專利名稱：益菌奶及其制造方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種牛奶制品及其制造方法，特別涉及一種以牛奶作載體、添加益生菌及低聚糖的牛奶制品及其制造方法。
在現(xiàn)有市場(chǎng)中銷售的益生菌制品有益生菌酸奶、益生菌口服液和益生菌粉劑。益生菌酸奶在配方上需加入一定量的穩(wěn)定劑、白砂糖等配料，而這些輔料并不是消費(fèi)者真正想攝入的，并且由于酸奶的pH值較低(一般在pH4.5以下)，故益生菌不容易生存，產(chǎn)品的活菌數(shù)不穩(wěn)定，達(dá)不到產(chǎn)品的預(yù)期效果。益生菌口服液一般都需要某些基地培養(yǎng)基(如黃豆芽)，成分比較單一，而且常溫保存口服液幾乎不存在活菌，故也達(dá)不到產(chǎn)品的預(yù)期效果。益生菌粉劑含有少量糊精、淀粉、脫脂奶粉等，營(yíng)養(yǎng)元素非常有限，且粉劑中的益生菌基本上都處于休眠狀態(tài)，也很難達(dá)到產(chǎn)品的預(yù)期效果。在產(chǎn)品的口感方面，一般牛奶具有奶香味，但口感比較平淡；益生菌酸奶味尖酸(味似醋酸)，略具苦味，因此，其為了克服口感缺陷，一般的益生菌酸奶中的益生菌含量都非常低，故產(chǎn)品效果不好；益生菌口服液味如“黃豆湯“，口感很差。
本發(fā)明的目的是針對(duì)目前市場(chǎng)上益生菌制品的缺陷，提供一種適合益生菌生存，改善口感，強(qiáng)化保健功能的益菌奶及其制造方法。
本發(fā)明提供了一種益菌奶，含有脂肪、蛋白質(zhì)、非脂乳固體，其特點(diǎn)在于還含有重量百分比為1％-10％的低聚糖(一種或幾種混合)和1.0×106-3.6×108菌落數(shù)/毫升的益生菌(一種或幾種混合)，且該益菌奶的酸度為14-25滴定梯度；所含低聚糖的重量百分比優(yōu)選為1.2％-7.6％；所含益生菌優(yōu)選為6.0×107-3.2×108菌落數(shù)/毫升；該益菌奶的酸度優(yōu)選為17-21滴定梯度。
本發(fā)明還提供了一種益菌奶的制造方法，其原料為90％-98.5％的無(wú)抗奶，0.02％-0.5％的益生菌，1.4％-9.7％的低聚糖，以上百分比為重量百分比；該制造方法如下將無(wú)抗奶加入低聚糖中攪拌5-10分鐘，加熱至60-80℃，再均質(zhì)，然后在65-140℃殺菌3秒-30分鐘，再冷卻致4-25℃，添加益生菌，最后攪拌5-10分鐘；均質(zhì)有兩種方法一級(jí)均質(zhì)和二級(jí)均質(zhì)，一級(jí)均質(zhì)壓力為150-300bar，二級(jí)均質(zhì)為30-50bar和180-250bar。
無(wú)抗奶的定義普通不含有抗生素的牛奶或用奶粉、乳清粉、稀奶油或其他牛奶組分配制成的不含有抗生素的還原奶或含乳飲料。
益生菌主要包括雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌(lactobacillus.acidophilus)、干酪乳桿菌(lactobacillus.casei)、唾液乳桿菌(lactobacillus salivarius)、乳鏈球菌(Strept.lactis)、屎鏈球菌(Enterococcus faecium)、LGG(lactobacillusGG)、Saccharomyces boulardii和Saccharomyces Cerecisiae等。
雙歧桿菌包括青春雙歧桿菌(bifid.adolescentis)、嬰兒雙歧桿菌(bifid.infantis)、長(zhǎng)雙歧桿菌(bifid.longum)、短雙歧桿菌(bifid.breve)、動(dòng)物雙歧桿菌(bifid.breve)、兩歧雙歧桿菌(bifid.bifidum)和嗜熱雙歧桿菌(bifid.themophilus)等。
低聚糖包括低聚(異)麥芽糖、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、大豆低聚糖、棉子糖、乳果糖等。


圖1為本發(fā)明的工藝流程圖。
圖2為本發(fā)明另一種工藝流程圖。
圖3為本發(fā)明又一種工藝流程圖。
圖4為本發(fā)明又一種工藝流程圖。
圖5為本發(fā)明又一種工藝流程圖。
圖6為本發(fā)明又一種工藝流程圖。
下面給出具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作出詳細(xì)說明實(shí)施例1配方
生產(chǎn)工藝如圖1所示。檢驗(yàn)結(jié)果
實(shí)施例2配方
生產(chǎn)工藝如圖2所示。檢驗(yàn)結(jié)果
實(shí)施例3配方
生產(chǎn)工藝如圖3所示。檢驗(yàn)結(jié)果
實(shí)施例4配方
生產(chǎn)工藝如圖4所示。檢驗(yàn)結(jié)果
實(shí)施例5配方
生產(chǎn)工藝如圖5所示。檢驗(yàn)結(jié)果
實(shí)施例6配方
生產(chǎn)工藝如圖6所示。檢驗(yàn)結(jié)果
上述實(shí)施例中原料的來源益生菌的來源法國(guó)Crhodia，日本W(wǎng)isby，丹麥Hansen等。
