專利名稱：苯丙氨酸羥化酶基因突變診斷專用dna芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苯丙氨酸羥化酶基因突變診斷專用DNA芯片。
中國是一個遺傳病大國。遺傳病是由于人體生殖細(xì)胞或受精卵的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而引起的疾病，從親代傳至后代。通常包括三大類單基因遺傳病，染色體遺傳病和多基因遺傳病。從世界范圍講，新生兒中至少2％有明顯的先天異常。雖然大多數(shù)遺傳病的發(fā)病率低(多基因病除外)。然而遺傳病種類繁多，因此總數(shù)很多。僅單基因遺傳病就有4000多種，染色體病有100多種，多基因病也不少于100種。并且目前國際上以平均每年發(fā)現(xiàn)100多種新單基因遺傳病的速度在發(fā)展。這也反應(yīng)了遺傳病帶給醫(yī)學(xué)，社會和家庭問題的嚴(yán)重性。
絕大多數(shù)遺傳病目前還沒有有效的治療方法，因此預(yù)防就顯得尤為重要。若能在妊娠早期診斷出胎兒是否患病，對患病胎兒進(jìn)行人工流產(chǎn)，可防止患兒出生。產(chǎn)前遺傳篩檢，輔以人工流產(chǎn)，己證明是一種有效預(yù)防嚴(yán)重危害健康的遺傳病的方法。我國現(xiàn)有殘疾人5000萬，其中相當(dāng)數(shù)量是遺傳病引起的。由于邊遠(yuǎn)地區(qū)和某些農(nóng)村近親結(jié)婚率高，遺傳病發(fā)病率仍呈現(xiàn)上升趨勢，因此廣泛開展產(chǎn)前遺傳篩檢，杜絕患兒出生，降低發(fā)病率，對于我國優(yōu)生優(yōu)育，提高人口素質(zhì)起著重要作用。
由于許多遺傳病特別是單基因孟德爾型遺傳病的基因及基因突變的機制已研究清楚，使我們在基因水平能準(zhǔn)確診斷大部分遺傳病。在許多發(fā)達(dá)國家，新生嬰兒的遺傳篩檢很普遍。例如早在60年代，美國法律已規(guī)定必須對所有新生嬰兒進(jìn)行苯丙酮酸尿癥的篩檢。徹底消除了因苯丙酮酸尿癥引起的智能障礙兒童的出現(xiàn)。因為如果苯丙酮酸尿癥嬰兒在出生時便能及時接受特別食譜治療，就不會出現(xiàn)疾病癥狀。另外針對特定的新生兒遺傳篩檢，如針對黑人嬰兒的鐮刀血球細(xì)胞癥，猶太嬰兒的戴薩克斯癥等都已普遍實施。但在中國，由于遺傳病種類繁多，傳統(tǒng)遺傳篩檢方法需要較昂貴的儀器，專業(yè)人才，高費用等，使我國在產(chǎn)前產(chǎn)后遺傳篩檢普及方面做得非常不夠。希望中國有關(guān)方面重視該問題。這對中國的可持續(xù)發(fā)展問題，人口素質(zhì)提高問題，社會保障負(fù)擔(dān)問題都有非常深遠(yuǎn)的影響。舉例來說，苯丙酮酸尿癥是由于肝臟苯丙氨酸羥化酶(PAN)嚴(yán)重缺乏所致的常染色體隱性遺傳病?；颊哂捎诒奖彼崃u化酶缺乏或不足，造成苯丙氨酸不能按其正常代謝途徑轉(zhuǎn)化為酪氨酸，使得苯丙氨酸代謝物在體內(nèi)大量蓄積，損壞患者的神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，而導(dǎo)致智力發(fā)育障礙。在歐美地區(qū)發(fā)病率為l/10000，在我國是1/16000。
苯丙酮酸尿癥嬰兒出生時，應(yīng)立即停止母乳喂養(yǎng)，采用低苯丙氨酸飲食療法8-10年，才能維持患者智力發(fā)育正常，費用昂貴，在我國難以實行。因此實行產(chǎn)前診斷，并輔以人工流產(chǎn)是杜絕患者出生的最有效途徑。由于苯丙氨酸羥化酶基因只在肝細(xì)胞中特異表達(dá)，不能用血細(xì)胞，羊水，絨毛細(xì)胞進(jìn)行酶活性檢測，因而只能進(jìn)行基因突變分析。
我國尚未全面普及苯丙酮酸尿癥產(chǎn)前篩檢，以發(fā)病率1/16000計，僅此一種遺傳病，就使我國有近10萬的智能障礙者，給社會造成巨大負(fù)擔(dān)。
苯丙氨酸羥化酶(PAN)基因位于12號染色體長臂，即12q22-12q24.1，全長約90kb，包括13個外顯子，每個外顯子長度在57-892bp之間，全長2.3kb，其閱讀框架為1353bp，編碼451個氨基酸的多肽鏈。
