專利名稱：水稻器官形成調(diào)控基因OsSET1及其編碼的調(diào)控蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基因及其編碼的蛋白質(zhì)，特別是涉及一種水稻的器官形成調(diào)控基因及其編碼的蛋白質(zhì)。
本發(fā)明調(diào)控基因的cDNA全長2606個堿基，含一個完整的開放閱讀框架(ORF)，為序列表中的1號序列，命名為OsSET1?；蛑械拈_放閱讀框架為自第178個至第2355個共2178個堿基，其起始密碼子為ATG，終止密碼子為TAG。
本發(fā)明的另一個目的是提供上述基因所編碼的調(diào)控蛋白。
本發(fā)明的調(diào)控蛋白由725個氨基酸殘基組成，為序列表中的序列2。
含有上述序列1及其開放閱讀框架的多核苷酸的載體，以及用上述序列1及其開放閱讀框架的多核苷酸轉(zhuǎn)化的生物細(xì)胞，特別是具有器官形成調(diào)控能力的植物細(xì)胞，均是本發(fā)明需要保護的內(nèi)容。
目前，人們已從擬南芥中克隆到2個SET域基因，其中CFL的功能在于抑制一些轉(zhuǎn)錄因子基因(如AG、AP3)在特定器官及發(fā)育階段的表達(dá)，而MEDEA/FIE/FIS1基因則抑制中央細(xì)胞以及球形胚細(xì)胞的分裂，使得突變體胚乳在無受精的條件下也能夠發(fā)育、球形胚體積異常增大。這些資料表明，植物中的SET域基因具有類似動物同類基因的作用，通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合復(fù)合體的空間結(jié)構(gòu)來調(diào)控發(fā)育過程。比較OsSET1與CFL及MEDEA/FIE/FIS1所編碼蛋白質(zhì)的氨基酸序列表明，OsSET1的SET域的DNA序列與已知的其他生物中的有關(guān)基因序列有高度的一致性，各蛋白質(zhì)的氨基酸序列如下OsSET1SDVHGWGAFIKNPVNRNDYLGEYTGELISHREADKRGKIYDRANPSFLFDLNEQYVLDAYRKGDKLKFANHSSNPNCYAKVMLVAGGHRVGIYAKDRIEASEELFYDYCYGPELNEZA1SDVAGWGAFLKNSVSKNEYLGEYTGELISHHEADKRGKIYDRANSSFLFDLNDQYVLDAQRKGDKLKFANHSAKPNCYAKVMFVAGDHRVGIFANERIEASEELFYDYRYGPDQAMEASDVHGWGAFTWDSLKKNEYLGEYTGELITHDEANERGRIEDRIGSSYLFTLNDQLEIDARRKGNEFKFLNHSARPNCYAKLMIVRGDQRIGLFAERAIEEGEELFFDYCYGPEHACLFSDISGWGAFLKNSVSKHEYLGEYTGELISHKEADKRGKIYDRENCSFLFNLNDQFVLDAYRKGDKLKFANHSPEPNCYAKVIMVAGDHRVGIFAKERILAGEELFYDYRYEPDRAE(z)SDIAGWGIFLKEGAQKNEFISEYCGEIISQDEADRRGKVYDKYMCSFLFNLNNDFVVDATRKGNKIGFANHSINPNCYAKVMMVTGDHRIGIFAKRAIQPGEELFFDYRYGPTEQGenBank Acession No.EZA1AF100163；MEAAF060485；CLFY10580；E(z)U00810本發(fā)明調(diào)控基因OsSET1的發(fā)現(xiàn)，使通過基因調(diào)控來控制發(fā)育過程成為可能，對于培育高產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因水稻具有重要意義。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
圖2為本發(fā)明的基因克隆后的酶切圖譜二、水稻cDNA文庫的構(gòu)建1、總RNA的提取1)實驗材料液氮研磨后，分裝入1.5ml的Eppendorf管，每管50-100ng，并分別加入1mlTRIZOL試劑，振蕩。