低聚糖廣東江門市江山生物工程有限公司，云南天元健康食品有限責(zé)任公司，丹尼斯克-科特(上海)公司無(wú)抗奶上海光明乳業(yè)股份有限公司第七、九牧場(chǎng)無(wú)抗奶驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)按照GB6914-86檢驗(yàn)一般指標(biāo)，抗生素的指標(biāo)檢驗(yàn)方法如下取原料奶1000ml，接入20-30ml工作發(fā)酵劑(乳酸桿菌、嗜酸乳桿菌、嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑)，于40-42℃發(fā)酵3小時(shí)，測(cè)試該樣品的滴定酸度，若酸度低于65°T，則判不合格，否則合格。
本發(fā)明的積極效果在于以近中性的牛奶作為益生菌的載體，而且又有益生素(低聚糖)，實(shí)現(xiàn)了益生菌的最佳保存方法，從而益生菌的活性保持較好，故而本發(fā)明具有調(diào)節(jié)腸道菌群、降解膽固醇、調(diào)節(jié)免疫等功能。另外，本發(fā)明口感微甜，又有濃郁的奶香味，較一般的益生菌制品的口感好得多。
下面以上述實(shí)施例6為實(shí)驗(yàn)樣品，給出效果實(shí)施例。
效果實(shí)施例1潤(rùn)腸通便作用樣品性狀及處理樣品為白色液體，以蒸餾水配制成各濃度，供試。
劑量設(shè)計(jì)本品人體推薦劑量為每天20ml/60kg，本實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高三劑量組，分別為17、33、100ml/kg，另設(shè)空白對(duì)照組給予廠方提供的空白奶液和地芬諾酯便秘模型對(duì)照組。
給樣方式灌胃(高劑量組24h內(nèi)分多次灌胃)。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠，18-22克，由上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供的清潔級(jí)動(dòng)物(本站SPF動(dòng)物房飼養(yǎng))，合格證號(hào)02-22-1，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度20±2℃，相對(duì)濕度50-70％，動(dòng)物房合格證號(hào)02-28，動(dòng)物飼養(yǎng)料，由蘇杭實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技發(fā)展公司提供。
致便秘劑復(fù)方地芬諾酯片(國(guó)營(yíng)武進(jìn)制藥廠生產(chǎn)，規(guī)格2.5mg/片)實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果樣品對(duì)小鼠小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響
取昆明種小白鼠50只，稱重，按體重隨機(jī)分層分為5組，每組10只，按劑量設(shè)計(jì)方法連續(xù)喂養(yǎng)10天。末天禁食24小時(shí)后，稱重，口服樣品或溶劑一次，30分鐘后，口服地芬諾酯50mg/kg，空白對(duì)照組除外，60分鐘后用炭末懸液按0.2ml/10g灌胃，20分鐘后脫頸椎處死動(dòng)物，開腹取小腸，剪去上端至幽門，下端至回盲部的腸管，輕輕拉成直線，測(cè)量炭末推進(jìn)長(zhǎng)度及小腸全長(zhǎng)，計(jì)算炭末推進(jìn)移動(dòng)率。
計(jì)算公式
樣品對(duì)小腸推進(jìn)試驗(yàn)動(dòng)物體重的影響
由上表可見，樣品對(duì)動(dòng)物體重?zé)o明顯影響樣品對(duì)抗地芬諾酯抑制腸推進(jìn)的作用
*P＜0.05與地芬諾酯對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)由上表可見，空白對(duì)照組與地芬諾酯對(duì)照組相比有顯著性差異，說明便秘模型成立。經(jīng)口給予不同劑量的樣品10天，能對(duì)抗地芬諾酯引起的腸抑制作用，與地芬諾酯對(duì)照組相比，高劑量組有顯著性差異。
排便粒數(shù)、排便時(shí)間和排便總重量的測(cè)定取昆明重小鼠50只，按體重分層隨機(jī)分為5組，每組10只。按劑量設(shè)計(jì)方法連續(xù)喂養(yǎng)10天，末天禁食24小時(shí)，口服樣品或溶劑一次，30分鐘后，口服復(fù)方地芬諾酯10mg/kg(0.2ml/10g)，空白對(duì)照組除外。給復(fù)方地芬諾酯30分鐘后，各組以炭末懸液按0.2ml/10g灌胃1次，給藥后將小鼠分別放入小鼠籠內(nèi)，籠內(nèi)墊有濾紙，5組動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食，記錄小鼠的首粒排黑便時(shí)間，在6小時(shí)內(nèi)觀察和記錄每組小鼠的排便粒數(shù)，排便總重量。
樣品對(duì)便秘試驗(yàn)動(dòng)物體重的影響