疾病相關(guān)基因突變的檢測主要有(1)PCR-RFLP(restriction fragmentlength polymorphism)，該方法利用多種限制性內(nèi)切酶對基因擴增產(chǎn)物進(jìn)行酶切，不同的基因序列將產(chǎn)生不同的電泳圖譜(Mercier，B.et al.，Eur.J.Immunogenetics，21，105，1994)。該方法只能應(yīng)用于當(dāng)突變改變了某一酶切位點時。該方法的改進(jìn)是在突變位點引入酶切位點法，即PCR-AIRS(attificial introduction of restriction sites)(Cotton，R.G.H.Mut.Res.，285，125，1993)。(2)PCR-SSO(sequence specific oligonucleotide)或PCR-ASO(allele specific oligonucleotide)(Cotton，R.G.H.Mut.Res.，285，125，1993；Saiki，R.K.et al.，Nature，324，163，1986)，待測基因經(jīng)PCR擴增后，分別與15-20bp標(biāo)記的野生型和突變型探針雜交。該方法需進(jìn)行同位素標(biāo)記或地高辛，生物素，過氧化物酶等標(biāo)記，分析過程復(fù)雜，不適宜快速分析。(3)PCR-SSP(sequence specific primers)或ASPCR(allelespecific PCR)，其原理是根據(jù)已知突變位點的性質(zhì)在引物中設(shè)計一錯配堿基，使之僅能擴增突變型或野生型基因。該方法較為快速簡便。(Wu，D.Y.，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86，2757，1989；Rust，S.，et al.，NucleicAcids Research，21，3623，1993；Newton，R.et al.，Nucleic Acids Research，17，2503，1989)。(4)PCR-SSCP(single-stranded conformationpolymorphism)，SSCP是指單鏈DNA分子在中性PAGE中電泳遷移率隨其構(gòu)象改變的性質(zhì)。因此可作為基因變異的檢測方法，最早由Orita用于癌基因點突變和人基因組多態(tài)性研究(0rita，M.，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86，2766，1989)，此法僅能檢測基因變異的存在，而不能確定突變的部位和內(nèi)容。(5)DNA測序法是最直觀準(zhǔn)確的方法。但技術(shù)復(fù)雜價格昂貴，不能作為常規(guī)方法。
綜上所述，在有關(guān)疾病相關(guān)基因突變診斷的現(xiàn)有技術(shù)中，存在操作繁雜，所需時間長，成本較高，難以自動化及大量樣本平行分析等問題。因為PKU病癥可以利用低苯丙氨酸飲食進(jìn)行治療。所以PKU的早期診斷非常重要。在美國，英國等發(fā)達(dá)國家，出生嬰兒都要進(jìn)行PKU診斷篩選。現(xiàn)有的PKU基因診斷篩選主要是利用RFLP方法檢測苯丙氨酸羥化酶基因的突變，由于苯丙氨酸羥化酶基因的相關(guān)突變非常多，RFLP方法難以應(yīng)付。
本發(fā)明的目是提供一種可同時檢測苯丙氨酸羥化酶所有基因突變位點的苯丙氨酸羥化酶基因突變診斷專用DNA芯片。
為了達(dá)到上述目的本發(fā)明采取下列措施苯丙氨酸羥化酶基因突變診斷專用DNA芯片是在玻片、硅片、膜、高分子材料上固定檢測苯丙氨酸羥化酶基因突變的特異DNA探針，形成中密度DNA探針陣列，所說探針為Gly46Serwild AATGCACCAACTTCMut AATGCACTAACTTCLeu48Serwild TTTGGCCAATGCACCMut TTTGGCCGATGCACCGlu56Aspwild TATTTGAGGTCAGTAMut TATTTGATGTCAGTALeu98Serwild ATGCCTCAAGATCTTMut ATGCCTCGAGATCTTArg111Term wild TTATCTCGTGAAAGCMut TTATCTCATGAAAGCArgl58Gln wild CTGCTTCCGTCTTGCMut CTGCTTCTGTCTTGCArgl58Trp wild TGCTTCCGTCTTGCAMut TGCTTCCATCTTGCAPhel61Ser wild AAGCAGTTTGCTGACMut AAGCAGTCTGCTGACTyr204Term wild TGTACTCATAGCAAGMut TGTACTCCTAGCAAGArg241His wild GGTTTCCGCCTCCGA
