專利名稱：生物傳感器的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用于迅速而簡便地定量試樣里的特定成分的生物傳感器。
背景技術：
以實現(xiàn)一般人能夠?qū)w液成分進行簡易定量為目的，近年來，利用酶具有的特異性催化作用的各種類型的生物傳感器正在被開發(fā)。
以下，作為定量試液中的成分的方法的一例，說明葡萄糖的定量法。作為電化學的葡萄糖定量法，將葡萄糖氧化酶和氧電極或過氧化氫組合起來使用的方法廣為人知(例如，鈴木周一編的《バイオセンサ-(生物傳感器)》講談社出版)。
葡糖酸氧化酶以氧作為電子介質(zhì)，將作為基質(zhì)的葡萄糖選擇性地氧化成葡糖酸內(nèi)酯。在氧的存在下，在葡萄糖氧化酶催化的葡萄糖氧化反應過程中，氧被還原為過氧化氫。用氧電極來計測氧的減少量，或用過氧化氫電極來計測過氧化氫的增加量。因為氧的減少量和過氧化氫的增加量與試液中的葡萄糖含量是成比例的，所以，可以通過氧的減少量或過氧化氫的增加量來定量葡萄糖。
上述方法有測定結(jié)果會受到試液所含氧的濃度的影響的缺點，在試液里沒有氧存在的場合，就不能進行測定，這也可以從其反應過程推測出來。
為此，已有不用氧作為電子介質(zhì)，而用鐵氰化鉀、二茂鐵衍生物、苯醌衍生物等有機化合物、金屬絡合物作為電子介質(zhì)的一類葡萄糖傳感器被開發(fā)出來。這種類型的傳感器將作為酶反應的結(jié)果而生成的電子介質(zhì)的還原體在電極上氧化，并可由氧化電流量求出試液中所含葡萄糖濃度。在這種用有機化合物或金屬絡合物來代替氧作為電子介質(zhì)的情況下，可以將這些電子介質(zhì)以正確的量和穩(wěn)定的狀態(tài)與葡萄糖氧化酶一起加載在電極上，形成試劑層。另外，由于還能夠使試劑層在接近干燥的狀態(tài)下與電極系形成一體，所以，近年來，基于這些技術的一次性葡萄糖傳感器更多地被關注。其代表例是日本特許公報第2517153號中公開的生物傳感器。使用一次性葡萄糖傳感器，只需往與測定器連接并可拆卸的傳感器中注入試液，就能夠很容易地用測定器測定出葡萄糖濃度。
在上述使用葡萄糖傳感器的測定方法中，根據(jù)1-10μA/cm2數(shù)量級的應答電流，用30秒鐘左右的時間，就可以求出試樣里的葡萄糖濃度。但是，近年來，各方面期望著開發(fā)出一種能夠更迅速和高感度地對葡萄糖進行定量的傳感器。
另外，在現(xiàn)有的電化學的葡萄糖傳感器中，將羧甲基纖維素等親水性高分子添加在試劑層中，以使測定器的測定結(jié)果不受來自外部的振動的影響。該親水性高分子還有起到將酶緩緩地固定在電極上的粘合劑的作用的優(yōu)點。但是，由于親水性高分子的存在，會出現(xiàn)葡萄糖氧化酶的催化活性或葡糖酸內(nèi)酯水解成葡糖酸的反應的熱力學產(chǎn)生變化、葡萄糖氧化反應的的生成物葡糖酸內(nèi)酯蓄積的情況。葡糖酸內(nèi)酯蓄積，會導致出現(xiàn)逆反應、葡萄糖氧化反應速度下降等。由此，在短的反應時間中的電子介質(zhì)還原體的生成量降低，傳感器對葡萄糖的應答電流的大小即感度下降。特別是，對于高濃度的葡萄糖，要得到足夠的感應度，則為了使電子介質(zhì)還原體大量生成，就有必要增大反應時間，這樣，有使測定所需時間變長的趨勢。
