專利名稱：含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法及其組合物和評價方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及苦杏仁苷抗腫瘤活性的增進(jìn)方法、評價方法等技術(shù)，所說的苦杏仁苷屬于包含在植物種子中的糖苷。特別地，本發(fā)明涉及經(jīng)口服途徑施用后增大抗腫瘤效果的表達(dá)，或經(jīng)口服途徑施用后抗腫瘤劑效力的預(yù)測性評價。
已知枇杷種子具有抗腫瘤效果并且用于Kampo(中藥)和保健食品領(lǐng)域。關(guān)于枇杷種子的所謂抗腫瘤效果有很多報(bào)道。其抗癌的關(guān)鍵組分通常認(rèn)為是苦杏仁苷，一種糖苷。簡言之，當(dāng)用于治療抗腫瘤目的時，可以口服施用干粉形式的枇杷種子。
另一方面，通過小鼠測試證實(shí)來源于植物的物質(zhì)是否具有抗腫瘤效果。用含有或不含有植物提取溶液的飲食喂養(yǎng)小鼠組。對這兩組進(jìn)行對比研究，所研究的評價項(xiàng)目例如，腫瘤的滅絕，腫瘤大小的減少或轉(zhuǎn)移狀態(tài)、或者小鼠的存活率，以便證實(shí)用這種動物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了抗腫瘤效果。此外，進(jìn)行在動物試驗(yàn)中的毒性和在人類中的功效、安全試驗(yàn)。在獲得這些數(shù)據(jù)后，在醫(yī)學(xué)設(shè)備中進(jìn)行臨床試驗(yàn)。最后，通過臨床試驗(yàn)如此證明了抗腫瘤劑對人使用的效果。
枇杷種子具有制癌和抗腫瘤以及抗轉(zhuǎn)移活性迄今為止是廣泛已知的，并且到處得到宣傳。枇杷種子的干燥物質(zhì)為粉狀并且口服施用，或?qū)㈣凌朔N子的醇提取物與諸如維生素的其它組分配合，生產(chǎn)保健飲料和保健食品，或者用于灸術(shù)。
枇杷的種子和葉子中含有相對高含量的苦杏仁苷，并且被認(rèn)為具有抗癌、抗tissive、止痛等效果。
說到抗腫瘤效果，出乎預(yù)料，僅有非常少的病例證實(shí)干種子粉末在口服途徑施用中是有效的。盡管不能否認(rèn)抗癌效果，但僅有非常少的情況被認(rèn)可是抗腫瘤活性有效。
本發(fā)明者研究了在枇杷種子粉末病例中發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤效果的某些個體差異的原因等等，并且研究了人的制癌機(jī)理。本發(fā)明者認(rèn)為需要對所有患者采用有效的措施來接受枇杷種子的效力。
此外，如果認(rèn)為這種有效措施主要是通過使用含苦杏仁苷的草藥等而獲得的。則早期評價含苦杏仁苷的抗腫瘤劑在口服施用接受者中的功效，然后將這種醫(yī)藥較早地投入到世界中。這對援救受痛苦的患者來說是一項(xiàng)緊迫的工作。
另一方面，天然產(chǎn)物的干燥粉末在動物試驗(yàn)中證實(shí)具有抗腫瘤活性，卻在給人施用的情況中不能經(jīng)常獲得預(yù)期的效果。在功效發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)的過程中，或這不是一個標(biāo)準(zhǔn)化的臨床試驗(yàn)，用于此目的的施用體系要在規(guī)定的條件下設(shè)立并且在施用期間受到控制。跟蹤(follow-up)對這種試驗(yàn)是必要的。因此需要非常長的時間才能獲得決定人口服施用后功效是否得到證實(shí)的結(jié)果。
如果進(jìn)行臨床試驗(yàn)的患者患的是復(fù)雜疾病，則他們應(yīng)當(dāng)因急癥治療而被排除，因此由他們來證實(shí)功效是不可能的。有鑒于此，事實(shí)上很多病例在長期的臨床試驗(yàn)中是不能發(fā)現(xiàn)抗腫瘤效果的。
在保持能夠發(fā)現(xiàn)功效的條件下連續(xù)進(jìn)行長期臨床試驗(yàn)是不容易的。在臨床試驗(yàn)的條件中，確實(shí)發(fā)現(xiàn)了抗癌產(chǎn)物的功效。所用的目標(biāo)天然產(chǎn)物需要花費(fèi)長時間來獲得抗腫瘤活性。建立由能夠在較短天數(shù)內(nèi)評價抗腫瘤活性的技術(shù)來支持的方法是必要的。
本發(fā)明者認(rèn)為必要的是開發(fā)一種預(yù)測含枇杷種子苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的方法，并且代替通過人施用的臨床試驗(yàn)。除此之外，將枇杷種子的抗腫瘤活性與來源于Kampo(中藥)等的物質(zhì)進(jìn)行比較，來客觀地證實(shí)抗腫瘤的效果。
由于很多已知的抗腫瘤來源(除枇杷種子外)，如含苦杏仁苷的中藥是已知的。因此，將含苦杏仁苷的來源拓寬到諸如中藥等的天然產(chǎn)物，對這個主題的觀點(diǎn)是更好的。
本發(fā)明的目的是獲得含苦杏仁苷的抗腫瘤物質(zhì)效力的事實(shí)表達(dá)。
本發(fā)明的另一個目的是預(yù)測含枇杷種子苦杏仁苷的物質(zhì)當(dāng)人口服施用時的抗腫瘤效果。
本發(fā)明的另一個目的是提供含有苦杏仁苷能夠表達(dá)抗腫瘤活性的組合物。
下面將詳細(xì)描述本發(fā)明的前述目的、其它目的和特征。
本發(fā)明是一種可應(yīng)用于含苦杏仁苷的物質(zhì)的增進(jìn)方法，該方法包括以下特點(diǎn)使用遠(yuǎn)紅外線的焙烤過程，在焙烤過程之后給物質(zhì)添加微生物發(fā)酵的發(fā)酵過程。據(jù)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過焙烤和發(fā)酵的含苦杏仁苷的物質(zhì)比沒有經(jīng)過焙烤和發(fā)酵的物質(zhì)具有抗腫瘤活性增進(jìn)的特點(diǎn)。
繼前述的發(fā)酵過程之后，通過給焙烤發(fā)酵的物質(zhì)添加獲得自芝麻的油來包裹抗腫瘤物質(zhì)，進(jìn)行涂布油過程。其構(gòu)成了本發(fā)明的特點(diǎn)。含苦杏仁苷的前述物質(zhì)的特點(diǎn)是含有苦杏仁苷的植物種子。前述枇杷種子的特點(diǎn)，通過遠(yuǎn)紅外線給生種子進(jìn)行焙烤過程。
具有增進(jìn)的抗腫瘤活性的前述物質(zhì)包括以下特點(diǎn)通過遠(yuǎn)紅外線的焙烤過程，在焙烤過程之后給物質(zhì)添加微生物的發(fā)酵過程。通過這些過程，物質(zhì)比沒有經(jīng)過焙烤和發(fā)酵的物質(zhì)具有了增進(jìn)的抗腫瘤活性特點(diǎn)。
