專利名稱：利用人cyld基因?qū)δ[瘤進行診斷、治療及藥物開發(fā)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及利用人CYLD基因及其編碼產(chǎn)物診斷和治療腫瘤尤其是毛發(fā)上皮瘤的方法，以及含有CYLD基因和/或蛋白的藥物組合物。
背景技術(shù)：
毛發(fā)上皮瘤是一種皮膚腫瘤。其通常在青春期前發(fā)病，好發(fā)于面部，尤其是鼻唇溝及上唇，背部，頭皮，頸部，軀干，四肢亦可受累。其皮損呈半球形或圓錐形，質(zhì)地堅實，半透明，黃色或淡紅色，有時較大的皮損表明可見毛細血管擴張。毛發(fā)上皮瘤不僅影響美容，因為其使背部，頭皮，頸部，軀干，四肢受累，故嚴重者還會在生活中遇到困難。該病為常染色體顯性遺傳疾病，其發(fā)病的機理目前還不清楚。對于該疾病目前尚無滿意的治療方法。
然而，迄今為止，尚沒有充分揭示毛發(fā)上皮瘤的確切原因，也沒有人揭示出毛發(fā)上皮瘤與某種蛋白存在直接的相關(guān)性。此外，本領(lǐng)域還缺乏早期診斷毛發(fā)上皮瘤疾病的有效方法以及非手術(shù)治療毛發(fā)上皮瘤的有效手段。
CYLD是一種已知的蛋白，其基本信息如下英文Gene fromHomo sapiens chromosome 16 working draft sequencesegment.
NCBIContig NT_030834GENEGene fromHomo sapiens chromosome 16 working draft sequencesegment.gi|17488444243550-308161CYLD的DNA序列如SEQ ID NO1所示，ORF位于第392-3262位，編碼一個全長956個氨基酸的蛋白質(zhì)(SEQ ID NO2)。CYLD的其他信息可以從Http//www.ncbi.nlm.nih.gov獲得。
CYLD基因曾被報道其外顯子的突變導(dǎo)致了圓柱瘤的發(fā)生，但國際上尚無任何文章報道CYLD基因和毛發(fā)上皮瘤的關(guān)系。毛發(fā)上皮瘤的遺傳機理信息可從NCBI的OMIM獲得。
因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)新的診斷和治療毛發(fā)上皮瘤的有效方法，以及相關(guān)的治療藥物，診斷技術(shù)和試劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的就是提供一種新的診斷(尤其是早期診斷)腫瘤尤其是毛發(fā)上皮瘤的方法及檢測試劑盒。
本發(fā)明的另一目的是提供一種新的治療腫瘤尤其是毛發(fā)上皮瘤的方法。
本發(fā)明的再一目的是提供一種治療腫瘤尤其是毛發(fā)上皮瘤的藥物組合物。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種對個體的腫瘤易感性進行診斷的方法，它包括步驟檢測該個體的CYLD基因、轉(zhuǎn)錄本和/或蛋白，并與正常的CYLD基因、轉(zhuǎn)錄本和/或蛋白相比較，存在差異就表明該個體患腫瘤的可能性高于正常人群。
較佳地，被檢測的是CYLD的基因或轉(zhuǎn)錄本，并與正常CYLD核苷酸序列比較差異。更佳地，所述的腫瘤是毛發(fā)上皮瘤，且所述的差異選自SEQ ID NO1中第1853位A缺失。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種治療腫瘤的方法，它包括步驟給需要所述治療的病人施用安全有效量的正常CYLD蛋白。較佳地，CYLD蛋白被局部施用于病灶處。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種CYLD蛋白在制備藥物組合物方面的的用途以及相應(yīng)的藥物組合物，它含有安全有效量的人CYLD蛋白以及藥學(xué)上可接受的載體。較佳地，它是藥膏。
在本發(fā)明的第四方面，提供了一種檢測腫瘤的試劑盒，它包括特異性擴增CYLD基因或轉(zhuǎn)錄本的引物。較佳地，它還含有與突變部位結(jié)合的探針和/或識別突變位點的酶。