本發(fā)明的目的是，鑒于以上問題點，提供一種能夠以高應答性迅速且高感度地定量試樣中的特定成分的生物傳感器。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的生物傳感器具有電絕緣性基板、配置在電絕緣基板上的包含作用極和對極的電極系和包含對將葡萄糖氧化成葡糖酸內(nèi)酯的反應有催化作用的氧化還原酶、葡糖酸內(nèi)酯酶和緩沖劑的試劑系。所述緩沖劑選自苯二甲酸及其鹽、馬來酸和其鹽、琥珀酸及其鹽、磷酸及其鹽、乙酸及其鹽、硼酸及其鹽、檸檬酸及其鹽、氨基乙酸、三羥甲基氨基甲烷、哌嗪-N，N′-二(2-乙磺酸)、N-(2-乙酰胺基)亞氨基二乙酸、N，N-二(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸、2-碼啉代乙磺酸、咪唑、二甲基戊二酸、三乙醇胺鹽酸鹽、三甲基吡碇、N-三(羥甲基)甲基甘氨酸和二(2-羥乙基)亞氨基三(羥甲基)甲烷。


圖1是本發(fā)明一實施例的除去試劑層的生物傳感器的立體圖。
圖2是同一生物傳感器的重要部分的縱向剖面圖。
圖3是同一生物傳感器的應答特性圖。
圖4是本發(fā)明的其它實施例的生物傳感器的重要部分的縱向剖面圖。
具體實施例方式
本發(fā)明的生物傳感器具有電絕緣基板、配置在電絕緣基板上的包含作用極和對極的電極系和包含對將葡萄糖氧化成葡糖酸內(nèi)酯的反應有催化作用的氧化還原酶、葡糖酸內(nèi)酯酶和緩沖劑的試劑系。
這里，前述緩沖劑最好選自苯二甲酸酸、苯二甲酸鹽、馬來酸、馬來鹽、琥珀酸、琥珀酸鹽、磷酸、磷酸鹽、乙酸、乙酸鹽、硼酸、硼酸鹽、檸檬酸、檸檬酸鹽、氨基乙酸、三(羥甲基)氨基甲烷、和哌嗪-N，N′-二(2-乙磺酸)。
在本發(fā)明的其它實施方式中，前述緩沖劑選自N-(2-乙酰胺)亞氨基二乙酸、N，N-二(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸、2-碼啉代乙磺酸、咪唑、二甲基戊二酸、三乙醇胺鹽酸鹽、三甲基吡碇、N-三(羥甲基)甲基甘氨酸和二(2-羥乙基)亞氨基三(羥甲基)甲烷。
根據(jù)本發(fā)明，通過氧化還原酶的作用，由葡萄糖氧化而生成的葡糖酸內(nèi)酯通過葡糖酸內(nèi)酯酶而轉(zhuǎn)換成葡糖酸。因此，葡萄糖的氧化反應的進行變得容易，即使是在測定時間短的場合，也能得到充分的應答性。再者，因為通過調(diào)節(jié)反應系的pH，可以提高生物傳感器中所含的氧化還原酶或葡糖酸內(nèi)酯酶的活性，所以傳感器的應答性進一步得到提高。上述緩沖劑中，從溶解性足夠好的角度出發(fā)，優(yōu)選苯二甲酸、苯二甲酸鹽、馬來酸、馬來酸鹽、琥珀酸、琥珀酸鹽和三羥甲基氨基甲烷。
這里，試劑系最好還含有電子介質(zhì)。試液中的溶解氧也可以用作電子介質(zhì)，但是，最好在試劑系中放入電子介質(zhì)。作為電子介質(zhì)，例如可以是鐵氰化鉀、鋨-三(二吡啶鎓)、二茂鐵衍生物等金屬絡合物，對苯醌等苯醌衍生物，N-甲基吩嗪鎓硫酸單甲酯鹽等吩嗪鎓衍生物，亞甲藍等吩噻嗪鎓衍生物，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸等。這些電子介質(zhì)可以單獨使用，也可以兩種以上合用。
試劑系最好還含有親水性高分子。最好用以下物質(zhì)作為親水性高分子羧乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、乙基羥乙基纖維素、羧甲基乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚賴氨酸等聚氨基酸、聚苯乙烯磺酸、明膠和其衍生物、丙烯酸或其鹽的聚合物、甲基丙烯酸或是它的鹽的聚合物、淀粉及其衍生物、馬來酸酐或它的鹽的聚合物、瓊脂糖凝膠及其衍生物。如果試劑系含有親水性高分子，則測定器的測定結(jié)果就不會受到來自外部的振動的影響。再者，親水性高分子具有能夠起到將酶緩緩固定在電極上的粘合劑的作用的優(yōu)點。
