專(zhuān)利名稱(chēng)：磷脂制劑的穩(wěn)定化和終末消毒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本方面涉及對(duì)磷脂制劑進(jìn)行蒸汽消毒的方法，特別是涉及對(duì)任選地含有穩(wěn)定化賦性劑的磷脂制劑進(jìn)行消毒的方法，其中使所述磷脂制劑經(jīng)過(guò)一個(gè)高溫、短停留時(shí)間的蒸汽消毒周期。
背景技術(shù)：
超聲作為一種顯像診斷技術(shù)，與其它診斷方法相比，該方法具有一系列的優(yōu)勢(shì)。與諸如核醫(yī)學(xué)和X線(xiàn)等技術(shù)不同的是，超聲不需要將患者暴露于具有潛在危害的離子化電子輻射中，這種輻射可能會(huì)對(duì)生物物質(zhì)(例如DNA，RNA以及蛋白質(zhì))造成損傷。此外，與計(jì)算機(jī)成像(CT)或磁共振成像等技術(shù)相比，超聲技術(shù)是一種相對(duì)較為便宜的技術(shù)。
超聲的原理基于這樣一個(gè)事實(shí)，也就是說(shuō)，根據(jù)所觀(guān)察的組織或脈管系統(tǒng)的組成和密度，聲波將會(huì)有區(qū)別地從組織中反射回來(lái)。根據(jù)組織的構(gòu)成，超聲波要么被吸收，穿過(guò)組織，要么被反射回來(lái)。反射，是指反向散射或反射性，是超聲成像的基礎(chǔ)。傳感器，特別是能夠檢測(cè)臨床環(huán)境中1MHz到10MHz范圍內(nèi)的聲波的傳感器，用于靈敏地檢測(cè)返回的聲波。然后，這些聲波被整合成可以定量的圖像。經(jīng)定量的聲波然后被轉(zhuǎn)換成所觀(guān)察的組織的圖像。
盡管超聲方法在技術(shù)上有所改進(jìn)，但是所得到的圖像仍然需要進(jìn)一步的完善，特別是其中有血液流動(dòng)的脈管和組織的成像。為了達(dá)到這個(gè)目的，通過(guò)使用造影劑有助于清楚地呈現(xiàn)出脈管和與脈管有關(guān)的組織。特別是，微氣泡或小泡是非常好的超聲造影劑，因?yàn)樵谛∨荼砻娴慕缑嫣?，聲波反射率非常高。眾所周知，要生產(chǎn)適當(dāng)?shù)?、由微氣泡組成的造影劑首先要將優(yōu)選由脂質(zhì)構(gòu)成的含水懸浮液(也就是氣泡涂布劑)放入小瓶或容器中。然后在小瓶的剩余部分或頂部空間，在含水懸浮液相的上方引入氣體。然后在使用前，振搖小瓶從而形成微氣泡。應(yīng)注意的是，在振搖前，小瓶中含有含水懸浮液相和氣相。含水懸浮液相中可以使用各種各樣的氣泡涂布劑。同樣，氣相中也可以使用各種各樣不同的氣體。特別是使用例如全氟丙烷等全氟烴類(lèi)。參見(jiàn)例如Unger等人的美國(guó)專(zhuān)利5769080，該專(zhuān)利中所公開(kāi)的內(nèi)容在此引入作為本申請(qǐng)的參考。
磷脂在人體中無(wú)處不在。例如，人體細(xì)胞膜的大部分(即大于50％)由1，2-二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)構(gòu)成。磷脂還大量存在于肺泡膜上，用于防止肺泡的塌陷。磷脂不溶于水(或者一般的含水介質(zhì))，而且磷脂是兩親性的，也就是說(shuō)，它們通常包括一個(gè)親水的極性首基，二個(gè)厭水的非極性尾部。在水中，脂質(zhì)將根據(jù)結(jié)構(gòu)自發(fā)地形成微團(tuán)或脂質(zhì)體。由于磷脂沒(méi)有毒性，可以與人體相容，因此它們是最理想的藥物運(yùn)載工具，用于將難溶解的治療物質(zhì)(例如，肽、蛋白、其它大分子以及基因)攜帶到靶組織或作為一種控制-釋放裝置使藥物在體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)通過(guò)腸道外途徑緩慢釋放。而且，由于它們的兩親性的特性，磷脂還可以在制備乳劑和微氣泡超聲造影劑的過(guò)程中作為穩(wěn)定劑。