本發(fā)明的其它方面由于本文的技術(shù)的公開，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。


圖1顯示了一常染色體顯性遺傳的毛發(fā)上皮瘤家系的譜系圖。
圖2為典型的患者的臉部照片。
圖3為患者的活檢病理照片。
圖4顯示了CYLD基因中的序列變化，其中SEQ ID NO1的第1853位發(fā)生了堿基的缺失，從而導(dǎo)致了移碼突變，使其編碼的蛋白縮短。
具體實施例方式
本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，首次發(fā)現(xiàn)和證明了CYLD與毛發(fā)上皮瘤密切相關(guān)，而且發(fā)現(xiàn)了它的新功能CYLD的改變將直接導(dǎo)致毛發(fā)上皮瘤。進一步的研究還暗示，CYLD是一抑癌基因，其突變會導(dǎo)致多種腫瘤的發(fā)生。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
通過對一常染色體顯性遺傳的毛發(fā)上皮瘤家系進行遺傳連鎖分析、候選基因篩選以及大規(guī)模測序，已證實該家族中的所有病人在CYLD基因的第10號外顯子的1853位發(fā)生了堿基的缺失，從而導(dǎo)致了移碼突變，使其氨基酸編碼縮短，蛋白翻譯異常，最終導(dǎo)致了毛發(fā)上皮瘤的發(fā)生。正常的CYLD編碼全長956個氨基酸的蛋白(SEQ ID NO2)，如果在1853位處發(fā)生了堿基A的缺失則只編碼全長為496個氨基酸的蛋白(SEQ ID NO5)和部分非正常的小肽。
CYLD的突變導(dǎo)致了人類個體表現(xiàn)出腫瘤，尤其是毛發(fā)上皮瘤。我們的研究表明，正常的CYLD的存在是皮膚正常生理狀態(tài)的關(guān)鍵，同時CYLD的突變還會導(dǎo)致其他許多腫瘤。
鑒于人類CYLD的變異是導(dǎo)致毛發(fā)上皮瘤等腫瘤的直接原因之一。因此，可根據(jù)此基因及其表達產(chǎn)物設(shè)計的藥物和診斷治療技術(shù)，可用于診斷和治療人類的腫瘤，其中包括但并不限于毛發(fā)上皮瘤、小汗腺瘤、黑色素瘤、圓柱瘤、胃癌、肝癌等。
本發(fā)明的人CYLD核苷酸全長序列或其片段通常可以用PCR擴增法、重組法或人工合成的方法獲得。對于PCR擴增法，可根據(jù)CYLD的有關(guān)核苷酸序列，尤其是開放閱讀框序列來設(shè)計引物，并用市售的cDNA庫或按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法所制備的cDNA庫作為模板，擴增而得有關(guān)序列。當(dāng)序列較長時，常常需要進行兩次或多次PCR擴增，然后再將各次擴增出的片段按正確次序拼接在一起。
一旦獲得了有關(guān)的序列，就可以用重組法來大批量地獲得有關(guān)序列。這通常是將其克隆入載體，再轉(zhuǎn)入細胞，然后通過常規(guī)方法從增殖后的宿主細胞中分離得到有關(guān)序列。
此外，還可用人工合成的方法來合成有關(guān)序列，尤其是片段長度較短時。通常，通過先合成多個小片段，然后再進行連接可獲得序列很長的片段。
將CYLD編碼序列插入合適的表達載體，再轉(zhuǎn)入宿主細胞，就可以分離出CYLD蛋白。
基于本發(fā)明的新風(fēng)險，CYLD蛋白或多肽有多方面的新用途。這些用途包括(但不限于)直接做為藥物治療CYLD蛋白功能低下或喪失所致的疾病(如毛發(fā)上皮瘤等腫瘤)，和用于篩選促進CYLD蛋白功能的物質(zhì)，如抗體、多肽或其它配體。用表達的重組人CYLD蛋白篩選多肽庫可用于尋找有治療價值的能刺激人CYLD蛋白功能的多肽分子。
另一方面，本發(fā)明還包括對人CYLD DNA或是其片段編碼的多肽具有特異性的多克隆抗體和單克隆抗體，尤其是單克隆抗體。這里，“特異性”是指抗體能結(jié)合于人CYLD基因產(chǎn)物或片段。較佳地，指那些能與人CYLD基因產(chǎn)物或片段結(jié)合但不識別和結(jié)合于其它非相關(guān)抗原分子的抗體。本發(fā)明中抗體包括那些能夠結(jié)合并抑制人CYLD蛋白的分子，也包括那些并不影響人CYLD蛋白功能的抗體。