對葡萄糖的氧化反應有催化作用的氧化還原酶、葡糖酸內(nèi)酯酶和緩沖劑可以以混合狀態(tài)加載在傳感器上。這樣做，生物傳感器的制造過程就簡單了，可以簡便地制作試劑層。另外，因為氧化還原酶和葡糖酸內(nèi)酯酶處于很近的位置，由氧化還原酶的作用而生成的葡糖酸內(nèi)酯會在葡糖酸內(nèi)酯酶的作用下很快地轉(zhuǎn)換成葡萄糖酸。由此，葡萄糖的氧化反應性提高，即使在測定時間更短的情況下，也能得到足夠的應答性。
對葡萄糖的氧化反應有催化作用的氧化還原酶和葡糖酸內(nèi)酯酶也可以互相分離地加載在傳感器上。這樣的話，可以將適合各酶的緩沖劑與各酶混合或添加在酶的附近，從而能夠以更高的效率提高各酶的活性。
葡萄酸內(nèi)酯酶最好得自大腸菌、酵母、人、大鼠、豬、牛、黑曲霉、棕色固氮菌、熒光桿菌、運動發(fā)酵單胞菌、天藍色鏈霉菌、耐放射異常球菌、苛養(yǎng)木桿菌中的一種。在這些當中，從生產(chǎn)率高、保持著足夠的活性的角度考慮，最好以大腸菌、酵母、或黑曲霉作為來源。
傳感器中的緩沖劑加載量最好在5nmol/mm2以下。這樣的話，不會使對葡萄糖氧化反應有催化作用的氧化還原酶和葡糖酸內(nèi)酯酶的溶解性降低，還可以通過調(diào)整測定對象的試液的pH使各酶的活性得以充分地發(fā)揮。
另外，由于在上述加載量的情況下，不會使對應于0mg/dl葡萄糖的應答值亦即空白應答值上升，因此，生物傳感器可以有高的可靠性。更佳的緩沖劑加載量為0.1-3nmol/mm2。對于以0.04-20μl血液作為測定對象的一次性生物傳感器，從使含有緩沖劑層有效地平滑化和降低其空白值的角度來看，每個傳感器的試液最好在5-1000nmol的范圍內(nèi)。
試劑層含有緩沖劑可以使通過溶液展開和干燥而形成的試劑層變得平滑。在通過將試劑水溶液干燥而形成試劑層的情況下，由于試劑結(jié)晶的粗大化等，試劑層會有凹凸。特別是含有電子介質(zhì)鐵氰化鉀時，更加顯著。在試劑層含有緩沖劑后，試劑層就不會有凹凸不平而變得平滑。其原因被認為是由于緩沖劑使得由溶液干燥而生成的結(jié)晶變得更細所致。
在傳感器里放入試液、使試劑層溶解在此試液里時，如試劑層表面有凹凸不平，試液和試劑層之間的凹凸處就會有空氣進入，這樣，溶解了試劑層的試樣液里有時會有氣泡生成。如試液里有氣泡生成，則試液就不能在試樣液供給通路中移動，影響測定。通過試劑層被平滑化，前面所述的弊端就能消除。另外，由于試劑層被平滑化，可以減小試樣液供給通路內(nèi)的體積或高度，實現(xiàn)試液的微量化。
緩沖劑最好在pH4-8的范圍內(nèi)具有緩沖能力。使用這樣的緩沖劑時，當試劑被注入后會將傳感器中所含的試劑溶解，使構成酶反應系的該溶液的pH被調(diào)節(jié)在4-8左右，在這樣的pH范圍，反應系整體的反應性提高，即使在測定時間更短的情況下，也能得到足夠的應答性。
對葡萄糖氧化反應有催化作用的氧化還原酶最好從葡糖氧化酶、PQQ依存性的葡糖脫氫酶、NAD依存性的葡糖脫氫酶以及吡喃糖氧化酶中進行選擇。如果用葡糖氧化酶作為上述對葡萄糖氧化反應有催化作用的氧化還原酶時，緩沖劑在pH4-6的范圍有緩沖能就更佳。用PQQ依存性的葡糖脫氫酶、NAD依存性的葡糖脫氫酶以及吡喃糖氧化酶作為上述對葡萄糖氧化反應有催化作用的氧化還原酶時，緩沖劑在pH5-8的范圍有緩沖能就更佳。
本發(fā)明的生物傳感器還可以具有配置在基板上、在與該基板之間形成向電極系供給試液的通路的覆蓋部件。制成這樣的結(jié)構，就有將試液量確定在一定量的優(yōu)點。此外，使用低溶解性的緩沖劑時，可以與酶分離，將其加載在蓋板側(cè)。還有，將后述的兩親溶性化合物加載在生物傳感器上時，將雙親媒性化合物與酶分離地加載在蓋板側(cè)，有以下利處即，要形成兩親溶性化合物的層，通常采用涂布兩親溶性化合物的有機溶劑溶液并干燥的方法。如果將兩親溶性化合物層形成在含酶層的上面，則溶解有兩親溶性化合物的有機溶劑有時會對酶有影響。將兩親溶性化合物層與含酶層分離地形成在覆蓋部件側(cè)，就可以避免上述有機溶劑對酶的影響。