由上表可見，樣品對(duì)動(dòng)物體重?zé)o明顯影響樣品對(duì)便秘模型動(dòng)物糞便粒數(shù)的影響
*P＜0.05與地芬諾酯對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)由上表可見，空白對(duì)照組與地芬諾酯對(duì)照組相比有顯著性差異，說明便秘模型成立。經(jīng)口給予不同劑量的樣品10天，樣品高劑量組糞便粒數(shù)與地芬諾酯對(duì)照組相比，有顯著性差異。
樣品對(duì)便秘模型動(dòng)物排便時(shí)間的影響
*P＜0.05與地芬諾酯對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)由上表可見，空白對(duì)照組與地芬諾酯對(duì)照組相比有顯著性差異，說明便秘模型成立。經(jīng)口給予不同劑量的樣品10天，樣品高劑量組排便時(shí)間與地芬諾酯對(duì)照組相比，有顯著性差異。
樣品對(duì)便秘模型動(dòng)物排便總重量的影響
*P＜0.05與地芬諾酯對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)由上表可見，空白對(duì)照組與地芬諾酯對(duì)照組相比有顯著性差異，說明便秘模型成立。經(jīng)口給予不同劑量的樣品10天，樣品高劑量組排便總重量與地芬諾酯對(duì)照組相比，有顯著性差異。
總結(jié)經(jīng)口給予小鼠不同劑量樣品10天，具有潤(rùn)腸通便作用。
效果實(shí)施例2免疫調(diào)節(jié)作用樣品性狀及處理樣品為白色液體，以蒸餾水配制成各濃度，供試。
動(dòng)物來源BALB/C種小白鼠，合格證號(hào)02-22-1，體重18-22克，雄性，由上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供的清潔級(jí)動(dòng)物(本站SPF動(dòng)物房飼養(yǎng))。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度20±2℃，相對(duì)濕度50-70％，動(dòng)物房合格證號(hào)02-28，動(dòng)物飼養(yǎng)料，由蘇杭實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技發(fā)展公司提供。
劑量設(shè)計(jì)本樣品人體推薦劑量為每天20ml/60kg，本實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高三劑量組，分別為17、33、100ml/kg，空白對(duì)照組飲用由廠方提供的空白奶液。
給樣方式灌胃(高劑量組24h內(nèi)分多次灌胃)。
實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果體重動(dòng)物稱重，按體重隨機(jī)分層，分為4組，每組10只，按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)喂養(yǎng)28天，在實(shí)驗(yàn)中期和實(shí)驗(yàn)?zāi)┓謩e稱重一次。
樣品(免疫一組)對(duì)動(dòng)物體重的影響
由上表可見，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。
樣品(免疫二組)對(duì)動(dòng)物體重的影響
由上表可見，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。
樣品(免疫三組)對(duì)動(dòng)物體重的影響
由上表可見，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。
樣品(免疫四組)對(duì)動(dòng)物體重的影響
由上表可見，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。
血清溶血素試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，眼眶采血，頸椎脫臼處死，分離血清。在96孔微量血凝板上加25μl生理鹽水，再分別在第一排加25μl血清，以后各排做對(duì)倍稀釋，每孔加1％SRBC1滴，振蕩后室溫放置3小時(shí)，當(dāng)血球?qū)φ粘霈F(xiàn)沉落后觀察結(jié)果。
血清溶血素試驗(yàn)
*P＜0.05與空白對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量組與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異。
