專利名稱：一種海產(chǎn)小雜魚提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從海魚中提取多肽混合物制品的方法。
海產(chǎn)小雜魚在我國(guó)沿海有巨大的捕獲資源，目前對(duì)這一資源的利用大多是作為低價(jià)魚在市場(chǎng)直接銷售或是直接作為飼料或粗加工成魚粉作為養(yǎng)殖飼料，其資源價(jià)值未得到充分的利用。
本發(fā)明的目的是提出一種適合于大工業(yè)化生產(chǎn)的，從海產(chǎn)小雜魚中提取多肽混合物制品的制備方法。實(shí)現(xiàn)對(duì)具有巨大資源的海產(chǎn)小雜魚的深加工利用，大大提高其資源利用價(jià)值。
本發(fā)明以海產(chǎn)小雜魚為原料提取多肽混合物制品的制備方法包括蛋白酶酶解、超濾、離子交換分離以及濃縮、沉淀等工藝步驟，具體是第一步酶解新鮮海產(chǎn)小雜魚用自來(lái)水洗凈、骨肉分離機(jī)取肉，然后粉碎成魚糜。取一份魚糜，按比例加入1～5倍重量的去離子水，攪拌均勻升溫至50～70℃，再按魚重0.5～3.0％的比例加入蛋白酶，保溫1～5小時(shí)后迅速升溫至90～100℃并維持若干分鐘。
第二步超濾將上述反應(yīng)完畢的混合物離心，取離心液再用中速濾紙壓濾，收集濾液，用截取分子量為10kDa～50kDa的超濾膜分離濾過(guò)，收集其濾過(guò)部分。
第三步離子交換在上述濾過(guò)部分的液體之中加入混合磷酸鹽，調(diào)節(jié)溶液為pH6～8的緩沖體系，溶液中磷酸鹽的濃度為0.01～0.1M，按每升液體1.5～2.5公斤的劑量加入陰離子交換樹脂，于室溫下間歇攪拌0.5～3小時(shí)，然后離心，得離心液A。再按每公斤樹脂300～500毫升的劑量加入0.01～0.1M pH6～8的磷酸鹽緩沖溶液，與樹脂混合攪拌0.5～1小時(shí)后離心，得離心液B。
第四步濃縮沉淀將A與B混合，真空減壓濃縮至原體積的1/5～1/7。將濃縮液冷卻至5～10℃，再加入3～5倍濃縮液體積的冷丙酮，快速攪拌，然后靜置30～120分鐘，然后于4000轉(zhuǎn)/分離心，取沉淀物于真空-10℃～30℃溫度下干燥，得淺黃色粉末狀固體I。
第五步洗脫在上述離心后的樹脂中按每公斤樹脂0.5～1.0升的劑量加入洗脫液，該洗脫液中含有0.1～0.4M的NaCl，并調(diào)pH值為2～7，使其具有一定的離子強(qiáng)度和適當(dāng)?shù)膒H值。室溫下緩慢攪拌1～5小時(shí)，然后離心，得離心液C。再用按每公斤樹脂300～500毫升的劑量加入上述洗脫液，與樹脂混合攪拌0.5～1小時(shí)后離心，得離心液D。
第六步濃縮沉淀將C和D混合，真空減壓濃縮至原體積的1/8～1/10。將濃縮液冷卻至5～10℃，過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，濾液繼續(xù)濃縮至原體積的1/12～1/15，再冷卻至5～10℃并過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，然后按V2∶V1＝3～5的體積加入冷丙酮，快速攪拌混勻后靜置30～120分鐘，然后于4000轉(zhuǎn)/分離心，取沉淀于真空-10℃～30℃溫度下干燥，得淺黃色粉末狀固體II。
第七步混合將固體I和固體II混合均勻即得。