在本發(fā)明的生物傳感器中，試劑系還可含有兩親溶性化合物。采用卵磷酯和TritonX-100等作為兩親溶性化合物特別好。試劑系中含有兩親溶性化合物時，由于兩親溶性化合物的兩親溶性作用，傳感器的試液供給通路受到親水處理，由此，血液等試液被迅速地供給至試液供給通路內(nèi)，并且可以防止試液供給通路內(nèi)氣泡發(fā)生。
血液、血漿、血清、葡萄糖水溶液、培養(yǎng)液和發(fā)酵液等可以作為本發(fā)明生物傳感器的試樣來使用。
下面以實施列對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明不受這些實施列的限制。實施列1圖1是本實施例的葡萄糖傳感器的除去試劑系的分解立體圖。通過絲網(wǎng)印刷法將銀膏印刷在由聚對苯二甲酸乙二醇酯構成的電絕緣基板1上，形成導線2和3，接著，把含有樹脂粘合劑的碳糊印刷在基板1上，形成作用極4。這個作用極4與導線2接觸。再將絕緣膏印刷在基板1上，形成絕緣層6。絕緣層6覆蓋在作用極4的外圍，這樣，使作用極4的露出部分的面積保持恒定。并且，將含有樹脂粘合劑的導電性碳糊印刷在基板1上，使其與導線3接觸，形成環(huán)狀對極5。
在上述基板1上，如后所述，形成試劑系之后，將具有切口10的中間蓋板8和有空氣孔11的上蓋板9按照圖1的點劃線所示位置連接，由此制得生物傳感器。在基板1上，通過將由中間蓋板8和上蓋板9構成的覆蓋件組合，在中間蓋板的切口10的部分形成試劑供給通路。在傳感器端部的切口10的開放端部就成為通向試劑供給通路的試劑供給口。
圖2是本實施例的生物傳感器的縱向剖面圖。在形成有由作用極4和對極5構成的電極系的基極1上，首先，滴下為一種親水性高分子的羧甲基纖維素(以下以CMC表示)的0.5wt％水溶液5μl，干燥后，形成CMC層7a。接著，將為一種對葡萄糖氧化反應有催化作用的氧化還原酶的葡糖氧化酶、為一種電子介質(zhì)的鐵氰化鉀和得自黑曲霉的葡糖酸內(nèi)酯酶溶解于作為緩沖劑的1mM馬來酸緩沖液(pH6)里。將該溶液4μl滴加在CMC層7a上，干燥，形成試劑層7b。這里，試劑層7b的面積為12mm2，馬來酸緩沖劑的加載量是0.33nmol/mm2。在本實施例中，試劑系7由CMC層7a和試劑層7b構成。
將一定量的含有葡萄糖的水溶液用作試液。將試液與傳感器切口10的開放端部接觸，利用毛細管現(xiàn)象，使試液進入到試液供給通路中。經(jīng)過一定時間(反應時間)，以對極5為基準，給作用極4施加500mV電壓，測定此時在作用極4和對極5之間的流過的電流值。隨著葡萄糖因葡糖氧化酶的催化作用而氧化成葡糖酸內(nèi)酯，鐵氰化物離子被還原為亞鐵氰化物離子。上述亞鐵氰化物離子的生成濃度與試液里的葡萄糖濃度成比例，這樣，利用其氧化電流，就可以測定葡萄糖的濃度。這時生成的葡糖酸內(nèi)酯受到葡糖酸內(nèi)酯酶的作用而分解。
如圖3所示，將在反應時間5秒鐘中得到的應答電流相對于試液中的葡萄糖濃度作了標繪，結(jié)果看到，兩者間有著良好的線性關系。這樣，就可知道，用5秒鐘這樣的短的反應時間，就能夠?qū)Τ蔀闇y定對象的基質(zhì)濃度以良好的精確度進行定量。這被認為是因為在試劑層中添加的緩沖劑的作用下，葡糖酸內(nèi)酯酶充分發(fā)揮了活性的緣故。由此推知，為葡萄糖氧化反應生成物的葡糖酸內(nèi)酯被葡糖酸內(nèi)酯酶快速分解，不再在溶液中蓄積，葡萄糖氧化反應得到加速。
像上面所述，即使用更短的反應時間，也能得到足夠的應答值，因此，可以縮短傳感器的測定時間。實施列2圖4是本實施例的生物傳感器的縱向剖面圖。和實施例1的不同之處是將作為對葡萄糖的氧化反應有催化作用的氧化還原酶的PQQ依存性葡萄糖脫氫酶與葡糖酸內(nèi)酯酶分開地加載在傳感器上這一點上。
