT CCT TCG TTG TAT20642065 TGA TTT TTG TAT AAA AAT GTA ACT TCT ACG TGT CTA ACA CGT ATT AAA21122113 TAT TTT GAA GCA AAA AAA AAA AAA AAA AAA21425.PP4664蛋白A核苷酸序列(SEQ ID NO:13)長度2158bpGCCATCCCTA AGCAGACCCC AGTCCAATAC CTGCTCCCTG AGGCCAAGGC CCAGGACTCA 60GACAAGATCT GCGTGGTCAT CGACCTGGAC GAGACCCTGG TGCACAGCTC CTTCAAGCCA 120GTGAACAACG CGGACTTCAT CATCCCTGTG GAGATTGATG GGGTGGTCCA CCAGGTCTAC 180GTGTTGAAGC GTCCTCATGT GGATGAGTTC CTGCAGCGAA TGGGCGAGCT CTTTGAATGT 240GTGCTGTTCA CTGCTAGCCT CGCCAAGTAC GCAGACCCAG TAGCTGACCT GCTGGACAAA 300TGGGGGGCCT TCCGGGCCCG GCTGTTTCGA GAGTCCTGCG TCTTCCACCG GGGGAACTAC 360GTGAAGGACC TGAGCCGGTT GGGTCGAGAC CTGCGGCGGG TGCTCATCCT GGACAATTCA 420CCTGCCTCCT ATGTCTTCCA TCCAGACAAT GCTGTACCGG TGGCCTCGTG GTTTGACAAC 480ATGAGTGACA CAGAGCTCCA CGACCTCCTC CCCTTCTTCG AGCAACTCAG CCGTGTGGAC 540GACGTGTACT CAGTGCTCAG GCAGCCACGG CCAGGGAGCT AGTGAGGGTG ATGGGGCCAG 600GACCTGCCCC TGACCAATGA TACCCACACC TCCTCCCAGG AAGACTGCCC AGGCCTTTGT 660TAGGAAAACC CATGGGCCGC CGCCACACTC AGTGCCATGG GGAAGCGGGC GTCTCCCCCA 720CCAGCCCCAC CAGGCGGTGT AGGGGCAGCA GGCTGCACTG AGGACCGTGA GCTCCAGGCC 780CCGTGTCAGT GCCTTCAAAC CTCCTCCCCT ATTCTCAGGG GACCTGGGGG GCCCTGCCTG 840CTGCTCCCTT TTTCTGTCTC TGTCCATGCT GCCATGTTTC TCTGCTGCCA AATTGGGCCC 900CTTGGCCCCT TCCGGTTCTG CTTCCTGGGG GCAGGGTTCC TGCCTTGGAC CCCCAGTCTG 960GGAACGGTGG ACATCAAGTG CCTTGCATAG AGCCCCCTCT TCCCCGCCCA GCTTTCCCAG 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Pro 15911 TCC GGT TCT GCT TCC TGG GGG CAG GGT TCC TGC CTT GGA CCC CCA GTC 95816 Ser Gly Ser Ala Ser Trp Gly Gln Gly Ser Cys Leu Gly Pro Pro Val 31959 TGG GAA CGG TGG ACA TCA AGT GCC TTG CAT AGA GCC CCC TCT TCC CCG100632 Trp Glu Arg Trp Thr Ser Ser Ala Leu His Arg Ala Pro Ser Ser Pro 471007 CCC AGC TTT CCC AGG GGC ACA GCT CTA GGC TGG GAG GGG AGA ACC AGC105448 Pro Ser Phe Pro Arg Gly Thr Ala Leu Gly Trp Glu Gly Arg Thr Ser 631055 CCC TCC CCC TGC CCC ACC TCC TCC CTT GGG ACT GAG AGG GCC CCT ACC110264 Pro Ser Pro Cys Pro Thr Ser Ser Leu Gly Thr Glu Arg Ala Pro Thr 791103 AAC CTT TGC CTC TGC CTT GGA GGG AGG GGA GGT CTG TTA CCA CTG GGG115080 Asn Leu Cys Leu Cys Leu Gly Gly Arg Gly Gly Leu Leu Pro Leu Gly 951151 AAG GCA GCA GGA GTC TGT CCT TCA GGC CCC ACA GTG CAG CTT CTC CAG119896 Lys Ala Ala Gly Val Cys Pro Ser Gly Pro Thr Val Gln Leu Leu Gln 1111199 GGC CGA CAG CTG AGG GCT GCT CCC TGC ATC ATC CAA GCA ATG ACC TCA1246112 Gly Arg Gln Leu Arg Ala Ala Pro Cys Ile Ile Gln Ala Met Thr Ser 1271247 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GCCAAGGCTG CCATCGTCTG CTATGACCTC ACAGACAGCA 480GCAGCTTTGA GCGAGCAAAG TTCTGGGTGA AGGAACTGCG CAGCCTAGAG GAGGGCTGCC 540AAATCTACTT ATGTGGCACC AAGAGTGACC TGCTGGAAGA AGACCGGAGG CGTCGACGTG 600TGGACTTCCA CGACGTCCAG GACTATGCAG ACAGTAGCTG CTCCTCAGCC CTTTGGGGGG 660TGGGGGTGTG TGGCTGTCTG GGTGGATCAA AGAAAATAGG GACTGCCTTG GCTGCCAGGG 720CAAGGTGCTC TAGGAGGTCT TCCTGGCCTC CTTGAACTGT GGGGTCCAGG AGACTCCCTG 780AACTGCTAGC CCTCCCTTTT GTCTGTTTAT CTAATTCTCA GGTATGAGGC TTTAGTCACT 840TCTCTTTACA GATATCAAAG CTCAGCTCTT TGAAACATCC AGCAAGACAG GCCAGAGTGT 900GGACGAGCTC TTCCAGAAAG TGGCAGAGGA TTACGTCAGT GTGGCTGCCT TCCAGGTGAT 960GACAGAGGAC AAGGGCGTGG ATCTGGGCCA GAAGCCAAAC CCCTACTTCT ACAGCTGTTG 1020TCATCACTGA GTCAGCACTC ACCTGGCCTG GGGGAATTAA AGGAATTCCC CGTAAGGGCT 1080GGACCCAGCT CCTTTCTGGG CTTGGGTAGT CAAATGTCTG AGCTACCCCA GGTCCTCATG 1140TCAGCAGAGT GGCGCCTGCC TGTGCTGGCC CATGGAACGG AGACAGCATT GGGCTGACTG 1200TGGGCATGAG GAGGGATAAG GCTGATTTGG ACCCCAGGCT TCTGCCCTGG ACAGCACTTG 1260TGTCTGCAGA TTATTTAAGT GGCTTTTGAT CTGTAAATAA AATCAGTGCA CTGTGCATCA 1320AAAAAAAAAA AAAAAAA1337B氨基酸序列(SEQ ID NO:17)長度184個氨基酸1 MSGQRVDVKV VMLGKEYVGK TSLVERYVHD RFLVGPYQNT