專利名稱：桑黃菌絲體制品及其生產(chǎn)方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種藥用真菌發(fā)酵菌絲體制品及其生產(chǎn)方法。
桑黃[Phellinus yucatanensis(Murr.)Imaz.]屬擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina)、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)的真菌，在自然界十分罕見。《本草綱目》記載可治癖飲積聚，腹痛金瘡?！吨兴幋筠o典》敘述可治內(nèi)科等疾病。民間以子實(shí)體入藥，用于治療肝炎、肝硬化等。直接用桑黃子實(shí)體入藥，既存在自然資源嚴(yán)重不足的問題，還存在使用不方便和療效較低的問題。
本發(fā)明的目的是提供一種利用桑黃菌進(jìn)行人工發(fā)酵而制得的桑黃菌絲體制品及其進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)的方法，以解決桑黃自然資源的嚴(yán)重不足，生產(chǎn)的發(fā)酵菌絲體制品可用于治療遷延性、慢性肝炎。
本發(fā)明所提供的桑黃菌絲體制品是由桑黃菌[Phellinus yucatanensis(Murr.)Imaz.]菌種經(jīng)人工發(fā)酵而成的菌絲體，可制成膠囊或糖衣片，其主要有效成分為桑黃多糖，其單糖組成主要有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、巖藻糖、阿拉伯糖等，屬雜多糖，多糖分子中含有β構(gòu)型糖甘鍵。
生產(chǎn)本發(fā)明所述的桑黃菌絲體制品的方法，是以桑黃菌[Phellinusyucatanensis(Murr.)Imaz.]為菌種按下述工藝流程進(jìn)行人工發(fā)酵試管斜面菌種培養(yǎng)——→搖瓶種子培養(yǎng)——→一級種子培養(yǎng)——→二級種子培養(yǎng)——→發(fā)酵罐培養(yǎng)——→放罐具體的工藝步驟如下(1)試管斜面的培養(yǎng)培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基加培養(yǎng)基總量(重量)0～0.01％的維生素B1；培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度20～30℃，培養(yǎng)時(shí)間5～10天，pH自然；(2)搖瓶種子培養(yǎng)培養(yǎng)基組分(重量百分比)葡萄糖1～5％，花生餅粉0.1～3％，酵母粉0.1～2％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％；培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速100～200次/分，培養(yǎng)溫度20～30℃，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間5～9天；(3)一級種子罐種子培養(yǎng)培養(yǎng)基組分(重量百分比)葡萄糖1～5％，花生餅粉0.1～2％，酵母粉0.1～2％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.1～0.5％；培養(yǎng)條件接種量0.1～5％，培養(yǎng)溫度20～30℃，通氣量1∶0.1～1∶1.5v/v/分，攪拌轉(zhuǎn)速100～250轉(zhuǎn)/分，罐壓0.2～0.8公斤/厘米2，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間2～5天；(4)二級種子罐種子培養(yǎng)培養(yǎng)基組分(重量百分比)同一級種子罐；培養(yǎng)條件接種量10～30％，攪拌轉(zhuǎn)速100～250轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、罐壓、通氣量、pH等同一級種子罐；(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)培養(yǎng)基組分(重量百分比)花生餅粉0.1～2％，酵母粉0.1～2％，葡萄糖1～5％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.2～0.8％；培養(yǎng)條件接種量10～30％，攪拌轉(zhuǎn)速100～200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度、通氣量、罐壓、pH等同種子罐，培養(yǎng)時(shí)間72～120小時(shí)。
本發(fā)明的工藝方法穩(wěn)定可靠，適于進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)。所生產(chǎn)的桑黃菌絲體產(chǎn)品經(jīng)各種分析和試驗(yàn)，證明可作為治療遷延性、慢性肝炎的醫(yī)藥原料或保健品原料。從而解決了自然資源嚴(yán)重不足的桑黃菌這種藥用資源的開發(fā)和利用問題。
對本發(fā)明所生產(chǎn)的桑黃菌絲體的有關(guān)分析試驗(yàn)結(jié)果如下藥化研究結(jié)合藥理試驗(yàn)，化學(xué)分析的結(jié)果表明，桑黃多糖是發(fā)酵菌絲體的主要有效成分，其單糖組成主要有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、巖藻糖、阿拉伯糖等，屬雜多糖，多糖分子中含有β構(gòu)型糖甘鍵。
藥理研究藥理試驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵菌絲體的醇沉物(含桑黃多糖)對中毒性肝炎動(dòng)物模型有護(hù)肝效應(yīng)，可促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能，提高炭廓清功能，對抗免疫抑制劑所引起的血清溶菌酶值的下降，提高外周淋巴細(xì)胞ANAE陽性率，對動(dòng)物免疫中樞器官胸腺亦呈活性，且對炎癥性關(guān)節(jié)腫有抗炎作用。因此桑黃菌絲體有護(hù)肝、抗炎作用及免疫活性。