本發(fā)明不僅包括完整的單克隆或多克隆抗體，而且還包括具有免疫活性的抗體片段，如Fab’或(Fab)2片段；抗體重鏈；抗體輕鏈；遺傳工程改造的單鏈Fv分子；或嵌合抗體。
本發(fā)明的抗體可以通過本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員已知的各種技術(shù)進行制備。例如，純化的人CYLD基因產(chǎn)物或者其具有抗原性的片段，可被施用于動物以誘導(dǎo)多克隆抗體的產(chǎn)生。與之相似的，表達人CYLD蛋白或其具有抗原性的片段的細胞可用來免疫動物來生產(chǎn)抗體。多種佐劑可用于增強免疫反應(yīng)，包括但不限于弗氏佐劑等。
本發(fā)明的抗體也可以是單克隆抗體。此類單克隆抗體可以利用雜交瘤技術(shù)來制備。本發(fā)明的抗體包括能阻斷人CYLD蛋白功能的抗體以及不影響人CYLD蛋白功能的抗體。本發(fā)明的各類抗體可以利用人CYLD基因產(chǎn)物的片段或功能區(qū)，通過常規(guī)免疫技術(shù)獲得。這些片段或功能區(qū)可以利用重組方法制備或利用多肽合成儀合成。與人CYLD基因產(chǎn)物的未修飾形式結(jié)合的抗體可以用原核細胞(例如E.Coli)中生產(chǎn)的基因產(chǎn)物來免疫動物而產(chǎn)生；與翻譯后修飾形式結(jié)合的抗體(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核細胞(例如酵母或昆蟲細胞)中產(chǎn)生的基因產(chǎn)物來免疫動物而獲得。
抗人CYLD蛋白的抗體可用于免疫組織化學(xué)技術(shù)中，檢測活檢標本中的人CYLD蛋白。一種優(yōu)選的抗CYLD抗體是不識別正常CYLD但識別突變CYLD的抗體(由于突變的CYLD所編碼的蛋白比正常的CYLD所編碼的蛋白小得多，故可設(shè)計只識別異常小蛋白的抗體)，或者識別正常CYLD但不識別突變CYLD的抗體。利用該抗體對正常和異常CYLD蛋白的特異性差異，可以方便地進行蛋白質(zhì)水平的毛發(fā)上皮瘤易感性檢測。
利用本發(fā)明CYLD蛋白，通過各種常規(guī)篩選方法，可篩選出與CYLD蛋白發(fā)生相互作用的物質(zhì)，如抑制劑、激動劑或拮抗劑等。
本發(fā)明CYLD蛋白及其抗體、抑制劑、激動劑、拮抗劑等，當(dāng)在治療上進行施用(給藥)時，可提供不同的效果。通常，可將這些物質(zhì)配制于無毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中pH通常約為5-8，較佳地pH約為6-8，盡管pH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變化。配制好的藥物組合物可以通過常規(guī)途徑進行給藥，其中包括(但并不限于)肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、或局部給藥(包括病灶處)。較佳地是局部給藥。
正常的CYLD多肽可直接用于疾病治療，例如，用于毛發(fā)上皮瘤方面的治療。在使用本發(fā)明CYLD蛋白時，還可同時使用其他治療腫瘤的藥劑。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量的本發(fā)明CYLD蛋白以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括(但并不限于)鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明的藥物組合物可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規(guī)方法進行制備。諸如藥膏、片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過常規(guī)方法進行制備。藥物組合物如藥膏、針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無菌條件下制造?；钚猿煞值慕o藥量是治療有效量，例如每天約0.1微克/千克體重-約10毫克/千克體重。此外，本發(fā)明的多肽還可與其他治療劑一起使用。