Mut GGTTTCCACCTCCGAArg243Gln wild CACAGGTGCGAGGCGMut CACAGGTTGGAGGCGPro244Leu wild AGCCACAGGTCGGAGMut AGCCACAAGTCGGAGGly247Val wild GTGGCTGGCCTGCTTMut GTGGCTGTCCTGCTTLeu249His wild GGCCTGCTTTCCTCTMut GGCCTGCATTCCTCTArg252Gln wild GAAATCCCGAGAGGAMut GAAATCCTGAGAGGAPhe254Ile wild TCGGGATTTCTTGGGMut TCGGGATATCTTGGGLeu255Val wild GGATTTCTTGGGTGGMut GGATTTCGTGGGTGGGly257Val wild TTGGGTGGCCTGGCCMut TTGGGTGTCCTGGCCAla259Val wild TCGGAAGGCCAGGCCMut TCGGAAGACCAGGCCArg261Gln wild GAAGACTCGGAAGGCMut GAAGACTTGGAAGGCArg261Promut GAAGACTGGGAAGGCSer273Phe wild GGGCTTGGATCCATGMut GGGCTTGAATCCATGTyr277Asp wild GGGGTATACATGGGCMut GGGGTATCCATGGGCGly280Lys wild TCAGGTTCGGGGGTAMut TCAGGTTTGGGGGTAPhe299Cys wild CTGGGCAAAGCTGCGMut CTGGGCACAGCTGCGLeu311Pro wild TGCACCCAGAGAGGCMut TGCACCCGGAGAGGCTrp326Term wild AGTAAACCAGTAAATMut AGTAAACTAGTAAATAla345Thr wild ATATGGTGCTGGGCTMut ATATGGTACTGGGCTSer349Leu wild AAAGGATGACAGGAGMut AAAGGATAACAGGAGSer349Pro wild AAGGATGACAGGAGCMut AAGGATGGCAGGAGCTyr356Term wild ATAAGCAGTACTGTAMut ATAAGCATTACTGTAMut ATAAGCACTACTGTASer359Term wild CTTCTCTGATAAGCAMut CTTCTCTCATAAGCAVal388Met wild TCTGCCACGTAATACMut TCTGCCATGTAATACVal388LeuMut TCTGCCAGGTAATACPro40TSer wild GGCCGAGGTATTGTGMut GGCCGAGATATTGTGArg408Gln wild GAAGGGCCGAGGTATMut GAAGGGCTGAGGTATArg413Ser wild TCGTAGCGAAGTGAGMut TCGTAGCTAACTGAGThr418Pro wild CCCATACACCCAAAGMut CCCATACCCCCAAAGIVs4nt-1wild TCTCCTAGGGTTTTAMut TCTCCTAAGGTTTTAIVs7nt＋2 wild CGAACCGTGAGTACTMut CGAACCGAGAGTACT本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，在一顯微鏡載玻片大小的載體表面，固定79×4DNA探針，因此可同時檢測苯丙氨酸羥化酶所有基因突變位點Gly46Ser、Leu48Ser、Glu56Asp、Leu98Ser、Arg111Term、Arg158Gln、Arg158Trp、Phe161Ser、Tyr204Term、Arg241His、Arg243Gln、Pro244Leu、Gly247Val、Leu249His、Arg252Gln、Phe254Ile、Leu255Val、Gly257Val、Ala259Val、Arg261Gin、Arg26lPro、Ser273Phe、Tyr277Asp、Gly280Lys、Phe299Cys、Leu311Pro、Trp326Term、Ser349Leu、Ser349Pro、Tyr356Term、Ser359Term、Val388Met、Ala345Thr、Val388Leu、Pro407Ser、Arg408Gln、Arg413Ser、Thr418Pro、IVs4nt-1(G-A)、IVs-7nt2(T-A)。