毒性試驗(yàn)發(fā)酵菌絲體醇沉物毒性測定結(jié)果如下(1)急性毒性試驗(yàn)小鼠口服LD50＞10g/Kg，腹腔注射LD50為3936.1mg/Kg，根據(jù)毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，受試物屬無毒級。(2)亞急性毒性試驗(yàn)大鼠罐胃30天，無論高劑量組(約合臨床量80倍)或低劑量組(約合臨床量50倍)SGPT、NPN、血象等生理指標(biāo)未見異常，給藥前后變化無顯著差異，主要臟器(心、肝、腎)組織切片檢查亦未見異常。
臨床初試用發(fā)酵菌絲體制成糖衣片供空軍廣州醫(yī)院對遷延性、慢性病毒性肝炎進(jìn)行治療觀察，共68例，結(jié)果SGPT復(fù)常率為63.2％，隨訪19例中復(fù)發(fā)率為31.5％，明顯低于對照的五味子制劑組，該組復(fù)發(fā)率為69.8％。
實(shí)施例一用桑黃菌[Phellinus yucatanensis(Murr.)Imaz.]菌種進(jìn)行人工發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體的工藝過程如下1.搖瓶種子培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基葡萄糖1％，花生餅粉0.5％，酵母粉0.2％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％。(2)培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速120次/分，培養(yǎng)溫度25℃，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間6天。2.一級種子罐種子培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基葡萄糖1％，花生餅粉0.5％，酵母粉0.5％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.2％。(2)培養(yǎng)條件接種量0.5％，培養(yǎng)溫度25℃，通氣量1∶0.3v/v/分，攪拌轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分，罐壓0.3公斤/厘米2，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間2天。3.二級種子罐種子培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基同一級種子罐。(2)培養(yǎng)條件接種量15％，攪拌轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、罐壓、通氣量、pH等同一級種子罐。4.發(fā)酵罐培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基葡萄糖2％，花生餅粉0.5％，酵母粉0.1％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.3％。(2)培養(yǎng)條件接種量10％，攪拌轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度、通氣量、罐壓、pH等同種子罐，培養(yǎng)時(shí)間80小時(shí)。
實(shí)施例二1.搖瓶種子培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基葡萄糖2％，花生餅粉1％，酵母粉0.2％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％。(2)培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速160次/分，培養(yǎng)溫度28℃，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間7天，菌球密度約占培養(yǎng)液40～50％，菌液從混濁變清，黃色至深黃色。2.一級種子罐種子培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基葡萄糖2％，花生餅粉0.8％，酵母粉0.1％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.3％。(2)培養(yǎng)條件接種量0.8％，培養(yǎng)溫度28℃，通氣量1∶0.5v/v/分，攪拌轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分，罐壓0.4公斤/厘米2，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間3天，發(fā)酵液由混濁變清，淺黃色，味香。3.二級種子罐種子培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基同一級種子罐。(2)培養(yǎng)條件接種量18％，攪拌轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、罐壓、通氣量、pH等同一級種子罐。培養(yǎng)3天后發(fā)酵液變稠，淺黃色，味香。4.發(fā)酵罐培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基葡萄糖3％，花生餅粉1％，酵母粉0.2％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.4％。(2)培養(yǎng)條件接種量16％，攪拌轉(zhuǎn)速170轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度、通氣量、罐壓、pH等同種子罐，培養(yǎng)時(shí)間95小時(shí)，還原糖0.5～2％以下，干菌絲得率1.5％；發(fā)酵液的菌球球形或近球形，直徑最大0.3厘米，具長絨毛；菌絲絲狀，粗2～4.8微米；鎖狀聯(lián)合和分隔不明顯。
