專(zhuān)利名稱(chēng)：提高慢病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞密度的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的細(xì)胞培養(yǎng)物。具體地講，本發(fā)明涉及用慢病毒，如用貓免疫缺陷病毒(FIV)感染的新型細(xì)胞培養(yǎng)物，該培養(yǎng)物含有合適的抗生素，以便提高細(xì)胞密度并且加強(qiáng)培養(yǎng)物的生長(zhǎng)。本發(fā)明還涉及用某些抗生素提高細(xì)胞培養(yǎng)物密度的新方法。
背景技術(shù)：
慢病毒構(gòu)成一類(lèi)可以在人類(lèi)和動(dòng)物體內(nèi)導(dǎo)致多種疾病的病毒。在所述疾病發(fā)病之前通常會(huì)有數(shù)月甚至是數(shù)年的潛伏期。例如，與AIDS相關(guān)的病理學(xué)是由人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIVs)引起的，并且是由疾病的慢性發(fā)展所導(dǎo)致的，通常在感染之后數(shù)年時(shí)間導(dǎo)致患者的惡病質(zhì)和死亡。
慢病毒還與諸如猿和猴的物種，以及諸如馬、驢、牛、山羊和綿羊的家畜的各種病理學(xué)相關(guān)。其中，馬傳染性貧血(EIA)已被鑒定為在世界范圍內(nèi)發(fā)生的最重要的馬傳染病。在世界上的大多數(shù)地方，綿羊的慢病毒是較常見(jiàn)的病原體，并且包括作為兩種主要類(lèi)型的Maedi-visna病毒和漸進(jìn)性肺炎病毒。牛免疫缺陷病毒是牛生病的重要因素。
其他慢病毒是諸如貓的動(dòng)物病理學(xué)的重要標(biāo)志。在結(jié)構(gòu)上類(lèi)似于HIV的貓免疫缺陷病毒能導(dǎo)致家貓死亡。有越來(lái)越多的醫(yī)生、獸醫(yī)和研究人員，將大量的時(shí)間和資源投入用于預(yù)防和治療由這些病毒導(dǎo)致的疾病。
一部分研究包括生長(zhǎng)含有細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞)的組織培養(yǎng)物，所述細(xì)胞已被一種或多種已知慢病毒感染。淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物或停泊依賴(lài)性(anchorage dependent)上皮樣細(xì)胞，如貓腎細(xì)胞培養(yǎng)物可以在T燒瓶、滾瓶、旋轉(zhuǎn)燒瓶和生物反應(yīng)器中，使用補(bǔ)充了高達(dá)大約20％至大約5％的牛血清白蛋白(BSA)的培養(yǎng)基，諸如最低必需培養(yǎng)基(MEM)、Roswell Park Memorial Institute(RPMI)、Dulbecco’s MEM(DMEM)和AIM V(Gibco/LTI，Grand Island NY)生長(zhǎng)。大規(guī)模培養(yǎng)物可以在添加剪切保護(hù)化合物、增稠劑、乳化劑或諸如甲基纖維素、羧甲基纖維素的化合物，以及諸如Pluronic系列的表面活性劑，例如BASF公司(Wyandotte，Michigan)生產(chǎn)的PLURONICF-68的條件下，在大的旋轉(zhuǎn)燒瓶(spinner)、發(fā)酵罐和生物反應(yīng)器中生長(zhǎng)。
在維持含有病毒的組織培養(yǎng)物時(shí)，研究人員試圖清除培養(yǎng)物中的有害細(xì)菌，以便含有病毒的細(xì)胞能夠生長(zhǎng)和繁殖。與此同時(shí)，一個(gè)相伴的目的是最大地增加細(xì)胞培養(yǎng)物的生長(zhǎng)。為了促進(jìn)生長(zhǎng)并且清除細(xì)菌，可向細(xì)胞培養(yǎng)物添加抗生素，通常是添加抗生素的組合物。例如US5958423提供了一種Madin-Darby牛腎(MDBK)細(xì)胞培養(yǎng)物，在該培養(yǎng)物中使用了高達(dá)30mcg/ml的多粘菌素(polymixin)B和新霉素，以及高達(dá)2.5mcg/ml的兩性霉素B。
本領(lǐng)域現(xiàn)在需要的是含有用慢病毒感染過(guò)的細(xì)胞的新的細(xì)胞培養(yǎng)物組合物。特別需要這樣的新型細(xì)胞培養(yǎng)物，其中，細(xì)胞生長(zhǎng)可以最大化，并且能同時(shí)使諸如細(xì)菌的有害生物的存在最少化。還需要生長(zhǎng)細(xì)胞培養(yǎng)物的新方法，其中，可以通過(guò)促進(jìn)組織生長(zhǎng)提高細(xì)胞密度。還需要能引起和促進(jìn)包括所述培養(yǎng)物的細(xì)胞生長(zhǎng)的，能優(yōu)化細(xì)胞培養(yǎng)物密度的新型添加劑。
