專利名稱：紅平紅球菌及其在脫除含硫化合物中硫元素的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種紅平紅球菌及其在脫除含硫化合物中硫元素的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
石油的主要元素組成是碳和氫，二者合計(jì)達(dá)96～99％，其余1～4％則是硫、氮、氧及微量金屬元素。硫在石油中以無(wú)機(jī)硫和有機(jī)硫的形式存在。無(wú)機(jī)硫包括溶解和懸浮的單體硫，硫化氫和硫鐵礦等，而有機(jī)硫包括各種硫醇，硫醚，二硫化物和噻吩及其衍生物。一般來(lái)說(shuō)，有機(jī)含硫化合物中，噻吩類化合物是最豐富的。許多沸點(diǎn)較低的小分子含硫有機(jī)物比較容易通過(guò)簡(jiǎn)單的化學(xué)方法除去。因此，許多深度脫硫研究工作都用二苯并噻吩(DBT)作為石油中難脫除有機(jī)硫的模型化合物。
石油及其產(chǎn)品中的含硫所帶來(lái)的問(wèn)題是多方面的。第一，它們?nèi)紵苯訉?dǎo)致二氧化硫的生成，從而造成空氣污染和酸雨，嚴(yán)重污染環(huán)境，破壞生態(tài)平衡，直接威脅著人類的生存空間。據(jù)有關(guān)報(bào)道，全世界每年排入大氣的SO2近兩億噸，我國(guó)每年排入大氣的SO2也達(dá)到了1795萬(wàn)噸。隨著我國(guó)機(jī)動(dòng)車保有量的不斷增加，汽車尾氣造成的空氣污染越來(lái)越嚴(yán)重。1998年國(guó)際衛(wèi)生組織公布的一項(xiàng)報(bào)告表明全球空氣污染最嚴(yán)重的十大城市中，我國(guó)的太原、北京、烏魯木齊、蘭州、重慶、濟(jì)南、石家莊七大城市榜上有名。同時(shí)我國(guó)酸雨面積不斷擴(kuò)大，1995年已擴(kuò)大到華中、華南地區(qū)約100萬(wàn)平方公里，占國(guó)土面積的29％，酸雨威脅到73個(gè)城市，酸雨的年平均pH值已達(dá)5.6。其次，含硫有機(jī)化合物能嚴(yán)重地毒化石油精煉時(shí)的催化劑，導(dǎo)致產(chǎn)率降低。另外，含硫化合物的存在加重了石油精煉設(shè)備如貯存罐、運(yùn)輸管線等的腐蝕，增加了精煉成本。為了避免硫化物造成的危害，就必須想方設(shè)法地除了石油及其產(chǎn)品的硫化物。因此，世界發(fā)達(dá)國(guó)家都制定出嚴(yán)格的規(guī)定來(lái)控制石油產(chǎn)品中的硫含量。美國(guó)1990年就通過(guò)了清潔空氣法的修正案，提出了使用新配方汽油的要求。歐洲議會(huì)1998年也立法要求2000年實(shí)施清潔汽油配方。2000年后，發(fā)達(dá)國(guó)家普遍要求將柴油的含硫量降到350ppm以下，汽油的含硫量降到50-100ppm以下，北美和歐洲國(guó)家要求到2005年汽油、柴油中硫含量要低于50ppm，2010年要低于30ppm甚至于10ppm。我國(guó)是一個(gè)發(fā)展中國(guó)家，SO2的排放量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)世界平均水平。為了落實(shí)國(guó)家的可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略，我國(guó)初步提出將目前柴油中硫含量從5000ppm降低到2000ppm以下，部分大城市車用柴油中硫含量低于500ppm。
常用的脫硫方法有還原脫硫法、氧化脫硫法和吸咐脫硫法。工業(yè)上廣泛采用的方法是加氫還原脫硫法，即用氫氣作為還原劑將原料中的硫還原成硫化氫的形式除去。加氫脫硫是一個(gè)需要催化劑的高溫高壓過(guò)程，因此它的耐溫耐壓設(shè)備投資昂貴，操作費(fèi)用也高。雖然這種方法對(duì)脫除石油產(chǎn)品中許多含硫化合物中的硫是有效的，但對(duì)脫除有些含硫化合物，特別是較重餾分中的多芳硫雜環(huán)中的硫效果卻不顯著或很差。氧化脫硫法是用氧化劑將噻吩被氧化成相應(yīng)的砜或亞砜，由于后者在油和水中的溶解度不同，可使含硫分子得到分離，從而達(dá)到脫硫的目的。但這些化學(xué)氧化過(guò)程都沒(méi)有選擇性，有許多副反應(yīng)同時(shí)發(fā)生。