具有平行分析和多重分析特點。特定的洗脫條件可以區(qū)分全配雜交和單堿基失配雜交。生產(chǎn)成本少于20元。適合于早期診斷，產(chǎn)前篩查苯丙酮酸尿癥。本發(fā)明也適用于其他已知基因突變的遺傳病和其他疾病的檢測及單核苷酸多態(tài)性(SNP)的檢測。
下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作詳細(xì)說明。


圖1是苯丙酮酸尿癥診斷DNA專用芯片模式圖；圖2是檢測Arg243Gln突變的苯丙酮酸尿癥患者的結(jié)果模式圖；圖3是檢測Arg243Gln突變的苯丙酮酸尿癥患者的雜交結(jié)果圖。
本發(fā)明利用生物芯片技術(shù)在一種載體如載玻片、硅片、膜和高分子材料上固定我們設(shè)計的可檢測苯丙氨酸羥化酶基因突變的特異DNA探針，形成中密度(＞2000/microscope slide)的DNA探針陣列。用載體表面的特異性DNA探針雜交方法來檢測苯丙氨酸羥化酶基因中國人種常見突變。
苯丙氨酸羥化酶基因中國人種常見突變位點的檢索我們檢索了大量文獻(xiàn)資料，導(dǎo)致中國人苯丙酮酸尿癥的苯丙氨酸羥化酶基因突變位點有40種。分另是Gly46Ser、Leu48Ser、Glu56Asp、Leu98Ser、Arg111Term、Arg158Gln、Arg158Trp、Phe161Ser、Tyr204Term、Arg241His、Arg243Gln、Pro244Leu、Gly247Val、Leu249His、Arg252Gln、Phe254Ile、Leu255Val、Gly257Val、Ala259Val、Arg261Gln、Arg261Pro、Ser273Phe、Tyr277Asp、Gly280Lys、Phe299Cys、Leu311Pro、Trp326Term、Ala345Thr、Ser349Leu、Ser349Pro、Tyr356Term、Ser359Term、Val388Met、Val388Leu、Pro407Ser、Arg408Gln、Arg413Ser、Thr418Pro、IVs4nt-1(G-A)、IVs-7nt2(T-A)。DNA探針設(shè)計選取與PKU相關(guān)的40種苯丙氨酸羥化酶基因突變，合成相對應(yīng)的野生型和突變型DNA探針，固定于載體表面。設(shè)計的相關(guān)探針如下Gly46Serwild AATGCACCAACTTCMut AATGCACTAACTTCLeu48Serwild TTTGGCCAATGCACCMut TTTGGCCGATGCACCGlu56Aspwild TATTTGAGGTCAGTA
Mut TATTTGATGTCAGTALeu98Serwild ATGCCTCAAGATCTTMut ATGCCTCGAGATCTTArg111Term wild TTATCTCGTGAAAGCMut TTATCTCATGAAAGCArg158Gln wild CTGCTTCCGTCTTGCMut CTGCTTCTGTCTTGCArg158Trp wild TGCTTCCGTCTTGCAMut TGCTTCCATCTTGCAPhe161Ser wild AAGCAGTTTGCTGACMut AAGCAGTCTGCTGACTyr204Term wild TGTACTCATAGCAAGMut TGTACTCCTAGCAAGArg241His wild GGTTTCCGCCTCCGAMut GGTTTCCACCTCCGAArg243Gln wild CACAGGTGCGAGGCGMut CACAGGTTGGAGGCGPro244Leu wild AGCCACAGGTCGGAGMut AGCCACAAGTCGGAGGly247Val wild GTGGCTGGCCTGCTTMut