抗體生成檢測(cè)試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，將脫纖維綿羊紅細(xì)胞免疫5天后，動(dòng)物頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106/ml。將表層培養(yǎng)基(1g瓊脂糖加雙蒸水100ml)加熱溶解后，放入45℃水浴保溫，與等量PH7.2-7.2、2倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加入50μl10％SRBC，20μl脾細(xì)胞懸液，迅速混勻，傾倒于已刷瓊脂薄層的6cm平皿上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中溫育1.5h，然后用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體(1∶100)加入到平皿中，繼續(xù)溫育1.5h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。結(jié)果用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
*P＜0.05與空白對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量組與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異。
胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的測(cè)定動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，每鼠稱重，頸椎脫臼處死，取胸腺、脾臟稱重，分別計(jì)算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。
胸腺指數(shù)、脾指數(shù)
經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品各劑量組與空白對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。
小鼠碳廓清試驗(yàn)小鼠尾靜脈注射1∶3稀釋的印度墨汁，待墨汁注入，立即計(jì)時(shí)。注入墨汁后2、10分鐘，分別從眼靜脈叢取血20μl，并將其加到2ml Na2CO3溶液中，用分光光度計(jì)在600nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，以Na2CO3溶液作空白對(duì)照。根據(jù)動(dòng)物體重、肝重和脾重計(jì)算吞噬指數(shù)，結(jié)果以方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
*P＜0.05與空白對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量組與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異。
ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣四周后；頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106/ml，將細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔加50μlConA液(相當(dāng)于5μg/ml)，另一孔作為對(duì)照，置5％CO2，37℃培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的PRM1640培養(yǎng)液，同時(shí)加入MTT(5mg/ml)50μl/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解后，以570nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色，結(jié)果用方差分析進(jìn)行分析。
*P＜0.05與空白對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品各劑量組與空白對(duì)照組相比，均有顯著性差異。
DTH測(cè)定致敏動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，每鼠腹部去毛，范圍約3×3cm，將1％的DNFB溶液50μl均勻涂抹致敏。
DTH的產(chǎn)生與測(cè)定5日后，用1％DNFB溶液10μl均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進(jìn)行攻擊。24小時(shí)后，頸椎脫臼處死小鼠，用打孔器取下直徑8mm的左右耳片，稱重并計(jì)算腫脹度。
DTH測(cè)定結(jié)果
*P＜0.05與空白對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品中、高劑量組與空白對(duì)照組相比，均有顯著性差異。