發(fā)明概述在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種細(xì)胞培養(yǎng)物，它含有至少一種慢病毒感染的宿主細(xì)胞和生長(zhǎng)促進(jìn)數(shù)量的抗生素，所述抗生物主要由新霉素或它的生物學(xué)相容的鹽組成。
本發(fā)明還涉及一種細(xì)胞培養(yǎng)物，它包括至少一種慢病毒感染的宿主細(xì)胞，和新霉素或它的生物學(xué)相容的鹽，以便在基本沒(méi)有其他抗生素的情況下，所述新霉素的含量能有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，并且提高細(xì)胞培養(yǎng)物的密度。
還作為本發(fā)明的一部分的是一種提高細(xì)胞培養(yǎng)物密度的方法，所述培養(yǎng)物中的細(xì)胞已被慢病毒感染，該方法包括向所述細(xì)胞培養(yǎng)物中添加主要由新霉素或它的生物學(xué)可以接受的鹽組成的抗生素。
本發(fā)明還提供了一種適合添加到被慢病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物中的組合物。該組合物含有細(xì)胞密度提高數(shù)量的、主要由新霉素或它的生物學(xué)鹽組成的抗生素，同時(shí)含有至少一種細(xì)胞培養(yǎng)添加劑。所述細(xì)胞培養(yǎng)添加劑優(yōu)選是源于牛的血清。
通過(guò)下面所提供的對(duì)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)說(shuō)明，可以更好地理解本發(fā)明的上述和其他特征和優(yōu)點(diǎn)。
優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明涉及細(xì)胞培養(yǎng)物。與本發(fā)明相關(guān)的細(xì)胞培養(yǎng)物是那些適合研究的，能夠錨定(harboring)慢病毒，并且可以讓它生長(zhǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)物。因此，所述細(xì)胞培養(yǎng)物包括可以被一種或多種慢病毒感染的淋巴細(xì)胞和其他類(lèi)型的細(xì)胞。其他合適的細(xì)胞培養(yǎng)物包括貓淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞和上皮細(xì)胞樣細(xì)胞，如貓腎細(xì)胞、Crandell貓腎或CRFK細(xì)胞、FL6、FL72和FL74(貓淋巴細(xì)胞)細(xì)胞。T細(xì)胞淋巴細(xì)胞、以及IL-2獨(dú)立型FetJ和FL6淋巴細(xì)胞也可優(yōu)選用于本發(fā)明中。
本文所使用的術(shù)語(yǔ)“慢病毒”，包括所有已知的和尚有待發(fā)現(xiàn)的慢病毒，包括但不局限于馬傳染性貧血病毒、Maedin-visna病毒、漸進(jìn)性肺炎病毒、山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒、貓免疫缺陷病毒(FIV)、能感染諸如獼猴、非洲猴和狒狒的猿猴(simian)免疫缺陷病毒、以及I型和II型人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)。術(shù)語(yǔ)“慢病毒”還包括上述任意病毒的類(lèi)似物、衍生物和肽序列。本發(fā)明優(yōu)選使用非人慢病毒，特別是貓免疫缺陷病毒(FIV)。
可以用本領(lǐng)域已知方法培養(yǎng)本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)物。例如，可以通過(guò)公認(rèn)的方法，用一種或多種上述慢病毒對(duì)諸如淋巴細(xì)胞的宿主細(xì)胞進(jìn)行慢性感染，然后在合適的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基大體上是液體培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基更優(yōu)選是最初以基本上不含血清的培養(yǎng)基形式提供的。例如，可以將宿主細(xì)胞懸浮在液體培養(yǎng)基中。培養(yǎng)的細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞密度可以根據(jù)特定的宿主細(xì)胞、培養(yǎng)基、生長(zhǎng)箱而改變，不過(guò)，可以在每毫升細(xì)胞培養(yǎng)物(包括培養(yǎng)基)中有大約1×104-大約1×106合適細(xì)胞的范圍內(nèi)。所述細(xì)胞密度更優(yōu)選為大約每毫升2×105-大約5×105細(xì)胞。