2)室溫下保溫5分鐘后，每管加0.2ml氯仿，劇烈震蕩15秒，室溫放置2-3分鐘，4℃下12,000g離心15分鐘。
3)轉(zhuǎn)移上清到新管，加0.5ml異戊醇，混勻。室溫放置10分鐘后，4℃下12,000g離心10分鐘。
4)洗滌沉淀。每管加至少1ml 75％的乙醇后，振蕩，4℃下7,500g離心5分鐘。
5)重溶沉淀。待沉淀稍稍干燥后，每管用20ul DEPC處理過的ddH2O重溶沉淀。合并各管，存于-20℃。
6)1.2％甲醛變性膠電泳檢測。紫外觀察，有三條清晰的帶，分別為28S，18S和5S。
2、mRNA的分離1)取0.1-1mg總RNA，加水至500ul。65℃，保溫10分鐘。
2)分別加入3ul Biotinylated-Oligo(dT)和13ul 20xSSC，輕輕混勻后，冷卻至室溫。冷卻過程中，制備0.5xSSC和0.1xSSC。
3)重懸SA-PMPs后，磁力架捕獲磁珠，棄上清。再用0.5xSSC洗滌磁珠3次，每次用0.3ml。最后將磁珠重懸于0.1ml 0.5xSSC。
4)把2中冷卻到室溫的反應(yīng)體系加入到3中。室溫下放置10分鐘，每1-2分鐘顛倒一次。
5)用0.3ml的0.1xSSC重懸磁珠，磁力架吸附磁珠后，棄上清。重復(fù)洗滌3次。
6)用0.1mlDEPC處理過的水重懸磁珠(其上結(jié)合有mRNA)，用磁力架吸附磁珠后，收集上清。
7)用0.15ml水洗脫mRNA。
8)在mRNA洗脫液中加入25ul的3M，pH7.5的醋酸鈉和250ul的異丙醇，-20℃沉淀過夜。
9)12,000g離心10分鐘。
10)1ml的75％乙醇重懸沉淀，再次離心。
11)沉淀晾干后，用DEPC處理過的水溶解。
3、cDNA第一鏈的合成1)向1.5ml Eppendorf管中，依次加入5ul10x第一鏈緩沖液3ul第一鏈甲基核苷酸混合液2ul連接頭引物XulDEPC處理過的水1ulRNA酶抑制劑YulmRNA其中，X+Y＝37.5ul輕輕混勻后，室溫放置10分鐘。
2)加1.5ul的MMLV-RT(50U/ul)，混勻后，稍微離心。
3)37℃，保溫1小時。
4)保溫結(jié)束，置于冰上。
4、cDNA第二鏈的合成1)加下列試劑20ul10x-第二鏈緩沖液6ul 第二鏈dNTP混合液111ul 無菌水2ul RNaseH11ulDNA聚合酶I輕輕混勻后，稍微離心。
2)16℃，保溫2.5小時。
3)保溫完畢，置于冰上。
5、cDNA平末端化1)加23ul 平端化dNTP2ul Pfu DNA聚合酶迅速渦旋并稍微離心后，置于72℃下保溫30分鐘。
2)200ul苯酚氯仿抽提后，上清中加入等體積的氯仿再次抽提。
3)上清中加入20ul 3M NaAc
400ul100％乙醇振蕩后，置于-20℃過夜。
4)4℃，最大速離心1小時，棄上清。
5)500ul 70％的乙醇洗滌沉淀后，最大速離心2分鐘。
6)晾干沉淀后，用9ul EcoRI接頭溶解沉淀。4℃保溫至少30分鐘。
6、EcoRI接頭的連接1)加入1ul10x連接酶緩沖液1ul10mM rATP1ulT4 DNA連接酶混勻，8℃過夜或者4℃ 2天。
2)70℃水浴保溫30分鐘滅活連接酶。
3)離心2秒，冷卻到室溫。
7、磷酸化接頭1)加1ul10x連接酶緩沖液2ul10mM rATP6ul無菌水1ulT4多核苷酸激酶2)37℃，保溫30分鐘。
3)70℃，保溫30分鐘滅活激酶。
4)離心2秒，冷卻到室溫。
8、XhoI進(jìn)行消化1)加入28ul XhoI緩沖液3ulXhoI(40U/ul)2)37℃，保溫1.5小時。
3)加5ul的10xSTE緩沖液和125ul的無水乙醇。
4)-20℃，過夜。
5)4℃，最大速離心60分鐘，棄上清。
6)完全干燥沉淀后，用14ul的1xSTE溶解。
7)加3.5ul上柱染料
9、分級分離1)過柱，收集大于500bp的片段。
2)加等體積的酚∶氯仿(1∶1)，振蕩后，室溫最大速離心2分鐘。
3)轉(zhuǎn)移上清到新管后，加等體積氯仿，振蕩后，室溫最大速離心2分鐘。
4)轉(zhuǎn)移上清到新管，每管中加入2倍體積的無水乙醇。
5)-20℃，過夜。
6)4℃，最大速離心60分鐘，棄上清。
7)200ul 80％乙醇小心洗滌沉淀，室溫最大速離心2分鐘，抽干。
8)重溶于5ul無菌水，取1ul跑1％電泳。