本發(fā)明所得提取物為淺黃色粉末狀固體，溶解于水呈黃棕色澄明液體。該產(chǎn)物的總蛋白質(zhì)含量大于75％，其中游離氨基酸含量大于15％，所含的多肽混合物分子量小于50kDa，多肽含量大于50％，90％以上的多肽分子量在2k～8kDa之間。本發(fā)明產(chǎn)物每日口服劑量1～5g，可一次服用或分次服用。實(shí)驗(yàn)證明這種方法制備的多肽混合物具有顯著的升高機(jī)體血紅蛋白和血紅細(xì)胞數(shù)量的作用?？捎米鳡I(yíng)養(yǎng)保健食品和貧血治療藥品。本發(fā)明能實(shí)現(xiàn)對(duì)資源大、成本低廉的海產(chǎn)小雜魚的科學(xué)深加工，產(chǎn)品經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，適于工業(yè)化生產(chǎn)。
實(shí)施例一(1)新鮮海產(chǎn)小雜魚用自來(lái)水洗凈、骨肉分離機(jī)取肉，然后粉碎成魚糜。取一份魚糜，加入1倍重量的去離子水，攪拌均勻升溫至50℃，再按魚重0.5％的比例加入活力80～90萬(wàn)單位的木瓜蛋白酶，保溫5小時(shí)后迅速升溫至90℃并維持若干分鐘。
(2)將上述反應(yīng)完畢的混合物離心，取離心液再用中速濾紙壓濾，收集濾液，用截取分子量為50kDa的超濾膜分離濾過(guò)，收集分子量在50kDa以下的濾過(guò)部分。
(3)在每升上述超濾過(guò)的液體之中加入0.44克Na2HPO4·12H2O和1.37克NaH2PO4·2H2O，調(diào)節(jié)溶液pH為6、溶液中磷酸鹽的濃度為0.01M，再按每升液體1.5公斤的劑量加入陰離子交換樹脂，于室溫下間歇攪拌0.5小時(shí)，然后離心，得離心液A。再按每公斤樹脂300毫升的劑量加入0.01M pH6的磷酸鹽緩沖溶液，與樹脂混合攪拌0.5小時(shí)后離心，得離心液B。
(4)將A與B混合，真空減壓濃縮至原體積的1/5。將濃縮液冷卻至5℃，加入3倍體積的冷丙酮，快速攪拌均勻，然后靜置30分鐘，然后于4000轉(zhuǎn)/分離心，取沉淀物于真空25℃溫度下干燥即得淺黃色粉末狀固體I。
(5)在上述離心后的樹脂中按每公斤樹脂0.5升的劑量加入洗脫液，該洗脫液中含有中0.2M濃度的NaCl和0.04M濃度的HAC。室溫下緩慢攪拌1小時(shí)，然后離心，得離心液C。再用按每公斤樹脂300毫升的劑量加入上述洗脫液，與樹脂混合攪拌0.5小時(shí)后離心，得離心液D。
(6)將C和D混合，真空減壓濃縮至原體積的1/8。將濃縮液冷卻至5℃，過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，濾液繼續(xù)濃縮至原體積的1/12，再冷卻至5℃并過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，加入3倍體積的冷丙酮，快速攪拌混勻后靜置30分鐘，然后于4000轉(zhuǎn)/分離心，取沉淀于真空25℃溫度下干燥，得淺黃色粉末狀固體II。
(7)將固體I和固體II混合均勻即得。
實(shí)施例二(1)新鮮海產(chǎn)小雜魚用自來(lái)水洗凈、骨肉分離機(jī)取肉，然后粉碎成魚糜。取一份魚糜，加入3倍重量的去離子水，攪拌均勻升溫至60℃，再按魚重1.5％的比例加入活力80～90萬(wàn)單位的木瓜蛋白酶，保溫3小時(shí)后迅速升溫至90～100℃并維持若干分鐘。
(2)將上述反應(yīng)完畢的混合物離心，取離心液再用中速濾紙壓濾，收集濾液，用截取分子量為40kDa的超濾膜分離濾過(guò)，收集濾過(guò)部分。