作為本發(fā)明的另一部分，所述細(xì)胞培養(yǎng)物含有能在所述培養(yǎng)物中有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的合適的抗生素，與此同時(shí)，提高了細(xì)胞的生長(zhǎng)，并由此提高了細(xì)胞培養(yǎng)物的密度。本發(fā)明優(yōu)選使用的抗生素是新霉素，可以包括新霉素的生物學(xué)相容的鹽和衍生物，如硫酸新霉素。“生物學(xué)相容的”表示它的鹽或衍生物基本上不會(huì)對(duì)所述細(xì)胞產(chǎn)生不利的生物學(xué)影響。
在細(xì)胞培養(yǎng)物中添加的新霉素的量可以根據(jù)技術(shù)人員的需要加以改變，不過(guò)，通常以能提高細(xì)胞培養(yǎng)物密度的用量添加。大約5微克/毫升細(xì)胞培養(yǎng)物至大約60微克/毫升細(xì)胞培養(yǎng)物(包括培養(yǎng)基)范圍內(nèi)的新霉素用量通常是優(yōu)選的。在一種更優(yōu)選的實(shí)施方案中，以至少大約10微克/毫升的用量將新霉素添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中，更優(yōu)選至少大約20微克/毫升。更優(yōu)選的是，新霉素的用量可以在大約30微克/毫升至大約60微克/毫升的范圍內(nèi)。
優(yōu)選在不添加諸如多粘菌素B和慶大霉素的其他抗生素的情況下，用新霉素增強(qiáng)細(xì)胞培養(yǎng)物的生長(zhǎng)和密度。多粘菌素B可以是由多粘菌素B1和B2衍生的，它是通過(guò)生長(zhǎng)多粘芽孢桿菌(Prazmowski)Migula(芽孢桿菌科)而產(chǎn)生的。已發(fā)現(xiàn)，與單獨(dú)使用新霉素相比，在細(xì)胞培養(yǎng)物中添加新霉素和多粘菌素B，在很多場(chǎng)合下能導(dǎo)致細(xì)胞密度明顯較小程度的提高。
本發(fā)明細(xì)胞培養(yǎng)物的其他成分通常包括至少一種培養(yǎng)添加劑。所述培養(yǎng)添加劑可以是來(lái)源于牛的，如源于牛血清，并且可以包括牛血清和牛血清白蛋白(BSA)。所添加的培養(yǎng)添加劑的量，可以占最終細(xì)胞培養(yǎng)物體積的大約0.1-大約10％。
正如本文所披露的，與不含任何抗生素的慢病毒感染的宿主細(xì)胞的相同細(xì)胞培養(yǎng)物相比，使用新霉素可以將細(xì)胞密度提高至少大約20％，更優(yōu)選提高至少大約331/3％。可以通過(guò)可接受的方法評(píng)估細(xì)胞密度，包括使用臺(tái)盼蘭排阻在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上測(cè)定。
提供下面的實(shí)施例，是為了說(shuō)明本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面，而不應(yīng)當(dāng)被理解成對(duì)本發(fā)明的范圍的限定。
實(shí)施例在本實(shí)施例中，在諸如補(bǔ)充了源于BSA的2.5毫克/毫升ALBUMAX的改性DMEMF12培養(yǎng)基或AIM V培養(yǎng)基的無(wú)血清培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)用貓免疫缺陷病毒(FIV)慢性感染的Fet-J細(xì)胞。在37℃下，讓細(xì)胞在三角燒瓶的懸浮液中，在以150rpm的速度旋轉(zhuǎn)的旋轉(zhuǎn)搖床上生長(zhǎng)。以3×105活細(xì)胞/毫升的細(xì)胞密度培養(yǎng)細(xì)胞。通過(guò)在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上進(jìn)行臺(tái)盼蘭排阻測(cè)定細(xì)胞密度。通過(guò)用抗FIV Gp120單克隆抗體進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)完成了Gp120表達(dá)測(cè)定。評(píng)估FIV補(bǔ)充物(supplementation)的抗生素包括慶大霉素、新霉素和多粘菌素B。以30微克/毫升的濃度將相應(yīng)的抗生素?fù)饺肱囵B(yǎng)基中。通過(guò)上述方法，以24小時(shí)為基礎(chǔ)測(cè)定細(xì)胞密度。結(jié)果如下面的表1所示。
表1

來(lái)自表1的結(jié)果表明，補(bǔ)充了新霉素的細(xì)胞培養(yǎng)懸浮液具有最佳的總體生長(zhǎng)和細(xì)胞密度的提高。慶大霉素沒(méi)有明顯的作用，每天的細(xì)胞密度大體上與對(duì)照的相同。與不使用抗生素的培養(yǎng)物相比，添加多粘菌素B或同時(shí)添加新霉素和多粘菌素B的培養(yǎng)物，實(shí)際上抑制了細(xì)胞密度，并因此可能比僅使用新霉素本身的細(xì)胞密度更小。