IGAAFVAKVM SVGDRTVTLG61 IWDTAGSERY EAMSRIYYRG AKAAIVCYDL TDSSSFERAK FWVKELRSLE EGCQIYLCGT121 KSDLLEEDRR RRRVDFHDVQ DYADSSCSSA LWGVGVCGCL GGSKKIGTAL AARARCSRRS181 SWPPC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:18)克隆號PP4748起始編碼子201 ATG終止編碼子755 TGA蛋白質分子量205171 GA ACA GCG GGG GCA CAC GGG GCG CTG CCG AAG TGC AAG GCC ACG GCC 4748 AGA GCT CGA GCC CGA CGC GCT GTC TGG AGT CGT AGG TTG GCG CCG TTT 9596 GGG GTC GGG GTC TGA GGC TTG GGC GCT GCC TGG GCC GAG CGG AGA TCG 143144 GGG TTT GCC TCC CGT CCC CGC TCA GGA CCC TGA CGT GGC TGA AGC GGC 191192 CCC GGG AGC ATG AGC GGG CAG CGC GTG GAC GTC AAG GTG GTG ATG CTG 2391 Met Ser Gly Gln Arg Val Asp Val Lys Val Val Met Leu 13240 GGC AAG GAG TAC GTG GGC AAG ACT AGC CTG GTG GAG CGC TAC GTG CAC 28714 Gly Lys Glu Tyr Val Gly Lys Thr Ser Leu Val Glu Arg Tyr Val His 29288 GAC CGC TTT CTG GTG GGG CCT TAT CAG AAC ACC ATC GGG GCC GCC TTC 33530 Asp Arg Phe Leu Val Gly Pro Tyr Gln Asn Thr Ile Gly Ala Ala Phe 45336 GTG GCC AAG GTG ATG TCG GTC GGA GAC CGG ACT GTG ACA TTA GGT ATT 38346 Val Ala Lys Val Met Ser Val Gly Asp Arg Thr Val Thr Leu Gly Ile 61384 TGG GAC ACA GCA GGC TCT GAG CGC TAT GAG GCC ATG AGT AGA ATC TAC 43162 Trp Asp Thr Ala Gly Ser Glu Arg Tyr Glu Ala Met Ser Arg Ile Tyr 77432 TAT CGG GGT GCC AAG GCT GCC ATC GTC TGC TAT GAC CTC ACA GAC AGC 47978 Tyr Arg Gly Ala Lys Ala Ala Ile Val Cys Tyr Asp Leu Thr Asp Ser 93480 AGC AGC TTT GAG CGA GCA AAG TTC TGG GTG AAG GAA CTG CGC AGC CTA 52794 Ser Ser Phe Glu Arg Ala Lys Phe Trp Val Lys Glu Leu Arg Ser Leu 109528 GAG GAG GGC TGC CAA ATC TAC TTA TGT GGC ACC AAG AGT GAC CTG CTG 575110 Glu Glu Gly Cys Gln Ile Tyr Leu Cys Gly Thr Lys Ser Asp Leu Leu 125576 GAA GAA GAC CGG AGG CGT CGA CGT GTG GAC TTC CAC GAC GTC CAG GAC 623126 Glu Glu Asp Arg Arg Arg Arg Arg Val Asp Phe His Asp Val Gln Asp 141624 TAT GCA GAC AGT AGC TGC TCC TCA GCC CTT TGG GGG GTG GGG GTG TGT 671142 Tyr Ala Asp Ser Ser Cys Ser Ser Ala Leu Trp Gly Val Gly Val Cys 157672 GGC TGT CTG GGT GGA TCA AAG AAA ATA GGG ACT GCC TTG GCT GCC AGG 719158 Gly Cys Leu Gly Gly Ser Lys Lys Ile Gly Thr Ala Leu Ala Ala Arg 173720 GCA AGG TGC TCT AGG AGG TCT TCC TGG CCT CCT TGA ACT GTG GGG TCC 767174 Ala Arg Cys Ser Arg Arg Ser Ser Trp Pro Pro *** 185768 AGG AGA CTC CCT GAA CTG CTA GCC CTC CCT TTT GTC TGT TTA TCT AAT 815816 TCT CAG GTA TGA GGC TTT AGT CAC TTC TCT TTA CAG ATA TCA AAG CTC 863864 AGC TCT TTG AAA CAT CCA GCA AGA CAG GCC AGA GTG TGG ACG AGC TCT 911912 TCC AGA AAG TGG CAG AGG ATT ACG TCA GTG TGG CTG CCT TCC AGG TGA 959960 TGA CAG AGG ACA AGG GCG TGG ATC TGG GCC AGA AGC CAA ACC CCT ACT10071008 TCT ACA GCT GTT GTC ATC ACT GAG TCA GCA CTC ACC TGG CCT GGG GGA10551056 ATT AAA GGA ATT CCC CGT AAG GGC TGG ACC CAG CTC CTT TCT GGG CTT11031104 GGG TAG TCA AAT GTC TGA GCT ACC CCA GGT CCT CAT GTC AGC AGA GTG11511152 GCG CCT GCC TGT GCT GGC CCA TGG AAC GGA GAC AGC ATT GGG CTG ACT11991200 GTG GGC ATG AGG AGG GAT AAG GCT GAT TTG GAC CCC AGG CTT CTG CCC12471248 TGG ACA GCA CTT GTG TCT GCA GAT TAT TTA AGT GGC TTT TGA TCT GTA12951296 AAT AAA ATC AGT GCA CTG TGC ATC AAA AAA AAA AAA AAA AAA1337D.Blastp結果Query=PP4748蛋白(184個氨基酸)>SP_IN:P91857 P91857 caenorhabditis elegans.f26h9.6 protein.11/1999長度=208個氨基酸分值=108bits(266),預計值=3e-23相同性=60/140(42%),相似性=88/140(62%),缺口=8/140(5%)Query:9 KVVMLGKEYVGKTSLVERYVHDRFLVGPYQ-NTIGAAFVAKVMSVGDRTVTLGIWDTAGS 67K+V+LG+ VGK+SLV R+V +FYQ +TIGAAF+ + + + D T+ IWDTAGSbjct:21 KLVLLGESAVGKSSLVLRFVKGQF--HEYQESTIGAAFLTQTVCLDDATIKFEIWDTAGQ 78Query: 68 ERYEAMSRIYYRGAKAAIVCYDLTDSSSFERAKFWVKEL-RSLEEGCQIYLCGTKSXXXX 126ERY +++ +YYRGA+AAIV YD+T+ SF++AK WVKEL R + L G K+Sbjct: 79 