使用藥物組合物時，是將安全有效量的CYLD蛋白或其拮抗劑、激動劑施用于哺乳動物，其中該安全有效量通常至少約0.1微克/千克體重，而且在大多數(shù)情況下不超過約10毫克/千克體重，較佳地該劑量是約0.1微克/千克體重-約100微克/千克體重。當(dāng)然，具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。
人CYLD蛋白的多聚核苷酸也可用于多種治療目的?；蛑委熂夹g(shù)可用于治療由于CYLD蛋白的無表達或異常/無活性的CYLD蛋白的表達所致的細胞增殖、發(fā)育或代謝異常。構(gòu)建攜帶CYLD基因的重組病毒載體的方法可見于已有文獻(Sambrook，et al.)。另外重組人CYLD基因可包裝到脂質(zhì)體中，然后再轉(zhuǎn)移至細胞內(nèi)。
多聚核苷酸導(dǎo)入組織或細胞內(nèi)的方法包括將多聚核苷酸直接注入到體內(nèi)組織中；或在體外通過載體(如病毒、噬菌體或質(zhì)粒等)先將多聚核苷酸導(dǎo)入細胞中，再將細胞移植到體內(nèi)等。
本發(fā)明還涉及定量和定位檢測人CYLD蛋白水平的診斷試驗方法。這些試驗是本領(lǐng)域所熟知的，且包括FISH測定和放射免疫測定。
一種檢測檢測樣品中是否存在CYLD蛋白的方法是利用CYLD蛋白的特異性抗體進行檢測，它包括將樣品與CYLD蛋白特異性抗體接觸；觀察是否形成抗體復(fù)合物，形成了抗體復(fù)合物就表示樣品中存在CYLD蛋白。
CYLD蛋白的多聚核苷酸可用于CYLD蛋白相關(guān)疾病的診斷和治療。在診斷方面，CYLD蛋白的多聚核苷酸可用于檢測CYLD蛋白的表達與否或在疾病狀態(tài)下CYLD蛋白的異常表達。如CYLD DNA序列可用于對活檢標本的雜交以判斷CYLD蛋白的表達異常。雜交技術(shù)包括Southern印跡法，Northern印跡法、原位雜交等。這些技術(shù)方法都是公開的成熟技術(shù)，相關(guān)的試劑盒都可從商業(yè)途徑得到。本發(fā)明的多核苷酸的一部分或全部可作為探針固定在微陣列(microarray)或DNA芯片(又稱為“基因芯片”)上，用于分析組織中基因的差異表達分析和基因診斷。用CYLD蛋白特異的引物進行RNA-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)體外擴增也可檢測CYLD蛋白的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。
本發(fā)明還提供了一種檢測人CYLD基因表達是否異常的方法，它包括步驟(a)確定在人CYLD基因的SEQ ID NO1所示序列的第1853位的核苷酸；和(b)檢測在所述位置是否存在堿基A缺失。
檢測CYLD基因的突變也可用于診斷毛發(fā)上皮瘤。檢測可以針對cDNA，也可針對基因組DNA。CYLD蛋白突變的形式包括與正常野生型CYLD DNA序列相比的點突變、易位、缺失、重組和其它任何異常等?？捎靡延械募夹g(shù)如Southern印跡法、DNA序列分析、PCR和原位雜交檢測突變。另外，突變有可能影響蛋白的表達，因此用Northern印跡法、Western印跡法可間接判斷基因有無突變。
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1常染色體顯性毛發(fā)上皮瘤家系的確定1.1對象一個毛發(fā)上皮瘤大家系，共4代，53人。其中毛發(fā)上皮瘤患者共有20人(圖1) 。