本發(fā)明是一種用于含苦杏仁苷物質(zhì)的處理的抗腫瘤活性的功效評價方法。對通過用紫外線對不飽和脂肪酸如廿二碳六烯酸等照射的過氧化物脂質(zhì)生產(chǎn)體系，添加經(jīng)處理的含苦杏仁苷。含苦杏仁苷的物質(zhì)的濃度越高，以增加過氧化物脂質(zhì)比例為目的的處理越強(qiáng)。該特點(diǎn)構(gòu)成了這種含苦杏仁苷物質(zhì)的方法的較強(qiáng)抗腫瘤活性。
含苦杏仁苷的前述物質(zhì)的特點(diǎn)是含有苦杏仁苷的植物種子。前述枇杷種子的特點(diǎn)，通過遠(yuǎn)紅外線給生種子進(jìn)行焙烤過程。
本發(fā)明是一種不通過臨床試驗(yàn)方法對含苦杏仁苷抗腫瘤物質(zhì)的功效評價方法。本發(fā)明具有預(yù)測口服施用抗腫瘤活性通過使用含苦杏仁苷物質(zhì)變得較強(qiáng)的特點(diǎn)，將所說的含苦杏仁苷物質(zhì)添加到其中通過用遠(yuǎn)紅外線照射不飽和脂肪酸如廿二碳六烯酸等產(chǎn)生的過氧化物脂質(zhì)的體系中，以增加抗腫瘤物質(zhì)中的脂質(zhì)的比例。其包括預(yù)測含苦杏仁苷產(chǎn)物口服途徑中抗腫瘤效力的特點(diǎn)。
前述的含苦杏仁苷物質(zhì)具有以下特點(diǎn)用遠(yuǎn)紅外線的焙烤過程，接著添加微生物的發(fā)酵過程。這些過程可應(yīng)用于使前述含苦杏仁苷物質(zhì)的抗腫瘤活性比沒有經(jīng)過焙烤和發(fā)酵的物質(zhì)增進(jìn)的技術(shù)。
本發(fā)明的一個特點(diǎn)是繼發(fā)酵過程之后，給發(fā)酵后的物質(zhì)添加由遠(yuǎn)紅外線焙烤芝麻獲得的油，以包裹抗腫瘤細(xì)合物。
本發(fā)明的另一個特點(diǎn)是前述含苦杏仁苷的物質(zhì)是含苦杏仁苷植物種子，前述的植物種子是枇杷種子，并且用遠(yuǎn)紅外線焙烤生的枇杷種子。
本發(fā)明者通過Kampo藥(中藥)中抗活性氧物質(zhì)抑制效果的研究確認(rèn)了受活性氧和過氧化物脂質(zhì)因破壞了人體組織而引起和損傷的各種傳染性疾病。
人體內(nèi)存在的一種名叫超氧化物歧化酶(SOD)的酶，可以除去活性氧，以便保護(hù)人體不受活性氧對細(xì)胞的破壞。SOD含量依據(jù)年齡逐漸減少，并且在不能除去活性氧的SOD含量下，尤其是在年齡超過40歲的SOD含量下，體內(nèi)摻入的活性氧無法除去活性氧。體內(nèi)的不能被除去的活性氧會引起成人疾病。
并且在活性氧由于慢性和急性刺激和人體內(nèi)形成化學(xué)物質(zhì)而在體內(nèi)積累的情況中，體內(nèi)存在的SOD的量不能完全除去活性氧。由此導(dǎo)致各種疾病的開始。
有鑒于此，那些通過SOD不足和活性氧不能被完全除去引起的疾病，外原性SOD施用是一種彌補(bǔ)不足的緩解方法，作為這種情況所采用的措施。據(jù)發(fā)現(xiàn)這種活療僅對注射途徑有效而對口服途徑無效。這種口服施用SOD沒有效果的原因還未得到解釋。
本發(fā)明者弄清了SOD當(dāng)口服給藥時無效的原因。由于其對胃汁不穩(wěn)定并且分子量超過30,000的SOD不被消化器官吸收。因而對SOD有局限性。它僅除去了四種活性氧種類中的超氧化物類(O2-)。
本發(fā)明者研究了具有除去過量活性氧能力并且可以通過口服途徑給藥的物質(zhì)，并且發(fā)現(xiàn)可以通過焙烤和發(fā)酵過程、然后添加得自焙烤植物的植物油配制成制劑，來加工谷物(如稻、小麥等)、豆類(如大豆、紅豆)及其豆芽，作為通過口服途徑除去活性氧的有效產(chǎn)物(參考JP專利2125887)。
植物種子及其芽本來含有抗活性氧的低分子類化合物類黃酮、多酚(polypherol)、鞣酸、生育酚、維生素B2等。這些抗活性氧低分子量化合物彼此結(jié)合形成高分子量化合物，或者被吸收和包被形成更復(fù)雜和高分子量化合物。本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)就它們的原樣攝取它們，不能達(dá)到像預(yù)料低分子量化合物那樣的抗活性氧活性。
即，人的胃汁不能將攝入后的活性氧高分子量抑制物分解成小分子。大部分患者不能享受到活性氧抑制物的效果。本發(fā)明者在″食品工業(yè)″雜志第35卷第14號中描述了這個觀點(diǎn)，標(biāo)題為″對天然植物種子的DDS、SOD類活性食品的開發(fā)、改進(jìn)及其藥理學(xué)生物化學(xué)討論″。
本發(fā)明者研究了怎樣可以使抗活性氧物質(zhì)以其含在谷物和豆類等(如種子和芽)中的狀態(tài)被激活并且用于活療和預(yù)防疾病。
結(jié)果，在溫和加熱條件下，在植物種子及其芽中的活性氧抑制物，可以從復(fù)雜的狀態(tài)中釋放出一部分低分子化合物，或者可以通過化學(xué)變化使一部分復(fù)雜分子激活并且解放官能團(tuán)。通過這種加熱處理可特別增進(jìn)抗活性氧活性。
另一方面，據(jù)認(rèn)為枇杷種子的制癌、抗腫瘤或抗轉(zhuǎn)移活性主要地是由于苦杏仁苷。苦杏仁苷與具有活性氧抑制活性的低分子量分子在化學(xué)結(jié)構(gòu)方面不同。這種苦杏仁苷對有關(guān)活性氧的系列研究來說不是目標(biāo)化合物。
但本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)了可以在一些患者中找到枇杷種子粉末的抗腫瘤效果，與此相反，另一些患者沒有效果，這兩類患者均是通過口服途徑施用。物質(zhì)經(jīng)降解成低分子量后顯出抗活性氧的事實(shí)不能解釋這個發(fā)現(xiàn)。
即，枇杷種子的抗腫瘤活性機(jī)理卻得不到闡明，如上所述，枇杷種子粉末抗腫瘤活性在口服施用的患者中的表達(dá)顯出差異。這個在患者中抗腫瘤活性表達(dá)的差異可以說明有兩類的患者。一類容易表達(dá)活性的患者和另一類難以表達(dá)抗腫瘤組分的患者。
在通過口服途徑攝取后，枇杷種子粉末遲早被胃汁處理。由此患者容易或難以表達(dá)抗腫瘤活性，這取決于被胃汁的處理。即，存在有胃汁處理的個體差別，這可以被認(rèn)為是造成抗腫瘤活性表達(dá)差別的因素。
基于由于胃汁處理個體強(qiáng)弱所造成的抗腫瘤活性表達(dá)差異的臨床事實(shí)，本發(fā)明者提出了如下的抗腫瘤活性可能與胃汁處理有關(guān)的假說。
即，代表著含在枇杷種子粉末中的抗腫瘤組分的苦杏仁苷是胃汁處理的對象。它以難以表達(dá)抗腫瘤活性的狀態(tài)存在，并且通過個體不同的胃汁處理可以被改變成容易表達(dá)抗腫瘤活性的狀態(tài)。