盡管已結(jié)合本發(fā)明的特定實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了說(shuō)明，但是應(yīng)當(dāng)理解的是，在不超出本發(fā)明構(gòu)思或范圍的前提下，可以進(jìn)行多種改變和改進(jìn)。因此，本發(fā)明應(yīng)不被視為是由上述說(shuō)明書(shū)所限定的，而僅僅是由所附權(quán)利要求書(shū)的范圍限定的。
權(quán)利要求
1.一種細(xì)胞培養(yǎng)物，包括至少一種慢病毒感染的宿主細(xì)胞，和生長(zhǎng)促進(jìn)量的主要由新霉素或它的生物學(xué)相容的鹽或衍生物組成的抗生素。
2.如權(quán)利要求1的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述新霉素的添加量高達(dá)大約60微克/毫升所述培養(yǎng)物。
3.如權(quán)利要求1的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述宿主細(xì)胞被至少一種選自下列的慢病毒感染馬傳染性貧血病毒、Maedi-visna病毒、漸進(jìn)性肺炎病毒、山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒、貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿猴免疫缺陷病毒、以及I型和II型人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)。
4.如權(quán)利要求3的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述病毒選自貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿猴免疫缺陷病毒、以及I型和II型人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)。
5.如權(quán)利要求4的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述病毒是貓免疫缺陷病毒(FIV)。
6.如權(quán)利要求1的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述宿主細(xì)胞是淋巴細(xì)胞的至少一員。
7.如權(quán)利要求6的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述淋巴細(xì)胞是T細(xì)胞淋巴細(xì)胞。
8.如權(quán)利要求7的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述淋巴細(xì)胞選自IL-2獨(dú)立型FetJ和FL6淋巴細(xì)胞。
9.如權(quán)利要求1的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述新霉素的添加量為大約5微克/毫升起。
10.如權(quán)利要求9的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述用量的新霉素能有效提高所述細(xì)胞培養(yǎng)物的密度。
11.如權(quán)利要求10的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述用量的新霉素能有效抑制所述細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)菌生長(zhǎng)。
12.如權(quán)利要求11的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述新霉素的添加量為大約20微克/毫升起。
13.如權(quán)利要求12的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述新霉素的添加量為大約30微克/毫升起。
14.如權(quán)利要求5的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物存在于無(wú)血清培養(yǎng)基中。
15.如權(quán)利要求12的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞以大約1×105至大約5×105活細(xì)胞/毫升細(xì)胞培養(yǎng)物的密度培養(yǎng)。