生物脫硫是利用微生物對(duì)硫源的特殊需要或代謝方式來(lái)實(shí)現(xiàn)硫脫除的方法。它反應(yīng)條件溫和，設(shè)備投資僅為加氫脫硫的30％，反應(yīng)過(guò)程沒(méi)有有害產(chǎn)物生成，可以實(shí)現(xiàn)深度脫硫，是一種具有廣闊發(fā)展前途的技術(shù)。能夠脫除有機(jī)硫化物的微生物既有厭氧菌也有好氧菌。例如Desulfovibrio desulfurcans M6能厭氧降解DBT，并主要產(chǎn)生聯(lián)苯。但轉(zhuǎn)化率低，速度慢。好氧性脫硫途徑有兩條，一條是以攻擊C-C鍵為代表的“Kodama途徑”，一條是以攻擊“C-S”鍵為代表的“4S途徑”。1973年，Kodama等人從環(huán)境中分離得到一株細(xì)菌，它能催化含硫雜環(huán)化合物二苯并噻吩發(fā)生氧化反應(yīng)，使C-C鍵斷裂(如圖1)，通過(guò)這一途徑，硫并沒(méi)有真正從雜環(huán)化合物中脫除，但是因?yàn)槠洚a(chǎn)物的水溶性所以使硫的脫除。1988年美國(guó)氣體技術(shù)研究所(IGT)的Kilbane首次分離得到了能夠選擇性催化DBT類含硫化合物的C-S鍵的紫紅紅球菌(Rhodococcus rhodochrous)IGTS8，它可以選擇性地進(jìn)攻DBT中的C-S鍵，而對(duì)其中的C--C鍵不起作用。這種代謝脫硫途徑就是“4S途徑”(如圖2)。這一途徑的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)底物的破壞作用很小，從而對(duì)其燃燒值的影響較小?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)外已發(fā)現(xiàn)了幾十株能專一性脫硫的微生物，主要有Arthrobacter，Bacillus，Brevibacterium，Burkholderia，Corynebacterium，Gordona，Nocardia globerula，Paenibacillus，Pleurotus ostreatus，Pseudomonas，和Rhodococcus幾種，其中以紅球菌(Rhodococcus)最多，最具代表性，也最具有應(yīng)用前景。例如日本Tottori大學(xué)生物技術(shù)系的紅平紅球菌(Rhodococcuserythropolis)D-1菌株，美國(guó)賓夕法尼亞州王平(Ping Wang)等人的紅平紅球菌(Rhodococcus erythropolis)N1-36、Q1a-22和N1-43菌株，美國(guó)EBC(EnergyBioSystems Corporation)公司的紫紅紅球菌(Rhodococcus rhodochrous)IGTS8和紅球菌(Rhodococcus sp.)I-19菌株，日本靜岡石油能源中心高級(jí)技術(shù)研究所生物精煉加工實(shí)驗(yàn)室紅球菌(Rhodococcus sp.)KA2-5-1菌株，美國(guó).加利福尼亞州斯坦福SSRL($tanford Synchrotron Radiation Laboratory)實(shí)驗(yàn)室的紅球菌(Rhodococcus sp.)ECRD-1菌株。而且，Rhodococcus rhodochrous IGTS8在美國(guó)已進(jìn)入工業(yè)應(yīng)用的中試階段。因而，紅球菌(Rhodococcus)被廣泛認(rèn)為是最具應(yīng)用前景的脫硫菌。盡管如此，這些紅球菌亦然具有這樣或那樣的缺陷，從而限制了其應(yīng)用。例如對(duì)高濃度的DBT的耐受性和脫硫活性差，脫除有機(jī)硫的活性易受硫酸根等無(wú)機(jī)含硫化合物的抑制，不能耐受羥基聯(lián)苯的抑制等都是具有代表性的缺憾。我國(guó)國(guó)內(nèi)公開(kāi)報(bào)道的有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的“四硫途徑”脫硫菌有德氏假單胞菌(Pseudomanas delafidii)R-8、球形諾卡氏菌(Nocardia globelula)R-9、短芽胞桿菌(Bacillus brevie)R-6和球形芽胞桿菌(Bacillus sphaericus)R-16等，未見(jiàn)有紅球菌(Rhodococcus)的報(bào)道。有關(guān)該類菌的許多研究工作，均是借國(guó)外的紅球菌(Rhodococcus)進(jìn)行，沒(méi)有該類菌的所有權(quán)，因而也不可能將其直接應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)。本發(fā)明的紅平紅球菌(Rhodococcus erythropolis)新菌株LSSE8-1具有廣闊的工業(yè)應(yīng)用前景和理論研究?jī)r(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服以上紅球菌的缺陷，提供一種更高活性，耐硫酸根和羥基連苯，并能對(duì)高濃度的DBT有較高脫硫活性的紅平紅球菌；本發(fā)明的目的在于該紅平紅球菌在脫除含硫化合物中硫元素的應(yīng)用。