ERYHSLAPMYYRGAQAAIVVYDITNQESFQKAKNWVKELQRQASPNIVMALAGNKA---- 134Query: 127 XXXXXXXVDFHDVQDYADSS 146V++ + YA+ +Sbjct: 135 DVANKRTVEYEEANAYAEDN 1547.PP4762蛋白A核苷酸序列(SEQ ID NO:19)長度2417bpGTTTCTGGCG CGAACTTCCG CCGTTCCGAA GTTGCACGGT GAATTGGCGC TATGTCTGGG60GACAGCAGCG GCCGCGGGCC AGAGGGCCGG GGCCGGGGCC GCGACCCGCA TCGGGATCGC 120ACCCGCTCCC 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TTTAGTAGAG 1860ACATTGTTTC GCCATGTTGG CCAAGCTAGT CTTGAACCCC TGACCTCAGG TGATCTGCCA 1920GCATCGGCCT CCCAAAGTGC TGGGATTACA GGTCTGATAC CCCAATGTCC TTCTTTGACT 1980TTGTGGTTGA TCCTCATTCT TTCCCCCGTA CAGTGGAAAA CATCTTTCAT GTTTCCTTCA 2040TTATACGGGA TGGTTTTGCA AGAATAAGAC TTGACCAAGA CCGACTGCCA GTAATAGAGC 2100CTGTTAGTAT TAATGAAGAA AATGAGGGAT TTGAACATAA CACACAAGTT AGAAATCAAG 2160GAATTATAGC TTTGAGTTAC CGTGACTGGG AGGAGATTGT GAAGACCTTT GAGATTTCAG 2220AGCCTGTGAT TACTCCAAGT CAGAGGCAGC AGAAGCCAAG TGCTTGATGC TAGCTGAAGG 2280ACTCAAATGG ATAGTGAAGT CCAAAACGGA AAGCGGCATG TATTGTACAT ATTGTATGAT 2340TCAACATTTT TAAAGGCAGA TTGTTTTTAG TAAAATGTAG CTTTTGATAG TTAAAAAAAA 2400AAAAAAAAAA AAAAAAA 2417B氨基酸序列(SEQ ID NO:20)長度157個氨基酸1 MLRYVETLLT HMGVNPLEAE ELIRDEDSPD FEFIVYDSWK ITGRTAENTF NKTHTFHFLL61 GSIYGECPVP KPRVDRPRKV PVIQEERAMP AQLRRMEESH QEATEKEVER ILGLLQTYFR121 EDRDSLTLSP RLECSGTIST HCNLHLLDSS NSPASASC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:21)克隆號PP4762起始編碼子1320 ATG 終止編碼子1793 TGA蛋白質分子量180601 GT TTC TGG CGC GAA CTT CCG CCG TTC CGA AGT TGC ACG GTG AAT TGG 4748 CGC TAT GTC TGG GGA CAG CAG CGG CCG CGG GCC AGA GGG CCG GGG CCG 9596 GGG CCG CGA CCC GCA TCG GGA TCG CAC CCG CTC CCG CTC CCG CTC GCG 143144 GTC CCC TTT GTC GCC CAG GTC CCG CCG CGG GTC TGC GCG GGA GCG CAG 191192 AGA GGC CCC AGA GCG CCC GAG CCT GGA GGA CAC AGA GCC GTC GGA TTC 239240 CGG GGA CGA GAT GAT GGA CCC GGC CAG CTT GGA GGC GGA GGC CGA CCA 287288 AGG CCT GTG CCG CCA GAT CCG CCA TCA GTA CCG GGC GCT CAT CAA CTC 335336 CGT CCA ACG TAA GGC GGC GCC TCC GGG CGG CGC GGG CCC GGA CGG GCC 383384 GCT GTC CCC GCC CTG CGC CGG GCG CGG GGG GAG GGC ACC GGA GGC AGG 431432 TGC CGG GCG GAG GCC CGG CGC GGC GTT AGT AGA GAC GCG CCG GGT GCC 479480 AGC CCC TCG CCG CAC CTT AAA TTG TTG ACA AAG TGC TCC CAC TTT GTG 527528 GCT GGA GCC GTA CGA CCT TGG CGC GGG TCC CCG AGT GGC GGG CTG GAA 575576 AAG CTG GAG GCC AGA GCC GTT CGC GGA GTC GCC CGA GCC CAG CCA GCC 623624 AGT GGG GAG AGG CAG GAC GCG GAC TCC GCG TGC TTT GAT TGC GCC CGG 671672 CAG TCC TCG GCG TGG GCT CCC GGC CTC GCA GCG GCA CGC TGA GCT GCA 719720 GCG GCA CGC GAG AGC TGT CAA ATG CAC GTT CTC GGA CCC CAC CCG GAC 767768 CCG CGG AAT TCG AAT CTC TGG GTG GGT CCG CGC AAC TGT GGA GTG GCC 815816 GTC CAG GTG ATG GTG TGT ATT GCT TGC AAA GTT TGA GAA CCA CTC AGT 863864 TAT GGA GCA CTC AGA GGC TGC AGC CGG AGT CCA GCC CTT TGG GTT AAG 911912 GTT AGA GGG AGC TAG GGT TTC CTT TTA AAA TTC ATG CTG CAT AAA GGG 959960 TAG GGT GGC CTT TCT CCT TTT CCG GGT CAT TTT GGT TAA AAA GAT AAA10071008 GAT GTT CGA AGT AAT TAC TCA GAG CGC AGG GGC CGG GGC TTG GCT TTA10551056 CTG TTG CAG GTG ATA ACC TTG TCA ACT GCT TAT TAG TGA ATG CTG AAC11031104 AAA TTT CCC AAA GTT TGT ATT TTT AAA AAT AGA AAA CCG TGA GAC ATA11511152 CTG AAT GCC GGT GAC AAA TTA ACA GAG GTC CTT GAA GAG GCT AAC ACT11991200 CTG TTT AAT GAA GTG TCC CGA GCA AGA GAA GCA GTC CTG GAT GCC CAC12471248 TTT CTT GTT TTG GCT TCA GAT TTG GGC AAA GAG AAA GCA AAG CAG CTG12951296 CGC TCA GAC CTG AGC TCC TTT GAC ATG TTA AGA TAT GTT GAA ACT CTA13431 Met Leu Arg Tyr Val Glu Thr Leu 81344 CTC ACA CAT ATG GGT GTA AAT CCG CTA GAA GCT GAA GAA CTC ATC CGT13919 Leu Thr His Met Gly Val Asn Pro Leu Glu Ala Glu Glu Leu Ile Arg 241392 GAT GAA GAT AGT CCT GAT TTT GAA TTC