專利名稱：灰樹(shù)花大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種灰樹(shù)花10噸罐及10噸罐以上大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝。
灰樹(shù)花(Grifola frondosa)，隸屬擔(dān)子菌亞門，層菌綱，無(wú)隔擔(dān)子菌亞綱，非褶菌目，多孔菌科，樹(shù)花菌屬，又名貝葉多孔菌、栗子蘑、蓮花菌，日本俗稱舞茸?；覙?shù)花是亞熱帶至溫帶森林中的大型真菌，具有獨(dú)特的芳香味，營(yíng)養(yǎng)豐富，口味鮮美，且含有豐富的生物活性物質(zhì)。近20年來(lái)，國(guó)內(nèi)外深入開(kāi)展了作為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的真菌多糖的研究，灰樹(shù)花多糖顯著的療效也逐漸被人們所認(rèn)識(shí)。經(jīng)過(guò)大量的化學(xué)和藥理分析發(fā)現(xiàn)，灰樹(shù)花多糖具有明顯的抗腫瘤、抗HIV病毒、改善免疫系統(tǒng)功能、調(diào)節(jié)血糖、血脂及膽固醇水平、降血壓等作用，對(duì)防止癌細(xì)胞的生成和轉(zhuǎn)移、艾滋病、高血壓、肥胖癥、糖尿病以及免疫系統(tǒng)功能的紊亂都有一定的療效，且無(wú)任何毒副作用。因此，灰樹(shù)花是一種極具開(kāi)發(fā)價(jià)值的珍貴食、藥用真菌。最近，美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)證實(shí)了灰樹(shù)花提取物治療晚期乳腺癌和前列腺癌的研究結(jié)果，并允許灰樹(shù)花提取物作為癌癥的有效抑制劑，直接進(jìn)行二期臨床試驗(yàn)。
灰樹(shù)花野生資源較少，目前主要通過(guò)人工栽培獲得，但人工栽培具有周期長(zhǎng)、占地面積大、產(chǎn)量及質(zhì)量均不穩(wěn)定等缺點(diǎn)。菌絲體發(fā)酵則周期較短、產(chǎn)量高且質(zhì)量穩(wěn)定，適合工業(yè)化生產(chǎn)。液體深層發(fā)酵上到一定規(guī)模時(shí)，各種參數(shù)的控制對(duì)整個(gè)發(fā)酵的質(zhì)量起著相當(dāng)重要的作用。如果將小試(搖瓶或小發(fā)酵罐)工藝直接套用到大規(guī)模發(fā)酵中往往會(huì)出現(xiàn)參數(shù)控制失調(diào)，進(jìn)而導(dǎo)致發(fā)酵產(chǎn)量質(zhì)量下降。因此到目前為止，尚未見(jiàn)到灰樹(shù)花大規(guī)模工業(yè)發(fā)酵技術(shù)方面的報(bào)道，僅有一些小試方面的研究。
本發(fā)明的目的在于提供了一種大規(guī)模的灰樹(shù)花液體深層發(fā)酵工藝，并且通過(guò)對(duì)工藝參數(shù)的研究和培養(yǎng)基配方的優(yōu)化，使產(chǎn)量質(zhì)量都有明顯提高，從而解決了已有技術(shù)存在的各種問(wèn)題。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明灰樹(shù)花大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝依次包括以下步驟(1)將灰樹(shù)花斜面菌種接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，25～28℃溫度培養(yǎng)144～168小時(shí)；(2)將步驟1中所得的菌種轉(zhuǎn)接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，25～28℃溫度培養(yǎng)96～120小時(shí)；(3)將步驟2中所得的菌種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓30～40kPa，攪拌速率100～120r/min，通氣量1∶0.2～0.4，發(fā)酵72～96小時(shí)；(4)將一級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的二級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓40～50kPa，攪拌速率100～120r/min，通氣量1∶0.3～0.5，發(fā)酵72～84小時(shí)；(5)將二級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的三級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓40～50kPa，攪拌速率100～120r/min，通氣量1∶0.4～0.6，發(fā)酵80～96小時(shí)；(6)將三級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的大型發(fā)酵罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓40～50kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量為1∶0.5～0.7，發(fā)酵96～120小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中50～60℃烘干至含水量低于8％。
本發(fā)明步驟1中搖瓶培養(yǎng)基與搖瓶的容積比為1∶5～1∶10；步驟2中搖瓶培養(yǎng)基與搖瓶的容積比為1∶2～1∶5。
本發(fā)明步驟3中一級(jí)種子罐的容積為150L～300L，在該一級(jí)種子罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為100L～250L；步驟4和步驟5中所述的二級(jí)、三級(jí)種子罐指的是1.5噸～5噸的發(fā)酵罐，在該二級(jí)、三級(jí)種子罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為1噸～4噸。
本發(fā)明步驟6中大型發(fā)酵罐指的是10噸～30噸發(fā)酵罐，在該發(fā)酵罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為7.5噸～24噸。
