專利名稱：一種脂肪酸合成酶抑制劑及其制造方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及酶的抑制劑及其制造方法與應(yīng)用，特別是涉及一種脂肪酸合成酶抑制劑及其制造方法與應(yīng)用。
研究表明，高等動物的體脂一方面靠直接攝入，更多的由體內(nèi)自身合成(Lenninger，A.L.，1982.Principles of Biochemistry，Chapter 13，p333-360 andChapter 21，p593-614；Wakil，S.J.et al.，1983.Ann.Rev.Biochem.52，p537-579)。脂肪酸合成酶是生物細(xì)胞內(nèi)合成脂肪過程中最重要的酶。田維熙等對家禽脂肪酸合成酶的研究發(fā)現(xiàn)，家禽腹腔的脂肪水平和脂肪酸合成酶活性有很高的正相關(guān)，并提出控制脂肪酸合成酶活性是控制動物體脂水平的有效方法的理論(田維熙，1994.動物的體脂水平和脂肪酸合成酶活性的調(diào)控，生命的化學(xué)，14，(1)184；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系，生物化學(xué)雜志，12(2)234-236；Mei Li et al.，1999.Factors influencingthe levels of fatty acid synthase complex activity in fowl.Biochemistry andMolecular Biology International，47(1)63-69)。最近，霍普金斯大學(xué)Loftus等對小鼠脂肪酸合成酶的研究結(jié)果證明，抑制脂肪酸合成酶可造成丙二酰輔酶A的積累，而后者抑制與進(jìn)食相關(guān)的下丘腦神經(jīng)肽Y的表達(dá)，在不影響小鼠活動能力的情況下使食欲下降，體重降低。Loftus等指出，脂肪酸合成酶可以作為控制體重潛在的治療靶位(Loftus.T.M.et al.，2000.Science，288(5475)2379-2381)。以上結(jié)果表明，抑制脂肪酸合成酶的活性，不僅可抑制細(xì)胞內(nèi)脂肪的合成，而且還能抑制動物的食欲，進(jìn)而限制直接攝入的熱量。因此，研制和開發(fā)脂肪酸合成酶的抑制劑將具有重大的現(xiàn)實(shí)意義及開發(fā)潛力。
本發(fā)明的目的是提供一種能有效抑制脂肪酸合成酶活性的脂肪酸合成酶抑制劑。
本發(fā)明的另一目的是提供一種制造上述脂肪酸合成酶抑制劑的方法。
本發(fā)明的又一目的是提供上述脂肪酸合成酶抑制劑的用途。
本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑是用有機(jī)溶劑或水或有機(jī)溶劑與水的混合物，從中藥銀杏葉中萃取出的物質(zhì)。
所述的有機(jī)溶劑為極性有機(jī)溶劑，其中，優(yōu)選的是乙醇、丁醇或丙酮。所述乙醇的濃度可以在20％-100％的范圍內(nèi)，其中，優(yōu)選的是50％-100％的乙醇，最優(yōu)選的是70％的乙醇。
生產(chǎn)上述脂肪酸合成酶抑制劑的方法，包括以下步驟
(1)、將粉碎后的銀杏葉置于容器中，加入有機(jī)溶劑或水或有機(jī)溶劑與水的混合物；(2)、在20℃-40℃條件下萃取4-9小時；(3)、離心或過濾，收集上清液。
在上述生產(chǎn)方法中，所述加入的有機(jī)溶劑或水或有機(jī)溶劑與水的混合物的重量可以為銀杏葉重量的5-15倍，其中優(yōu)選的為6-10倍。
如果萃取在攪拌、30℃條件下進(jìn)行，則萃取4小時即可；如果離心是在8000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行，則進(jìn)行15分鐘。
以本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑為活性成分生產(chǎn)的藥物，是本發(fā)明脂肪酸合成酶抑制劑的主要應(yīng)用領(lǐng)域。
本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為食品添加劑、日用化學(xué)品(特別是化妝品)添加劑及保健品添加劑。
銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的葉子。銀杏在我國大部分地區(qū)有產(chǎn)，主產(chǎn)廣西、四川、河南、山東、湖北、遼寧等地。中藥銀杏葉“性苦，平，澀”(《綱目》)，“入心、肺、腎三經(jīng)”(《本草再新》)。中醫(yī)認(rèn)為，銀杏葉的功用主要為益心斂肺，化濕止瀉。主治胸悶心痛，心悸，痰喘咳嗽，泄痢，白帶。