ATA GTC TAT GAC TCC TGG AAG143925 Asp Glu Asp Ser Pro Asp Phe Glu Phe Ile Val Tyr Asp Ser Trp Lys 401440 ATA ACA GGC AGA ACA GCA GAA AAC ACC TTT AAT AAA ACC CAT ACA TTC148741 Ile Thr Gly Arg Thr Ala Glu Asn Thr Phe Asn Lys Thr His Thr Phe 561488 CAC TTT CTG TTG GGT TCA ATA TAC GGA GAG TGC CCT GTG CCA AAG CCA153557 His Phe Leu Leu Gly Ser Ile Tyr Gly Glu Cys Pro Val Pro Lys Pro 721536 CGA GTT GAT CGT CCA AGA AAA GTT CCT GTG ATA CAA GAG GAG AGG GCA158373 Arg Val Asp Arg Pro Arg Lys Val Pro Val Ile Gln Glu Glu Arg Ala 881584 ATG CCT GCC CAG TTA AGA AGA ATG GAA GAA TCT CAT CAA GAA GCA ACA163189 Met Pro Ala Gln Leu Arg Arg Met Glu Glu Ser His Gln Glu Ala Thr 1041632 GAG AAA GAA GTA GAA AGA ATC TTG GGA TTG TTG CAG ACA TAT TTT CGA1679105 Glu Lys Glu Val Glu Arg Ile Leu Gly Leu Leu Gln Thr Tyr Phe Arg 1201680 GAA GAT CGA GAC AGT CTC ACT CTT TCG CCC AGA CTG GAA TGC AGT GGC1727121 Glu Asp Arg Asp Ser Leu Thr Leu Ser Pro Arg Leu Glu Cys Ser Gly 1361728 ACC ATC TCA ACT CAC TGC AAC CTC CAC CTC CTG GAT TCA AGC AAT TCT1775137 Thr Ile Ser Thr His Cys Asn Leu His Leu Leu Asp Ser Ser Asn Ser 1521776 CCT GCC TCA GCC TCC TGA GTA GCT GGG ATT ACA GGC GCA CGC GCC ACC1823153 Pro Ala Ser Ala Ser *** 1581824 ACA TCT GGC TAA TTT TTT TTC TGT ATT TTT AGT AGA GAC ATT GTT TCG18711872 CCA TGT TGG CCA AGC TAG TCT TGA ACC CCT GAC CTC AGG TGA TCT GCC19191920 AGC ATC GGC CTC CCA AAG TGC TGG GAT TAC AGG TCT GAT ACC CCA ATG19671968 TCC TTC TTT GAC TTT GTG GTT GAT CCT CAT TCT TTC CCC CGT ACA GTG20152016 GAA AAC ATC TTT CAT GTT TCC TTC ATT ATA CGG GAT GGT TTT GCA AGA20632064 ATA AGA CTT GAC CAA GAC CGA CTG CCA GTA ATA GAG CCT GTT AGT ATT21112112 AAT GAA GAA AAT GAG GGA TTT GAA CAT AAC ACA CAA GTT AGA AAT CAA21592160 GGA ATT ATA GCT TTG AGT TAC CGT GAC TGG GAG GAG ATT GTG AAG ACC22072208 TTT GAG ATT TCA GAG CCT GTG ATT ACT CCA AGT CAG AGG CAG CAG AAG22552256 CCA AGT GCT TGA TGC TAG CTG AAG GAC TCA AAT GGA TAG TGA AGT CCA23032304 AAA CGG AAA GCG GCA TGT ATT GTA CAT ATT GTA TGA TTC AAC ATT TTT23512352 AAA GGC AGA TTG TTT TTA GTA AAA TGT AGC TTT TGA TAG TTA AAA AAA23992400 AAA AAA AAA AAA AAA AAA24178.PP5242蛋白A核苷酸序列(SEQ ID NO:22)長度1685bpGCACCGCGGA GGACAGGGGC AGCTGGCGGG CAGCGGGTGA GGGGGTGGCG GGGACGCGAG60TGGCGGCCGC GGGGCCCCGG ACAAGGGTCC GCAGAGCTGC AGCCTTCGAG GGCCAGCCCT 120CTCCGAGTCC GGGGCTGGGT CCCACCAGTG ACAAGGCGGC AGCCCCGCGC ACACCAAAGA 180GAAGGCGGCT GTGGCGGCAG CGGCAGCCCC AGCCATGCTG TGTTATGTGA CGAGGCCGGA 240CGCGGTGCTG ATGGAGGTGG AGGTGGAGGC GAAAGCCAAC GGCGAGGACT GCCTCAACCA 300GGTGTGCAGG CGACTGGGAA TCATAGAAGT TGACTATTTT GGACTGCAGT TTACGGGTAG 360CAAAGGTGAA AGTTTATGGC TAAACCTGAG AAACCGGATC TCCCAGCAGA TGGATGGGCT 420AGCCCCTTAC AGGCTTAAAC TTAGAGTCAA GTTCTTCGTG GAGCCTCATC TCATCTTACA 480GGAGCAGACT AGGCATATCT TTTTCTTGCA CATCAAGGAG GCCCTCTTGG CAGGCCACCT 540CTTGTGTTCC CCAGAGCAGG CAGTGGAACT CAGTGCCCTC CTGGCCCAGA CCAAGTTTGG 600AGACTACAAC CAGAACACTG CCAAGTATAA CTATGAGGAG CTCTGTGCCA AGGAGCTCTC 660CTCTGCCACC TTGAACAGCA TTGTTGCAAA ACATAAGGAG TTGGAGGGGA CCAGCCAGGC 720TTCAGCTGAA TACCAAGTTT TGCAGATTGT GTCGGCAATG GAAAACTATG GCATAGAATG 780GCATTCTGTG CGGGATAGCG AAGGGCAGAA ACTGCTCATT GGGGTTGGAC CTGAAGGAAT 840CTCAATTTGT AAAGATGACT TTAGCCCAAT TAATAGGATA GCTTATCCTG TGGTGCAGAT 900GGCCACCCAG TCAGGAAAGA ATGTATATTT GACGGTCACC AAGGAATCTG GGAACAGCAT 960CGTGCTCTTG TTTAAAATGA TCAGCACCAG GGCGGCCAGC GGGCTCTACC GAGCGATAAC 1020AGAGACGCAC GCATTCTACA GGTGTGACAC AGTGACCAGC GCCGTGATGA TGCAGTATAG 1080CCGTGACTTG AAGGGCCACT TGGCATCTCT GTTTCTGAAT GAAAACATTA ACCTTGGCAA 1140GAAATATGTC TTTGATATTA AAAGAACATC AAAGGAGGTG TATGACCATG CCAGGAGGGC 1200TCTGTACAAT GCTGGCGTTG TGGACCTCGT TTCAAGAAGC AACCAGAGCC