實(shí)施例三1.搖瓶種子培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基葡萄糖4％，花生餅粉2％，酵母粉1％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％。(2)培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速180次/分，培養(yǎng)溫度30℃，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間9天。2.一級種子罐種子培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基葡萄糖4％，花生餅粉1.5％，酵母粉2％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.5％。(2)培養(yǎng)條件接種量3％，培養(yǎng)溫度30℃，通氣量1∶1.2v/v/分，攪拌轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)/分，罐壓0.8公斤/厘米2，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間4天。3.二級種子罐種子培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基同一級種子罐。
(2)培養(yǎng)條件接種量25％，攪拌轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、罐壓、通氣量、pH等同一級種子罐。4.發(fā)酵罐培養(yǎng)(1)培養(yǎng)基葡萄糖5％，花生餅粉2％，酵母粉1％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.6％。(2)培養(yǎng)條件接種量20％，攪拌轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)溫度、通氣量、罐壓、pH等同種子罐，培養(yǎng)時(shí)間120小時(shí)。
權(quán)利要求
1.一種桑黃菌絲體制劑，其特征在于是由桑黃菌[Phellinusyucatanensis(Murr.)Imaz.]菌種經(jīng)人工發(fā)酵而成的菌絲體，其主要有效成分為桑黃多糖，其單糖組成主要有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、木糖、巖藻糖、阿拉伯糖，屬雜多糖，多糖分子中含有β構(gòu)型糖甘鍵。
2.權(quán)利要求1所述的桑黃菌絲體的生產(chǎn)方法，其特征在于以桑黃菌[Phellinusyucatanensis(Murr.)Imaz.]為菌種，按以下工藝步驟進(jìn)行人工發(fā)酵(1)試管斜面的培養(yǎng)培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基加培養(yǎng)基總量(重量)0～0.01％的維生素B1；培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度20～30℃，培養(yǎng)時(shí)間5～10天，pH自然；(2)搖瓶種子培養(yǎng)培養(yǎng)基組分(重量百分比)葡萄糖1～5％，花生餅粉0.1～3％，酵母粉0.1～2％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％；培養(yǎng)條件旋轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速100～200次/分，培養(yǎng)溫度20～30℃，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間5～9天；(3)一級種子罐種子培養(yǎng)培養(yǎng)基組分(重量百分比)葡萄糖1～5％，花生餅粉0.1～2％，酵母粉0.1～2％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.1～0.5％；培養(yǎng)條件接種量0.1～5％，培養(yǎng)溫度20～30℃，通氣量1∶0.1～1∶1.5v/v/分，攪拌轉(zhuǎn)速100～250轉(zhuǎn)/分，罐壓0.2～0.8公斤/厘米2，pH自然，培養(yǎng)時(shí)間2～5天；(4)二級種子罐種子培養(yǎng)培養(yǎng)基組分(重量百分比)同一級種子罐；培養(yǎng)條件接種量10～30％，攪拌轉(zhuǎn)速100～250轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時(shí)間、罐壓、通氣量、pH等同一級種子罐；(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)培養(yǎng)基組分(重量百分比)花生餅粉0.1～2％，酵母粉0.1～2％，葡萄糖1～5％，MgSO40.05％，KH2PO40.1％，消泡油0.2～0.8％；培養(yǎng)條件接種量10～30％，攪拌轉(zhuǎn)速100～200轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度、通氣量、罐壓、pH等同種子罐，培養(yǎng)時(shí)間72～120小時(shí)。
3.權(quán)利要求1所述的桑黃菌絲體制品的用途是作為治療遷延性、慢性肝炎的醫(yī)藥原料。
全文摘要
桑黃菌絲體制品及其生產(chǎn)方法和用途，本發(fā)明的桑黃菌絲體由桑黃菌[Phellinus yucatanensis(Murr.)Imaz.]為菌種進(jìn)行人工發(fā)酵而制得，其發(fā)酵工藝流程包括試管斜面菌種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、一級種子培養(yǎng)、二級種子培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、放罐。本發(fā)明的桑黃菌絲體制品可用于治療遷延性、慢性肝炎。本發(fā)明的生產(chǎn)工藝穩(wěn)定可靠，適于工業(yè)化生產(chǎn)，解決了自然資源嚴(yán)重不足的桑黃菌這種藥用資源的開發(fā)和利用問題。
文檔編號C12N1/14GK1403566SQ01127760
公開日2003年3月19日 申請日期2001年8月21日 優(yōu)先權(quán)日2001年8月21日
發(fā)明者章衛(wèi)民, 鐘韓, 徐學(xué)平, 黃茂先, 何國襄 申請人:廣東省微生物研究所