本發(fā)明中所述的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯15％～20％，葡萄糖1％～2％，硫酸鎂0.04％～0.08％，磷酸二氫鉀0.1％～0.7％，維生素B1為10ppm～20ppm，加水定容至所需體積，PH值為5.5～6.0。
本發(fā)明中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為玉米粉2％～3％，豆餅粉1％～2％，葡萄糖1.5％～2％，硫酸鎂0.03％～0.05％，磷酸二氫鉀0.1％～0.15％，維生素B1為10～20ppm，加水定容至所需體積，PH值為5.5～6.0。
本發(fā)明步驟6中放罐的標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)酵液變得較為粘稠，鏡檢有大量菌絲體，PH值降至3.5～3.8左右，取樣離心稱濕菌絲體重量，較4小時(shí)前無(wú)明顯增加即可放罐。
本發(fā)明適用于各種灰樹(shù)花菌種10噸罐及10噸罐以上大規(guī)模液體深層發(fā)酵，解決了灰樹(shù)花尚不能大規(guī)模生產(chǎn)的局限，這對(duì)灰樹(shù)花工業(yè)化生產(chǎn)及灰樹(shù)花相關(guān)應(yīng)用產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的意義。本發(fā)明工藝發(fā)酵規(guī)模達(dá)到10噸及10噸以上，干粉得率達(dá)到0.8％～1.2％，大大提高了灰樹(shù)花的產(chǎn)量，且100克菌絲體干粉多糖含量達(dá)到4～6克?；覙?shù)花深層培養(yǎng)菌絲體的多糖含量在9％-12％之間。而灰樹(shù)花子實(shí)體中多糖含量約為5％～7％，可見(jiàn)灰樹(shù)花深層培養(yǎng)菌絲體中的多糖含量明顯高于子實(shí)體。而且發(fā)酵液中亦含有一定量的灰樹(shù)花多糖，因此發(fā)酵液也具有一定的應(yīng)用價(jià)值。與子實(shí)體相比，菌絲體中所含18種氨基酸明顯高于子實(shí)體，其中8種人體必需氨基酸Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Thr、Trp、Val在氨基酸總量中含量較高。另外深層培養(yǎng)灰樹(shù)花菌絲體微量元素的含量總體上接近于灰樹(shù)花子實(shí)體。
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例1將新鮮的斜面菌種接入十個(gè)裝有100mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中，26℃搖床培養(yǎng)144小時(shí)。然后把兩個(gè)500ml搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1000mL搖瓶培養(yǎng)基的2000mL三角瓶中，26℃搖床培養(yǎng)100小時(shí)。然后將5瓶2000mL三角瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)的種子轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有100L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，保持罐溫26℃，罐壓30kPa，攪拌速率100r/min，通氣量1∶0.2，發(fā)酵72小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的1.5噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫26℃，罐壓40kPa，攪拌速率110r/min，通氣量1∶0.3，發(fā)酵80小時(shí)。將二級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的15噸發(fā)酵罐中，保持罐溫26℃，罐壓40kPa，攪拌速率120r/min，通氣量為1∶0.5，發(fā)酵110小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中60℃烘干，干粉得率為0.95％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為4.76克/100克干粉。
本實(shí)施例1中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯15％，葡萄糖1％，硫酸鎂0.04％，磷酸二氫鉀0.1％，維生素B1為10ppm，加水定容至100mL、1000mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例1中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為玉米粉2％，豆餅粉1％，葡萄糖1.5％，硫酸鎂0.03％，磷酸二氫鉀0.1％，維生素B1為10ppm，加水定容至100L、1噸、10噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例1步驟5中放罐的標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)酵液變得較為粘稠，鏡檢有大量菌絲體，PH值降至3.5～3.8左右，取樣離心稱濕菌絲體重量，較4小時(shí)前無(wú)明顯增加即可放罐。