在給予患者磷脂之前，應(yīng)對(duì)磷脂進(jìn)行消毒。然而，磷脂分子含有四個(gè)酯鍵，當(dāng)有酸或堿存在的情況下，這些酯鍵會(huì)產(chǎn)生水解。由于水解降解，大多數(shù)的脂質(zhì)產(chǎn)品要進(jìn)行無(wú)菌處理，也就是指消毒過(guò)濾，使產(chǎn)品的無(wú)菌程度達(dá)到1×10-3。更好的是采用更加嚴(yán)格的處理方法以達(dá)到更高的無(wú)菌程度，使其相當(dāng)于對(duì)常規(guī)腸道外產(chǎn)品所進(jìn)行的終末消毒，也就是說(shuō)，消毒失敗的概率小于1×10-12。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明涉及含有脂質(zhì)的制劑的處理方法。通過(guò)所述方法可以得到具有高度無(wú)菌程度的含有脂質(zhì)的制劑。尤其是，這些方法可以達(dá)到等于或高于常規(guī)腸道外產(chǎn)品終末消毒的無(wú)菌程度，也就是說(shuō)，消毒失敗的概率小于1×10-12。此外，由本發(fā)明的所述方法所得到的無(wú)菌含有脂質(zhì)的制劑中的脂質(zhì)沒(méi)有發(fā)生明顯降解，而且不產(chǎn)生大量雜質(zhì)。
本發(fā)明所述方法包括將含有脂質(zhì)的制劑在大約126℃-130℃的溫度下消毒2-10分鐘左右的步驟。優(yōu)選地，將所述制劑在大約128℃±1℃的溫度下消毒6±0.5分鐘左右。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述含有脂質(zhì)的制劑包括一種或多種磷脂。
可選擇地，在所述含有脂質(zhì)的制劑中加入穩(wěn)定賦形劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述穩(wěn)定賦形劑包括pH緩沖劑，例如，磷酸鈉或檸檬酸鈉。作為選擇，或者附加地，所述穩(wěn)定賦形劑任選地包括丙二醇或甘油。
可選擇地，本發(fā)明的所述方法還包括調(diào)整含有脂質(zhì)的制劑的pH或離子強(qiáng)度的步驟。
根據(jù)下文所公開(kāi)的內(nèi)容和所附的權(quán)利要求書(shū)，本申請(qǐng)的其它特征和實(shí)施方案對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。
本發(fā)明的詳細(xì)描述[1]在第一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種處理含有脂質(zhì)的制劑的方法，包括將所述制劑在大約126℃-130℃的溫度下放置2-10分鐘左右的步驟。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案1所述的方法，其中，將所述制劑在大約128℃±1℃的溫度下放置6±0.5分鐘左右。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案1或?qū)嵤┓桨?所述的方法，包括在無(wú)菌條件下將所述含有脂質(zhì)的制劑放入至少一個(gè)小瓶中的步驟。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案1至實(shí)施方案3中任一項(xiàng)所述的方法，包括在所述含有脂質(zhì)的制劑中加入一種穩(wěn)定賦形劑的步驟。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案1至實(shí)施方案4中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述穩(wěn)定賦形劑包括一種pH緩沖劑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案5所述的方法，其中所述pH緩沖劑包括檸檬酸鹽緩沖劑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案5所述的方法，其中所述pH緩沖劑包括磷酸鹽緩沖劑。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案4所述的方法，其中所述穩(wěn)定賦形劑包括丙二醇。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案1至實(shí)施方案8中任一項(xiàng)所述的方法，包括調(diào)節(jié)所述含有脂質(zhì)的制劑pH值的步驟。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案1至實(shí)施方案9中任一項(xiàng)所述的方法，包括調(diào)節(jié)所述含有脂質(zhì)的制劑總的離子強(qiáng)度的步驟。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及如實(shí)施方案9所述的方法，其中在所述調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度步驟之后調(diào)整含有脂質(zhì)的制劑的pH值。