NK細(xì)胞活性測(cè)定動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液(效應(yīng)細(xì)胞)，取傳代后24h YAC-1細(xì)胞加1640完全培養(yǎng)液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/ml(靶細(xì)胞)，取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各100μl(效靶比50∶1)，加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板，靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100μl，最大釋放孔加靶細(xì)胞和1％NP40各100μl，上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)復(fù)孔，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清液100μl置平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)業(yè)100μl，反應(yīng)3min，每孔加入1mol/L的HCL30μl，用酶標(biāo)儀在490nm處測(cè)定光密度值(OD)。
NK細(xì)胞活性測(cè)定
*P＜0.05與空白對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量組與空白對(duì)照組相比，有顯著性差異。
小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，每鼠腹腔注射20％雞紅細(xì)胞懸液1ml，間隔30分鐘，頸椎脫臼處死，固定于鼠板上，剪開腹壁皮膚，注射生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1分鐘，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37℃孵箱濕孵30分鐘，用生理鹽水漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸緩沖液染色3分鐘，再用蒸餾水漂洗晾干，用油鏡鏡檢，計(jì)算吞噬％和吞噬指數(shù)。
巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)
*P＜0.05與空白對(duì)照組比較(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量組吞噬％和吞噬指數(shù)與空白對(duì)照組相比，均存在顯著性差異。
結(jié)論動(dòng)物經(jīng)口喂養(yǎng)樣品30天后，具有免疫調(diào)節(jié)作用。
效果實(shí)施例3
說明總共20人參加感官評(píng)定，評(píng)定內(nèi)容分三部分(即上表“行“的內(nèi)容)，總體評(píng)價(jià)按100％計(jì)。
權(quán)利要求
1.一種益菌奶，含有脂肪、蛋白質(zhì)、非脂乳固體，其特征在于還含有重量百分比為1％-10％的低聚糖和1.0×106-3.6×108菌落數(shù)/毫升的益生菌，且該益菌奶的酸度為14-25滴定梯度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌，其特征在于所含低聚糖的重量百分比為1.2％-7.6％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌，其特征在于所含益生菌為6.0×107-3.2×108菌落數(shù)/毫升。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌，其特征在于該益菌奶的酸度為17-21滴定梯度。
5.一種權(quán)利要求1所述益菌奶的制造方法，其原料為90％-98.5％的無(wú)抗奶，0.02％-0.5％的益生菌，1.4％-9.7％的低聚糖，以上百分比為重量百分比；該制造方法如下將無(wú)抗奶加入低聚糖中攪拌5-10分鐘，加熱至60-80℃，再均質(zhì)，然后在65-140℃殺菌3秒-30分鐘，再冷卻致4-25℃，添加益生菌，最后攪拌5-10分鐘。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種益菌奶的制造方法，其特征在于該均質(zhì)在150-300bar下進(jìn)行。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種益菌奶的制造方法，其特征在于該均質(zhì)為二級(jí)均質(zhì)，第一次在30-50bar，第二次在180-250bar。
全文摘要
一種益菌奶,含有脂肪、蛋白質(zhì)、非脂乳固體,其特點(diǎn)在于還含有重量百分比為1%－10%的低聚糖和1.0×10
文檔編號(hào)A23C9/127GK1383727SQ01112799
公開日2002年12月11日 申請(qǐng)日期2001年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月29日
發(fā)明者龔廣予 申請(qǐng)人:上海光明乳業(yè)股份有限公司