本發(fā)明巧妙地將傳統(tǒng)的中藥銀杏葉用有機(jī)溶劑或水或有機(jī)溶劑與水的混合物，特別是乙醇、丁醇或丙酮等極性有機(jī)溶劑進(jìn)行萃取，創(chuàng)造性地揭示出，所萃取出的物質(zhì)是有效的脂肪酸合成酶抑制劑。由于銀杏葉本身即為一味常用的中藥，因而為該脂肪酸合成酶抑制劑的進(jìn)一步開發(fā)利用提供了廣闊的前景。實(shí)驗(yàn)表明脂肪酸合成酶抑制劑可以有效抑制脂肪酸合成酶的活性，而脂肪酸合成酶活性的強(qiáng)弱直接影響到生物細(xì)胞內(nèi)合成脂肪的多少。也就是說，抑制了脂肪酸合成酶的活性，生物細(xì)胞內(nèi)合成脂肪的過程會弱化，脂肪含量即會得到控制，甚至減少，而且，脂肪酸合成酶抑制劑還可以控制動物的食欲，因此本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑可以作為減肥藥物的活性成分，生產(chǎn)口服液、沖劑、膠囊、片劑、針劑等各種劑型的減肥藥物。本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為保健品、食品的添加劑，特別是可作為高熱量食品的添加劑，使喜食高熱量食品的人既滿足了口福，又不用擔(dān)心會增胖。本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為美容日用化學(xué)品的添加劑，如可以制成減肥霜，對需要減肥的部位進(jìn)行定點(diǎn)涂抹。同時，由于中藥銀杏葉的源植物分布廣泛，因而價格較低，為脂肪酸合成酶抑制劑的工業(yè)化生產(chǎn)提供了保證。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
在下述的實(shí)施例中，所用的脂肪酸合成酶均為用常規(guī)方法(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系.生物化學(xué)雜志，12(2)234-236)自新鮮雞肝中分離提純的，并經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測為單一帶。
脂肪酸合成酶活性采用乙酰輔酶A、丙二酰輔酶A、NADPH為底物的標(biāo)準(zhǔn)測活方法測定(W.X.Tian et al.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系.生物化學(xué)雜志，12(2)234-236)。
脂肪酸合成酶(FAS)活性被抑制的程度用I％(抑制程度)來表示，其計(jì)算方法為以底物中只加入相應(yīng)提取溶劑的為對照，測定其脂肪酸合成酶活性值，該值用A0表示，并設(shè)定其為100％。底物中加入脂肪酸合成酶抑制劑提取液的為實(shí)驗(yàn)組，測得其脂肪酸合成酶活性的數(shù)值為A；RA％(剩余活性)＝A/A0×100％I％(抑制程度)＝100％-RA％實(shí)施例1用乙醇從中藥銀杏葉中萃取脂肪酸合成酶抑制劑(1)取中藥銀杏葉，粉碎后置于容器中，加入5倍重量95％的乙醇，充分?jǐn)嚢韬竺芊猓?2)在30℃、攪拌的條件下萃取4小時；(3)將上述溶液在8000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下離心15分鐘，取上清液，即為含脂肪酸合成酶抑制劑的提取液，以備下面的實(shí)驗(yàn)使用。
可以用與該實(shí)施例相同的方法，用不同梯度的乙醇(如17％，40％，50％，70％，80％，100％)、水、與乙醇極性相近或較弱的有機(jī)溶劑(如丁醇、丙酮)來萃取脂肪酸合成酶抑制劑。如果是在非攪拌條件下進(jìn)行萃取，則至少應(yīng)每隔4小時攪拌一次，萃取8小時。用該實(shí)施例的方法自中藥銀杏頁中萃取脂肪酸合成酶抑制劑，攪拌條件下，萃取時間在4-12小時，溫度在20-100℃之間均能萃取出有效成分。在實(shí)際生產(chǎn)中，萃取后一般采用壓濾機(jī)來收取上清液。
實(shí)施例2相同的實(shí)驗(yàn)底物中加入不同數(shù)量的脂肪酸合成酶抑制劑對FAS活性的影響(測活的酶加入量為每毫升實(shí)驗(yàn)底物10微克)。每毫升底物中加實(shí)施例1提取液的微升數(shù) 0.330.50.67 0.83折算成加入中藥銀杏葉的毫克數(shù) 0.067 0.10.133 0.167折算成每毫克酶加入中藥銀杏葉的毫克數(shù) 6.7 10 13.3 16.7FAS酶活性被抑制的程度I％ 20 48 70 93由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，隨著加入提取液量的增加，F(xiàn)AS酶活性被抑制程度I％升高，當(dāng)每毫升底物中加入0.83微升的提取液時，I％已高達(dá)93％，表明脂肪酸合成酶的活性基本被抑制。
實(shí)施例3萃取溶劑對脂肪酸合成酶活性的影響取與實(shí)施例2相同的底物，分別向每毫升底物中加0.33、0.5、0.67、0.83微升95％的乙醇，檢測計(jì)算FAS酶活性被抑制的程度I％，結(jié)果是I％均為0，表明所加量的萃取溶劑乙醇不會抑制脂肪酸合成酶的活性，抑制脂肪酸合成酶活性的是從中藥銀杏葉中萃取出的物質(zhì)。