在形成有電極系的基板1上，首先，滴加一種親水性高分子CMC的0.5wt％水溶液5μl，干燥后形成CMC層7a；接著，將得自黑曲霉的葡糖酸內(nèi)酯酶溶解于作為緩沖劑的1mM苯二甲酸氫鉀緩沖液(pH6)中。將以上溶液4μl滴加在CMC層7a上，干燥后，葡葡糖酸內(nèi)脂酶層12就形成了。在此，葡糖酸內(nèi)酯酶層12的面積為12mm2，苯二甲酸氫鉀緩沖劑的加載量為0.33nmol/mm2。然后，在葡糖酸內(nèi)酯酶層12上，為了和葡糖酸內(nèi)酯酶層12分離，滴加聚乙烯吡咯烷酮(以下以PVP表示)0.5wt％水溶液5μl，干燥，形成PVP層13。再將一種為對葡萄糖的氧化反應有催化作用的氧化還原酶的PQQ依存性葡萄糖脫氫酶和為一種電子介質(zhì)的鐵氰化鉀溶解在作為緩沖劑的1mM琥珀酸緩沖液(pH5)里。將該溶液4μl滴在PVP層13上，干燥后，葡萄糖脫氫酶層14就形成了。這里，葡萄糖脫氫酶層14的面積是12mm2，琥珀酸的加載量為0.33nmol/mm2。本實施例的試劑系由CMC層7a、葡糖酸內(nèi)酯酶層12、PVP層13和葡萄糖脫氫酶層14構成。
如本實施例那樣，用PVP之類的水溶性高分子將2種酶在空間上分離，就可將適合于各酶的緩沖劑添加到各酶上。這時，PVP之類的水溶性高分子在血液等生物體試樣、葡萄糖水溶液供給至生物傳感器后會迅速溶解，因此，沒有使酶的反應性下降之虞。
用本實施例的生物傳感器，以一定量的含有葡萄糖的水溶液為試樣進行測定，其結(jié)果，得到和實施例1一樣的結(jié)果。
如上所述，在使用2種酶的情況下，也可以在各酶的附近添加適合各酶的緩沖劑。所以，即使反應時間更短，在對作為測定對象的基質(zhì)的濃度進行定量時，也可以得到足夠的應答值，從而可以縮短傳感器的測定時間。
在上述實施例中，施加在電極系上的電壓為500mV，但不限于此電壓。只要是電子介質(zhì)在作用極會被氧化的電壓即可。此外，以檢測電流的方法作為了測定法，但只要是會隨著電化學反應的進行而變化的輸出，就可以作為用于檢測的對象。例如，也可以檢測某一時間內(nèi)的通電電荷量。通電電荷量因是相對于時間的電流的積分值，因此，可以和作為測定對象的基質(zhì)濃度產(chǎn)生關聯(lián)。
在試液供給通路內(nèi)放置非水溶性載體、將上述試劑系中所含的試劑中的一種或多種固定在該載體上也可以。固定時，最好運用以下的固定法共價鍵法、交聯(lián)固定法、吸附法、或者是利用配位結(jié)合、特異的結(jié)合性相互作用的固定方法。
在上述的實施例中，用碳作為電極材料，但不限于此。作為作用極材料，只要是如碳、鉑、金、鈀等那樣的在將電子介質(zhì)氧化時其本身不被氧化的導電材料就可以。作為對極材料，只要是包括碳、金在內(nèi)的銀、鉑等一般使用的導電材料就可以使用。除了作用極和對極之外，也可將有穩(wěn)定電位的電極用作參比極。這時，電壓施加在參比極和作用極之間。這些電極系的形狀、配置和個數(shù)等不受上述實施例所示的限制。電極的導線、端子的形狀、配置和個數(shù)等也不受上述實施例所示的限制。
在上述實施例中就試劑系形成在電極系上的情況進行了說明，但是，試劑系也可以形成在電極的近旁，例如，形成在上蓋板側(cè)并向試液供給通路露出。
產(chǎn)業(yè)上利用的可能性在本發(fā)明的生物傳感器中，葡萄糖因氧化還原酶的作用而氧化，由此生成的葡糖酸內(nèi)酯被葡糖酸內(nèi)酯酶變換成葡萄糖酸。由此，葡萄糖的氧化反應順利地進行，即使在測定時間很短的情況下，也可以得到足夠的應答性。另外，由于對葡萄糖的氧化反應有催化作用的氧化還原酶或葡糖酸內(nèi)酯酶的活性因緩沖劑而提高，也使傳感器的應答性得以提高。這樣，根據(jù)本發(fā)明，可以提供應答性高、能夠迅速且高感度地對試樣里的特定成分進行定量的生物傳感器。