10、cDNA和Uni-ZAPXR載體的連接1)依次加入2.5ulcDNA0.5ul10x連接酶緩沖液0.5ul10mM rATP(pH7.5)1.0ulUni-ZAPXR Vector4.5ul水0.5ulT4 DNA′連接酶(4U/ul)2)12℃，保溫過夜或4℃ 2天。
11、宿主菌的制備1)挑取涂有四環(huán)素平板上的E.coli XL1-blue MRF′單菌落，50mlLB培養(yǎng)基(含500ul的20％麥芽糖和500ul的1M硫酸鎂)中進(jìn)行過夜培養(yǎng)，同時進(jìn)行空對照培養(yǎng)。
2)搖菌結(jié)束后，空對照無菌生長。把接種管分為兩管后，500g離心10分鐘。棄上清，加12ml的10mM MgSO4，振蕩混勻后，置于4℃，待用。
3)12℃，保溫過夜結(jié)束，置于冰上。
12、包裝取出包裝提取物，冰上開始融化時，立即加入4ul連接產(chǎn)物，用槍輕吹兩下混勻包裝體，離心3-5秒后，置于22℃水浴100分鐘。
2)分別加500ul的SM緩沖液和20ul的氯仿，輕輕混勻。
3)離心沉淀碎片。
4)上清(525ul)貯存于4℃。
13、滴度的測定1)取1ul加入到200ul的宿主菌中，混勻后，從中取出20ul加到另一管200ul的宿主菌中。將此兩管同時置于37℃水浴中，保溫15分鐘讓噬菌體吸附到細(xì)胞上。
2)每管中分別加入3ml的NZY頂層瓊脂后，迅速鋪到NZY瓊脂平板上，放置10分鐘后，37℃倒置培養(yǎng)8小時。
3)分別計數(shù)兩平板的噬菌斑，計算滴度，為1.1×106，達(dá)到要求，進(jìn)一步擴增。
14、文庫的擴增1)取20個50ml的離心管，分別加入600ul的宿主菌，再分別加入21ul的包裝產(chǎn)物后，37℃水浴中保溫15分鐘，讓噬菌體吸附到細(xì)胞上。
2)各加6.5ml的NZY頂層瓊脂后，迅速鋪到NZY瓊脂平板上，放置10分鐘后37℃倒置培養(yǎng)8小時。
3)每個平板中加入10ml的SM緩沖液，4℃過夜。
4)收集平板上液體，加入氯仿至終濃度為5％(v/v)，混勻后室溫靜置15分鐘。
5)500g離心10分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新管，加氯仿到終濃度0.3％(v/v)，4℃保存。
6)擴增文庫滴度測定取兩個1.5ml的Eppendorf管，標(biāo)為1和2，并分別加1ml的SM緩沖液。取10ul的擴增文庫加入1中，混勻后取出10ul，再加入2中，混勻。從2中取2ul加入到200ul宿主菌中，混勻37℃水浴中保溫15分鐘。加入3ml的NZY頂層瓊脂后，迅速鋪到NZY瓊脂平板上，放置10分鐘后37℃倒置培養(yǎng)8小時。計數(shù)噬菌斑，計算滴度為2×1010。
三、水稻cDNA文庫的篩選1、測滴度A、準(zhǔn)備宿主菌1)劃線接菌，37℃培養(yǎng)過夜，宿主菌的活力對鋪板是至關(guān)重要的，每周繼代一次。侵染的頭一天下午重新劃線一次。四環(huán)素為脂溶性的，應(yīng)用70％乙醇溶解，且須避光保存于-20℃。
2)選取單克隆，接種于適當(dāng)體積的培養(yǎng)基中，加入終濃度為10mM MgSO4和0.2％(W/V)麥芽糖中。先用試管培養(yǎng)，長起來后轉(zhuǎn)接入錐型瓶中。
3)37℃ 200rpm搖床培養(yǎng)4-6小時，至OD600＝0.5-0.7，或30℃搖過夜。
4)500g離心10分鐘，收集細(xì)胞，棄上清。
5)用合適體積的無菌10mM MgSO4，輕輕重懸細(xì)胞。
6)用10mM MgSO4稀釋至OD600為0.5。
B、侵染和鋪板1)打開50℃水浴鍋，化好NZY頂層瓊脂，并每管3ml分裝入5ml的離心管中，水浴鍋保溫。將倒好的NZY瓊脂平板放入37℃溫箱平衡。
2)SM緩沖液稀釋噬菌體對于初級文庫，加1μl噬菌體或1μl的1∶10稀釋的噬菌體到2001μl OD600＝0.5的宿主菌中。
對于擴增文庫，用SM緩沖液稀釋以下梯度1∶10,000；1∶100,000；1∶1,000,000。加1μl稀釋液于200μl OD600＝0.5的宿主菌中。每個梯度做兩個平行。