實(shí)施例4脂肪酸合成酶抑制劑的半抑制濃度用實(shí)施例1所得的提取液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，要達(dá)到I％＝50％，每毫升溶液中需加入0.52微升的提取液，折算成加入中藥銀杏葉的毫克數(shù)為0.104，折算成每毫克酶加入中藥銀杏葉的毫克數(shù)為10.4，半抑制濃度很低，說明本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑對脂肪酸合成酶的活性有較強(qiáng)的抑制作用，并且所需有效劑量較低。
實(shí)施例5不同萃取劑對萃取出的脂肪酸合成酶抑制劑數(shù)量的影響萃取劑 水17％ 50％ 95％ 丁醇 丙酮 乙醚 石油醚乙醇 乙醇 乙醇每毫升底物中加入 2.5 2.5 1.52.51.5 1.51.51.5提取液的微升數(shù)折算成加入中藥 0.5 0.5 0.30.50.3 0.30.30.3銀杏葉的毫克數(shù)折算成每毫克酶加入 50 50 30 50 3030 30 30中藥銀杏葉的毫克數(shù)FAS酶活性被抑 29 25 79 93 7975 0 0制的程度I％從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑可以溶于水，但溶解性以在較高濃度的乙醇(50％-100％)、丁醇及丙酮中為佳，在非極性溶劑中不溶。
權(quán)利要求
1.脂肪酸合成酶抑制劑，它是用有機(jī)溶劑或水或有機(jī)溶劑與水的混合物，從中藥銀杏葉中萃取出的物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑，其特征在于所述有機(jī)溶劑為極性有機(jī)溶劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的脂肪酸合成酶抑制劑，其特征在于所述極性有機(jī)溶劑為乙醇、丁醇或丙酮。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的脂肪酸合成酶抑制劑，其特征在于所述乙醇的濃度為20％-100％，其中，優(yōu)選的是50％-100％，最優(yōu)選的是70％。
5.一種生產(chǎn)權(quán)利要求1所述脂肪酸合成酶抑制劑的方法，包括以下步驟(1)將粉碎后的銀杏葉置于容器中，加入有機(jī)溶劑或水或有機(jī)溶劑與水的混合物；(2)在20℃-40℃條件下萃取4-9小時；(3)離心或過濾，收集上清液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生產(chǎn)脂肪酸合成酶抑制劑的方法，其特征在于所述加入的有機(jī)溶劑或水或有機(jī)溶劑與水的混合物的重量為所述銀杏葉重量的5-15倍；其中優(yōu)選的為6-10倍；所述萃取在攪拌、30℃條件下，進(jìn)行4小時；所述離心是在8000轉(zhuǎn)/分鐘的條件下進(jìn)行15分鐘。
7.以權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑為活性成分的藥。
8.權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑作為食品添加劑的應(yīng)用。
9.權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑作為日用化學(xué)品添加劑的應(yīng)用。
10.權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑作為保健品添加劑的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種脂肪酸合成酶抑制劑,它是用有機(jī)溶劑或水或有機(jī)溶劑與水的混合物,從中藥銀杏葉中萃取出的物質(zhì);所述有機(jī)溶劑優(yōu)選乙醇、丁醇或乙醚;所述乙醇的濃度優(yōu)選的是50%－100%,最優(yōu)選的是70%。一種生產(chǎn)上述脂肪酸合成酶抑制劑的方法,包括以下步驟:(1)將粉碎后的銀杏葉置于容器中,加入有機(jī)溶劑或水或有機(jī)溶劑與水的混合物;(2)在20℃－40℃條件下萃取4－9小時;(3)離心或過濾,收集上清液。本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑可以在制藥、食品添加劑及日用化學(xué)品添加劑等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。
文檔編號A23L1/30GK1371696SQ0110385
公開日2002年10月2日 申請日期2001年2月26日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月26日
發(fā)明者田維熙, 李麗春, 吳柏南, 吳曉東, 王玄, 陳傳楚 申請人:田維熙