本發(fā)明涉及對(duì)含有磷脂的藥物制劑進(jìn)行蒸汽消毒或高壓消毒的方法，其中磷脂包括但不局限于1，2-二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸膽堿(DPPC)、1，2-二棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷酸一鈉鹽(DPPA)等，或與磷脂形成共軛的聚合物，例如N-(MPEG5000氨基甲酰)-棕櫚酰-sn-甘油基-3-磷脂酰(phosphaditeyl)乙醇胺(pegyated DPPE或MPEG5000-DPPE)。對(duì)含有磷脂的腸道外制劑進(jìn)行終末消毒(高壓消毒)可以通過(guò)減少例如大量的潛在微生物污染而顯著提高腸道外制劑的無(wú)菌程度和安全性，其中磷脂作為表面活性劑、助溶劑、乳化劑或藥物運(yùn)載工具。在較高的溫度下停留較短的時(shí)間(例如，在127℃-130℃下2-3分鐘)，并結(jié)合使用穩(wěn)定賦形劑(例如，pH為6.5的磷酸鹽或檸檬酸鹽緩沖劑，和/或丙二醇)可以顯著降低消毒過(guò)程中磷脂所發(fā)生的水解降解。通過(guò)本發(fā)明的所述方法對(duì)磷脂產(chǎn)品進(jìn)行消毒可以將例如嗜熱脂肪芽孢桿菌等微生物污染最低降至1×10-12。穩(wěn)定賦形劑和對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行的終末消毒，在含有脂質(zhì)的藥物制劑和超聲造影增強(qiáng)劑中是非常有用的，其中在微氣泡的產(chǎn)生和穩(wěn)定過(guò)程中，磷脂或脂質(zhì)體作為藥物前體。
本發(fā)明的所述方法結(jié)合適當(dāng)?shù)姆浪赓x形劑和一個(gè)消毒周期，所述賦形劑例如有丙二醇和甘油、和/或pH緩沖劑。在所述消毒周期中，將產(chǎn)品停留時(shí)間(也就是說(shuō)產(chǎn)品暴露于較高的高壓消毒溫度的時(shí)間)降至最短，從而使微生物污染有效地降至1×10-12，并且沒(méi)有對(duì)產(chǎn)品造成不良影響。適宜的防水解賦形劑包括例如，0.1ml/ml(0.11035g/ml)的丙二醇、0.1ml/ml(0.11262g/ml)的甘油、5-25mM的磷酸鈉溶液(pH6.5)、5-13mM的檸檬酸鈉溶液(pH6.5)。
在使用前，對(duì)所述磷脂制劑進(jìn)行消毒或高壓消毒。為了達(dá)到消毒目的，消毒溫度足夠高而且時(shí)間足夠長(zhǎng)，同時(shí)沒(méi)有對(duì)所述磷脂造成不良影響。在一個(gè)實(shí)施例中，在大約126℃-130℃的溫度下進(jìn)行消毒2-10分鐘左右。優(yōu)選地，在大約128±1℃的溫度下進(jìn)行消毒6±0.5分鐘左右。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，選擇消毒周期的溫度和時(shí)間從而使經(jīng)殺菌處理的含有磷脂的制劑的微生物污染的減少程度等于或大于106(也就是說(shuō)，消毒失敗的概率小于1×10-6)。優(yōu)選地，所述消毒周期使產(chǎn)品的無(wú)菌程度等于或高于常規(guī)腸道外產(chǎn)品的終末消毒，也就是說(shuō)，消毒失敗的概率小于1×10-12。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及事先經(jīng)振搖的超聲造影劑的蒸汽消毒，其中所述超聲造影劑含有由一種或多種磷脂形成的脂質(zhì)體。所述脂質(zhì)體可由任一種常規(guī)的、本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的脂質(zhì)體制備技術(shù)進(jìn)行制備。這些技術(shù)包括冷凍-解凍、聲處理、螯合透析、均質(zhì)處理、溶劑浸入、微乳化作用、自發(fā)形成、溶劑蒸發(fā)、French pressure cell技術(shù)、控制清洗劑透析、溶劑浸入、溶劑注射注射以及其它技術(shù)。如果需要，可以通過(guò)各種各樣的方法調(diào)節(jié)脂質(zhì)體的大小，包括擠壓、過(guò)濾、聲處理法、均質(zhì)處理、將核心為液體的層流引入不能相混溶的液體流中以及其它類(lèi)似方法，從而調(diào)整所產(chǎn)生的脂質(zhì)體的生物分布和清除率。