GTGGCTGTCCTGCTTLeu249His wild GGCCTGCTTTCCTCTMut GGCCTGCATTCCTCTArg252Gln wild GAAATCCCGAGAGGAMut GAAATCCTGAGAGGAPhe254Ile wild TCGGGATTTCTTGGGMut TCGGGATATCTTGGGLeu255Val wild GGATTTGTTGGGTGGMut GGATTTCGTGGGTGGGly257Val wild TTGGGTGGCCTGGCCMut TTGGGTGTCCTGGCCAla259Val wild TCGGAAGGCCAGGCC
Mut TCGGAAGACCAGGCCArg261Gln wild GAAGACTCGGAAGGCMut GAAGACTTGGAAGGCArg261Promut GAAGACTGGGAAGGCSer273Phe wild GGGCTTGGATCCATGMut GGGCTTGAATCCATGTyr277Asp wild GGGGTATACATGGGCMut GGGGTATCCATGGGCGly280Lys wild TCAGGTTCGGGGGTAMut TCAGGTTTGGGGGTAPhe299Cys wild CTGGGCAAAGCTGCGMut CTGGGCACAGCTGCGLeu311Pro wild TGCACCCAGAGAGGCMut TGCACCCGGAGAGGCTrp326Term wild AGTAAACCAGTAAATMut AGTAAACTAGTAAATAla345Thr wild ATATGGTGCTGGGCTMut ATATGGTACTGGGCTSer349Leu wild AAAGGATGACAGGAGMut AAAGGATAACAGGAGSer349Pro wild AAGGATGACAGGAGCMut AAGGATGGCAGGAGCTyr356Term wild ATAAGCAGTACTGTAMut ATAAGCATTACTGTAMut ATAAGCACTACTGTASer359Term wild CTTCTCTGATAAGCAMut CTTCTCTCATAAGCAVal388Met wild TCTGCCACGTAATACMut TCTGCCATGTAATACVa1388Leu Mut TCTGCCAGGTAATACPro407Ser wild GGCCGAGGTATTGTGMut GGCCGAGATATTGTGArg408Gln wild GAAGGGCCGAGGTATMut GAAGGGCTGAGGTATArg413Ser wild TCGTAGCGAAGTGAGMut TCGTAGCTAACTGAGThr418Pro wild CCCATACACCCAAAGMut CCCATACCCCCAAAGIVs4nt-1wild TCTCCTAGGGTTTTAMut TCTCCTAAGGTTTTAIVs7nt＋2wild CGAACCGTGAGTACTMut CGAACCGAGAGTACTPKU診斷芯片的構(gòu)建合成以上79種DNA探針，5’末端用氨基或其它活性基團修飾。每種探針重復(fù)4次固定于載體的活性表面，構(gòu)建PKU診斷DNA專用芯片。
樣品處理用設(shè)計的PCR引物擴增待檢測樣品的靶的基因或突變區(qū)域，熒光標(biāo)記可以用PCR引物5’末端標(biāo)記或PCR擴增時加入熒光標(biāo)記的dNTP。DNA芯片表面雜交過程熒光標(biāo)記的PCR擴增產(chǎn)物在一定的條件下與PKU診斷芯片表面的DNA探針雜交，用特定的洗脫條件可以區(qū)分全配雜交和單堿基失配雜交。
雜交信號檢測雜交后用共聚焦熒光顯微鏡或熒光掃描儀檢測DNA芯片雜交信號；從而可以檢測苯丙氨酸羥化酶基因突變。
