專利名稱：具有tnf生成抑制作用的組合物和tnf生成抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物和TNF生成抑制劑。更確切地說，該發(fā)明涉及一種具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物和TNF生成抑制劑，通過抑制TNF的過量生成，他們可用于預(yù)防或改善各種由TNF介導(dǎo)的疾病，諸如慢性炎性疾病、急性炎性疾病、傳染性炎性疾病、自身免疫疾病和過敏性疾病。
背景技術(shù)：
TNF(腫瘤壞死因子)最早是作為一種抗腫瘤物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)的，后來其作為細(xì)胞因子參與炎癥過程的特征被揭示出來。TNF包括TNF-α和TNF-β(淋巴毒素)。已知TNF-α是在對由各種細(xì)胞，通常是巨噬和單核細(xì)胞產(chǎn)生的多種刺激物的應(yīng)答反應(yīng)中產(chǎn)生的，而TNF-β是T細(xì)胞產(chǎn)生的。只要TNF在體內(nèi)以正常水平產(chǎn)生，它就能在如保護(hù)生物體、提高其免疫活性中起到重要作用。然而，當(dāng)由于這樣或那樣的原因使得TNF生成或分泌過量時，會引起病理性炎癥、誘發(fā)或促進(jìn)TNF介導(dǎo)的疾病，諸如慢性炎癥、急性炎癥、傳染性炎癥、自身免疫疾病和過敏性疾病。因此，希望通過抑制TNF的過量生成來預(yù)防或改善這類TNF介導(dǎo)的疾病。
在日本Kokai出版物Hei-07-215884中，公布了一種具有TNF生成抑制效應(yīng)的紫蘇(perilla)提取物，其制備過程包括，研磨一種屬于Labiatae科的植物葉片，用水、一種有機(jī)溶劑如乙醇、或它們的混合物，抽提研碎的葉子，去掉提取組合物中的紫蘇醛和提取物中分子量超過10000的部分。該文件還公布，這種紫蘇提取物可以有效抵御諸如特應(yīng)性皮炎等過敏性疾病。
在日本Kokai出版物Hei-03-157330中，公布了表沒食子兒茶精沒食子酸酯，即茶(Camellia sinensis L.)葉中的一種成分，可以有效地作為抗過敏因子。在日本Kokai出版物Hei-10-72361中，公布了一種茶葉提取物具有TNF生成抑制效應(yīng)，該提取物通過用水、一種有機(jī)溶劑、或其混合物抽提茶葉片來獲得。
除了此類紫蘇提取物和茶葉提取物，Marion Man-Ying Chan(生化藥理學(xué)，49，1551-1556，1995)和Yoshiaki Abe et al.(藥理學(xué)研究，39，41-47，1999)報道了姜黃色素，即姜科(Zingiberaceae)姜黃(Curcuma longa L.)中的一種黃色成分，也具有TNF生成抑制效應(yīng)。然而，至于肉桂、丁香、甘草根或生姜或是它們的提取物是否有TNF生成抑制效應(yīng)，目前還不清楚。
發(fā)明概述按照前面所說的，本發(fā)明的一個目標(biāo)是提供一種具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物以及TNF生成抑制劑，其不會引起副作用或安全問題、可以抑制TNF的任何過量生成并且可用于預(yù)防或改善TNF介導(dǎo)的疾病。
本發(fā)明者們?yōu)橥瓿缮鲜瞿繕?biāo)作了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)肉桂(cinnamon)提取物、丁香(clove)提取物、甘草(licorice)根提取物以及生姜(ginger)提取物都有TNF生成抑制效應(yīng)。根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)，他們目前已經(jīng)完成了本發(fā)明。
因此本發(fā)明涉及一種具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物，其中至少包括肉桂、丁香、甘草根以及生姜的提取物之一。
此外，本發(fā)明涉及一種TNF生成抑制劑，其中至少包括肉桂、丁香、甘草根以及生姜的提取物之一。
而且，本發(fā)明涉及上述TNF生成抑制劑，其目的用于食品/飲料；以及上述TNF抑制劑，其目的用于制藥。