上述技術(shù)以及其它方法在例如以下文獻(xiàn)中公開(kāi)US4,728,578；GB2193095A；US 4,728,575；US 4,737,323；PCT/US85/01161；Mayer等人的Biochimica et Biophysica Acta，Vol.858，pp.161-168(1986)；Hope等人的Biochimicaet Biophysica Acta，Vol.812，pp.55-65(1985)；US 4,533,254；Mayhew等人的Methods in Enzymology，第149卷，第64-77頁(yè)(1987)；Mayhew等人的Biochimicaet Biophysica Acta，第755卷，第169-174頁(yè)(1984)；Cheng等人的InvestigativeRadiology，第22卷，第47-55頁(yè)(1987)；PCT/US89/05040；US 4,162,282；US 4,310,505；US 4,921,706；Liposomes Technology，Gregoriadis，G.，ed.，Vol.I，pp 29-37，51-67，79-108(CRC Press Inc，BocaRaton，F(xiàn)la.，1984)。上述專(zhuān)利、出版物、專(zhuān)利申請(qǐng)均作為本申請(qǐng)的參考文獻(xiàn)引入本文。
盡管可以使用任何一種技術(shù)使含水介質(zhì)中的脂質(zhì)共混物進(jìn)行水合和分散，但是優(yōu)選地采用WO99/36104中所公開(kāi)的新方法制備所述脂質(zhì)體。上述申請(qǐng)作為本申請(qǐng)的參考文獻(xiàn)引入本文。簡(jiǎn)而言之，所述過(guò)程是形成小的單一薄層泡沫(SUVs)的技術(shù)。首先，將所述脂質(zhì)或脂質(zhì)共混物溶解于加熱至50-55℃的丙二醇中。然后，將上述脂質(zhì)共混物/丙二醇混合物加入到加熱至50-55℃的氯化鈉、甘油和水的混合物中。該混合物可選擇地用磷酸鈉或檸檬酸鈉進(jìn)行緩沖。然后用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6-6.5。在該經(jīng)過(guò)緩沖的溶液中加入氯化鈉以調(diào)整離子強(qiáng)度至0.116。然后將溶液加熱至70-75℃。制備大批量的脂質(zhì)體可以任選采用過(guò)濾消毒，例如使用0.22mm的過(guò)濾器。
用于制備本發(fā)明所述方法中的脂質(zhì)體的材料可以選用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的用于構(gòu)建脂質(zhì)體的材料或其組合。所使用的脂質(zhì)可以是源自天然的或人工合成的。上述材料包括但不局限于脂質(zhì)例如脂肪酸類(lèi)、溶血脂質(zhì)類(lèi)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酰膽堿、磷脂酸、神經(jīng)鞘磷脂、膽固醇、膽固醇半琥珀酸酯、生育酚半琥珀酸酯、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、溶血脂質(zhì)類(lèi)、神經(jīng)鞘磷脂、糖鞘脂類(lèi)、糖脂類(lèi)、醣脂類(lèi)、硫脂類(lèi)，還包括含有醚的脂質(zhì)以及與酯相連接的脂肪酸類(lèi)、聚合脂質(zhì)、二乙酰磷酸鹽、十八烷酰胺、二硬脂酰磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、神經(jīng)鞘磷脂、心脂質(zhì)、具有6-8個(gè)碳原子的短鏈脂肪酸的磷脂、具有不對(duì)稱(chēng)?；湹暮铣闪字?例如，一個(gè)酰基鏈含有6個(gè)碳原子，而另一個(gè)酰基鏈含有12碳原子)、6-(5-膽甾烯-3β-基氧)-1-硫基-β-D-吡喃半乳糖苷、二半乳糖甘油二酯、6-(5-膽甾烯-3β-基氧)己基-6-氨基-6-脫氧-1-硫基-β-D-吡喃半乳糖苷、6-(5-膽甾烯-3β-基氧)己基-6-氨基-6-脫氧-1-硫代-β-D-吡喃甘露糖苷、甘油二山萮酰-磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二二油酸酰磷脂酰膽堿、和/或它們的組合。