本發(fā)明提供的一株成功地從自然界篩選分離得到的紅平紅球菌及其在脫除有機(jī)含硫化合物中硫的應(yīng)用，該紅平紅球菌無(wú)論是生長(zhǎng)狀態(tài)還是靜止細(xì)胞，無(wú)論是游離細(xì)胞還是固定化細(xì)胞，無(wú)論是完整的菌體還是破碎的菌體片段，無(wú)論是細(xì)胞粗液還是分離純化的酶組分均能表現(xiàn)出專一性的有效地脫除含硫化合物，特別是石油及其產(chǎn)品中的硫。
本發(fā)明的實(shí)施方案如下本發(fā)明提供的紅平紅球菌，其特征在于該紅平紅球菌為Rhodococcuserythropolis LSSE8-1，2001年10月9日保藏于“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，其保藏號(hào)為CGMCC NO.0643；該紅平紅球菌的革蘭氏染色陽(yáng)性，部分抗酸，好氧；在葡萄糖天門冬素瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂上30℃插片培養(yǎng)14小時(shí)后，其菌絲從菌落中央開(kāi)始斷裂，24小時(shí)產(chǎn)生球狀或桿狀小體，72小時(shí)菌落周緣繼續(xù)生長(zhǎng)，無(wú)氣生菌絲體，偶爾有分枝；對(duì)維生素B1無(wú)要求；該紅平紅球菌含有內(nèi)消旋二氨基庚二酸，有特征性的阿拉伯糖和半乳糖，細(xì)胞壁屬于IV型，該紅平紅球菌含有諾卡氏枝菌酸；該紅平紅球菌本發(fā)明的16SrRNA序列如下GTGTTTAACACATGCAAGTCGAGCGGTAAGGCCTTTCGGGGTACACGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGTGATCTGCCCTGCACTTCGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATATGACTTCAGGTTGCATGACTTGGGGTGGAAAGATTTATCGGTGCAGGATGGGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGACCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGCGCAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGG。
本發(fā)明提供的紅平紅球菌在脫除有機(jī)含硫化合物中的硫的應(yīng)用，其特征在于所述的含硫化合物為有機(jī)含硫化合物或無(wú)機(jī)含硫化合物，本發(fā)明的紅平紅球菌尤其是可脫除以二苯并噻吩(DBT)為代表的有機(jī)含硫化合物中的硫元素，對(duì)無(wú)機(jī)化合物亦有作用。在脫除以苯并噻吩(DBT)為代表的一大類化石燃料中的含硫化合物時(shí)，專一性地攻擊碳硫鍵，對(duì)碳碳鍵不進(jìn)行攻擊，原分子的碳碳結(jié)構(gòu)沒(méi)有被破壞。
下面詳細(xì)介紹本發(fā)明本發(fā)明的紅平紅球菌是以我國(guó)貴州省赤水市赤水氣田12#氣井附近被油氣污染的土壤和污水池中采集土樣和水樣，以二苯并噻吩化合物為硫源選擇性培養(yǎng)分離純化而得到；其生物學(xué)特征如下A.形態(tài)學(xué)特征菌株LSSE8-1在葡萄糖天冬素瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂上插片培養(yǎng)14小時(shí)后，該菌的菌絲從菌落中央開(kāi)始斷裂，24小時(shí)后產(chǎn)生球狀或桿狀的小體(如圖3和圖4所示)。培養(yǎng)72小時(shí)菌落周緣繼續(xù)生長(zhǎng)、無(wú)氣生菌絲體，偶爾有分枝。革蘭氏染色陽(yáng)性，部分抗酸。
B.培養(yǎng)特征本菌株LSSE8-1在以下五種培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)結(jié)果見(jiàn)表1所示。
表1菌株LSSE8-1的培養(yǎng)特征

C.化學(xué)組分按Hasegawa T.等的快速薄層層析法(Thin Layer Chromography，TLC)對(duì)本菌株LSSE8-1進(jìn)行全細(xì)胞水解液糖型及氨基酸分析，確認(rèn)該菌含有meso-DAP(內(nèi)消旋二氨基庚二酸，Diaminopimelic acid)，有特征性的阿拉伯糖和半乳糖，細(xì)胞壁屬于IV型。
按Lechevalier的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行枝菌酸分析，本菌株LSSE8-1含有諾卡氏枝菌酸(nocardomycolic acid)。D.生理生化參照《Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology》vol.IV.的方法，菌株LSSE8-1的生理生化特征如表2所示。
表2菌株LSSE8-1的生理生化特征

