專利名稱：神經(jīng)干細(xì)胞分化相關(guān)基因及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于發(fā)育生物學(xué)，涉及神經(jīng)干細(xì)胞分化發(fā)育的基因和遺傳工程，以及利用這些基因及其產(chǎn)物作為干預(yù)干細(xì)胞分化發(fā)育的靶標(biāo)。
神經(jīng)干細(xì)胞是指具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力，并能進(jìn)行自我更新、足以提供腦組織細(xì)胞的可再生細(xì)胞。在哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育，保持中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能具有重要作用。神經(jīng)干細(xì)胞分化是一個極為復(fù)雜的過程。影響神經(jīng)干細(xì)胞分化的因子很多，如CNTF能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化為膠質(zhì)細(xì)胞，而BDNF則促進(jìn)分化為神經(jīng)元。到目前為止，有哪些基因、有多少基因參與神經(jīng)干細(xì)胞分化的過程還無法知曉。
對神經(jīng)干細(xì)胞分化特異基因表達(dá)的研究，為進(jìn)一步探討神經(jīng)元的發(fā)生、分化和多種神經(jīng)疾病的診治提供了新的機遇。神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)育、分化受控于相關(guān)基因的表達(dá)，從全基因組層面研究神經(jīng)干細(xì)胞分化特異基因表達(dá)的相互關(guān)系有助于形成對神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育、分化的整體認(rèn)識，進(jìn)而加深對這一過程分子機制的研究。
本發(fā)明包括下列步驟尋找神經(jīng)干細(xì)胞分化發(fā)育過程中差異表達(dá)的基因；研究這些基因所在的特定代謝途徑；異源表達(dá)這些基因；利用這些基因的及其產(chǎn)物為靶標(biāo)，干預(yù)神經(jīng)干細(xì)胞的分化發(fā)育。具體的包括以下的方案1.神經(jīng)干細(xì)胞分離和培養(yǎng)從孕鼠(14天)紋狀體分離神經(jīng)干細(xì)胞，置于培養(yǎng)液中。[DMEM/F12(1∶1，V∶V)，谷氨酰胺(2mmol/L)，青霉素(100U/mL)，B27(2％)]，細(xì)胞種植濃度為3×105mL，37℃，5％CO2培養(yǎng)。2.RNA分離用SK311Trizol RNA isolation Kit分離細(xì)胞→Trizol 1mL→氯仿200uL→振蕩30s→4℃，12000g離心5分鐘→加入等體積異丙醇→70％乙醇洗二次，干燥→0。1％DEPC水，3倍體積無水乙醇，-70℃保存。3.微距陣分析總RNA→cDNA→與人類基因(14000)雜交分析。
圖象分析軟件Array Guage software；基因功能分析PubMed(NCBI)，Drosophila BanR。4.新功能基因的克隆獲得差異表達(dá)基因克隆至T-vector及表達(dá)載體。
通過與人類14000個基因雜交分析，共有1406個基因差異表達(dá)，148個基因呈現(xiàn)2倍以上差異，60個基因呈現(xiàn)3倍以上差異，新功能序列46個。
b)圖象分析軟件Array Guage software；c)基因功能分析PubMed(NCBI)，Drosophila BanR。部分差異表達(dá)的基因列表基因登錄號差異表達(dá)的倍數(shù)AL046825 2.43J029662.43BF258548 4.42U7929112.40D236602.38NM001660 2.37AW014.22 5.34AB032951 2.31AI698743 6.34AF037439 2.26S781872.2權(quán)利要求
1.一組與神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育有關(guān)的基因，包括SEQ ID1(A1046825)、2(J02966)、3(BE258548)、4(U79291)、5(D23660)、6(NM001660)、7(AW014022)、8(AB032951)、9(AI698743)、10(AF037439)、11(S78187)。
2.含有序列SEQ NO1-11中任何一個或幾個核酸序列的表達(dá)載體。
3.含有權(quán)利要求2所述的表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。
4.一種監(jiān)測神經(jīng)干細(xì)胞分化發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)的方法，其特征是包括下列步驟提供樣品，將權(quán)利要求1所述的多核苷酸與樣品的核酸在高嚴(yán)緊度下雜交，形成一個或多個雜交復(fù)合物，檢測雜交復(fù)合物的形成，復(fù)合物的形成則表示樣品表達(dá)了多核苷酸。
全文摘要
本發(fā)明提供了與神經(jīng)干細(xì)胞分化發(fā)育有關(guān)的基因以及這些基因編碼的多肽。本發(fā)明也提供了這些基因相應(yīng)的表達(dá)載體、宿主細(xì)胞和抗體。本發(fā)明提供了與這些基因雜交的核酸探針。這些基因和相關(guān)分子可以作為神經(jīng)干細(xì)胞分化發(fā)育的標(biāo)記，以及干預(yù)神經(jīng)干細(xì)胞分化發(fā)育的靶標(biāo)。
文檔編號C12N15/12GK1415751SQ0214519
公開日2003年5月7日 申請日期2002年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月12日
發(fā)明者文鐵橋, 谷平, 陳付學(xué) 申請人:上海大學(xué)