符合本發(fā)明的發(fā)明精神的、本領(lǐng)域技術(shù)人員所知曉的其它脂質(zhì)或其組合也屬于本發(fā)明的范圍。例如，US4310505中所描述的用于體內(nèi)靶向給藥的含有脂質(zhì)的碳?xì)浠衔?。本發(fā)明特別感興趣的是在振搖操作所進(jìn)行的溫度下處于膠體狀態(tài)的脂質(zhì)(與液晶狀態(tài)相比)。不同脂質(zhì)的相轉(zhuǎn)變溫度對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，例如在脂質(zhì)體技術(shù)(LiposomeTechnology，Gregoriadis，G.，ed，Vol.I，pp.1-18(CRC Press，Inc.Boca Raton，F(xiàn)la.1984)中所公開(kāi)的。該文章中所公開(kāi)的內(nèi)容作為本發(fā)明的參考文獻(xiàn)引入本文。此外還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)任一脂質(zhì)體膜上結(jié)合有至少帶有少量負(fù)電荷的脂質(zhì)時(shí)，盡管不是必需的，但是其有利于保持脂質(zhì)體的高度穩(wěn)定性。其中至少少量的含義是指總脂質(zhì)的約1摩爾百分比。對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，帶有負(fù)電荷的脂質(zhì)是顯而易見(jiàn)的，包括例如磷脂酰絲氨酸和脂肪酸。從生態(tài)遺傳性和穩(wěn)定性?xún)煞矫婵紤]，最優(yōu)選的是由二棕櫚酰磷脂酰膽堿制備成的脂質(zhì)體。在本發(fā)明的消毒過(guò)程中可以采用上述任一種脂質(zhì)，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的其它脂質(zhì)。
總的來(lái)說(shuō)，二棕櫚酰磷脂酰膽堿脂質(zhì)體的制備如下將脂質(zhì)溶解于一個(gè)非水溶性的溶液，其中所述脂質(zhì)可以溶于該溶液中，優(yōu)選該溶液為丙二醇，然后將該溶液與水溶液相接觸，從而形成脂質(zhì)體懸浮液。
然后，可選擇地將所述脂質(zhì)體放在一個(gè)小瓶中?？蛇x地，調(diào)整小瓶的頂部空間，使其含有預(yù)定量的氣體，例如全氟丙烷氣體，然后在無(wú)菌條件下將所述小瓶密封。例如，將所述小瓶放在一個(gè)冷凍干燥室中，降低室中壓力，然后將所述氣體引入該室中，從而將所述氣體引入小瓶?jī)?nèi)脂質(zhì)體頂部空間。
在使用前，對(duì)本發(fā)明中所述含有磷脂的混合物進(jìn)行蒸汽消毒或高壓消毒。消毒的溫度應(yīng)足夠地高，時(shí)間足夠長(zhǎng)，從而可以有效地進(jìn)行消毒而對(duì)所述含有磷脂的混合物不產(chǎn)生顯著的不良作用。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，在大約126℃-130℃的溫度下進(jìn)行消毒2-10分鐘左右。優(yōu)選地，在大約128±1℃的溫度下進(jìn)行消毒6±0.5分鐘左右。在一個(gè)實(shí)施方案中，所選消毒周期中所采用的溫度和時(shí)間使經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理的含有磷脂的制劑的微生物污染減少程度等于或大于106(也就是說(shuō)，消毒失敗的概率小于1×10-6)。優(yōu)選地，所選消毒周期所達(dá)到的消毒程度等于或高于常規(guī)腸道外產(chǎn)品的終末消毒程度，也就是說(shuō)，消毒失敗的概率小于1×10-12。
一旦進(jìn)行了消毒，在即將使用前振搖小瓶，形成脂質(zhì)包繞的微氣泡。
應(yīng)注意的是，為了清楚起見(jiàn)，在單獨(dú)的多個(gè)實(shí)施方案中對(duì)本發(fā)明某些特征進(jìn)行了描述。這些特征也可以在一個(gè)實(shí)施方案中進(jìn)行組合。相反地，為了簡(jiǎn)便起見(jiàn)，本發(fā)明的不同特征在一個(gè)實(shí)施方案中進(jìn)行了描述，其也可以在不同實(shí)施方案中分別進(jìn)行，或者還可以將不同特征進(jìn)行亞組合。
對(duì)含有磷脂的制劑進(jìn)行檢測(cè)以證明本發(fā)明所述方法的消毒效果和程度。根據(jù)表1所給出的重量百分比和濃度制備脂質(zhì)共混物。然后將0.375g的脂質(zhì)共混物與51.8g的丙二醇相混合。丙二醇/脂質(zhì)共混物的溫度保持在55℃，定期對(duì)其進(jìn)行旋轉(zhuǎn)，直至所述脂質(zhì)共混物分散在所述丙二醇中。