E.16SrRNA序列本發(fā)明的菌株LSSE8-1的16SrRNA序列如下GTGTTTAACACATGCAAGTCGAGCGGTAAGGCCTTTCGGGGTACACGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGTGATCTGCCCTGCACTTCGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATATGACTTCAGGTTGCATGACTTGGGGTGGAAAGATTTATCGGTGCAGGATGGGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGACCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGCGCAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGG通過(guò)查國(guó)際相關(guān)的基因庫(kù)，本發(fā)明的菌株LSSE8-1與其中相關(guān)菌株的16SrRNA雖有相似性(如表3所示)，但卻不完全相同，說(shuō)明本菌是首次被分離鑒定。
表3菌株LSSE8-1與相關(guān)菌株的16SrRNA的相似性




該菌屬于紅球菌屬進(jìn)化分枝。形態(tài)特征基內(nèi)菌絲生長(zhǎng)良好，有初級(jí)分枝、橫隔并斷裂成桿狀或球狀小體，表面光滑；無(wú)氣生菌絲體。胞壁化學(xué)組份中含有枝菌酸，胞壁屬于IV型，部分抗酸。
本發(fā)明的LSSE8-1菌株既可以在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，也或以在含有硫源(無(wú)機(jī)可溶性含硫化合物如MgSO4，或有機(jī)含硫化合物如二甲基亞砜等)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中培養(yǎng)。若菌體生長(zhǎng)中沒(méi)有DBT，則脫硫前在培養(yǎng)基中加入DBT或其衍生物CxDBT進(jìn)行適當(dāng)誘導(dǎo)能大大提高脫硫速度。菌株在pH4-9均能良好地生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度25-45℃，好氧。
本發(fā)明的菌株LSSE8-1的應(yīng)用方法有(1)用除DBT類化合物以外的其它化合物作硫源，迅速培養(yǎng)的菌體，直接或DBT誘導(dǎo)后用于石油及其產(chǎn)品的脫硫；(2)用冷凍干燥的菌體細(xì)胞進(jìn)行脫硫；(3)用該菌的細(xì)胞片段或細(xì)胞提取液進(jìn)行脫硫；(4)用該菌中提純的生物活性成份進(jìn)行脫硫。(5)該菌進(jìn)行進(jìn)一步的誘變處理后進(jìn)行脫硫。
本發(fā)明提供的紅平紅球菌是從自然界篩選分離得到的；該紅平紅球菌無(wú)論是生長(zhǎng)狀態(tài)還是靜止細(xì)胞，無(wú)論是游離細(xì)胞還是固定化細(xì)胞，無(wú)論是完整的菌體還是破碎的菌體片段，無(wú)論是細(xì)胞粗液還是分離純化的酶組分均能表現(xiàn)出專一性的有效地脫除含硫化合物，特別是石油及其產(chǎn)品中的硫。


附圖1為生物脫硫的“Kodama途徑”示意圖；附圖2為生物脫硫的“4S途徑”示意圖；附圖3為本發(fā)明LSSE8-1菌株的菌絲及斷裂小體形態(tài)(750X)附圖4為本發(fā)明LSSE8-1菌株的斷裂小體表面特征(10,000X)附圖5為本發(fā)明LSSE8-1脫除DBT中硫的色譜分析圖；附圖6為本發(fā)明LSSE8-1的16SrRNA序列。
實(shí)施方式實(shí)施例1LSSE8-1菌株的篩選氣井的密封性好，一般沒(méi)有什么泄漏。但是，氣井在鉆井時(shí)卻有大量的石油和天然氣噴出。從中國(guó)貴州省赤水市赤水氣田12號(hào)氣井周圍尋找這種被石油污染的土壤作樣品，同時(shí)在氣井附近的污水池中取污水樣。取5克土壤樣品懸浮于25毫升的生理鹽水中，置搖床中混合30-60分鐘后，靜置，吸以上清液于100毫升的選擇性培養(yǎng)基中(水樣可以直接取上清液加于選擇性培養(yǎng)基中)。選擇性培養(yǎng)基的組成為去離子水1000毫升，KH2PO42.44克；Na2HPO4·12H2O 14.03克；NH4Cl 2.00克；MgCl2·6H2O 0.36克；CaCl2·2H2O 0.001克FeCl3·6H2O 0.001克MnCl2·4H2O 0.004克；甘油1.5毫升，其中加入0.1mmol/L的二苯并噻吩(DBT)作硫源。置搖床以150轉(zhuǎn)/分，30℃培養(yǎng)三天后，在瓊脂制成的選擇性固體培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線分離。