對具有天生強(qiáng)胃汁的患者而言，施用了含有抗腫瘤組分(苦杏仁苷)的枇杷種子粉末的患者表達(dá)抗腫瘤活性。由此證實(shí)了抗腫瘤活性的表達(dá)。
但對胃汁天生較弱并且難以找到活性的患者來說，其結(jié)果是，活性表達(dá)的程度不像具有強(qiáng)胃汁患者那么容易。
由此認(rèn)為和解釋了當(dāng)今很多人，他們的胃汁不夠強(qiáng)至降解含在枇杷種子粉末中的抗腫瘤性苦杏仁苷，因而在以其原狀攝入粉末后，其可以發(fā)現(xiàn)的效力非常之少。
即，其胃汁天生強(qiáng)的患者可以解開枇杷種子中含有的非活性狀態(tài)抗腫瘤物質(zhì)組分這個拴緊的枷鎖(比喻)。這說明其以非活性形式存在，并且胃汁可以將其降解成活性和游離形式。從而導(dǎo)致抗腫瘤活性表達(dá)明朗化。
據(jù)認(rèn)為，當(dāng)今的人，他們的胃汁可以將該物質(zhì)分解成容易表達(dá)抗腫瘤活性的狀態(tài)。為此目的，抗腫瘤的有效組分通過腸吸收了，其活性位點(diǎn)彼此結(jié)合并由此呈非活性狀態(tài)。這解釋了為什么在患者中找不到抗腫瘤活性。
有鑒于此，本發(fā)明者認(rèn)為如果可以進(jìn)行某些處理，使枇杷種子的非活性形式轉(zhuǎn)化成活性形式，通過這個想法解決上述問題。
但本發(fā)明者不能獲得有效的處理方法，盡管有很多將非活性形式轉(zhuǎn)化成活性形式的試驗(yàn)。還由于的一個事實(shí)是不能獲得枇杷種子中非活性形式的活性組合物的狀態(tài)、不能完全發(fā)現(xiàn)之等等。因?yàn)槭褂昧颂珡?fù)雜的系統(tǒng)。
出乎預(yù)料地，本發(fā)明者進(jìn)行了各種實(shí)驗(yàn)并且最后，將用于諸如類黃酮、多酚(polypherol)等與苦杏仁苷全然不同的抗活性氧物質(zhì)的活化方法，運(yùn)用于苦杏仁苷中，并且發(fā)現(xiàn)苦杏仁苷的活性形式轉(zhuǎn)化成功了。
這種活化方法是運(yùn)用于類黃酮的，其與苦杏仁苷全然不同并由此非活性狀態(tài)與苦杏仁苷不同。一開始，認(rèn)為將抗活性氧物質(zhì)的活化方法運(yùn)用于苦杏仁苷是很困難的。
結(jié)果，出乎本發(fā)明者的意料，抗活性氧物質(zhì)的活化方法當(dāng)運(yùn)用于將苦杏仁苷改變成活性狀態(tài)時是有效的，盡管苦杏仁苷的結(jié)構(gòu)區(qū)別于抗活性氧物質(zhì)。
即，在實(shí)驗(yàn)中，本發(fā)明者使用了通過遠(yuǎn)紅外線照射制備的焙烤枇杷種子粉末，其與沒有經(jīng)過焙烤的枇杷種子粉末相比時以口服途徑顯出增加的抗腫瘤效果。此外，向經(jīng)過焙烤的枇杷種子粉末，接種微生物、特別是清酒曲(koji)，并且隨后用其發(fā)酵?？鼓[瘤活性據(jù)發(fā)現(xiàn)有所增加。這個事實(shí)被本發(fā)明者所理解。
除枇杷種子以外的含有苦杏仁苷并且顯出抗腫瘤活性的植物種子是已知的，例如杏、桃、李子、日本杏、中國桃、苦扁桃(Amygdala amara)的種子。此外，枇杷葉、alpha-alpha、竹筍等也含有相當(dāng)量的抗癌物質(zhì)。其中，含有苦杏仁苷的物質(zhì)可用于本發(fā)明。
從通過遠(yuǎn)紅外線焙烤并且在各種條件下發(fā)酵處理過的干燥枇杷種子中沒有獲得明顯的效果。由此，使用生的種子較好。
遠(yuǎn)紅外線焙烤和發(fā)酵后涂布油可增加抗腫瘤活性。使用的油獲得自遠(yuǎn)紅外線焙烤的芝麻。油的涂布通過包裹發(fā)酵后的物質(zhì)來實(shí)現(xiàn)。
如上所述，可以將使抗活性氧物質(zhì)分解成低分子量以表達(dá)抗腫瘤的有效方法應(yīng)用于苦杏仁苷的情況。其是一種硝?；擒?，不同于抗活性氧物質(zhì)。起先，它超出了本發(fā)明者的估計(jì)。將該方法用于苦杏仁苷并且導(dǎo)致了本發(fā)明。
由于進(jìn)行枇杷種子的抗癌效果，在經(jīng)過前述處理過程的處理后，物質(zhì)變得具有與Agaricus blazei一樣高的抗腫瘤效果，后者已知因其有抗腫瘤效果而具吸引力。
即，包含在枇杷種子苦杏仁苷中的潛在的抗癌活性沒有完全發(fā)揮出來。因此，其抗腫瘤的效果沒有得到證實(shí)。這可以通過本發(fā)明的處理來解決，并且表現(xiàn)出了預(yù)料不到的抗腫瘤效果。
如果運(yùn)用了抗腫瘤活性的增進(jìn)方法，則可以不使用那些昂貴稀有的生藥如蕈類等，而可以使用便宜且方便的水果種子作為醫(yī)藥、保健食品等開發(fā)的原料。由于不使用昂貴稀有的生藥而使用那些容易獲得的原料，降低了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。當(dāng)從患者的這個觀點(diǎn)考慮，本發(fā)明是有意義的。
運(yùn)用了抗腫瘤活性增進(jìn)方法的枇杷種子等含苦杏仁苷的物質(zhì)，當(dāng)與常規(guī)物質(zhì)(其配料僅含有來自含苦杏仁苷物質(zhì)的干燥粉末)相比時，其抗腫瘤效果被專門地證實(shí)特別高。
此外，在進(jìn)行系列研究的過程中，通過用紫外線照射從廿二碳六烯酸等中產(chǎn)生過氧化物脂質(zhì)的體系，逐步增加經(jīng)各種過程處理過的枇杷種子粉末的濃度，然后發(fā)現(xiàn)各濃度的過氧化物脂質(zhì)的增加的產(chǎn)物取決于枇杷種子粉末的濃度的增加，并且抗腫瘤活性據(jù)發(fā)現(xiàn)更強(qiáng)。
向過氧化物脂質(zhì)產(chǎn)生體系，添加相同濃度的經(jīng)各種過程處理過的種子粉未。成功地獲得通過口服表達(dá)的抗腫瘤效果，用于大量產(chǎn)生過氧化物脂質(zhì)的產(chǎn)物(通過測定過氧化物含量)。
如果采納了這些過程，甚至施用途徑不是口服，可以通過對枇杷種子等中含苦杏仁苷的物質(zhì)進(jìn)行的處理，來預(yù)測發(fā)現(xiàn)口服途徑中抗腫瘤效果表達(dá)的能力。即使患者沒有接受臨床試驗(yàn)，可以使用口服途徑中的抗腫瘤功效作為抗腫瘤效力的評價方法。
此外，在不飽和脂肪酸如廿二碳六烯酸通過用紫外線照射可以衍生至過氧化物脂質(zhì)中進(jìn)行判斷。向該體系中，通過增加濃度來逐步增加含苦杏仁苷的物質(zhì)，并且測定所產(chǎn)生的過氧化物脂質(zhì)?？诜緩街械目鼓[瘤活性越強(qiáng)，其中添加了苦杏仁苷的過氧化物脂質(zhì)的增量越高，即使不進(jìn)行臨床試驗(yàn)，也能夠容易地進(jìn)行含苦杏仁苷物質(zhì)的抗腫瘤活性的比較。