本發(fā)明還涉及一種預(yù)防或改善TNF介導(dǎo)疾病的制劑，其包括上述的TNF生成抑制劑。
發(fā)明詳述下面是對本發(fā)明的詳細(xì)描述。
本發(fā)明具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物和TNF生成抑制劑各自都至少包括肉桂、丁香、甘草根以及生姜的提取物之一。所述具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物可以以諸如食物、藥物等制品形式來利用，所述TNF生成抑制劑可以以此類提取物本身的形式或從它們衍生的制品形式來利用。
實施本發(fā)明中用到的起始植物肉桂是樟科(Lauraceae)的肉桂(Cinnamomum cassia)、錫蘭肉桂(C.zeylanicum)或C.loureirii；丁香植物是桃金娘科(Myrtaceae)的Syzygium aromaticum或Eugenia caryophyllata；甘草根植物是Fabaceae科的洋甘草(Glycyrrhiza glabra)、甘草(G.uralensis)或脹果甘草(G.inflate)；而生姜植物是姜科的姜(Zingiber officinale)。所有這些植物都有長期廣泛的作為食品成分或調(diào)味品的歷史，而其提取物也已經(jīng)被批準(zhǔn)作為食品添加劑。因此，它們不會帶來副作用或安全問題。
實施本發(fā)明中所用到的肉桂、丁香、甘草根和生姜的提取物，可以從上述植物中通過溶劑提取等方法而獲得。得到所述提取物的方法不僅限于溶劑提取，還有其它提取方法諸如蒸餾以及根據(jù)超臨界萃取技術(shù)用二氧化碳提取等。此外，所述提取物可以以粗制提取物或半純化提取物的形式用于本發(fā)明，除非這些形式中包含有使它們不適用于食品、飲料或藥品的雜質(zhì)。
在進(jìn)行溶劑提取時，以粉末、碎?；蛟跣问酱嬖诘纳鲜雒恳环N植物，可以，例如浸在1～20倍體積的下述溶劑中，然后在-20～100℃、優(yōu)選1～80℃、更優(yōu)選20～60℃，攪拌或靜置該混合物0.1小時至1個月，優(yōu)選0.5小時至7天。然后過濾或離心該混合物，濃縮所得提取液以去除溶劑獲得目的提取物。
提取所用的溶劑包括，水、丙酮、乙醇、甘油、乙酸乙酯、丙二醇、己烷和烹調(diào)用的脂和油。兩種或更多種上述溶劑也可混合使用。優(yōu)選使用提取后易于除去的有機(jī)溶劑，例如丙酮、乙醇、乙酸乙酯和己烷。
這樣得到的肉桂、丁香、甘草根和生姜的提取物，每一種都包含具有TNF生成抑制效應(yīng)的成分。而且，這種具有TNF生成抑制效應(yīng)的成分可以以一種從該提取物中濃縮或分離出來的形式來利用。
對上述提取物的TNF生成抑制效應(yīng)進(jìn)行評價的方法沒有特殊限制，但上述提取物可以如下進(jìn)行評價，例如，將它們加入一種實驗系統(tǒng)中，在這里可以對TNF的生成進(jìn)行誘導(dǎo)。因而，上述提取物可如下進(jìn)行體外評價用PMA(佛波醇12-十四烷基13-乙酸酯)或LPS(脂多糖)刺激人的細(xì)胞如單核和其它單核性質(zhì)的細(xì)胞，誘導(dǎo)TNF-α的生成，將上述任何提取物加入其中，培養(yǎng)細(xì)胞，然后測定培養(yǎng)基中TNF-α濃度。評價也可在體內(nèi)完成，具體例如利用經(jīng)LPS或免疫刺激物羅莫肽(romurtide)或OK432處理的小鼠，或?qū)嶋H上利用過敏疾病模型小鼠，將上述任何提取物給予小鼠，其后測定血中TNF濃度。
本發(fā)明具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物和TNF生成抑制劑都可以用于食品/飲料和藥物。在形式上沒有特別的限定，它們可以以例如食品/飲料的形式來利用，諸如宣稱有保健性的食品(用于特殊保健用途的食品和宣稱有營養(yǎng)功能的食品)或保健食品、或藥品、或準(zhǔn)藥物等等。