圖1為苯丙酮酸尿癥診斷DNA專用芯片模式圖。1玻片220×4突變序列探針，從左到右是Gly46Ser、Leu48Ser、Glu56Asp、Leu98Ser、Arg111Term、Arg158Gln、Arg158Trp、Phe161Ser、Tyr204Term、Arg241His、Arg243Gln、Pro244Leu、Gly247Val、Leu249His、Arg252Gln、Phe254Ile、Leu255Val、Gly257Val、Ala259Val、Arg261Gln；320×4與2相對應(yīng)的正常序列探針；420×4突變序列探針，從左到右是Arg261Pro、Ser273Phe、Tyr277Asp、Gly280Lys、Phe299Cys、Leu311Pro、Trp326Term、Ala345Thr、Ser349Leu、Ser349Pro、Tyr356Term、Ser359Term、Val388Met、Val388Leu、Pro407Ser、Arg408Gln、Arg413Ser、Thr418Pro、IVs4nt-1(G-A)、IVs-7nt2(T-A)；520×4與4相對應(yīng)的正常序列探針；圖2為檢測Arg243Gln突變的苯丙酮酸尿癥患者的結(jié)果模式圖。6Arg243Gln突變位點信號。
圖3為檢測Arg243Gln突變的苯丙酮酸尿癥患者的雜交結(jié)果圖。1和2正常序列信號；3Arg243Gln突變位點信號。
實施例利用本發(fā)明的芯片檢測Arg243Gln突變的苯丙酮酸尿癥患者。取待測者血液1毫升，利用商業(yè)化的基因組DNA抽提試劑盒或標(biāo)準(zhǔn)的苯酚抽提/乙醇沉淀方法提取待測者的基因組DNA，用設(shè)計的11組PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))引物對苯丙氨酸羥化酶基因的外顯子2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12進(jìn)行擴增。擴增的體積為50μl，混合PCR產(chǎn)物，加入1/10體積的3M pH5.2醋酸緩沖液，加入2.5倍體積的-20℃冷藏的100％乙醇，混勻后，-20℃放置30分鐘。13000rpm離心10分鐘，用70％乙醇洗滌沉淀，干燥。DNA芯片表面雜交過程5μl雜交緩沖液(5 X SSC，0.2％SDS)溶解上述DNA，95℃變性5分鐘，冷卻至室溫，滴加于DNA陣列表面，再蓋上載玻片，42℃雜交4～8小時。雜交信號檢測用共聚焦熒光顯微鏡或熒光掃描儀檢測DNA芯片雜交信號。結(jié)果如圖3。實施例說明本發(fā)明在疾病苯丙酮酸尿癥相關(guān)基因突變檢測方面的應(yīng)用。苯丙酮酸尿癥(PKU)是一種單基因突變引起的智力遲緩的遺傳性疾病。是由于苯丙氨酸羥化酶基因活性缺失，苯丙氨酸羥化酶催化苯丙氨酸降解反應(yīng)的第一步即苯丙氨酸轉(zhuǎn)化為酪氨酸。所以缺失苯丙氨酸羥化酶，苯丙氨酸在血液中積累并轉(zhuǎn)化為苯丙酮酸，損壞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育。因為PKU病癥可以利用低苯丙氨酸飲食進(jìn)行治療。所以PKU的早期診斷非常重要。在美國，英國等發(fā)達(dá)國家，出生嬰兒都要進(jìn)行PKU診斷篩選。現(xiàn)有的PKU診斷篩選主要是利用RFLP方法檢測苯丙氨酸羥化酶基因的突變，由于苯丙氨酸羥化酶基因的相關(guān)突變非常多，RFLP方法難以應(yīng)付。本發(fā)明構(gòu)建的DNA芯片非常適合于PKU的診斷篩選。
權(quán)利要求
1.一種苯丙氨酸羥化酶基因突變診斷專用DNA芯片，其特征在于在玻片、硅片、膜、高分子材料上固定檢測苯丙氨酸羥化酶基因突變的特異DNA探針，形成中密度DNA探針陣列，所說的探針為Gly46Serwild AATGCACCAACTTCMut AATGCACTAACTTCLeu48Serwild TTTGGCCAATGCACCMut TTTGGCCGATGCACCGlu56Aspwild TATTTGAGGTCAGTAMut TATTTGATGTCAGTALeu98Serwild ATGCCTCAAGATCTTMut ATGCCTCGAGATCTTArglllTerm wild TTATCTCGTGAAAGCMut TTATCTCATGAAAGCArgl58Gln wild CTGCTTCCGTCTTGCMut CTGCTTCTGTCTTGCArg158Trp wild TGCTTCCGTCTTGCAMut TGCTTCCATCTTGCAPhe161Ser wild AAGCAGTTTGCTGACMut AAGCAGTCTGCTGACTyr204Term wild TGTACTCATAGCAAGMut TGTACTCCTAGCAAGArg241His wild GGTTTCCGCCTCCGAMut