權利要求
1.生物傳感器，它具有電絕緣性基板、配置在該基板上的包含作用極和對極的電極系和含有對葡萄糖氧化成葡糖酸內(nèi)酯的反應有催化作用的氧化還原酶、葡糖酸內(nèi)酯酶和緩沖劑的試劑系，所述緩沖劑選自苯二甲酸及其鹽、馬來酸和其鹽、琥珀酸及其鹽、磷酸及其鹽、乙酸及其鹽、硼酸及其鹽、檸檬酸及其鹽、氨基乙酸、三羥甲基氨基甲烷、 哌嗪-N，N′-二(2-乙磺酸)、N-(2-乙酰胺基)亞氨基二乙酸、N，N-二(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸、2-碼啉代乙磺酸、咪唑、二甲基戊二酸、三乙醇胺鹽酸鹽、三甲基吡碇、N-三(羥甲基)甲基甘氨酸和二(2-羥乙基)亞氨基三(羥甲基)甲烷。
2.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述試劑系還包含電子介質(zhì)。
3.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述試劑系還包含親水性高分子。
4.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述氧化還原酶、葡糖酸酯酶和緩沖劑以混合狀態(tài)加載在傳感器中。
5.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述氧化還原酶和葡糖酸內(nèi)酯酶相互分開地加載在傳感器中。
6.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述葡糖酸內(nèi)酯酶得自大腸菌、酵母、人、大鼠、豬、牛、黑曲霉、棕色固氮菌、熒光桿菌、運動發(fā)酵單胞菌、天藍色鏈霉菌、耐放射異常球菌、苛養(yǎng)木桿菌。
7.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述緩沖劑的加載量在5nmol/mm2以下。
8.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述緩沖劑在pH4-8范圍有緩沖能。
9.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述氧化還原酶選自葡萄糖氧化酶、PQQ依存性葡糖脫氫酶、NAD依存性的葡糖脫氫酶以及吡喃糖氧化酶。
10.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，它還具有配置在基板上的、與基板之間形成向電極系供給試液的通路的覆蓋部件。
11.根據(jù)權利要求1所述的生物傳感器，其特征在于，所述試劑系還含有兩親溶性化合物。
全文摘要
提供應答性高、能夠迅速且高感度地定量試樣中的特定成分的生物傳感器。本發(fā)明的生物傳感器具有絕緣性基板、配置在該基板上的包括作用極和對極的電極系、含有對葡萄糖氧化反應有催化作用的氧化還原酶、葡糖酸內(nèi)酯酶以及緩沖劑的試劑系。所述緩沖劑選自苯二甲酸及其鹽、馬來酸和其鹽、琥珀酸及其鹽、磷酸及其鹽、乙酸及其鹽、硼酸及其鹽、檸檬酸及其鹽、氨基乙酸、三羥甲基氨基甲烷、哌嗪－N，N′－二(2－乙磺酸)等。
文檔編號C12Q1/54GK1462367SQ02801626
公開日2003年12月17日 申請日期2002年5月13日 優(yōu)先權日2001年5月15日
發(fā)明者渡邊基一, 中南貴裕, 池田信, 南海史朗 申請人:松下電器產(chǎn)業(yè)株式會社