3)將噬菌體與細(xì)菌37℃共培養(yǎng)15分鐘，進(jìn)行吸附，每5分鐘輕輕混勻。
4)將噬菌體與細(xì)菌吸出放入NZY頂層瓊脂(50℃)中，快速顛倒混勻。迅速倒入NZY瓊脂平板上，并迅速按住平板搖勻，使NZY頂層瓊脂均勻鋪開。放置10分鐘，37℃倒置培養(yǎng)。
若藍(lán)白斑顯色反應(yīng)，可將15μl 0.5M IPTG，50μl X-Gal(250mg/ml in DMF)提前加入NZY頂層瓊脂(50℃)，按上述步驟鋪板。
5)6-8小時后可見噬菌斑，但過夜培養(yǎng)才可見有顯色反應(yīng)。藍(lán)斑少于1X105pfu/μg，白斑多于藍(lán)斑10-100倍。
2、鋪板提前兩天倒35個9cm的NZY瓊脂平板，按每個30,000pfu/平板鋪板。
1)50℃水浴鍋，化好NZY頂層瓊脂，并每管3ml分裝入5ml離心管中，水浴鍋保溫。將倒好的NZY瓊脂平板放入37℃溫箱平衡30分鐘以上。
2)加30,000pfu/平板稀釋液于200μl OD600＝0.5的宿主。
3)將噬菌體與細(xì)菌37℃共培養(yǎng)15分鐘，進(jìn)行吸附，每5分鐘輕輕混勻。
4)將噬菌體與細(xì)菌吸出放入NZY頂層瓊脂(50℃)中，快速顛倒混勻，避免產(chǎn)生氣泡，快速倒入NZY瓊脂平板上，并迅速按住平板搖勻，使NZY頂層瓊脂均勻鋪開。放置10分鐘，37℃倒置培養(yǎng)。
5)37℃倒置培養(yǎng)8小時，斑直徑為0.2-0.3mm。
6)將平板放置4℃ 2小時以防止NZY頂層瓊脂沾到尼龍膜上。
3、轉(zhuǎn)膜1)用平頭鑷子進(jìn)行以下操作，所有試劑都在室溫。
2)在兩張膜上同時剪三個不對稱的缺口，分別編號，于板對應(yīng)(1-1，1-2，2-1，2-2)。將膜卷起形成一槽狀，沿平板直徑標(biāo)上兩點將槽底沿兩點放至平板的中心，用釋放膜讓它展開。在平板底部膜缺口對應(yīng)處做標(biāo)記，以定位。第一張膜轉(zhuǎn)移1分鐘，第二張膜2分鐘，膜完全浸透后開始記時。第二張膜按兩點及底部的缺口來定位。
3)用兩把平頭鑷子從膜邊緣輕輕將其揭起，放在干濾紙上。
4)揭完膜后，平板4℃保存?zhèn)溆谩?br> 5)在四個15cm平皿中分別放入變性液、中和液飽和的濾紙，緩沖液和干濾紙。每個處理都保證DNA朝上，且液體勿弄濕上面，將膜放在干濾紙上以去除底部多余的液體。
6)變性液中，2-5分鐘。
7)中和液中，3分鐘，重復(fù)這一步。
8)在2XSSC中充分洗滌30秒以除去蛋白殘留物。
9)放在干濾紙上去除多余水分。
10)紫外交聯(lián)(Stratalinker2400)11)將10XSSC潤濕的1-2張濾紙放在底板上，膜放在濾紙上，轉(zhuǎn)有核酸的那面朝上。
12)交聯(lián)25-50秒。
13取出膜。
14)將膜快速浸入ddH2O中去除殘留的鹽。
15)將膜放在兩張濾紙之間，外包錫箔，80℃烤干后，4℃保存。
4、探針合成及純化1)裝柱雜交前一天，將G50葡聚糖顆粒放入ddH2O中煮沸10分鐘后，溶漲過夜，再用TE平衡。用少許玻璃棉塞緊1ml注射器底部，放入5ml玻璃試管中，吸取TE裝至注射器刻度上沿1厘米處，再用200μl槍吸取凝膠，沿壁緩緩流下，裝至1厘米刻度處，用TE洗柱至少5ml，將玻璃試管加入比膠面高的TE，把柱子放入其中。
2)65℃水浴預(yù)熱20ml預(yù)雜交液。
3)將標(biāo)記反應(yīng)所需各組分冰上化開，在0.5ml離心管中，加入Tem平板 25ng(XμL)隨機引物2ulddH2O Yul其中，X+Y＝3ul Vt＝5ul4)95℃加熱3分鐘后，立即放入冰中，冷卻5分鐘。
5)加入2.5ul 10X緩沖液，2.5ul dNTP，9ul ddH20。將1ul Klenow放入新管中，與反應(yīng)管一起放入冰上。
6)加入5ulα-32P-dCTP，槍吸打混勻后，放入37℃水浴鍋中，溫育10分鐘。
7)加入25ul上柱溴酚藍(lán)。
8)從玻璃試管中取出柱子，待膠面上還剩有0.5厘米高的TE時，加入反應(yīng)物，待溴酚藍(lán)前沿進(jìn)膠后，加入200ul TE洗脫，繼續(xù)加入TE，每次200ul，收集溴酚藍(lán)之前的洗脫液(約800ul)。