CTTCACACTC 1260GCCTCTGAAG TCCTCAGAAA GCAGCATGAA CTGCAGCAGC TGCGAGGGCC TCAGCTGCCA 1320GCAGACCCGG GTGCTGCAGG AGAAGCTACG CAAGCTGAAG GAAGCCATGC TGTGCATGGT 1380GTGCTGCGAG GAGGAGATCA ACTCCACCTT CTGTCCCTGT GGCCACACTG TGTGCTGTGA 1440GAGCTGCGCC GCCCAGCTAC AGTCATGTCC CGTCTGCAGG TCGCGTGTGG AGCATGTCCA 1500GCACGTCTAT CTGCCAACGC ACACCAGTCT TCTCAATCTG ACTGTAATCT AATCTGTTGT 1560GCTTTTGTTG GACTTGGCAT GTTTCCATGA ACTGCACTAT TATAAACTAT TAAAATGATA 1620GATTGTGGAG AAAGTAATTA TTCCAACACC CATCTGCCAT GCGATGTTAA AAAAAAAAAA 1680AAAAA 1685B氨基酸序列(SEQ ID NO:23)長度445個氨基酸1 MLCYVTRPDA VLMEVEVEAK ANGEDCLNQV CRRLGIIEVD YFGLQFTGSK GESLWLNLRN61 RISQQMDGLA PYRLKLRVKF FVEPHLILQE QTRHIFFLHI KEALLAGHLL CSPEQAVELS121 ALLAQTKFGD YNQNTAKYNY EELCAKELSS ATLNSIVAKH KELEGTSQAS AEYQVLQIVS181 AMENYGIEWH SVRDSEGQKL LIGVGPEGIS ICKDDFSPIN RIAYPVVQMA TQSGKNVYLT241 VTKESGNSIV LLFKMISTRA ASGLYRAITE THAFYRCDTV TSAVMMQYSR DLKGHLASLF301 LNENINLGKK YVFDIKRTSK EVYDHARRAL YNAGVVDLVS RSNQSPSHSP LKSSESSMNC361 SSCEGLSCQQ TRVLQEKLRK LKEAMLCMVC CEEEINSTFC PCGHTVCCES CAAQLQSCPV421 CRSRVEHVQH VYLPTHTSLL NLTVIC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:24)克隆號PP5242起始編碼子215 ATG 終止編碼子1552 TAA蛋白質分子量498811G CAC CGC GGA GGA CAG GGG CAG CTG GCG GGC AGC GGG TGA GGG GGT 4647 GGC GGG GAC GCG AGT GGC GGC CGC GGG GCC CCG GAC AAG GGT CCG CAG 9495 AGC TGC AGC CTT CGA GGG CCA GCC CTC TCC GAG TCC GGG GCT GGG TCC 142143 CAC CAG TGA CAA GGC GGC AGC CCC GCG CAC ACC AAA GAG AAG GCG GCT 190191 GTG GCG GCA GCG GCA GCC CCA GCC ATG CTG TGT TAT GTG ACG AGG CCG 2381 Met Leu Cys Tyr Val Thr Arg Pro 8239 GAC GCG GTG CTG ATG GAG GTG GAG GTG GAG GCG AAA GCC AAC GGC GAG 2869 Asp Ala Val Leu Met Glu Val Glu Val Glu Ala Lys Ala Asn Gly Glu 24287 GAC TGC CTC AAC CAG GTG TGC AGG CGA CTG GGA ATC ATA GAA GTT GAC 33425 Asp Cys Leu Asn Gln Val Cys Arg Arg Leu Gly Ile Ile Glu Val Asp 40335 TAT TTT GGA CTG CAG TTT ACG GGT AGC AAA GGT GAA AGT TTA TGG CTA 38241 Tyr Phe Gly Leu Gln Phe Thr Gly Ser Lys Gly Glu Ser Leu Trp Leu 56383 AAC CTG AGA AAC CGG ATC TCC CAG CAG ATG GAT GGG CTA GCC CCT TAC 43057 Asn Leu Arg Asn Arg Ile Ser Gln Gln Met Asp Gly Leu Ala Pro Tyr 72431 AGG CTT AAA CTT AGA GTC AAG TTC TTC GTG GAG CCT CAT CTC ATC TTA 47873 Arg Leu Lys Leu Arg Val Lys Phe Phe Val Glu Pro His Leu Ile Leu 88479 CAG GAG CAG ACT AGG CAT ATC TTT TTC TTG CAC ATC AAG GAG GCC CTC 52689 Gln Glu Gln Thr Arg His Ile Phe Phe Leu His Ile Lys Glu Ala Leu 104527 TTG GCA GGC CAC CTC TTG TGT TCC CCA GAG CAG GCA GTG GAA CTC AGT 574105 Leu Ala Gly His Leu Leu Cys Ser Pro Glu Gln Ala Val Glu Leu Ser 120575 GCC CTC CTG GCC CAG ACC AAG TTT GGA GAC TAC AAC CAG AAC ACT GCC 622121 Ala Leu Leu Ala Gln Thr Lys Phe Gly Asp Tyr Asn Gln Asn Thr Ala 136623 AAG TAT AAC TAT GAG GAG CTC TGT GCC AAG GAG CTC TCC TCT GCC ACC 670137 Lys Tyr Asn Tyr Glu Glu Leu Cys Ala Lys Glu Leu Ser Ser Ala Thr 152671 TTG AAC AGC ATT GTT GCA AAA CAT AAG GAG TTG GAG GGG ACC AGC CAG 718153 Leu Asn Ser Ile Val Ala Lys His Lys Glu Leu Glu Gly Thr Ser Gln 168719 GCT TCA GCT GAA TAC CAA GTT TTG CAG ATT GTG TCG GCA ATG GAA AAC 766169 Ala Ser Ala Glu Tyr Gln Val Leu Gln Ile Val Ser Ala Met Glu Asn 184767 TAT GGC ATA GAA TGG CAT TCT GTG CGG GAT AGC GAA GGG CAG AAA CTG 814185 Tyr Gly Ile Glu Trp His Ser Val Arg Asp Ser Glu Gly Gln Lys Leu 200815 CTC ATT GGG GTT GGA CCT GAA GGA ATC TCA ATT TGT AAA GAT GAC TTT 862201 Leu Ile Gly Val Gly Pro Glu Gly Ile Ser Ile Cys Lys Asp Asp Phe 216863 AGC CCA ATT AAT AGG ATA GCT TAT CCT GTG GTG CAG ATG GCC ACC CAG 910217 Ser Pro Ile Asn Arg Ile Ala Tyr Pro Val Val Gln Met Ala Thr Gln 232911 TCA GGA AAG AAT GTA TAT TTG ACG GTC ACC AAG