實施例2確定CYLD突變是導(dǎo)致毛發(fā)上皮瘤的直接原因2.1遺傳連鎖分析利用微衛(wèi)星標記進行該家系的連鎖分析。共利用384對微衛(wèi)星引物(RESEARCH GENETICS)對整個基因組進行掃描，將該家系毛發(fā)上皮瘤基因定位于人的第16號染色體上。進一步合成引物將致病基因定位到微衛(wèi)星標記d16s753和d16s3253之間的14(cM)厘摩的遺傳距離內(nèi)，如圖1所示。此物理距離大約有1千4百萬個堿基對，1百多個基因。

2.2候選基因用DNA抽提試劑盒(QIAGEN公司)從家族血樣中抽提基因組DNA作為模板。
對候選基因，設(shè)計PCR引物，PCR擴增出候選基因，然后進行測序。經(jīng)過對候選基因的測序檢測，發(fā)現(xiàn)CYLD與該家系的毛發(fā)上皮瘤密切相關(guān)。
對CYLD設(shè)計了34對引物進行測序。其中，以下列一對引物擴增出的PCR產(chǎn)物進行測序時，發(fā)現(xiàn)該毛發(fā)上皮瘤家系各病人的中CYLD對比該家族的正常人發(fā)現(xiàn)該基因在第10號外顯子的1853位發(fā)生了堿基的缺失，即SEQ ID NO1的第1853位發(fā)生了堿基A的缺失，從而導(dǎo)致了移碼突變，使其編碼的蛋白縮短為496個氨基酸。該突變最終導(dǎo)致了毛發(fā)上皮瘤的發(fā)生(見圖4)。

此外，為了驗證該位點對毛發(fā)上皮瘤的發(fā)生的特異性，隨機檢查了100個沒有親源關(guān)系的人在該位點的情況，沒有發(fā)現(xiàn)任何突變。這說明該位點的突變并非人群中的多態(tài)性所致，而是毛發(fā)上皮瘤的特異性突變位點。因此表明了CYLD與人類的毛發(fā)上皮瘤的發(fā)生密切相關(guān)，此基因及其編碼產(chǎn)物可對人類的毛發(fā)上皮瘤起重要作用。
實施例3毛發(fā)上皮瘤檢測試劑盒的制備制備一試劑盒，它含有名稱 序列(5 ú3i) 編號濃度正向引物 tctgcagtga tagcttttct gacaSEQ ID NO3干粉2OD反向引物 cagtctcacc aagatgccca atacSEQ ID NO4干粉2ODPCR反應(yīng)液含Taq酶dNTP鎂離子PCR反應(yīng)緩沖液PCR產(chǎn)物純化盒含小量PCR產(chǎn)物純化的溶液，DNA吸附柱測序反應(yīng)液 含Big Dye
抽取待檢測病人的血液3ml，使用常規(guī)方法(或使用特定的試劑盒)從血液中提取DNA。將毛發(fā)上皮瘤檢測試劑盒中的PCR引物稀釋到1μmol/μl，以所提取的DNA為模板與所提供的引物進行PCR反應(yīng)。使用檢測試劑盒所提供的PRC產(chǎn)物純化盒對PCR產(chǎn)物進行純化。將純化的產(chǎn)物進行測序反應(yīng)后直接進行測序。觀測測序所得到的序列是否有移碼突變。
實施例4藥物組合物的制備將CYLD所編碼的正常蛋白與普通的藥膏材料按特定的比例混合，制成含CYLD所編碼的正常蛋白的藥膏。使用時，將藥膏施于患處，患處CYLD所編碼的正常蛋白得到補充，使病人由于缺乏CYLD所編碼的正常蛋白而引起的皮膚病變得以減輕，直至最后的消失。或?qū)YLD所編碼的正常蛋白制成針劑，使用時對患處進行皮下注射，直接補充病灶處的CYLD編碼蛋白，使病人的皮膚的生理狀況得到改善，從而達到治療的目的。
在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
序列表<110>中國科學(xué)院上海生物工程研究中心<120>利用人CYLD基因?qū)δ[瘤進行診斷、治療及藥物開發(fā)的方法<130>020614<160>5<170>PatentIn version 3.0<210>1<211>5371<212>DNA<213>智人(Homo sapiens)<220><221>CDS<222>(392)..