此外，例如，向通過對不飽和脂肪酸如廿二碳六烯酸照射產(chǎn)生過氧化物脂質(zhì)的體系，獨(dú)立地添加含苦杏仁苷具有抗腫瘤活性的物質(zhì)如蕈類(mushrooms)等和其它中藥品種，并且逐步地增加所添加的物質(zhì)的濃度。通過比較形成的過氧化物脂質(zhì)的含量和列出過氧化物脂質(zhì)含量的順序，可以容易地彼此比較物質(zhì)的口服途徑中的抗腫瘤活性的增進(jìn)。
即可以容易地進(jìn)行那些對不同類物質(zhì)的抗腫瘤相對強(qiáng)度比較的不具有個別差異完全對照的臨床試驗(yàn)。
作為含苦杏仁苷的物質(zhì)，可以廣泛地使用很多植物和動物來源。也可以使用通過使用含苦杏仁苷野生植物的生藥(中藥)，以及得自人工栽培的水施肥培養(yǎng)的收獲原料的含苦杏仁苷物質(zhì)。通過把本發(fā)明運(yùn)用于天然產(chǎn)物或栽培產(chǎn)物，并且獲得抗腫瘤的成功表達(dá)?？梢允褂帽景l(fā)明中所描述的那些物質(zhì)作為含苦杏仁苷的組合物。
下面通過幾個實(shí)施例來詳細(xì)解釋本發(fā)明的實(shí)施方案。
以下描述，使用枇杷種子作為含苦杏仁苷的物質(zhì)，含苦杏仁苷的抗腫瘤活性物質(zhì)的增進(jìn)方法，含有增進(jìn)的含苦杏仁苷物質(zhì)的組合物，用于含苦杏仁苷物質(zhì)的處理的抗腫瘤功效評價方法以及含苦杏仁苷物質(zhì)的抗腫瘤功效評價方法。(實(shí)施方案1)該實(shí)施方案由含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性增進(jìn)方法以及抗癌活性增進(jìn)的含有含苦杏仁苷物質(zhì)的產(chǎn)物的組成。
首先是含苦杏仁苷物質(zhì)的增進(jìn)方法，用遠(yuǎn)紅外線焙烤含苦杏仁苷的枇杷種子，接著添加微生物如清酒曲(米曲霉)在一定濕度和溫度條件下發(fā)酵。在發(fā)酵完成之后，將物質(zhì)粉碎成粉未。進(jìn)而，用通過壓榨經(jīng)遠(yuǎn)紅外線焙烤的芝麻而獲得的油對微粉涂布油。
此外，對含苦杏仁苷的枇杷種子，經(jīng)過遠(yuǎn)紅外線焙烤、微生物發(fā)酵、涂布油的逐步加工。最終獲得的所述物質(zhì)變成在口服途徑中顯出抗腫瘤活性的物質(zhì)。
通過以下的實(shí)施例，詳細(xì)描述本發(fā)明。本發(fā)明使用的含苦杏仁苷的物質(zhì)是枇杷種子。根據(jù)實(shí)驗(yàn)，所用的種子的狀態(tài)為生的未加工狀態(tài)。生的狀態(tài)比干燥狀態(tài)顯出更強(qiáng)的抗腫瘤活性。
此實(shí)施例中抗腫瘤的增進(jìn)方法的第一個過程是通過用遠(yuǎn)紅外線照射的焙烤過程，通過使用4-14μm波長的遠(yuǎn)紅外線。使用放射具有這種波長的遠(yuǎn)紅外線的陶瓷涂層容器如鍋、釜等的內(nèi)壁，或由金屬氧化物材料如石頭、陶瓷土、砂礫和與陶瓷土混合的沙土制造的放射遠(yuǎn)紅外線的容器，用于焙烤。
將上述的枇杷種子放入容器中，如遠(yuǎn)紅外發(fā)射材料如花崗巖、陶瓷、天青石(TENSYOUSEKI)等，照射30-90分鐘，直至原料的狀態(tài)在緩慢攪拌和焙烤的條件下不被燒焦。
焙烤方法，對限制可以從枇杷種子中釋放的刺激的苦杏仁苷的程度是不必要的。
在遠(yuǎn)紅外線焙烤過程之后，進(jìn)行發(fā)酵過程作為第二過程。在此方式中，在用遠(yuǎn)紅外線處理原料之后，用諸如清酒曲的微生物在30-36℃的一定濕度條件下發(fā)酵48-72小時。通過使用許可的發(fā)酵機(jī)器，可以縮短所需要的時間。
發(fā)酵中可以使用除清酒曲外的微生物。并且在發(fā)酵期間，使用熟化的番木瓜、波蘿汁、葡萄的無花果皮、幼竹來代替清酒曲。
此外，在發(fā)酵過程中使用消化酶，如淀粉酶、胰酶、蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶等，微生物來源的蛋白酶，用于分解多糖如半纖維素等的糖苷酶，或消化酶和蛋白酶的前體等。
本發(fā)明者發(fā)現(xiàn)在使用微生物的發(fā)酵中，使用清酒曲的發(fā)酵比其它顯出更好的抗腫瘤活性增進(jìn)。并且在發(fā)酵后，將產(chǎn)物粉碎成粉末。
將原料粉碎成粉末所需要的機(jī)器，可以使用市場上出售的破碎機(jī)，但在所必須進(jìn)行的粉碎過程中避免加熱。為避免加熱，使用石磨來代替破碎機(jī)。
將如此經(jīng)過遠(yuǎn)紅外線照射焙烤、發(fā)酵過程后的枇杷種子進(jìn)行涂布油加工。涂布油過程是一個在發(fā)酵之后通過使用經(jīng)遠(yuǎn)紅外線焙烤芝麻獲得的油包裹微粉原料的過程。
涂布油過程中所用的油是獲得自焙烤芝麻的油(此后簡寫成″芝麻糊油″)。芝麻糊油是通過將芝麻經(jīng)遠(yuǎn)紅外線緩慢焙烤(其溫度不超過100℃)、然后壓榨焙烤后的芝麻來制備的。這種芝麻油具有糊狀外觀，因?yàn)槠扑槠陂g留下了微固體。
將發(fā)酵后的枇杷種子原料添加到芝麻糊油中并且粉碎成微粉，添加芝麻糊油是為了使芝麻油包裹枇杷種子微粉。相比沒有涂布油的原料，芝麻油對得病部分的細(xì)胞顯出了更強(qiáng)的滲透力。從藥物傳遞系統(tǒng)(DDS)的觀點(diǎn)，這種油的涂布在目前是具吸引力的。并且，這是一個具有功效方向的重要的過程。
致癌物和病毒等首先附著在細(xì)胞膜上并且在那兒生長，并且摧毀細(xì)胞膜。細(xì)胞膜是一個含有全脂肪的地方。細(xì)胞膜在接近它之前拒絕溶于水的藥物(包括化學(xué)試劑)。但在這種枇杷種子原料中，通過這種涂布油的過程可以容易地接近膜，并且可以是造成抗腫瘤效果的因素。
如上所述，油的涂布是一個重要的過程。盡管設(shè)立這個過程是較好的，但在一些油的涂布不能成功實(shí)施的情況中，可以略去涂布油的過程。由于如下所述的原因，甚至當(dāng)省略油涂布過程時，如果遠(yuǎn)紅外線照射和發(fā)酵過程得到了確切的進(jìn)行，則抗腫瘤效力的增進(jìn)是大的。為了證明，這個實(shí)驗(yàn)已進(jìn)行。
在涂布油的過程中，使用由上述的芝麻糊油和從生芝麻中收集的油組成的合適比例的混合油是更好的。
為減小油滴的顆粒粒度，將從生芝麻中獲得的油與芝麻糊油混合，并且混合油的粘度增加。相比于僅涂布芝麻糊油(其油滴粒度較大)，這將導(dǎo)致提高對靶細(xì)胞的滲透能力。
從通過破碎芝麻并且機(jī)械壓榨后獲得的生芝麻中收集的油，除去固體物之后的剩余部分是相當(dāng)于市售油的油。