表1

將所述丙二醇/脂質(zhì)共混物加入水溶液中(USP級(jí))，該水溶液中含有6.8mg/ml NaCl(USP級(jí))和0.1ml/ml(0.11262g/ml)的甘油(USP級(jí))，從而制備成含有磷脂的制劑。各組分在所述含有磷脂的制劑中的最終濃度參見(jiàn)表2。在所述含有脂質(zhì)制劑中加入磷酸鈉或檸檬酸鈉得到經(jīng)緩沖的制劑。
表2

加入氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)所得到的本體溶液的pH值，使pH值在6.0-7.0之間。對(duì)于經(jīng)緩沖的制劑，在本體溶液中加入氯化鈉調(diào)整本體溶液的離子強(qiáng)度，使離子強(qiáng)度達(dá)到0.116。然后向本體溶液中再加入氫氧化鈉或鹽酸調(diào)節(jié)本體溶液的pH值。對(duì)于未經(jīng)緩沖的制劑，開(kāi)始時(shí)加入6.8mg/ml的氯化鈉，使其離子強(qiáng)度等于0.116。
實(shí)施例1用上述制備得到的未經(jīng)緩沖的脂質(zhì)制劑檢測(cè)本發(fā)明的高溫短時(shí)間消毒過(guò)程對(duì)脂質(zhì)制劑的消毒效果。在一組含有1.6ml本體溶液的2ml小瓶中，接種0.1ml的嗜熱脂肪芽孢桿菌(目標(biāo)菌種數(shù)達(dá)到106芽孢/瓶)。然后，在Finn-Aqua飽和蒸汽壓力釜(型號(hào)為6912-D或121224-DP)或Barriquand過(guò)熱水壓力釜(型號(hào)為1342X)中，使接種細(xì)菌的小瓶經(jīng)過(guò)一系列周期。在無(wú)菌條件下，打開(kāi)每個(gè)瓶子，分別用獨(dú)立包裝的1ml無(wú)菌吸量管吸出內(nèi)容物，將其分別注入100ml的大豆酪蛋白消化肉湯(Soybean Casein Digest Broth，SCDB)中進(jìn)行培養(yǎng)。在55-65℃下至少溫育7天，并觀(guān)察培養(yǎng)物，如果出現(xiàn)混濁就表示有細(xì)菌生長(zhǎng)。以所有測(cè)試小瓶中(#測(cè)試)中出現(xiàn)細(xì)菌生長(zhǎng)的小瓶(#陽(yáng)性)的數(shù)量作為所得結(jié)果見(jiàn)于表3。表3的數(shù)據(jù)顯示高溫短時(shí)間的消毒周期可以有效地對(duì)所述脂質(zhì)制劑進(jìn)行消毒。
表3

a使用型號(hào)為1342X的Barriquand過(guò)熱水壓力釜進(jìn)行的消毒周期。
b六輪獨(dú)立的測(cè)試，每輪中有12個(gè)小瓶。
c使用型號(hào)為121224-DP的Finn-Aqua飽和蒸汽壓力釜進(jìn)行的消毒周期。
d三輪獨(dú)立的測(cè)試，每輪中有10個(gè)小瓶。
實(shí)施例2使用具有蒸發(fā)式光散射檢測(cè)器的反相HPLC法檢測(cè)消毒后的脂質(zhì)降解。所述脂質(zhì)制劑的制備參見(jiàn)實(shí)施例1。用本發(fā)明的高溫、短時(shí)間消毒周期進(jìn)行消毒的結(jié)果參見(jiàn)表4-6。為了進(jìn)行比較，表7為用常規(guī)的低溫、長(zhǎng)時(shí)間的消毒周期進(jìn)行消毒的結(jié)果。對(duì)照(未消毒)溶液的濃度和經(jīng)消毒的溶液的濃度參見(jiàn)各表。經(jīng)消毒的溶液(與未經(jīng)消毒的對(duì)照溶液的濃度相比)的濃度改變已經(jīng)計(jì)算并顯示出來(lái)。同時(shí)顯示的還有所述制劑、停留時(shí)間和溫度、每輪消毒的小瓶數(shù)、計(jì)算的理論停留F0值(該消毒過(guò)程中熱輸入量的量度)。表4-7的數(shù)據(jù)顯示與具有可比性的低溫長(zhǎng)時(shí)間的消毒過(guò)程相比(也就是說(shuō)，具有相似F0值的消毒過(guò)程)，在高溫短時(shí)間的消毒過(guò)程中脂質(zhì)損耗較少。
表4

a為3個(gè)測(cè)定值的平均值。
*使用型號(hào)為6912D的Finn-Aqua飽和蒸汽壓力釜進(jìn)行的消毒周期表5

a為3個(gè)測(cè)定值的平均值。
*用型號(hào)為1342X的Barriquand過(guò)熱水壓力釜進(jìn)行的消毒周期。
表6