16.如權(quán)利要求15的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞以大約3×105活細(xì)胞/毫升的密度培養(yǎng)。
17.一種細(xì)胞培養(yǎng)物，包括至少一種慢病毒感染的宿主細(xì)胞和新霉素，其中所述新霉素是以基本上沒(méi)有其他抗生素的形式添加的，其添加量能有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，并且提高所述細(xì)胞培養(yǎng)物的密度。
18.如權(quán)利要求17的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物基本上不含慶大霉素或多粘菌素B。
19.如權(quán)利要求17的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述新霉素在所述細(xì)胞培養(yǎng)物中的添加量為大約5微克/毫升至大約60微克/毫升所述培養(yǎng)物。
20.如權(quán)利要求19的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述新霉素在所述細(xì)胞培養(yǎng)物中的添加量為至少大約20微克/毫升。
21.如權(quán)利要求20的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述新霉素在所述細(xì)胞培養(yǎng)物中的添加量為至少大約30微克/毫升。
22.如權(quán)利要求17的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述慢病毒選自馬傳染性貧血病毒、Maedi-visna病毒、漸進(jìn)性肺炎病毒、山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒、貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿猴免疫缺陷病毒、以及I型和II型人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)中的至少一種。
23.如權(quán)利要求22的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述病毒選自貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿猴免疫缺陷病毒、以及I型和II型人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)。
24.如權(quán)利要求23的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述病毒是貓免疫缺陷病毒(FIV)。
25.如權(quán)利要求17的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述宿主細(xì)胞是淋巴細(xì)胞的至少一員。
26.如權(quán)利要求25的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述宿主細(xì)胞是T淋巴細(xì)胞。
27.如權(quán)利要求26的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述宿主細(xì)胞是選自IL-2獨(dú)立型FetJ和FL6T淋巴細(xì)胞中的至少一種。
28.如權(quán)利要求17的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞以大約1×105至大約5×105活細(xì)胞/毫升的密度培養(yǎng)。
29.如權(quán)利要求28的細(xì)胞培養(yǎng)物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞以大約3×105活細(xì)胞/毫升的密度培養(yǎng)。
30.一種提高細(xì)胞培養(yǎng)物的密度的方法，所述細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)胞被慢病毒感染，所述方法包括向細(xì)胞培養(yǎng)物中添加主要由新霉素組成的抗生素。
31.如權(quán)利要求30的方法，其中所述新霉素的添加量為大約5微克/毫升至大約60微克/毫升細(xì)胞培養(yǎng)物。
32.如權(quán)利要求31的方法，其中所述用量的新霉素能有效抑制所述細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)菌生長(zhǎng)。
33.如權(quán)利要求32的方法，其中所述新霉素的添加量至少為大約20微克/毫升。