5、預(yù)雜交A、把膜放入雜交瓶中1)剪取與雜交瓶等長的尼龍網(wǎng)，將三張膜放一排，與mesh放在一起，在盛有2XSSC的培養(yǎng)皿中潤濕。
2)使膜緊貼mesh，折疊后再放另三張膜，共卷十次，最后卷成小筒。
3)向雜交瓶中加入40ml 2XSSC，將小筒放入2XSSC溶液里。蓋緊雜交瓶后，沿著使小筒展開的方向慢慢轉(zhuǎn)動，使膜與mesh貼著瓶內(nèi)壁逐漸展開。
B、預(yù)雜交1)倒出雜交瓶中的2XSSC，加入40ml預(yù)熱到65℃的預(yù)雜交液。
2)與平衡雜交瓶一起對稱地放入雜交儀中，使雜交瓶按膜展開的方向旋轉(zhuǎn)。
3)65℃預(yù)雜交15-30分鐘。
6、雜交1)將純化后的探針放入沸水浴中，加熱5分鐘變性，冰上冷卻。
2)將變性后的探針加入到40ml預(yù)熱到65℃的預(yù)雜交液中，制成雜交液。
3)倒出雜交瓶中的預(yù)雜交液，倒入雜交液。
4)放入雜交儀中，65℃雜交12小時。
7、洗膜1)將雜交液小心地倒入廢液瓶中，將雜交儀溫度調(diào)至25℃。
2)加入100ml預(yù)熱的洗滌液，平衡瓶中加入等體積的水，室溫下洗5分鐘。
8、放射自顯影A、將雜交膜包上保鮮膜，接觸X光膠片，-80℃曝光過夜。
將帶核酸的那面保持平整，壓上磷屏，蓋好夾子，室溫曝光兩天。
B、剝離探針(Stripping)1)加熱洗液至沸騰。
2)在玻璃盤中，將雜交膜浸入洗液中，洗兩次，每次15分鐘。
3)繼續(xù)進(jìn)行第二次雜交的預(yù)雜交。
9、二輪篩選1)將同一塊板的兩張膜的自顯影結(jié)果進(jìn)行對比，在兩張膜上同一位置均有信號的為陽性斑。
2)在讀片機上放上自顯影照片及相應(yīng)的培養(yǎng)皿。
3)取出確定的陽性信號及周圍約0.1cm2的頂層瓊脂，放于250ul SM溶液中，加入50ul氯仿。
4)振蕩30秒，離心。
5)取上清適當(dāng)稀釋再次鋪板，密度約200pfu/平板。
6)重復(fù)前述的轉(zhuǎn)膜、雜交、放射自顯影及上述(該部分)的1-5步，可準(zhǔn)確得到陽性噬菌斑。
10、內(nèi)切除1)取出確定的陽性信號及周圍約0.1cm2的頂層瓊脂，放于500ul SM溶液中，加入20ul氯仿，振蕩。室溫放置1-2小時，或4℃過夜。
2)30℃下，分別過夜震蕩培養(yǎng)XL1-Blue MRF`和SOLR菌株。
3)1000g離心收集XL1-Blue MRF`和SOLR菌株，并用10mM MgSO4重懸細(xì)胞至OD600＝1.0。
4)在5ml離心管中，建立如下反應(yīng)體系200μlXL1-Blue MRF`250μl噬菌體1μl ExAssist helper噬菌體5)37℃，15分鐘。
6)加3ml的LB。37℃下震蕩培養(yǎng)2.5-3小時。
7)65-70℃保溫20分鐘后，1000g離心15分鐘。
8)收集上清。
9)分別取上清100μl和10μl，各加200μl SOLR菌液。
10)37℃ 15分鐘。
11)各取200μl涂氨芐板，37℃下過夜培養(yǎng)。
11、鑒定1)提取質(zhì)粒。
2)限制性酶切，得插入片段大小。
3)測序。
12、基因分離結(jié)果第一次篩選，得到一個陽性斑。取出該噬菌斑，鋪板進(jìn)行第二輪篩選。得到11個陽性斑，如

圖1所示，部分自顯影結(jié)果，取出其中的一個陽性斑，進(jìn)行單克隆內(nèi)切除，轉(zhuǎn)化為菌落后提取質(zhì)粒。酶切，得一略大于2.5KB的插入片段，如圖2所示，進(jìn)行測序，得到序列1的基因。
實施例2、OsSET1功能的驗證利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，構(gòu)建OsSET1基因過量表達(dá)的轉(zhuǎn)基因水稻。在OsSET1基因表達(dá)被抑制的情況下，水稻早期子房的細(xì)胞分裂能夠增加，從而導(dǎo)致子房體積的增加。OsSET1基因反義表達(dá)的轉(zhuǎn)基因水稻也有同樣的結(jié)果，證實OsSET1基因具有調(diào)控器官形成的功能。