實(shí)施例2將新鮮的斜面菌種接入十個(gè)裝有80mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中，25℃搖床培養(yǎng)168小時(shí)。然后把兩個(gè)500mL搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1000mL搖瓶培養(yǎng)基的3000mL三角瓶中，25℃搖床培養(yǎng)110小時(shí)，然后將5瓶3000mL三角瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)的種子轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有100L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，保持罐溫25℃，罐壓30kPa，攪拌速率100r/min，通氣量1∶0.3，發(fā)酵78小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的1.5噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫25℃，罐壓40kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.4，發(fā)酵88小時(shí)。將二級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的15噸發(fā)酵罐中，保持罐溫25℃，罐壓45kPa，攪拌速率130r/min，通氣量為1∶0.5，發(fā)酵115小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中55℃烘干，干粉得率為1.04％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為5.14克/100克干粉。
本實(shí)施例2中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯16％，葡萄糖1.7％，硫酸鎂0.05％，磷酸二氫鉀0.5％，維生素B1為18ppm，加水定容至80mL、1000mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例2中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為玉米粉2％，豆餅粉1.5％，葡萄糖1.8％，硫酸鎂0.03％，磷酸二氫鉀0.15％，維生素B1為16ppm，加水定容至100L、1噸、10噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例2步驟5中放罐的標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例3將新鮮的斜面菌種接入十個(gè)裝有100mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中，27℃搖床培養(yǎng)150小時(shí)。然后把兩個(gè)500mL搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1000mL搖瓶培養(yǎng)基的2500mL三角瓶中，27℃搖床培養(yǎng)96小時(shí)，然后將5瓶2500mL三角瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)的種子轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有100L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為150L的一級(jí)種子罐，保持罐溫27℃，罐壓40kPa，攪拌速率100r/min，通氣量1∶0.35，發(fā)酵84小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的1.5噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫27℃，罐壓45kPa，攪拌速率110r/min，通氣量1∶0.45，發(fā)酵78小時(shí)。將二級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有10噸發(fā)酵培養(yǎng)基的15噸發(fā)酵罐中，保持罐溫27℃，罐壓50kPa，攪拌速率135r/min，通氣量為1∶0.6，發(fā)酵112小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中58℃烘干，干粉得率為1.17％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為5.78克/100克干粉。
本實(shí)施例3中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯15％，葡萄糖1.5％，硫酸鎂0.05％，磷酸二氫鉀0.5％，維生素B1為15ppm，加水定容至100mL、1000mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例3中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為玉米粉2％，豆餅粉1.5％，葡萄糖1.8％，硫酸鎂0.03％，磷酸二氫鉀0.1％，維生素B1為15ppm，加水定容至100L、1噸、10噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例3步驟5中放罐的標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例4將新鮮的斜面菌種接入十六個(gè)裝有100mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中，26℃搖床培養(yǎng)144小時(shí)。然后把兩個(gè)500mL搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1500mL搖瓶培養(yǎng)基的3000mL三角瓶中，26℃搖床培養(yǎng)100小時(shí)，然后將8瓶3000mL三角瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)的種子轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有150L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為300L的一級(jí)種子罐，保持罐溫26℃，罐壓30kPa，攪拌速率115r/min，通氣量1∶0.35，發(fā)酵90小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1噸發(fā)酵培養(yǎng)基的1.5噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫26℃，罐壓45kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.45，發(fā)酵84小時(shí)。