分離得到的單菌落分別接種于DBT為0.2mmol/L的選擇性培養(yǎng)基中，置搖床以150轉(zhuǎn)/分，30℃培養(yǎng)三至五天。取培養(yǎng)液2ml，用1M鹽酸調(diào)節(jié)其PH為1.0，用2ml的正已醇振蕩萃取。萃取液用高效液相進(jìn)行分析。并與HBP的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照。結(jié)果選擇到了一株對(duì)二苯并噻吩(DBT)具有專一性脫硫能力的菌株，定名為紅平紅球菌為Rhodococcus erythropolis LSSE8-1，2001年10月9日保藏于“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，其保藏號(hào)為CGMCC NO.0643。實(shí)施例2LSSE8-1生長(zhǎng)細(xì)胞的獲得與誘導(dǎo)挑取營(yíng)養(yǎng)斜面培養(yǎng)的LSSE8-1菌株，加入25毫升的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基的成份去離子水1000毫升，KH2PO42.44克；Na2HPO4·12H2O 14.03克；NH4Cl2.00克；MgCl2·6H2O 0.36克；CaCl2·2H2O 0.001克 FeCl3·6H2O 0.001克MnCl2·4H2O 0.004克；葡萄糖10克，Na2SO41mmol/L。30℃，150轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)24-48小時(shí)后，再將其加入500毫升的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，48-72小時(shí)后，離心獲得菌體。將菌體置于50毫升含有1mmol/L DBT的生理鹽水中，搖床混合2-4小時(shí)，離心再次取得菌體。實(shí)施例3LSSE8-1活性干細(xì)胞的獲得挑取營(yíng)養(yǎng)斜面培養(yǎng)的LSSE8-1菌株，加入25毫升的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基的成份去離子水1000毫升，KH2PO42.44克；Na2HPO4·12H2O 14.03克；NH4Cl2.00克；MgCl2·6H2O 0.36克；CaCl2·2H2O 0.001克FeCl3·6H2O 0.001克MnCl2·4H2O 0.004克；葡萄糖10克，Na2SO41mmol/L。30℃，150轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)24-48小時(shí)后，再將其加入500毫升的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，48-72小時(shí)后，離心獲得菌體。將菌體置于50毫升含有0.1mmol/L DBT的生理鹽水中，搖床混合2-4小時(shí)，離心再次取得菌體。冷凍真空干燥獲得具有活性的干細(xì)胞。實(shí)施例4菌株LSSE8-1脫除模擬體系DBT中的硫。
十二烷中加入DBT，使?jié)舛冗_(dá)到0.2mmol/L。挑取營(yíng)養(yǎng)斜面培養(yǎng)的LSSE8-1菌株，加入25毫升的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基的成份去離子水1000毫升，KH2PO42.44克；Na2HPO4·12H2O 14.03克；NH4Cl 2.00克；MgCl2·6H2O 0.36克；CaCl2·2H2O0.001克FeCl3·6H2O 0.001克MnCl2·4H2O 0.004克；葡萄糖10克，DBT濃度1mmol/L。30℃，150轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)24-48小時(shí)后，以油水比1∶3將模擬的油相和菌體培養(yǎng)物混合。30℃，150轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)24-48小時(shí)，硫被全部脫除，其產(chǎn)物是HBP(如圖5所示)。實(shí)例5菌株LSSE8-1用于加氫脫硫后柴油的深度脫硫挑取營(yíng)養(yǎng)斜面培養(yǎng)的LSSE8-1菌株，加入50毫升的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基的成份去離子水1000毫升，KH2PO42.44克；Na2HPO4·12H2O 14.03克；NH4Cl2.00克；MgCl2·6H2O 0.36克；CaCl2·2H2O 0.001克FeCl3·6H2O 0.001克MnCl2·4H2O 0.004克；葡萄糖10克，DBT濃度1mmol/L。