a為6個(gè)測(cè)定值的平均值*使用型號(hào)為1342X的Barriquand過(guò)熱水壓力釜進(jìn)行的消毒周期。
表7

a為3個(gè)測(cè)定值的平均值。
*使用型號(hào)為1342X的Barriquand過(guò)熱水壓力釜進(jìn)行的消毒周期。
實(shí)施例3同樣對(duì)在大規(guī)模的生產(chǎn)過(guò)程中使用本發(fā)明的高溫、短時(shí)間消毒周期進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)上述的優(yōu)選方法制備45L的脂質(zhì)體制劑。將該制劑放在小瓶中，調(diào)節(jié)小瓶頂部空間使其含有全氟丙烷氣體，在無(wú)菌條件下密封所述小瓶。然后，在如表8所述的條件下對(duì)小瓶進(jìn)行消毒。結(jié)果見(jiàn)表8。表8的數(shù)據(jù)顯示高溫、短時(shí)間的消毒周期可以用于大規(guī)模的生產(chǎn)過(guò)程中，而且脂質(zhì)沒(méi)有發(fā)生明顯降解。
表8

a為6個(gè)測(cè)定值的范圍。
實(shí)施例4此外，還對(duì)經(jīng)緩沖的脂質(zhì)制劑的使用進(jìn)行了檢測(cè)。根據(jù)實(shí)施例1中所述步驟加入磷酸鈉和檸檬酸鈉緩沖劑制備所述經(jīng)緩沖的制劑。結(jié)果參見(jiàn)下表9。表9的結(jié)果表明，與不加緩沖液的制劑相比，在消毒過(guò)程中，含有pH為6.5的緩沖劑的制劑的脂質(zhì)降解較少。
表9

a制劑還含有0.75mg/ml脂質(zhì)共混物，0.1ml/ml丙二醇，0.1ml/ml甘油，以及水。
b3個(gè)測(cè)量值的平均值*使用型號(hào)為6912D的Finn-Aqua飽和蒸汽壓力釜進(jìn)行的消毒周期實(shí)施例5同樣研究在大規(guī)模的生產(chǎn)工藝過(guò)程中經(jīng)緩沖的制劑的脂質(zhì)降解。結(jié)果見(jiàn)下表10。表10的數(shù)據(jù)表明大規(guī)模生產(chǎn)的經(jīng)磷酸鈉或檸檬酸鈉緩沖的制劑，用本發(fā)明的高溫短時(shí)間的消毒周期進(jìn)行消毒只產(chǎn)生了極少部分的脂質(zhì)降解。
表10

a制劑還含有0.75mg/ml脂質(zhì)共混物，0.1ml/ml丙二醇，0.1ml/ml甘油，以及水。
b3個(gè)測(cè)量值的范圍*使用型號(hào)為6912D的Finn-Aqua飽和蒸汽壓力釜進(jìn)行的消毒周期實(shí)施例6用具有蒸發(fā)性光散射檢測(cè)器的反相HPLC法檢測(cè)經(jīng)本發(fā)明的高溫短時(shí)間消毒周期進(jìn)行消毒的脂質(zhì)制劑中所存在的已知雜質(zhì)。所述脂質(zhì)制劑的制備參見(jiàn)實(shí)施例1和4。檢測(cè)到的雜質(zhì)包括棕櫚酸、溶血卵磷脂(1-?；?[lyso-PC(1-acyl)]、棕櫚酰溶血卵磷脂(1-?；?，mPEG5K-lyso-PE[甲氧基聚乙二醇5000棕櫚酰溶血磷脂酰膽堿乙二醇胺(1-?；?)。結(jié)果參見(jiàn)下表11。表中包括所檢測(cè)到的脂質(zhì)雜質(zhì)的總百分比(總雜質(zhì))，其計(jì)算如下雜質(zhì)的濃度/(0.75mg/ml)*100。表11的結(jié)果表明經(jīng)過(guò)本發(fā)明的高溫短時(shí)間消毒，經(jīng)緩沖和未經(jīng)緩沖的制劑只產(chǎn)生極少量的雜質(zhì)。表11的結(jié)果還表明經(jīng)緩沖的制劑中所產(chǎn)生的雜質(zhì)明顯低于未經(jīng)緩沖的制劑所產(chǎn)生的雜質(zhì)。
表11

a制劑還含有0.75mg/ml脂質(zhì)共混物，0.1ml/ml丙二醇，0.1ml/ml甘油，以及水。
b2個(gè)測(cè)量值的平均值*使用型號(hào)為6912D的Finn-Aqua飽和蒸汽壓力釜進(jìn)行的消毒周期實(shí)施例7同樣在大規(guī)模的生產(chǎn)工藝過(guò)程中，對(duì)經(jīng)過(guò)本發(fā)明的高溫短時(shí)間的消毒周期進(jìn)行消毒的脂質(zhì)制劑中出現(xiàn)的已知雜質(zhì)進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果見(jiàn)下表12。表12的數(shù)據(jù)顯示在大規(guī)模的生產(chǎn)工藝過(guò)程中，經(jīng)過(guò)本發(fā)明的高溫短時(shí)間消毒，經(jīng)緩沖和未經(jīng)緩沖的制劑只產(chǎn)生極少量的雜質(zhì)。