GAA TCT GGG AAC AGC 958233 Ser Gly Lys Asn Val Tyr Leu Thr Val Thr Lys Glu Ser Gly Asn Ser 248959 ATC GTG CTC TTG TTT AAA ATG ATC AGC ACC AGG GCG GCC AGC GGG CTC1006249 Ile Val Leu Leu Phe Lys Met Ile Ser Thr Arg Ala Ala Ser Gly Leu 2641007 TAC CGA GCG ATA ACA GAG ACG CAC GCA TTC TAC AGG TGT GAC ACA GTG1054265 Tyr Arg Ala Ile Thr Glu Thr His Ala Phe Tyr Arg Cys Asp Thr Val 2801055 ACC AGC GCC GTG ATG ATG CAG TAT AGC CGT GAC TTG AAG GGC CAC TTG1102281 Thr Ser Ala Val Met Met Gln Tyr Ser Arg Asp Leu Lys Gly His Leu 2961103 GCA TCT CTG TTT CTG AAT GAA AAC ATT AAC CTT GGC AAG AAA TAT GTC1150297 Ala Ser Leu Phe Leu Asn Glu Asn Ile Asn Leu Gly Lys Lys Tyr Val 3121151 TTT GAT ATT AAA AGA ACA TCA AAG GAG GTG TAT GAC CAT GCC AGG AGG1198313 Phe Asp Ile Lys Arg Thr Ser Lys Glu Val Tyr Asp His Ala Arg Arg 3281199 GCT CTG TAC AAT GCT GGC GTT GTG GAC CTC GTT TCA AGA AGC AAC CAG1246329 Ala Leu Tyr Asn Ala Gly Val Val Asp Leu Val Ser Arg Ser Asn Gln 3441247 AGC CCT TCA CAC TCG CCT CTG AAG TCC TCA GAA AGC AGC ATG AAC TGC1294345 Ser Pro Ser His Ser Pro Leu Lys Ser Ser Glu Ser Ser Met Asn Cys 3601295 AGC AGC TGC GAG GGC CTC AGC TGC CAG CAG ACC CGG GTG CTG CAG GAG1342361 Ser Ser Cys Glu Gly Leu Ser Cys Gln Gln Thr Arg Val Leu Gln Glu 3761343 AAG CTA CGC AAG CTG AAG GAA GCC ATG CTG TGC ATG GTG TGC TGC GAG1390377 Lys Leu Arg Lys Leu Lys Glu Ala Met Leu Cys Met Val Cys Cys Glu 3921391 GAG GAG ATC AAC TCC ACC TTC TGT CCC TGT GGC CAC ACT GTG TGC TGT1438393 Glu Glu Ile Asn Ser Thr Phe Cys Pro Cys Gly His Thr Val Cys Cys 4081439 GAG AGC TGC GCC GCC CAG CTA CAG TCA TGT CCC GTC TGC AGG TCG CGT1486409 Glu Ser Cys Ala Ala Gln Leu Gln Ser Cys Pro Val Cys Arg Ser Arg 4241487 GTG GAG CAT GTC CAG CAC GTC TAT CTG CCA ACG CAC ACC AGT CTT CTC1534425 Val Glu His Val Gln His Val Tyr Leu Pro Thr His Thr Ser Leu Leu 4401535 AAT CTG ACT GTA ATC TAA TCT GTT GTG CTT TTG TTG GAC TTG GCA TGT1582441 Asn Leu Thr Val Ile *** 4461583 TTC CAT GAA CTG CAC TAT TAT AAA CTA TTA AAA TGA TAG ATT GTG GAG16301631 AAA GTA ATT ATT CCA ACA CCC ATC TGC CAT GCG ATG TTA AAA AAA AAA16781679 AAA AAA A 1685D.Blastp結果Query=PP5242蛋白(445個氨基酸)>SP_IN:Q24440 Q24440 drosophila melanogaster(fruit fly).(cdnal)protein 4.1 homologue(coracle).11/1999長度=1698個氨基酸分值=125bits(312),預計值=4e-28相同性=82/284(28%),相似性=138/284(47%),缺口=8/284(2%)Query: 2 LCYVTRPDAVLMEVEVEAKANGEDCLNQVCRRLGIIEVDYFGLQFTGSKGESLWLNLRNR 61L VT D L++V ++ KA G D +N +C L +IE DYFGL +WL+LSbjct: 33 LARVTLLDGSLLDVSIDRKAIGRDVINSICAGLNLIEKDYFGLTYETPTDPRTWLDLEKP 92Query: 62 ISQQMDGLAPYRLKLRVKFF-VEPHLILQEQTRHIFFLHIKEALLAGHLLCSPEQAVELS 120+S + + L VKF+ EP + ++ TR+ L ++ +L G L C+ LSbjct: 93 VS-KFFRTDTWPLTFAVKFYPPEPSQLKEDITRYHLCLQVRNDILEGRLPCTFVTHALLG 151Query: 121 ALLAQTKFGDYNQN---TAKYNYEELCAKELSSATLNSIVAKHKELEGTSQASAEYQVLQ 177+ L Q++ GDY+ T Y + A ++ + ++ HK +G S A AE L+Sbjct: 152 SYLVQSEMGDYDAEEMPTRAYLKDFKIAPNQTAELEDKVMDLHKTHKGQSPAEAELHYLE 211Query: 178 IVSAMENYGIEWHSVRDSEGQKLLIGVGPEGISICKDDFSPINRIAYPVVQMATQSGKNV 237+ YG++ H +DSEG +++GV G+ + +DINR A+P + ++Sbjct: 212 NAKKLAMYGVDLHPAKDSEGVDIMLGVCASGLLVYRDKLR-INRFAWPKILKISYKRHHF 270Query: 238 YLTVTKESGNSI--VLLFKMISTRAASGLYRAITETHAFYRCDT 279Y+ + + FK+ + RAA L+++ E H F+R TSbjct: 271 YIKIRPGEFEQYESTIGFKLANHRAAKKLWKSCVEHHTFFRLMT 3149.PP5656蛋白A核苷酸序列(SEQ ID NO:25)長度1373bpTTCCGCAATT TCTACCTGAC CTTCCTGGAG TACGATGGGA ACCTGCTGCG GAGAGAGCTC 60TTTGTGTGCC CCAGCCAGCC CCCACCTGGT GCTGAGCAGT TGCAGCAGGC CCTGGCACAA 120CTGGACGAGG AAGACCCCTG CTTTGAGTTC CGGCAGCAGC AGCTCACTGT GCACCGTGTG 180CATGTCACTT TCCTGCCCCA TGAACCGCCA CCCCCCCGGC CTCACGATGT CACCCTTGTG 240GCCCAGCTGT CCATGGACCG GCTGCAGATG TTGGAAGCCC TGTGCAGGCA