關(guān)于上述芝麻糊油和生芝麻油的混合比例，例如，1∶1-3重量比是適宜的。關(guān)于混合油與微粉材料的比率，較好是例如1∶4-5。
向通過用紫外線照射廿二碳六烯酸產(chǎn)生過氧化物脂質(zhì)的體系中，添加上述其抗腫瘤活性經(jīng)過增進(jìn)的枇杷種子，并且測定所形成的過氧化物脂質(zhì)的量。有鑒于此，通過臨床試驗(yàn)研究該產(chǎn)物口服施用的抗腫瘤作用的效力。
為比較上述的增進(jìn)方法，測定僅通過遠(yuǎn)紅外線照射處理的枇杷種子、僅用清酒曲發(fā)酵處理的枇杷種子、既用遠(yuǎn)紅外線照射又用清酒曲發(fā)酵處理過的枇杷種子、用照射、清酒曲發(fā)酵和涂布油處理過的枇杷種子、沒有處理的枇杷種子的過氧化物脂質(zhì)形成量、口服施用在臨床試驗(yàn)中的功效。在處理和比較目的中使用生的枇杷種子，制備遠(yuǎn)紅外線焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油的枇杷種子并且也使用干燥的枇杷種子。
在僅通過遠(yuǎn)紅外線焙烤處理的枇杷種子、僅用清酒曲發(fā)酵處理的枇杷種子、既焙烤又發(fā)酵處理過的枇杷種子的個體情形中，通過前述的過程在其終止處理時制備每種原料的微粉，用作以下實(shí)驗(yàn)中的樣品。粉碎的程度保持在相同水平的平均破碎顆粒粒度，以便從顆粒粒度中除去影響。
如下進(jìn)行過氧化物脂質(zhì)形成量的測定。向測試管中，添加一定量的廿二碳六烯酸，添加各個不同量的上述處理過的枇杷種子的粉末并且攪拌。對每個試管的混合物進(jìn)行紫外線照射并且測定所形成的過氧化物脂質(zhì)。
用乙醇將廿二碳六烯酸原始溶液稀釋十倍并且進(jìn)一步稀釋成200倍溶液。通過添加乙醇制備60mg/ml的處理枇杷種子的樣品溶液并且在室溫下放置2-6周以便乙醇提取，還制備一個未處理的樣品。在測定前，將提取溶液的最終濃度調(diào)整至0.6mg/ml并且使用。
向0.05ml一份的根據(jù)上述過程制備的廿二碳六烯酸稀釋溶液。添加0.1ml樣品和0.85ml乙醇，并且混合至總體積1ml。用紫外線照射混合物3小時，以產(chǎn)生過氧化物脂質(zhì)。用TBA(硫代巴比土酸反應(yīng))法測定所形成的過氧化物脂質(zhì)。
將所得的過氧化物脂質(zhì)在酸性條件下加熱，將分離的丙二醛(MDA)(malondialdehyde)與硫代巴比土酸(TBA)反應(yīng)。定量測定表達(dá)最大吸收率的物質(zhì)，并且用于間接地計(jì)算過氧化物脂質(zhì)的量。
向TBA反應(yīng)混合物，添加0.2ml 7％十二烷基硫酸鈉、2ml 0.1N鹽酸、0.3ml鎢磷酸、1ml 0.67％TBA和乙酸(1∶1體積)混合物溶液，并且在95℃下放置12分鐘，以便進(jìn)行TBA反應(yīng)。
在冷卻至室溫之后，用正丁醇提取TBA反應(yīng)層，并且通過使用熒光光譜法測定正丁醇層的MDA含量。在測定中，使用F2000型日立熒光分光熒光計(jì)，其裝配有400V光電倍增管，并且在553nm下使用515nm波長的激光源進(jìn)行熒光測定。
通過上述方法測定的在各種處理?xiàng)l件下通過用紫外線照射廿二碳六烯酸產(chǎn)生過氧化物脂質(zhì)的體系中的MDA值結(jié)果(等于吸光度密度)示于表1。
有鑒于此，在臨床試驗(yàn)中使用各個產(chǎn)物，給乳腺、胃和肺癌癥患者分別施用一次3g和一天3次。所說的產(chǎn)物包括未處理的清酒曲發(fā)酵紅外焙烤+清酒曲發(fā)酵、遠(yuǎn)紅外焙烤+清酒曲發(fā)酵+涂布油加工的枇杷種子。結(jié)果示于表2、3和4。
表2證明了用上述各種方法處理過的枇杷種子在乳腺癌患者中的功效。如同表2，表3和4證明了用同樣過程處理過的枇杷種子在胃癌和肺癌患者中的功效。通過使用式有效率(％)=(有效+相當(dāng)有效)病例×100(有效+相當(dāng)有效+無效=總病例)。
通過比較癌癥患者口服施用后3個月前階段和3個月后階段的照相診斷中的腫瘤標(biāo)記和陰影大小，來判斷表2-4中的病例。標(biāo)記或陰影大小變成原始大小的40％大小則判斷為″有效″，當(dāng)在大于20％和小于40％之間時判斷為″相當(dāng)有效″。表1、各種處理對MDA值的效果
樣品濃度添加6mg/ml用各種過程處理過的枇杷種子。
表2、各種處理在乳腺癌患者中的功效
()=表示患者總數(shù)
表3、各種處理在胃癌患者中的功效
()=表示患者總數(shù)表4、各種處理在肺癌患者中的功效
()=表示患者總數(shù)如表1所示，對于產(chǎn)生過氧化物脂質(zhì)的參數(shù)MDA值來說，用遠(yuǎn)紅外線、清酒曲發(fā)酵和將前者涂布油處理過的樣品高于用遠(yuǎn)紅外線焙烤和清酒曲發(fā)酵處理過的樣品。用遠(yuǎn)紅外線焙烤和清酒曲發(fā)酵處理過的樣品的MDA值大于僅用清酒曲發(fā)酵處理過的樣品。用清酒曲發(fā)酵處理過的樣品的MDA值大于用遠(yuǎn)紅外線處理過的樣品。用遠(yuǎn)紅外線處理過的樣品的MDA值大于未處理的樣品。
也就是說，其中從用遠(yuǎn)紅外線、清酒曲發(fā)酵和涂布油處理過的樣品中獲得了最高的MDA值。在使用干燥種子作為樣品的情況中，MDA值小于用遠(yuǎn)紅外線和清酒曲發(fā)酵處理過的生種子。即使是使用了同樣的處理，生種子的MDA值也大于干燥種子。
另一方面，表2-4中顯示了乳腺癌、胃癌和肺癌患者獨(dú)立地使用由生枇杷種子和干燥枇杷種子制備的產(chǎn)物的臨床試驗(yàn)結(jié)果。用清酒曲發(fā)酵處理過的生種子的產(chǎn)物，其有效率高于未處理的種子。用遠(yuǎn)紅外線焙烤和清酒曲發(fā)酵處理過的種子的產(chǎn)物，其有效率高于僅用遠(yuǎn)紅外線焙烤的種子的產(chǎn)物。用遠(yuǎn)紅外線焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油處理過的種子的產(chǎn)物，其有效率高于用遠(yuǎn)紅外線焙烤和清酒曲發(fā)酵處理過的種子的產(chǎn)物。
例如，表3顯示了未處理產(chǎn)物的乳腺癌有效率為13.3％。與此相反，用遠(yuǎn)紅外線焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油處理過的生枇杷種子的產(chǎn)物的有效率為46.6％。這說明有效率增加到大約3.5倍。另一方面，當(dāng)使用干燥種子的產(chǎn)物時，僅增加大約1.5倍。