序列表<160> 2<170><210> 1<211> 2606<212> DNA<213> Oryza Sativa<214> 稻屬栽培稻<220><223><400> 1gcacgaggcc tcgtgccgaa ttcggcacga gggaatctgg tcgccgggac gctcgtgctc60tcgagctctg gtggtagcgg cgcctcgcat aggaccgtcg tgcagcttgt gaagctgcct 120gtggtcgaca agattccgcc ctacaccacg tggatcttcc tggacaaaaa ccaaagaatg 180gccgatgatc agtcagttgg taggaggaga atttactacg acccaattgt caatgaggct 240ctgatctgca gtgaaagtga cgatgatgtt ccagagccag aggaagagaa acatgttttc 300acagaaggag aagatcagct aatatggaaa gctactcaag atcatgggtt aagtcgagag 360gttttaaatg tcctctgcca gtttgttgat gcaactcctt cagaaattga ggaaagatca 420gaagttcttt ttgagaaata tgagaagcag tctcaatctt cttacaagac agatttgcaa 480ctttttcttg acaagaccat ggatgtggct ttagattctt ttgataatct cttctgtcgg 540agatgtttgg tttttgattg ccgtctccat gggtgctccc agaacttggt attccctagc 600gagaagcaac catatggtca tgaacttgat gaaaacaaga gaccgtgtgg cgatcagtgc 660taccttcgaa ggagagaagt atatcaagat acgtgcaatg atgaccgaaa tgcttgtaca 720acatataata tggattcaag atcttcctca ctcaaagtta gtgctaccat attgtctgaa 780tcagaagatt caaacagaga tgaagataac atcaaatcca cttctattgt tgaaaccagc 840agatcaaaaa taactaattc tgaatatgct gacaaaagtg tgacaccacc tcctggagat 900gcttctgaaa ctgaaaatgt gtcccctgac atgcccctaa gaactttagg caggcgtaag 960atttcaaagc atgcctccaa gtctaacgat cattcacctg ataaaaggca gaagatatat 1020agctcaccgt ttccttttgc aatgagtgta ctgaacaagc aatctgttcc agaaattggt 1080gagacatgtc cagattccat agaatctgca gttgatcaac ttccaagtct ggatgaccct 1140aacaagaaaa tttctaccaa agatatgtgt gctggaagca caactaacac tactgaaaat 1200acattacgag ataataataa taatttgttc atctccaaca aggagcactc tatttctcat 1260tggagtgctt tagagagaga tttgtacttg aagggaattg agatatttgg gaaaaacagt 1320tgtctcatag ctagaaacct attgtctggc ctgaagacct gcatggaagt ggccagctac1380atgtacaaca atggtgcggc aatggcaaag agacctctat ctggtaaatc cattttaggt1440gactttgcag aggctgaaca aggttacatg gagcaagatt tggtggcaag gacaagaatc1500tgtcgtcgta agggccgagc tcgaaagctc aaatacactt ggaagtctgc agggcatcca1560actgtaagaa