(3)在每升上述超濾過(guò)的液體中加入10.92克Na2HPO4·12H2O和3.04克NaH2PO4·2H2O，調(diào)節(jié)溶液pH為7、溶液中磷酸鹽的濃度為0.05M，再按每升液體2.0公斤的劑量加入陰離子交換樹脂，于室溫下間歇攪拌1.5小時(shí)，然后離心，得離心液A。再按每公斤樹脂400毫升的劑量加入0.05M pH7的磷酸鹽緩沖溶液，與樹脂混合攪拌45分鐘后離心，得離心液B。
(4)將A與B混合，真空減壓濃縮至原體積的1/6。將濃縮液冷卻至8℃，加入4倍體積的冷丙酮，快速攪拌均勻后靜置90分鐘，然后于4000轉(zhuǎn)/分離心，取沉淀物于真空10℃溫度下干燥即得淺黃色粉末狀固體I。
(5)在上述離心后的樹脂中按每公斤樹脂0.75升的劑量加入洗脫液，該洗脫液中含有0.4M濃度的NaCl和0.08M濃度的HAC。室溫下緩慢攪拌3小時(shí)，然后離心，得離心液C。再用按每公斤樹脂400毫升的劑量加入上述洗脫液，與樹脂混合攪拌45分鐘后離心，得離心液D。
(6)將C和D混合，真空減壓濃縮至原體積的1/9。將濃縮液冷卻至10℃，過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，濾液繼續(xù)濃縮至原體積的1/14，再冷卻至10℃并過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，加入4倍體積的冷丙酮，快速攪拌混勻后靜置90分鐘，然后于4000轉(zhuǎn)/分離心，取沉淀于真空10℃溫度下干燥，得淺黃色粉末狀固體II。
(7)將固體I和固體II混合均勻即得。
實(shí)施例三(1)新鮮海產(chǎn)小雜魚用自來(lái)水洗凈、骨肉分離機(jī)取肉，然后粉碎成魚糜。取一份魚糜，按比例加入5倍重量的去離子水，攪拌均勻升溫至70℃，再按魚重3.0％的比例加入活力80～90萬(wàn)單位的木瓜蛋白酶，保溫1小時(shí)后迅速升溫至90～100℃并維持若干分鐘。
(2)將上述反應(yīng)完畢的混合物離心，取離心液再用中速濾紙壓濾，收集濾液，用截取分子量為50kDa的超濾膜分離濾過(guò)，收集分子量在10kDa以下的濾過(guò)部分。
(3)在每升上述濾過(guò)液體中加入33.92克Na2HPO4·12H2O和0.83克NaH2PO4·2H2O，調(diào)節(jié)溶液pH為8、溶液中磷酸鹽的濃度為0.1M，再按每升液體2.5公斤的劑量加入陰離子交換樹脂，于室溫下間歇攪拌3小時(shí)，然后離心，得離心液A。再按每公斤樹脂500毫升的劑量加入0.1M pH8的磷酸鹽緩沖溶液，與樹脂混合攪拌1小時(shí)后離心，放出離心液B。
(4)將A與B混合，真空減壓濃縮至原體積的1/7。將濃縮液冷卻至10℃，加入5倍體積的冷丙酮，快速攪拌均勻，然后靜置120分鐘，然后于4000轉(zhuǎn)/分離心，取沉淀物于真空-10℃溫度下干燥即得淺黃色粉末狀固體I。
(5)在上述離心后的樹脂中按每公斤樹脂1.0升的劑量加入洗脫液，該洗脫液中含有0.3M的NaCl和0.05M pH值為7的磷酸鹽緩沖溶液。室溫下緩慢攪拌5小時(shí)，然后離心，得離心液C。再用按每公斤樹脂500毫升的劑量加入上述洗脫液，與樹脂混合攪拌1小時(shí)后離心，得離心液D。
(6)將C和D混合，真空減壓濃縮至原體積的1/10。將濃縮液冷卻至8℃，過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，濾液繼續(xù)濃縮至原體積的1/15，再冷卻至8℃并過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，加入5倍體積的冷丙酮，快速攪拌混勻后靜置120分鐘，然后于4000轉(zhuǎn)/分離心，取沉淀于真空-10℃溫度下干燥，得淺黃色粉末狀固體II。