表3顯示了胃癌的有效率。用遠(yuǎn)紅外線焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油處理過的生枇杷種子的樣品的有效率增加到未處理生種子的4倍。生種子的有效率比干燥種子高2倍。
表4顯示了肺癌的有效率。用遠(yuǎn)紅外線焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油處理過的生枇杷種子的樣品的有效率增加到來處理生種子的大約2.5倍。生種子的有效率是干燥種子的大約1.7倍。
這些結(jié)果有力地說明了逐步摻入遠(yuǎn)紅外線焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油的過程可有效增大口服途徑中的抗腫瘤活性的功效(當(dāng)對枇杷種子運(yùn)用這些過程時)。
盡管在目前的階段還不能解釋確切的制癌機(jī)理并且還需要繼續(xù)研究。但本發(fā)明者認(rèn)為未處理的枇杷種子含有其抗腫瘤活性被枷鎖(比喻)拴緊而處于非活性狀態(tài)的苦杏仁苷。給患者施用這種枇杷種子，一般人的胃汁不能打開這個枷鎖因而找不到所期望程度的抗腫瘤活性。上述的處理可以提示處理方法有助于使苦杏仁苷活化成活性狀態(tài)，并最終增大抗腫瘤功效。
表5、枇杷種子與蕈類的MDA值比較
表5顯示了含苦杏仁苷的生枇杷種子與各種蕈的MDA值比較。表5中所用的蕈為茯苓(Pachyma hoelen)、Agaricus blazei、豬苓(CHYOREI MAITAKE)、Grifola frondosa((BLACK MAITAKE)、松口蘑(MARSUTAKE)、香菇，并且據(jù)發(fā)現(xiàn)使用Agaricus blazei的生子實(shí)體要比其干燥原料更強(qiáng)表達(dá)其抗腫瘤活性，并且當(dāng)使用生子實(shí)體時，將收割的子實(shí)體在冰箱中(4℃)保藏并且3天內(nèi)使用。
除Agaricus blazei外的蕈，它們以生的狀態(tài)使用時，與以干燥狀態(tài)提供的藥材相比，通過增進(jìn)方法沒有顯出明顯的功效差異。因此，在本發(fā)明中使用茯苓、Agaricus blazei、豬苓(CHYOREI MAIAKE)、Grifola frondosa((BLACKMAITAKE)、松口蘑(MARSUTAKE)、香菇(SHIITAKE)的干燥原料。
使用兩種類型的Grifola frondosa(BLACK MAITAKE)。其中一種是在日本Niigata縣的Yukikuni培養(yǎng)的產(chǎn)品，其正式名稱為Yukikunij或blackMAITAKE，在此詳細(xì)描述中，將其描述為″BlackMAITAKE″。另一種叫做ChyoreiMAITAKE(豬苓)，采集自中國。它不同于″black MAITAKE″。
通過比較枇杷種子與表5中抗腫瘤蕈類的抗腫瘤活性，來相對評價枇杷種子的抗腫瘤活性。
例如，目前Agaricus blazei因其抗腫瘤活性而具吸引力。Agaricus blazei的抗腫瘤活性高于未處理的生枇杷種子。
僅用遠(yuǎn)紅外線焙烤照射處理或用清酒曲發(fā)酵處理的枇杷種子，其抗腫瘤活性被增進(jìn)至Agaricus blazei的水平；并且高于茯苓，其是一種據(jù)說具有高抗腫瘤活性的蕈。此外，用遠(yuǎn)紅外線焙烤+清酒曲發(fā)酵處理的枇杷種子和用遠(yuǎn)紅外線焙烤+清酒曲發(fā)酵+涂布油處理的枇杷種子，都分別顯出比Agaricusblazei高的抗腫瘤活性。
Kampo藥使用天然生藥，其中幾種稀有的蕈中都具有高抗腫瘤活性，但供應(yīng)得不夠。如果使用本發(fā)明的上述方法，可以可能和大量地栽培含苦杏仁苷的物質(zhì)，如含苦杏仁苷的枇杷種子，并且可以收獲到足夠的量并且用作Kampo藥來代替使用這些稀有蕈類。
并且這可導(dǎo)致抗腫瘤原料的穩(wěn)定供應(yīng)和低價格。因此，很多癌癥患者可以接受到抗腫瘤產(chǎn)品的功效。
在上述的描述中，最高級的形式是通過焙烤、發(fā)酵和涂布油處理生枇杷種子。但僅用遠(yuǎn)紅外線焙烤處理過的或僅用微生物發(fā)酵如清酒曲發(fā)酵處理過的或既經(jīng)焙烤又經(jīng)發(fā)酵處理過的生枇杷種子，都比未處理的枇杷種子顯出增加的抗腫瘤活性的表達(dá)。在由于設(shè)施情況沒有適當(dāng)進(jìn)行油涂布、而僅用遠(yuǎn)紅外線焙烤和微生物發(fā)酵處理的情況中，它們的抗腫瘤活性比未處理的枇杷種子得到了具體和有效的增進(jìn)。
在處理對中(1)遠(yuǎn)紅外線焙烤+發(fā)酵+涂布油或(2)遠(yuǎn)紅外線焙烤+發(fā)酵，可以采用多糖降解酶處理來代替通使用微生物如清酒曲的發(fā)酵。
在涂布油的過程中使用獲得自焙烤芝麻的芝麻糊油。其有助于抗腫瘤活性的增進(jìn)方法。
除芝麻以外的油來源，可以使用例如大豆、玉米、紅花(Carthamus tinctoiusL.)、夜來香(evening primrose)、米糠、油菜籽等作為原料，并且通過用遠(yuǎn)紅外線焙烤并且壓榨獲得油。
如果向藥物組合物和保健食品組合物中，添加了用抗腫瘤活性增進(jìn)方法處理過的枇杷種子，則這些組合物對口服使用抗腫瘤目的來說將變得有效，所說的抗腫瘤活性增進(jìn)方法由遠(yuǎn)紅外線焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油組成。
在含有經(jīng)抗腫瘤增進(jìn)方法處理過的枇杷種子的產(chǎn)品中，除枇杷種子外還可以添加不影響抗腫瘤效果表達(dá)能力的組合物，如維生素等。還可以將本發(fā)明者開發(fā)的抗活性氧物質(zhì)配料到產(chǎn)品中。
添加有經(jīng)抗腫瘤增進(jìn)方法處理過的苦杏仁苷的物質(zhì)，含有這種物質(zhì)的組合物更好以明膠膠囊產(chǎn)品的形式提供，以便容易口服施用。并且還可以使用合適的藥物添加劑、粘合劑等制成片劑形式的產(chǎn)品或粒劑產(chǎn)品和丸劑。
盡管本發(fā)明是對口服施用情況中的抗腫瘤活性的增進(jìn)方法。但據(jù)認(rèn)為，如果通過添加用抗腫瘤增進(jìn)方法處理過的枇杷種子制備注射用藥物的話，則有助于注射藥的抗腫瘤功效的表達(dá)能力，超過未使用增進(jìn)方法的情形。
上述解釋具體針對含苦杏仁苷的生枇杷種子。但沒有必需說要限制到枇杷種子。本發(fā)明可以使用諸如杏、桃、李子、日本杏、扁桃(amygdaline peach)、苦扁桃的種子以及枇杷葉、alpha-alpha、竹筍等。(實(shí)施方案2)在此實(shí)施方案中，描述抗癌產(chǎn)物功效的評價方法，如含苦杏仁苷枇杷種子功效的評價方法，和評價用于含苦杏仁苷物質(zhì)的處理的抗腫瘤功效。