aaagaatcgg tgatggaaag caatggtaca ctcagtataa cccatgtggg1620tgtcagcaaa tgtgtggcaa agattgcgcc 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175 180Thr Thr Tyr Asn Met Asp Ser Arg Ser Ser Ser Leu Lys Val Ser185 190 195Ala Thr Ile Leu Ser Glu Ser Glu Asp Ser Asn Arg Asp Glu Asp200 205 210Asn Ile Lys Ser Thr Ser Ile Val Glu Thr Ser Arg Ser Lys Ile215 220 225Thr Asn Ser Glu Tyr Ala Asp Lys Ser Val Thr Pro Pro Pro Gly230 235 240Asp Ala Ser Glu Thr Glu Asn Val Ser Pro Asp Met Pro Leu Arg215 250 255Thr Leu Gly Arg Arg Lys Ile Ser Lys His Ala Ser Lys Ser Asn260 265 270Asp His Ser Pro Asp Lys Arg Gln Lys Ile Tyr Ser Ser Pro Phe275 280 285Pro Phe Ala Met Ser Val Leu Asn Lys Gln Ser Val Pro Glu Ile290 295 300Gly Glu Thr Cys Pro Asp Ser Ile Glu Ser Ala Val Asp Gln Leu305 310 315Pro Ser Leu Asp Asp Pro Asn Lys Lys Ile Ser Thr Lys Asp Met320 325 325Cys Ala Gly Ser Thr Thr Asn Thr Thr Glu Asn Thr Leu Arg Asp335 340 345Asn Asn Asn Asn Leu Phe Ile Ser Asn Lys Glu His Ser Ile Ser350 355 360His Trp Ser Ala Leu Glu Arg Asp Leu Tyr Leu Lys Gly Ile Glu365 370 375Ile Phe Gly Lys Asn Ser Cys Leu Ile Ala Arg Asn Leu Leu Ser380 385 390Gly Leu Lys Thr Cys Met Glu Val Ala Ser Tyr Met Tyr Asn Asn395 400 405Gly Ala Ala Met Ala Lys Arg Pro Leu Ser Gly Lys Ser Ile Leu410 415420Gly Asp Phe Ala Glu Ala Glu Gln Gly Tyr Met Glu Gln Asp Leu425 430 435Val Ala Arg Thr Arg Ile Cys Arg Arg Lys Gly Arg Ala Arg Lys440 445 450Leu Lys Tyr Thr Trp Lys Ser Ala Gly His Pro Thr Val Arg Lys455 46 465Arg Ile Gly Asp Gly Lys Gln Trp Tyr Thr Gln Tyr Asn Pro Cys470 475 480Gly Cys Gln Gln Met Cys Gly Lys Asp Cys Ala Cys Val Glu Asn485 490 495Gly Thr Cys Cys Glu Lys Tyr Cys Gly Cys Ser Lys Ser Cys Lys500 505 510Asn Arg Phe Arg Gly Cys His Cys Ala Lys Ser Gln Cys Arg Ser515 520 525Arg Gln Cys Pro Cys Phe Ala Ala Ser Arg Glu Cys Asp Pro Asp530 535 540Val