GGTTTCCACCTCCGAArg243Gln wild CACAGGTGCGAGGCGMut CACAGGTTGGAGGCGPro244Leu wild AGCCACAGGTCGGAGMut AGCCACAAGTCGGAGGly247Val wild GTGGCTGGCCTGCTTMut GTGGCTGTCCTGCTTLeu249His wild GGCCTGCTTTCCTCTMut GGCCTGCATTCCTCTArg252Gln wild GAAATCCCGAGAGGAMut GAAATCCTGAGAGGAPhe254Ile wild TCGGGATTTCTTGGGMut TCGGGATATCTTGGGLeu255Val wild GGATTTCTTGGGTGGMut GGATTTCGTGGGTGGGly257Val wild TTGGGTGGCCTGGCCMut TTGGGTGTCCTGGCCAla259Val wild TCGGAAGGCCAGGCCMut TCGGAAGACCAGGCCArg261Gln wild GAAGACTCGGAAGGCMut GAAGACTTGGAAGGCArg261Promut GAAGACTGGGAAGGCSer273Phe wild GGGCTTGGATCCATGMut GGGCTTGAATCCATGTyr277Asp wild GGGGTATACATGGGCMut GGGGTATCCATGGGCGly280Lys wild TCAGGTTCGGGGGTAMut TCAGGTTTGGGGGTAPhe299Cys wild CTGGGCAAAGCTGCGMut CTGGGCACAGCTGCGLeu311Pro wild TGCACCCAGAGAGGCMut TGCACCCGGAGAGGCTrp326Term wild AGTAAACCAGTAAATMut AGTAAACTAGTAAATAla345Thr wild ATATGGTGCTGGGCTMut ATATGGTACTGGGCTSer349Leu wild AAAGGATGACAGGAGMut AAAGGATAACAGGAGSer349Pro wild AAGGATGACAGGAGCMut AAGGATGGCAGGAGCTyr356Term wild ATAAGCAGTACTGTAMut ATAAGCATTACTGTAMut ATAAGCACTACTGTASer359Term wild CTTCTCTGATAAGCAMut CTTCTCTCATAAGCAVa1388Met wild TCTGCCACGTAATACMut TCTGCCATGTAATACVa1388LeuMut TCTGCCAGGTAATACPro407Ser wild GGCCGAGGTATTGTGMut GGCCGAGATATTGTGArg408Gln wild GAAGGGCCGAGGTATMut GAAGGGCTGAGGTATArg413Ser wild TCGTAGCGAAGTGAGMut TCGTAGCTAACTGAGThr418Pro wild CCCATACACCCAAAGMut CCCATACCCCCAAAGIVs4nt-1wild TCTCCTAGGGTTTTAMut TCTCCTAAGGTTTTAIVs7nt+2wild CGAACCGTGAGTACTMut CGAACCGAGAGTACT
全文摘要
本發(fā)明公開了一種苯丙氨酸羥化酶基因突變診斷專用DNA芯片。它是在玻片、硅片、膜、高分子材料上固定檢測苯丙氨酸羥化酶基因突變的特異DNA探針,形成中密度DNA探針陣列。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比,在一顯微鏡載玻片大小的載體表面,固定79×4DNA探針,因此可同時檢測苯丙氨酸羥化酶已發(fā)現(xiàn)的中國人種所有基因突變。具有平行分析和多重分析特點。特定的洗脫條件可以區(qū)分全配雜交和單堿基失配雜交。適合于早期診斷,產(chǎn)前篩查苯丙酮酸尿癥。
文檔編號C12Q1/68GK1335408SQ00122160
公開日2002年2月13日 申請日期2000年7月23日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月23日
發(fā)明者葉邦策 申請人:浙江江南生物科技有限公司