30℃，150轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)24-48小時(shí)后，得到菌懸液。加氫脫硫后柴油20毫升與之混和后，搖床培養(yǎng)24-48小時(shí)，柴油中的硫含量由263ppm降至50ppm以下。實(shí)例6菌株LSSE8-1用于污水中硫酸鹽污染物的脫除挑取營(yíng)養(yǎng)斜面培養(yǎng)的LSSE8-1菌株，加入50毫升的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基的成份去離子水1000毫升，KH2PO42.44克；Na2HPO4·12H2O 14.03克；NH4Cl2.00克；MgCl2·6H2O 0.36克；CaCl2·2H2O 0.001克FeCl3·6H2O 0.001克MnCl2·4H2O 0.004克；葡萄糖10克，DBT濃度1mmol/L。30℃，150轉(zhuǎn)/分培養(yǎng)24-48小時(shí)后，得到菌懸液。以4％的接種比例將該菌懸液接種到含500ppm硫酸根離子的污水中，搖床培養(yǎng)24小時(shí)，水中的硫酸根降低至30ppm以下。
權(quán)利要求
1.一株紅平紅球菌，其特征在于該紅平紅球菌為Rhodococcus erythropolisLSSE8-1，2001年10月9日保藏于“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，其保藏號(hào)為CGMCC NO.0643。
2.按權(quán)利要求1所述的紅平紅球菌，其特征在于該紅平紅球菌的革蘭氏染色陽(yáng)性，部分抗酸，好氧；在葡萄糖天門冬素瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂上30℃插片培養(yǎng)14小時(shí)后，其菌絲從菌落中央開(kāi)始斷裂，24小時(shí)產(chǎn)生球狀或桿狀小體，72小時(shí)菌落周緣繼續(xù)生長(zhǎng)，無(wú)氣生菌絲體，偶爾有分枝；對(duì)維生素B1無(wú)要求。
3.按權(quán)利要求1所述的紅平紅球菌，其特征在于該紅平紅球菌含有內(nèi)消旋二氨基庚二酸，有特征性的阿拉伯糖和半乳糖，細(xì)胞壁屬于IV型，該紅平紅球菌含有諾卡氏枝菌酸。
4.按權(quán)利要求1所述的紅平紅球菌，其特征在于該紅平紅球菌本發(fā)明的16SrRNA序列如下GTGTTTAACACATGCAAGTCGAGCGGTAAGGCCTTTCGGGGTACACGAGCGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGTGATCTGCCCTGCACTTCGGGATAAGCCTGGGAAACTGGGTCTAATACCGGATATGACTTCAGGTTGCATGACTTGGGGTGGAAAGATTTATCGGTGCAGGATGGGCCCGCGGCCTATCAGCTTGTTGGTGGGGTAATGGCCTACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGACCTGAGAGGGTGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGACGAAGCGCAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCACCGG。
5.權(quán)利要求1所述的紅平紅球菌在脫除含硫化合物中的硫的應(yīng)用，其特征在于所述的含硫化合物為有機(jī)含硫化合物或無(wú)機(jī)含硫化合物。
全文摘要
本發(fā)明的紅平紅球菌為Rhodococcus erythropolisLSSE8－1，2001年10月9日保藏于“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，其保藏號(hào)為CGMCCNO.0643；其革蘭氏染色陽(yáng)性，部分抗酸，好氧；在葡萄糖天門冬素瓊脂和營(yíng)養(yǎng)瓊脂上30℃插片培養(yǎng)14小時(shí)后，其菌絲從菌落中央開(kāi)始斷裂，24小時(shí)產(chǎn)生球狀或桿狀小體，72小時(shí)菌落周緣繼續(xù)生長(zhǎng)，無(wú)氣生菌絲體，偶爾有分枝；對(duì)維生素B
文檔編號(hào)C12S1/00GK1418948SQ0113480
公開(kāi)日2003年5月21日 申請(qǐng)日期2001年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2001年11月13日
發(fā)明者緱仲軒, 劉會(huì)洲, 邢建民, 羅明芳, 李珊, 陳家鏞 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所