34.如權(quán)利要求33的方法，其中所述新霉素的添加量至少為大約30微克/毫升。
35.如權(quán)利要求30的方法，還包括將所述細(xì)胞培養(yǎng)物培養(yǎng)至密度為大約1×105至大約5×105活細(xì)胞/毫升。
36.如權(quán)利要求35的方法，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)物培養(yǎng)至大約3×105活細(xì)胞/毫升。
37.如權(quán)利要求30的方法，還包括向所述培養(yǎng)物中添加至少一種培養(yǎng)添加劑。
38.如權(quán)利要求37的方法，其中所述培養(yǎng)添加劑是牛血清白蛋白(BSA)。
39.如權(quán)利要求30的方法，其中所述新霉素能有效提高細(xì)胞密度至少大約20％。
40.如權(quán)利要求39的方法，其中所述新霉素能有效提高細(xì)胞密度至少大約331/3％。
41.如權(quán)利要求40的方法，其中所述新霉素能有效提高細(xì)胞密度至少大約50％。
42.一種培養(yǎng)慢病毒感染的細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物的方法，包括向所述培養(yǎng)物中添加基本上沒(méi)有多粘菌素B或慶大霉素的新霉素。
43.如權(quán)利要求42的方法，其中所述新霉素的添加量為大約5微克/毫升至大約60微克/毫升細(xì)胞培養(yǎng)物。
44.如權(quán)利要求43的方法，其中所述用量的新霉素能有效抑制所述細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)菌生長(zhǎng)。
45.如權(quán)利要求43的方法，其中所述新霉素的添加量至少為大約20微克/毫升細(xì)胞培養(yǎng)物。
46.如權(quán)利要求45的方法，其中所述新霉素的添加量至少為大約30微克/毫升細(xì)胞培養(yǎng)物。
47.如權(quán)利要求42的方法，還包括向所述培養(yǎng)物中添加至少一種有效量的細(xì)胞培養(yǎng)添加劑。
48.如權(quán)利要求47的方法，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)添加劑是牛血清白蛋白(BSA)。
49.如權(quán)利要求42的方法，其中所述慢病毒選自馬傳染性貧血病毒、Maedi-visna病毒、漸進(jìn)性肺炎病毒、山羊關(guān)節(jié)炎-腦炎病毒、貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿猴免疫缺陷病毒、以及I型和II型人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)中的至少一種，所述細(xì)胞培養(yǎng)物含有淋巴細(xì)胞。
50.如權(quán)利要求49的方法，其中所述病毒選自貓免疫缺陷病毒(FIV)、猿猴免疫缺陷病毒、以及I型和II型人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)。
51.一種適用于用慢病毒感染過(guò)的細(xì)胞培養(yǎng)物的組合物，它包括(a)細(xì)胞密度提高量的主要由新霉素組成的抗生素；和(b)至少一種細(xì)胞培養(yǎng)添加劑。
52.如權(quán)利要求51的組合物，其中所述新霉素的添加量為大約5微克/毫升至大約60微克/毫升細(xì)胞培養(yǎng)物。
53.如權(quán)利要求52的組合物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)添加劑是源于牛的血清。
54.如權(quán)利要求53的組合物，其中所述細(xì)胞培養(yǎng)添加劑是牛血清白蛋白。
55.一種細(xì)胞培養(yǎng)物組合物，包括(a)大約1×105至大約5×105活細(xì)胞/毫升用貓免疫缺陷病毒慢性感染的Fet-J細(xì)胞；(b)至少大約10微克/毫升主要由新霉素或它的生物學(xué)相容的鹽或衍生物組成的抗生素。
全文摘要
用于加強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)并且提高含有慢病毒感染的宿主細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物的密度的組合物和方法，包括向培養(yǎng)物中添加合適量的抗生素，以便清除有害細(xì)菌。
文檔編號(hào)C12N7/01GK1514734SQ02809600
公開(kāi)日2004年7月21日 申請(qǐng)日期2002年5月3日 優(yōu)先權(quán)日2001年5月10日
發(fā)明者A·C·托馬斯, T·K·吳, A C 托馬斯, 吳 申請(qǐng)人:惠氏公司