如實(shí)踐形式1中所述的，向通過紫外線形成過氧化物脂質(zhì)的實(shí)驗(yàn)體系，添加各種含有含苦杏仁苷物質(zhì)的各種產(chǎn)物，以測定過氧化物脂質(zhì)的量，來評價抗腫瘤活性。
結(jié)果顯示了在口服施用中的強(qiáng)抗腫瘤活性，隨著含苦杏仁苷枇杷種子的產(chǎn)品濃度增加，可形成大量的過氧化物脂質(zhì)。
即，增加含苦杏仁苷物質(zhì)的比率可以有助于更高比率的過氧化物脂質(zhì)，從而按如此評價導(dǎo)致了強(qiáng)的口服途徑中抗腫瘤活性的表達(dá)。
有鑒于此，通過相互比較各種含苦杏仁苷的產(chǎn)物，向產(chǎn)生這種復(fù)雜產(chǎn)品的體系中添加含苦杏仁苷物質(zhì)的比率所相應(yīng)形成的過氧化物脂質(zhì)的增加比，可以決定抗腫瘤發(fā)現(xiàn)能力的等級。
根據(jù)實(shí)施例如下解釋兩種評價方法。各種處理示于表1，當(dāng)相互比較MDA值時，接受遠(yuǎn)紅外線焙烤的樣品的MDA值高于未處理的樣品。
用清酒曲發(fā)酵處理的樣品的MDA值高于用遠(yuǎn)紅外線焙烤的樣品。發(fā)現(xiàn)既用遠(yuǎn)紅外線焙烤又用清酒曲發(fā)酵處理過程處理的樣品的MDA值高于僅用焙烤或僅用發(fā)酵處理的樣品。
此外，據(jù)發(fā)現(xiàn)用遠(yuǎn)紅外線焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油處理的樣品高于既用焙烤又用發(fā)酵處理過程處理的樣品。
另一方面，發(fā)現(xiàn)表2、3和4中所示的乳腺癌、胃癌和肺癌的臨床試驗(yàn)有效率與來自經(jīng)過的處理的高M(jìn)DA值相一致。也就是說，通過處理后，高有效率、MDA值變高。
可以如此評價抗腫瘤活性發(fā)現(xiàn)能力，以致通過紫外線照射廿二碳六烯酸形成更多量的過氧化物脂質(zhì)。
有鑒于此，在表2-4中，通過使用生的和干燥的種子，盡管運(yùn)用了″遠(yuǎn)紅外線焙烤+清酒曲發(fā)酵+涂布油″處理，但干燥種子的MDA值仍低，并且發(fā)現(xiàn)這與低臨床有效率相一致。
也就是說，在用于形成過氧化物脂質(zhì)的體系中(其中經(jīng)相同過程處理的含苦杏仁苷物質(zhì)(生的和干燥的枇杷種子)的濃度相同)制備的樣品中所形成的高M(jìn)DA值說明處理過的種子中具有良好的抗腫瘤活性的發(fā)現(xiàn)能力。
繼而，在通過照射廿二碳六烯酸形成過氧化物脂質(zhì)的體系中表現(xiàn)的MDA值較高，臨床有效率較高、各種含苦杏仁苷物質(zhì)的抗腫瘤活性評價高。即，建立了一種各種含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性功效評價的預(yù)測方法，而不用進(jìn)行臨床試驗(yàn)。
上述的解釋是針對使用枇杷種子作為含苦杏仁苷物質(zhì)而言的。本發(fā)明中可以使用諸如杏、桃、李子、日本杏、中國杏、扁桃(Amygdaline peach)、苦扁桃的種子以及枇杷葉、alpha alpha、竹筍等。
此外，在上述解釋中使用了廿二碳六烯酸?？梢允褂贸ザ剂┧嵬獾闹舅?，如生物不飽和脂肪酸，其過氧化物脂質(zhì)的形成量受添加含苦杏仁苷物質(zhì)如枇杷種子等的影響。并且在評價方法的范圍內(nèi)還可以使用除來源于生物體以外的不飽和脂肪酸，其通過紫外線照射形成過氧化物脂質(zhì)的量受添加含苦杏仁苷物質(zhì)的影響，即化學(xué)合成的脂肪酸。
通過理解在各個濃度的含苦杏仁苷物質(zhì)添加體系中通過紫外線照射廿二碳六烯酸形成過氧化物脂質(zhì)的量，可以預(yù)測針對惡性腫瘤等晚期的平均和正確劑量，而不用進(jìn)行臨床試驗(yàn)。
即，根據(jù)上述觀點(diǎn)，通過理解含苦杏仁苷物質(zhì)的各種濃度與相應(yīng)MDA值之間的關(guān)系，每階段癌癥的功效表達(dá)在以前的臨床試驗(yàn)中得到證實(shí)并且超越其，則MDA值變成相當(dāng)于臨床試驗(yàn)的功效參數(shù)。通過由含苦杏仁苷物質(zhì)的濃度反算可以預(yù)測平均口服劑量。
在本發(fā)明中，可以通過使用共同的參數(shù)MDA值，來比較含苦杏仁苷物質(zhì)的抗腫瘤活性。即，建立用于各種含苦杏仁苷物質(zhì)的通用量綱作為可用的通用參數(shù)，MDA值項(xiàng)目。并且還建立MDA值與抗腫瘤活性之間的關(guān)系。如此可用相互評價抗腫瘤活性。
有鑒于此，可以通過使用此方法在短時間內(nèi)研究從很多含苦杏仁苷的物質(zhì)中篩選抗腫瘤效果。
根據(jù)本發(fā)明的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法，經(jīng)處理的含苦杏仁苷枇杷種子的口服途徑有效率高于未處理的枇杷種子。
根據(jù)經(jīng)處理含苦杏仁苷的物質(zhì)的抗腫瘤活性的增進(jìn)方法，可以使所說的物質(zhì)增進(jìn)到高于或超過蕈類，其不被認(rèn)作是含苦杏仁苷物質(zhì)的物質(zhì)，據(jù)稱在不通過這些方法處理的條件下具有抗腫瘤活性。
含有含苦杏仁苷物質(zhì)的諸如枇杷種子的產(chǎn)品，經(jīng)過抗腫瘤增進(jìn)方法處理，比含有含苦杏仁苷物質(zhì)的未處理產(chǎn)品，在口服途徑中顯出高的抗腫瘤活性有效率。
根據(jù)本發(fā)明的用于含苦杏仁苷物質(zhì)的處理的抗腫瘤功效評價方法，鑒于通過運(yùn)用給含苦杏仁苷物質(zhì)的各種類型處理方法的抗腫瘤活性，可以在短期間內(nèi)簡單評價功效。
根據(jù)含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的功效評價方法，可以不通過口服途徑的臨床試驗(yàn)而得到預(yù)測。出于此原因，當(dāng)與常規(guī)方法比較時在經(jīng)過長期動物測試和臨床試驗(yàn)后，最終獲得結(jié)果。通過使用本發(fā)明的方法，研究從天然產(chǎn)物中篩選活性抗腫瘤的無數(shù)的物質(zhì)要比常規(guī)方法來得簡單。
權(quán)利要求