(7)將固體I和固體II混合均勻即得。
權(quán)利要求
1.一種海產(chǎn)小雜魚提取物的制作方法，其特征在于采用以下步驟制作(1)將新鮮海產(chǎn)小雜魚的魚肉制成魚糜，取一份魚糜，按比例加入1～5倍重量的去離子水，攪拌均勻升溫至50～70℃，再按魚肉重0.5～3.0％的比例加入蛋白酶，保溫1～5小時(shí)后迅速升溫至90～100℃并維持若干分鐘；(2)將上述反應(yīng)完畢的混合物離心，取離心液再用中速濾紙壓濾，收集濾液，用截取分子量為10kDa～50kDa的超濾膜分離濾過(guò)，收集其濾過(guò)部分；(3)在上述濾過(guò)部分的液體之中加入混合磷酸鹽，調(diào)節(jié)溶液為pH 6～8的緩沖體系，溶液中磷酸鹽的濃度為0.01～0.1M，按每升液體1.5～2.5公斤的劑量加入陰離子交換樹脂，于室溫下間歇攪拌0.5～3小時(shí)，然后離心，得離心液A，再按每公斤樹脂300～500毫升的劑量加入0.01～0.1M，pH6～8的磷酸鹽緩沖溶液，與樹脂混合攪拌0.5～1小時(shí)后離心，得離心液B；(4)將A與B混合，真空減壓濃縮至原體積的1/5～1/7，將濃縮液冷卻至5～10℃，再加入3～5倍濃縮液體積的冷丙酮，快速攪拌，然后靜置30～120分鐘，離心，取沉淀物于真空-10℃～30℃溫度下干燥，得淺黃色粉末狀固體I；(5)在上述離心后的樹脂中按每公斤樹脂0.5～1.0升的劑量加入含有0.1～0.4M的NaCl，并調(diào)pH值為2～7的洗脫液，室溫下緩慢攪拌1～5小時(shí)，然后離心，得離心液C，再用按每公斤樹脂300～500毫升的劑量加入上述洗脫液，與樹脂混合攪拌0.5～1小時(shí)后離心，得離心液D；(6)將C和D混合，真空減壓濃縮至原體積的1/8～1/10，將濃縮液冷卻至5～10℃，過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，濾液繼續(xù)濃縮至原體積的1/12～1/15，再冷卻至5～10℃并過(guò)濾除去所析出的鹽晶體，然后按V2∶V1＝3～5的體積加入冷丙酮，快速攪拌混勻后靜置30～120分鐘，然后于4000轉(zhuǎn)/分離心，取沉淀于真空-10℃～30℃溫度下干燥，得淺黃色粉末狀固體II；(7)將固體I和固體II混合均勻即得。
全文摘要
本發(fā)明提供一種以海產(chǎn)小雜魚為原料提取多肽混合物制品的制備方法,包括蛋白酶酶解、超濾、離子交換分離、以及洗脫、濃縮、沉淀、混合等工藝步驟,本發(fā)明所得提取物的總蛋白質(zhì)含量大于75%,其中游離氨基酸含量大于15%,所含的多肽混合物分子量小于50kDa,多肽含量大于50%,這種方法制備的多肽混合物可用作營(yíng)養(yǎng)保健食品和貧血治療藥品。本發(fā)明能實(shí)現(xiàn)對(duì)資源大、成本低廉的海產(chǎn)小雜魚的科學(xué)深加工,產(chǎn)品經(jīng)濟(jì)價(jià)值高,適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12P21/00GK1356393SQ0013082
公開日2002年7月3日 申請(qǐng)日期2000年12月1日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月1日
發(fā)明者董玉蓮, 聞克威, 李寶才, 傅家漠, 盛國(guó)英 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院廣州地球化學(xué)研究所