將二級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有3.5噸發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸三級(jí)種子罐中，保持罐溫26℃，罐壓45kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.5，發(fā)酵82小時(shí)；將三級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有15噸發(fā)酵培養(yǎng)基的30噸發(fā)酵罐中，保持罐溫25℃，罐壓50kPa，攪拌速率130r/min，通氣量為1∶0.6，發(fā)酵110小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中50℃烘干，干粉得率為0.92％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為4.73克/100克干粉。
本實(shí)施例4中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯18％，葡萄糖1.5％，硫酸鎂0.06％，磷酸二氫鉀0.6％，維生素B1為18ppm，加水定容至100mL、1500mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例4中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為玉米粉2.5％，豆餅粉1.5％，葡萄糖1.8％，硫酸鎂0.04％，磷酸二氫鉀0.12％，維生素B1為18ppm，加水定容至150L、1噸、3.5噸、15噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例1步驟6中放罐的標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)酵液變得較為粘稠，鏡檢有大量菌絲體，PH值降至3.5～3.8左右，取樣離心稱濕菌絲體重量，較4小時(shí)前無(wú)明顯增加即可放罐。
實(shí)施例5將新鮮的斜面菌種接入十八個(gè)裝有100mL搖瓶培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中，28℃搖床培養(yǎng)144小時(shí)。然后把兩個(gè)500mL搖瓶種轉(zhuǎn)接入裝有1500mL搖瓶培養(yǎng)基的4000mL三角瓶中，28℃搖床培養(yǎng)120小時(shí)，然后將9瓶4000mL三角瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)的種子轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有180L發(fā)酵培養(yǎng)基的總?cè)莘e為300L的一級(jí)種子罐，保持罐溫28℃，罐壓40kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.4，發(fā)酵96小時(shí)。將種子罐菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有1.6噸發(fā)酵培養(yǎng)基的2噸二級(jí)種子罐中，保持罐溫28℃，罐壓45kPa，攪拌速率110r/min，通氣量1∶0.4，發(fā)酵82小時(shí)。將二級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有4噸發(fā)酵培養(yǎng)基的5噸三級(jí)種子罐中，保持罐溫28℃，罐壓45kPa，攪拌速率120r/min，通氣量1∶0.5，發(fā)酵90小時(shí)；將三級(jí)種子罐中菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有24噸發(fā)酵培養(yǎng)基的30噸發(fā)酵罐中，保持罐溫28℃，罐壓50kPa，攪拌速率140r/min，通氣量為1∶0.6，發(fā)酵112小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中60℃烘干，干粉得率為0.83％，用苯酚-硫酸法測(cè)總多糖含量為4.28克/100克干粉。
本實(shí)施例5中的搖瓶培養(yǎng)基的成份配比(重量體積比g/100ml)為馬鈴薯20％，葡萄糖2％，硫酸鎂0.08％，磷酸二氫鉀0.7％，維生素B1為20ppm，加水定容至100mL、1500mL，搖瓶培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例5中的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及配比(重量體積比g/100ml)為玉米粉3％，豆餅粉2％，葡萄糖2％，硫酸鎂0.05％，磷酸二氫鉀0.15％，維生素B1為20ppm，加水定容至180L、1.6噸、4噸、24噸，發(fā)酵培養(yǎng)基的PH值為5.5～6.0。
本實(shí)施例5步驟6中放罐的標(biāo)準(zhǔn)與實(shí)施例4相同。
權(quán)利要求
1.一種灰樹(shù)花大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，依次包括以下步驟(1)將灰樹(shù)花斜面菌種接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中，25～28℃溫度培養(yǎng)144～168小時(shí)；(2)將步驟1中所得的菌種轉(zhuǎn)接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，25～28℃溫度培養(yǎng)96～120小時(shí)；(3)將步驟2中所得的菌種轉(zhuǎn)接入一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓30～40kPa，攪拌速率100～120r/min，通氣量1∶0.2～0.4，發(fā)酵72～96小時(shí)(4)將一級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