CTGGCCTGGC 300CCCATGAGCC TGGCCTTGTA CCTGACAGAC GCAGAAGCTC AGCAGTTCCT GATTTCGGTC 360GAGGCCTCAC CAGTGCTTGC TGCCCGGCAG GACGTGGCCT ACCATGTGGT GTACCGTGAG 420GGCCCCTATA CCCCGTCAAC CAGCTTCGCA ACGTGGCCTT GGCCAGGCCC TCACGCCTTA 480CGTCTTCCTC AGTGACATTG ACTTCCTGCC TGCCTATTCT CTCTACGACT ACCTCAGGGC 540CTCCATTGAG CAGCTGGGGC TGGGCAGCCG GCGCAAGGCA GCACTGGTGG TGCCGGCATT 600CGAGACCCTG CGCTACCGCT TCAGCTTCCC CCATTCCAAG GTGGAGCTGT TGGCCTTGCT 660GGATGCGGGC ACTCTCTACA CCTTCAGGTA CCACGAGTGG CCCCGAGGCC ACGCACCCAC 720AGACTATGCC CGCTGGCGGG AGGCTCAGGC CCCGTACCGT GTGCAATGGG CGGCCAACTA 780TGAACCCTAC GTGGTGGTGC CACGAGACTG TCCCCGCTAT GATCCTCGCT TTGTGGGCTT 840CGGCTGGAAC AAAGTGGCCC ACATTGTGGA GCTGGATGCC CAGGAATATG AGCTCCTGGT 900GCTGCCCGAG GCCTTCACCA TCCATCTGCC CCACGCTCCA AGCCTGGACA TCTCCGCTTC 960CGCTCCAGCC CCACCTATCG TGACTGCCTC CAGGCCCTCA AGGACGAATT CCACCAGGAC 1020TTGTCCCGCC ACCATGGGGC TGCTGCCCTC AAATACCTCC CAGCCCTGCA GCAGCCCCAG 1080AGCCCTGCCC GAGGCTGAGG CTGGGCCGGC GCTGCCCCTC ATCTTAGCAT TGGGCAGACA 1140CCAGGGCAAC CTGCCCTCCG CCATCCCTGC TATTTAAATT ATTTAAGGTC TCTGGGAAGG 1200GCTGGGGCAG AGCATCTGTG GGGTGGGGTC TTCCCCTTGC TGCTATTGTA TGGCTGGGGA 1260CTGGTCTCTC TCTGCCCCAG CCAGTTTGGG GCTGGTTCCC CCATCTTGAA TTGTTTATCC 1320CTTTTTCATA ATTAAAGTTT TAAAACATAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAA 1373B氨基酸序列(SEQ ID NO:26)長度257個氨基酸1 MWCTVRAPIP RQPASQRGLG QALTPYVFLS DIDFLPAYSL YDYLRASIEQ LGLGSRRKAA61 LVVPAFETLR YRFSFPHSKV ELLALLDAGT LYTFRYHEWP RGHAPTDYAR WREAQAPYRV121 QWAANYEPYV VVPRDCPRYD PRFVGFGWNK VAHIVELDAQ EYELLVLPEA FTIHLPHAPS181 LDISASAPAP PIVTASRPSR TNSTRTCPAT MGLLPSNTSQ PCSSPRALPE AEAGPALPLI241 LALGRHQGNL PSAIPAIC.核苷酸及氨基酸組合序列(SEQ ID NO:27)克隆號PP5656起始編碼子404 ATG 終止編碼子1177 TAA蛋白質分子量285571T TCC GCA ATT TCT ACC TGA CCT TCC TGG AGT ACG ATG GGA ACC TGC 4647 TGC GGA GAG AGC TCT TTG TGT GCC CCA GCC AGC CCC CAC CTG GTG CTG 9495 AGC AGT TGC AGC AGG CCC TGG CAC AAC TGG ACG AGG AAG ACC CCT GCT 142143 TTG AGT TCC GGC AGC AGC AGC TCA CTG TGC ACC GTG TGC ATG TCA CTT 190191 TCC TGC CCC ATG AAC CGC CAC CCC CCC GGC CTC ACG ATG TCA CCC TTG 238239 TGG CCC AGC TGT CCA TGG ACC GGC TGC AGA TGT TGG AAG CCC TGT GCA 286287 GGC ACT GGC CTG GCC CCA TGA GCC TGG CCT TGT ACC TGA CAG ACG CAG 334335 AAG CTC AGC AGT TCC TGA TTT CGG TCG AGG CCT CAC CAG TGC TTG CTG 382383 CCC GGC AGG ACG TGG CCT ACC ATG TGG TGT ACC GTG AGG GCC CCT ATA 4301 Met Trp Cys Thr Val Arg Ala Pro Ile 9431 CCC CGT CAA CCA GCT TCG CAA CGT GGC CTT GGC CAG GCC CTC ACG CCT 47810 Pro Arg Gln Pro Ala Ser Gln Arg Gly Leu Gly Gln Ala Leu Thr Pro 25479 TAC GTC TTC CTC AGT GAC ATT GAC TTC CTG CCT GCC TAT TCT CTC TAC 52626 Tyr Val Phe Leu Ser Asp Ile Asp Phe Leu Pro Ala Tyr Ser Leu Tyr 41527 GAC TAC CTC AGG GCC TCC ATT GAG CAG CTG GGG CTG GGC AGC CGG CGC 57442 Asp Tyr Leu Arg Ala Ser Ile Glu Gln Leu Gly Leu Gly Ser Arg Arg 57575 AAG GCA GCA CTG GTG GTG CCG GCA TTC GAG ACC CTG CGC TAC CGC TTC 62258 Lys Ala Ala Leu Val Val Pro Ala Phe Glu Thr Leu Arg Tyr Arg Phe 73623 AGC TTC CCC CAT TCC AAG GTG GAG CTG TTG GCC TTG CTG GAT GCG GGC 67074 Ser Phe Pro His Ser Lys Val Glu Leu Leu Ala Leu Leu Asp Ala Gly 89671 ACT CTC TAC ACC TTC AGG TAC CAC GAG TGG CCC CGA GGC CAC GCA CCC 71890 Thr Leu Tyr Thr Phe Arg Tyr His Glu Trp Pro Arg Gly His Ala Pro 105719 ACA GAC TAT GCC CGC TGG CGG GAG GCT CAG GCC CCG TAC CGT GTG CAA 766106 Thr Asp Tyr Ala Arg Trp Arg Glu Ala Gln Ala Pro Tyr Arg Val Gln 121767 TGG GCG GCC AAC TAT GAA CCC TAC GTG GTG GTG CCA CGA GAC TGT CCC 814122 Trp Ala Ala Asn Tyr Glu Pro Tyr Val Val Val Pro Arg Asp Cys Pro 137815 CGC TAT GAT CCT CGC TTT GTG GGC TTC GGC TGG AAC AAA GTG GCC CAC 862138 Arg Tyr Asp