Cys Arg Asn Cys Trp Val Ser Cys Gly Asp Gly Ser Leu Gly545 550 555Glu Pro Leu Ala Arg Gly Asp Gly Tyr Gln Cys Gly Asn Met Lys560 565 570Leu Leu Leu Lys Gln Gln Gln Arg Ile Leu Leu Gly Lys Ser Asp575 580 585Val Ala Gly Trp Gly Ala Phe Ile Lys Asn Pro Val Asn Arg Asn590 595600Asp Tyr Leu Gly Glu Tyr Thr Gly Glu Leu Ile Ser His Arg Glu605 610615Ala Asp Lys Arg Gly Lys Ile Tyr Asp Arg Ala Asn Ser Ser Phe620 625630Leu Phe Asp Leu Asn Glu Gln Tyr Val Leu Asp Ala Tyr Arg Lys635 640645Gly Asp Lys Leu Lys Phe Ala Asn His Ser Ser Asn Pro Asn Cys650 655660Tyr Ala Lys Val Met Leu Val Ala Gly Asp His Arg Val Gly Ile665 670675Tyr Ala Lys Asp Arg Ile Glu Ala Ser Glu Glu Leu Phe Tyr Asp680 685690Tyr Arg Tyr Gly Pro Asp Gln Ala Pro Ala Trp Ala Arg Arg Pro695 700705Glu Gly Ser Lys Lys Asp Glu Ala Ser Val Ser His His Arg Ala710 715720His Lys Val Ala Arg72權(quán)利要求
1.序列1的基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因其特征在于它的開放讀碼框為自第178個至第2355個共2178個堿基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因其特征在于所述開放讀碼框的起始密碼子為ATG。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基因其特征在于所述開放讀碼框的終止密碼子為TAG。
5.序列2的蛋白質(zhì)。
6.含有權(quán)利要求1或2的多核苷酸的載體。
7.用權(quán)利要求1或2的多核苷酸轉(zhuǎn)化的生物細(xì)胞。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的生物細(xì)胞，其特征在于它是具有器官形成調(diào)控能力的植物細(xì)胞。
全文摘要
本發(fā)明基因的cDNA全長2606個堿基含一個完整的開放閱讀框架為序列表中的1號序列命名為OsSET1?；蛑械腟ET域為自第1927個至第2271個共345個堿基。本發(fā)明的調(diào)控蛋白由725個氨基酸殘基組成為序列表中的序列2。本發(fā)明調(diào)控基因OsSET1編碼的蛋白通過調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子與DNA結(jié)合復(fù)合體的空間結(jié)構(gòu)來調(diào)控發(fā)育過程。本發(fā)明水稻器官形成調(diào)控基因OsSET1的發(fā)現(xiàn)使通過基因調(diào)控來控制器官形成過程成為可能對于培育高產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因水稻具有重要意義。
文檔編號C12N15/29GK1407107SQ0114207
公開日2003年4月2日 申請日期2001年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月10日
發(fā)明者梁允寬, 白書農(nóng) 申請人:北京大學(xué)