的二級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓40～50kPa，攪拌速率100～120r/min，通氣量1∶0.3～0.5，發(fā)酵72～84小時(shí)；(5)將二級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的三級(jí)種子罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓40～50kPa，攪拌速率100～120r/min，通氣量1∶0.4～0.6，發(fā)酵80～96小時(shí)；(6)將三級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到一個(gè)裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的大型發(fā)酵罐中，保持罐溫25～28℃，罐壓40～50kPa，攪拌速率120～140r/min，通氣量為1∶0.5～0.6，發(fā)酵96～120小時(shí)，然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾，得濕菌絲體，然后放入真空干燥機(jī)中50～60℃烘干至含水量低于8％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的灰樹(shù)花大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中步驟1中搖瓶培養(yǎng)基與搖瓶的容積比為1∶5～1∶10；步驟2中搖瓶培養(yǎng)基與搖瓶的容積比為1∶2～1∶5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的灰樹(shù)花大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中步驟3中一級(jí)種子罐的容積為150L～300L，在該一級(jí)種子罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為100L～250L；步驟4和步驟5中的二級(jí)、三級(jí)種子罐指的是1.5噸～5噸的發(fā)酵罐，在該二級(jí)、三級(jí)種子罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為1噸～4噸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的灰樹(shù)花大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中步驟6中大型發(fā)酵罐指的是10噸～30噸發(fā)酵罐，在該發(fā)酵罐中裝有的發(fā)酵培養(yǎng)基相應(yīng)為7.5噸～24噸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的灰樹(shù)花大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中所述的搖瓶培養(yǎng)基的成份及其重量體積比(g/100ml)為馬鈴薯15％～20％，葡萄糖1％～2％，硫酸鎂0.04％～0.08％，磷酸二氫鉀0.1％～0.7％，維生素B1為10ppm～20ppm，加水定容至所需體積，PH值為5.5～6.0。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、3或4所述的姬松茸大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的成份及其重量體積比(g/100ml)為玉米粉2％～3％，豆餅粉1％～2％，葡萄糖1.5％～2％，硫酸鎂0.03％～0.05％，磷酸二氫鉀0.1％～0.15％，維生素B1為10～20ppm，加水定容至所需體積，PH值為5.5～6.0。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的灰樹(shù)花大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝，其中步驟6中放罐的標(biāo)準(zhǔn)為發(fā)酵液變得較為粘稠，鏡檢有大量菌絲體，PH值降至3.5～3.8左右，取樣離心稱濕菌絲體重量，較4小時(shí)前無(wú)明顯增加即可放罐。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種灰樹(shù)花大規(guī)模液體深層發(fā)酵工藝,依次包括以下步驟:(1)將灰樹(shù)花斜面菌種接入裝有搖瓶培養(yǎng)基的搖瓶中培養(yǎng);(2)將步驟1中所得的菌種轉(zhuǎn)接入搖瓶中再進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng):(3)將步驟2中所得的菌種依次轉(zhuǎn)接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的一級(jí)種子罐、二級(jí)種子罐、三級(jí)種子罐中發(fā)酵;(4)將三級(jí)種子罐中的菌種轉(zhuǎn)接到大型發(fā)酵罐中發(fā)酵,然后放罐將發(fā)酵液用板框壓濾機(jī)壓濾,得濕菌絲體。通過(guò)對(duì)灰樹(shù)花發(fā)酵工藝的步驟、參數(shù)和培養(yǎng)基配方的改進(jìn),成功地建立了灰樹(shù)花10噸罐及10噸罐以上發(fā)酵工藝,打破了以往灰樹(shù)花發(fā)酵只限于小試而不能工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)的局限,所得的灰樹(shù)花菌絲干粉得率達(dá)0.8%～1.2%,每百克菌絲干粉的灰樹(shù)花多糖含量達(dá)到4～6克,氨基酸、多糖兩項(xiàng)指標(biāo)上明顯超過(guò)了人工栽培的灰樹(shù)花子實(shí)體。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1339581SQ0112971
公開(kāi)日2002年3月13日 申請(qǐng)日期2001年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月29日
發(fā)明者李寶健, 徐志祥 申請(qǐng)人:李寶健, 徐志祥