Pro Arg Phe Val Gly Phe Gly Trp Asn Lys Val Ala His 153863 ATT GTG GAG CTG GAT GCC CAG GAA TAT GAG CTC CTG GTG CTG CCC GAG 910154 Ile Val Glu Leu Asp Ala Gln Glu Tyr Glu Leu Leu Val Leu Pro Glu 169911 GCC TTC ACC ATC CAT CTG CCC CAC GCT CCA AGC CTG GAC ATC TCC GCT 958170 Ala Phe Thr Ile His Leu Pro His Ala Pro Ser Leu Asp Ile Ser Ala 185959 TCC GCT CCA GCC CCA CCT ATC GTG ACT GCC TCC AGG CCC TCA AGG ACG1006186 Ser Ala Pro Ala Pro Pro Ile Val Thr Ala Ser Arg Pro Ser Arg Thr 2011007 AAT TCC ACC AGG ACT TGT CCC GCC ACC ATG GGG CTG CTG CCC TCA AAT1054202 Asn Ser Thr Arg Thr Cys Pro Ala Thr Met Gly Leu Leu Pro Ser Asn 2171055 ACC TCC CAG CCC TGC AGC AGC CCC AGA GCC CTG CCC GAG GCT GAG GCT1102218 Thr Ser Gln Pro Cys Ser Ser Pro Arg Ala Leu Pro Glu Ala Glu Ala 2331103 GGG CCG GCG CTG CCC CTC ATC TTA GCA TTG GGC AGA CAC CAG GGC AAC1150234 Gly Pro Ala Leu Pro Leu Ile Leu Ala Leu Gly Arg His Gln Gly Asn 2491151 CTG CCC TCC GCC ATC CCT GCT ATT TAA ATT ATT TAA GGT CTC TGG GAA1198250 Leu Pro Ser Ala Ile Pro Ala Ile *** 2581199 GGG CTG GGG CAG AGC ATC TGT GGG GTG GGG TCT TCC CCT TGC TGC TAT12461247 TGT ATG GCT GGG GAC TGG TCT CTC TCT GCC CCA GCC AGT TTG GGG CTG12941295 GTT CCC CCA TCT TGA ATT GTT TAT CCC TTT TTC ATA ATT AAA GTT TTA13421343 AAA CAT AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA AAA A 1373D.Blastp結果Query=PP5656蛋白(257個氨基酸)>SP_IN:Q21389 Q21389 caenorhabditis elegans.k09c8.4 protein.11/1999長度=622個氨基酸分值=104bits(256),預計值=8e-22相同性=65/166(39%),相似性=93/166(55%),缺口=17/166(10%)Query:26 YVFLSDIDFLPAYSLYDYLRASIEQLGLGSRRKAALVVPAFET----LRYRFSFPHSKVE 81Y+ ++D+DF+L DYI+Q G ++K LV+PA E LR S S+ +Sbjct:427 YILMTDVDFVV---LGDY-GTIIDQTG-NLKQKEVLVIPALEMTYPQLRLNLSNFLSRKD 481Query:82 LLA--LLDAGTLYTFRYHEWPRGHAPTDYARWREAQAPY----RVQWAANYEPYVVVPRD 135L+ LL+ T+ TFR WP H PT+ ++W ++ Y V + NYEPY V+ ++Sbjct:482 LVIEHLLNK-TIQTFRETIWPSSHVPTNISKWIKSNRTYMVAQNVNYEKNYEPYFVIKKE 540Query:136 -CPRYDPRFVGFGWNKVAHIVELDAQEYELLVLPEAFTIHLPHAPS 180CP YD RF GFGWNKV H+++LY+ LV P +F IH H SSbjct:541 ECPFYDQRFGGFGWNKVTHVMQLKMMNYKFLVSPTSFMIHQNHNAS 586在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考,就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解,在閱讀了本發(fā)明的上述講授內容之后,本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改,這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。
權利要求
1.一種分離的具有抑癌功能的人蛋白,其特征在于,它包含具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26;或其保守性變異多肽、或其活性片段、或其活性衍生物。
2.如權利要求1所述的多肽,其特征在于,該多肽是具有選自下組的氨基酸序列的多肽SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26。
3.一種分離的多核苷酸,其特征在于,它包含一核苷酸序列,該核苷酸序列與選自下組的一種核苷酸序列有至少85%相同性(a)編碼如權利要求1和2所述多肽的多核苷酸;(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。
4.如權利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,該多核苷酸編碼的多肽具有選自下組的氨基酸序列SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:26。
5.如權利要求3所述的多核苷酸,其特征在于,該多核苷酸的序列選自下組SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:27的編碼區(qū)序列或全長序列。
6.一種載體,其特征在于,它含有權利要求3所述的多核苷酸。
7.一種遺傳工程化的宿主細胞,其特征在于,它是選自下組的一種宿主細胞(a)用權利要求6所述的載體轉化或轉導的宿主細胞;(b)用權利要求3所述的多核苷酸轉化或轉導的宿主細胞。
8.一種具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽的制備方法,其特征在于,該方法包含(a)在適合表達具有抑癌功能的人蛋白的條件下,培養(yǎng)權利要求7所述的宿主細胞;(b)從培養(yǎng)物中分離出具有抑癌功能的人蛋白活性的多肽。
9.一種能與權利要求1所述的具有抑癌功能的人蛋白特異性結合的抗體。
10.一種核酸分子,它含有權利要求3所述的多核苷酸中連續(xù)的10-800個核苷酸。
11.一種藥物組合物,其特征在于,它含有安全有效量的權利要求1所述的多肽以及藥學上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類新的具有抑癌功能的人蛋白,編碼此多肽的多核苷酸和經重組技術產生該多肽的方法。本發(fā)明還公開了此多肽用于治療多種疾病如癌癥等的方法。本發(fā)明還公開了抗此多肽的拮抗劑及其治療作用。本發(fā)明還公開了編碼這類新的具有抑癌功能的人蛋白的多核苷酸的用途。
文檔編號C12P21/00GK1324820SQ0011574
公開日2001年12月5日 申請日期2000年5月18日 優(yōu)先權日2000年5月18日
發(fā)明者顧健人, 楊勝利 申請人:上海市腫瘤研究所