表12

a制劑還含有0.75mg/ml脂質(zhì)共混物，0.1ml/ml丙二醇，0.1ml/ml甘油，以及水。
b3個(gè)測(cè)量值的范圍*使用型號(hào)為6912D的Finn-Aqua飽和蒸汽壓力釜進(jìn)行的消毒周期本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)知曉，可以不偏離本發(fā)明的精神對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案作出大量修改和變換。因此，所附的權(quán)利要求包括所有等同替換，它們同樣落在本發(fā)明的實(shí)際范圍和精神之內(nèi)。例如，本發(fā)明的脂質(zhì)體有很多本發(fā)明中沒(méi)有提及的其他應(yīng)用。這些其它用途，包括例如超聲的高溫增強(qiáng)劑和藥物運(yùn)載工具。在PCT申請(qǐng)WO92/22298和US 5209720中描述并請(qǐng)求保護(hù)了上述其它用途和其它相關(guān)主題。上述申請(qǐng)均作為本申請(qǐng)的參考文獻(xiàn)引入本文。
權(quán)利要求
1.一種處理含有脂質(zhì)的制劑的方法，包括以下步驟將所述制劑在大約126℃-130℃下放置大約2-10分鐘。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中將所述制劑在大約128℃±1℃的溫度下放置大約6±0.5分鐘。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，包括以下步驟在無(wú)菌條件下，將所述含有脂質(zhì)的制劑引入至少一個(gè)小瓶中。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，包括以下步驟在所述含有脂質(zhì)的制劑中加入一種穩(wěn)定賦形劑。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述穩(wěn)定賦形劑包括pH緩沖劑。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述pH緩沖劑包括檸檬酸鹽緩沖劑。
7.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述pH緩沖劑包括磷酸鹽緩沖劑。
8.如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述穩(wěn)定賦形劑包括丙二醇。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，包括調(diào)節(jié)所述含有脂質(zhì)的制劑的pH值的步驟。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，包括調(diào)節(jié)所述含有脂質(zhì)的制劑的總離子強(qiáng)度的步驟。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其中在所述調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度步驟之后，調(diào)節(jié)所述含有脂質(zhì)的制劑的pH值。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種對(duì)含有脂質(zhì)的制劑進(jìn)行消毒的方法，其中可選擇地對(duì)所述含有脂質(zhì)的制劑的pH值和離子強(qiáng)度進(jìn)行調(diào)節(jié)，所述含有脂質(zhì)的制劑在大約126℃－130℃下消毒大約2－10分鐘?？晒┻x擇的是，向所述含有脂質(zhì)的制劑中加入一種穩(wěn)定賦形劑。
文檔編號(hào)A23L3/10GK1518479SQ02807748
公開(kāi)日2004年8月4日 申請(qǐng)日期2002年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月3日
發(fā)明者P·K·惠, W·R·迪盧茲奧, P K 惠, 迪盧茲奧 申請(qǐng)人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布藥品公司