(3262)<400>1gggggcgggc ccaggtagca ggtttggctg cgcgggggcc gcgcgtcgga gtttccccct 60ttctagggtg aggatggttc tacacagcca cccggagttc cttagttgaa aggtgcgccc120tgctgtgaca gaatgtggta attgtaatct ttaacatttt catgtaaaac atatttcctg180atcatctttc cattgtcttc atggaaaatt gataaatatt tgtgccttcc aactctcgtc240ttggttgaat gacttcatct taatacaaca tggacaccac gttgctgaaa acatgctttg300ggactgccac tgaatttatc ttttgcggtt ttatgacaaa gttattagta gtttcccttt360tttgaattag tattttgaag ttaatatcac a atg agt tca ggc tta tgg agc 412Met Ser Ser Gly Leu Trp Ser1 5caa gaa aaa gtc act tca ccc tac tgg gaa gag cgg att ttt tac ttg 460Gln Glu Lys Val Thr Ser Pro Tyr Trp Glu Glu Arg Ile Phe Tyr Leu10 15 20ctt ctt caa gaa tgc agc gtt aca gac aaa caa aca caa aag ctc ctt 508Leu Leu Gln Glu Cys Ser Val Thr Asp Lys Gln Thr Gln Lys Leu Leu25 30 35aaa gta ccg aag gga agt ata 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1.一種對個體的腫瘤易感性進行診斷的方法，其特征在于，它包括步驟檢測該個體的CYLD基因、轉(zhuǎn)錄本和/或蛋白，并與正常的CYLD基因、轉(zhuǎn)錄本和/或蛋白相比較，存在差異就表明該個體患腫瘤的可能性高于正常人群。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，檢測的是CYLD的基因或轉(zhuǎn)錄本，并與正常CYLD核苷酸序列比較差異。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的腫瘤是毛發(fā)上皮瘤，且所述的差異選自SEQ ID NO1中第1853位A缺失。
4.一種治療腫瘤的方法，其特征在于，包括步驟給需要所述治療的病人施用安全有效量的正常CYLD蛋白。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述的CYLD蛋白被局部施用于病灶處。
6.一種CYLD蛋白的用途，其特征在于，用于制備治療腫瘤的藥物組合物。
7.如權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于，所述藥物組合物是藥膏或針劑。
8.一種檢測腫瘤的試劑盒，其特征在于，它包括特異性擴增CYLD基因或轉(zhuǎn)錄本的引物。
9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，它還含有選自下組的試劑(a)與突變部位結(jié)合的探針；(b)識別突變位點的限制性內(nèi)切酶。
10.如權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述的突變選自SEQ ID NO1中第1853位A缺失。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種診斷腫瘤尤其是毛發(fā)上皮瘤的方法，它包括檢測個體的CYLD基因、轉(zhuǎn)錄本和/或蛋白與正常相比是否存在變異，存在變異就表明該個體患腫瘤的可能性大于正常人群。本發(fā)明還公開了相應(yīng)的檢測試劑盒，以及治療腫瘤的方法和藥物組合物。
文檔編號C12Q1/68GK1438320SQ0211085
公開日2003年8月27日 申請日期2002年2月10日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月10日
發(fā)明者孔祥銀, 鄭廣勇, 黃偉 申請人:中國科學(xué)院上海生物工程研究中心