1.一種含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法，該方法包括用遠(yuǎn)紅外線焙烤含苦杏仁苷物質(zhì)的焙烤過程和用微生物發(fā)酵的發(fā)酵過程，以便使含苦杏仁苷物質(zhì)的抗腫瘤活性比沒有經(jīng)過焙烤和發(fā)酵的情況有所增進(jìn)。
2.權(quán)利要求1的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法，其中繼前述的發(fā)酵過程之后，是涂布油過程，其中用油涂布在發(fā)酵過程中經(jīng)過發(fā)酵之后的物質(zhì)，所說的油獲得自用遠(yuǎn)紅外線焙烤的植物如芝麻。
3.權(quán)利要求1或2的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法，其中含苦杏仁苷的物質(zhì)是含苦杏仁苷的植物種子。
4.權(quán)利要求3的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法，其中植物種子是枇杷種子。
5.權(quán)利要求4的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法，其中用遠(yuǎn)紅外線焙烤生的未加工狀態(tài)的枇杷種子。
6.一種含有抗腫瘤活性得到增進(jìn)的含苦杏仁苷物質(zhì)的組合物，向該組合物運(yùn)用了含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法，所說的方法包括用遠(yuǎn)紅外線焙烤含苦杏仁苷物質(zhì)的焙烤過程和用微生物發(fā)酵的發(fā)酵過程，以便使含苦杏仁苷物質(zhì)的抗腫瘤活性比沒有經(jīng)過焙烤和發(fā)酵的情況有所增進(jìn)。
7.權(quán)利要求6的含有抗腫瘤活性得到增進(jìn)的含苦杏仁苷物質(zhì)的組合物，其中繼前述的發(fā)酵過程之后，是涂布油過程，其中用油涂布在發(fā)酵過程中經(jīng)過發(fā)酵之后的物質(zhì)，所說的油獲得自用遠(yuǎn)紅外線焙烤的植物如芝麻。
8.權(quán)利要求6或7的含有抗腫瘤活性得到增進(jìn)的含苦杏仁苷物質(zhì)的組合物，其中含苦杏仁苷的物質(zhì)是含苦杏仁苷的植物種子。
9.權(quán)利要求8的含有抗腫瘤活性得到增進(jìn)的含苦杏仁苷物質(zhì)的組合物，其中植物種子是枇杷種子。
10.權(quán)利要求9的含有抗腫瘤活性得到增進(jìn)的含苦杏仁苷物質(zhì)的組合物，其中用遠(yuǎn)紅外線焙烤生的未加工狀態(tài)的枇杷種子。
11.一種評價處理功效的方法，所說的處理是要運(yùn)用給含苦杏仁苷物質(zhì)的，該方法包括向通過用紫外線照射不飽和脂肪酸如廿二碳六烯酸形成過氧化物脂質(zhì)的體系，添加運(yùn)用該處理的含苦杏仁苷物質(zhì)，并且評價用于增進(jìn)含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的處理的功效，當(dāng)過氧化物脂質(zhì)形成量的增加比與含苦杏仁苷物質(zhì)的濃度的增加比為大時，評價為大。
12.權(quán)利要求11的評價處理功效的方法，所說的處理是要運(yùn)用給含苦杏仁苷物質(zhì)的，其中含苦杏仁苷的物質(zhì)是含苦杏仁苷的植物種子。
13.權(quán)利要求12的評價處理功效的方法，所說的處理是要運(yùn)用給含苦杏仁苷物質(zhì)的，其中植物種子是枇杷種子。
14.權(quán)利要求13的一種評價處理功效的方法，所說的處理是要運(yùn)用給含苦杏仁苷物質(zhì)的，其中用遠(yuǎn)紅外線焙烤生的未加工狀態(tài)的枇杷種子。
15.一種含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤功效的不通過臨床試驗(yàn)的評價方法，包括向通過用紫外線照射不飽和脂肪酸如廿二碳六烯酸形成過氧化物脂質(zhì)的體系添加含苦杏仁苷物質(zhì)，并且評價含苦杏仁苷物質(zhì)的抗腫瘤活性功效，在口服施用中當(dāng)過氧化物脂質(zhì)形成量的增加比與含苦杏仁苷物質(zhì)的濃度的增加比為大時，評價為大。
16.權(quán)利要求15的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤功效的評價方法，其中將含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤活性的增進(jìn)方法施用給含苦杏仁苷的物質(zhì)，所說的方法包括用遠(yuǎn)紅外線焙烤含苦杏仁苷物質(zhì)的焙烤過程和用微生物發(fā)酵的發(fā)酵過程，以便使含苦杏仁苷物質(zhì)的抗腫瘤活性比沒有經(jīng)過焙烤和發(fā)酵的情況有所增進(jìn)。
17.權(quán)利要求16的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤功效的評價方法，其中繼前述的發(fā)酵過程之后，是涂布油過程，其中用油涂布在發(fā)酵過程中經(jīng)過發(fā)酵之后的物質(zhì)，所說的油獲得自用遠(yuǎn)紅外線焙烤的植物如芝麻。
18.權(quán)利要求16或17的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤功效的評價方法，其中含苦杏仁苷的物質(zhì)是含苦杏仁苷的植物種子。
19.權(quán)利要求18的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤功效的評價方法，其中植物種子是枇杷種子。
20.權(quán)利要求19的含苦杏仁苷物質(zhì)抗腫瘤功效的評價方法，其中用遠(yuǎn)紅外線焙烤生的未加工狀態(tài)的枇杷種子。
全文摘要
本發(fā)明是通過紅外線焙烤、清酒曲發(fā)酵和涂布油增進(jìn)含苦杏仁苷枇杷種子等抗癌功效的發(fā)明。本發(fā)明涉及在添加和增加含苦杏仁苷的經(jīng)上述過程處理過的產(chǎn)物的濃度的條件下,通過紫外線照射廿二碳六烯酸在體系中增加過氧化物脂質(zhì)的形成。過氧化物脂質(zhì)形成得越多,評價和預(yù)測口服途徑中的抗癌功效越強(qiáng)。本發(fā)明涉及運(yùn)用本發(fā)明的方法來評價含苦杏仁苷物質(zhì)的功效。
文檔編號C12P1/00GK1319431SQ0111191
公開日2001年10月31日 申請日期2001年1月17日 優(yōu)先權(quán)日2000年1月17日
發(fā)明者丹羽耕三 申請人:丹羽耕三