作為食品/飲料，它們可以直接攝入或用已知有利于攝入的載體、助劑等配制成易于攝入的產(chǎn)品，如膠囊、片劑、顆粒等等。在這樣的一種配制產(chǎn)品中，本發(fā)明TNF生成抑制劑的量優(yōu)選占重量的0.1～100％，更優(yōu)選10～90％。此外，它們還可以摻入所有食品和飲料產(chǎn)品的原材料中，如糖果類諸如口香糖、巧克力、糖塊、果凍、糕餅、脆餅干(crackers)等；冷凍甜食類諸如冰淇凌、冰糖果等；飲料類如茶、無酒精飲料、營養(yǎng)飲料、美容飲料等；面條類如日本小麥面條、中國面條、意大利式細(xì)面條、速食面等；魚醬類食品如碎魚和蒸魚(kamaboko)、魚腸(chikuwa)、碎肉(hannpen)等；調(diào)味品如調(diào)料、蛋黃醬、醬油等；含油類產(chǎn)品如人造黃油、黃油、色拉油等；烤制產(chǎn)品、火腿、湯、密封除菌食品、冷凍食品等等。在攝入此類TNF生成抑制性食品或飲料時，以提取物含量為基礎(chǔ)來計算，一個成年人每日攝入量優(yōu)選0.1～1,000mg/kg體重，更優(yōu)選1～100mg/kg體重。
作為藥物產(chǎn)品，在劑型上沒有特別的限定，包括膠囊、片劑、粒劑、注射劑、栓劑和貼劑等。這類劑型的制備方法包括，適宜地配伍藥學(xué)上可用于制劑的原材料，如賦形劑、崩解劑、潤滑劑、粘合劑、抗氧化劑、著色劑、聚合抑制劑、促吸收劑、促溶劑、穩(wěn)定劑等等。以提取物含量為基礎(chǔ)來計算，對成年人來說，此類制劑的每日劑量優(yōu)選0.1～1,000mg/kg，更優(yōu)選1～100mg/kg，其給藥量可為一日一次或一日幾次。
作為準(zhǔn)藥物產(chǎn)品，該組合物可以如下的形式進(jìn)行應(yīng)用，特別是如藥膏、擦劑、氣霧劑、霜劑、肥皂、洗面劑、身體清潔劑、花露水、洗液和洗浴劑等，需要時可伴隨有添加劑及其類似成分，其形式能保證適用于身體的各個部分。
預(yù)防或改善TNF介導(dǎo)的疾病的制劑，可以用本發(fā)明具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物或TNF生成抑制劑得到。因為在該TNF生成抑制劑中包含的肉桂、丁香、甘草根和/或生姜提取物，每一種都可以抑制TNF生成，所以該制劑可用于預(yù)防或改善各種TNF介導(dǎo)的疾病，諸如慢性炎性疾病、急性炎性疾病、傳染性炎性疾病、自身免疫疾病和過敏性疾病等。
這里所說的慢性炎癥疾病，特別是指，骨關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、炎癥性皮膚疾病(牛皮癬、濕疹性皮炎、脂溢性皮炎、扁平苔蘚、天皰瘡、大皰性類天皰瘡、大皰性表皮松解、蕁麻疹、血管性水腫、脈管炎、紅斑、皮膚嗜酸細(xì)胞增多、痤瘡、局限性脫發(fā)、嗜酸細(xì)胞增多性筋膜炎、動脈硬化等等)、炎性腸疾病(潰瘍性結(jié)腸炎、Crohn疾病等)以及類似疾病。
這里所說的急性炎癥疾病，特別是指，接觸性皮炎、成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、敗血癥(包括敗血癥誘發(fā)的器官疾病等)敗血病休克以及類似疾病。
這里所說的感染性炎癥疾病，特別是指，內(nèi)毒素休克、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)、惡病質(zhì)，以及其它由細(xì)菌、病毒、支原體等等感染引起的炎癥疾病(包括由于地方性動物病熱和非地方性動物病熱引起的發(fā)熱、疼痛、器官病等)，以及類似疾病。
這里所說的自身免疫疾病，特別是指，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)強(qiáng)直性脊椎炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎小球腎炎(如腎病綜合癥(如先天腎病綜合癥、輕微腎病變))、多發(fā)性硬化癥、多發(fā)性軟骨炎、硬皮病、皮膚肌炎、Wegener’s肉芽腫病、活動性慢性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬變、重癥肌無力、先天口炎性腹瀉、Grave疾病、肉樣瘤病、Reiter’s綜合癥、青少年糖尿病(I型糖尿病)、自身免疫性眼病(內(nèi)分泌性眼病、非感染性眼色素層炎、角膜炎(如干性角膜結(jié)膜炎、春季角膜結(jié)膜炎))、自身免疫性血液疾病(溶血性貧血、再生障礙性貧血、先天性血小板減少癥等等)，以及類似疾病。
這里所說的過敏性疾病，特別是指，特應(yīng)性皮炎、哮喘性疾病(支氣管哮喘、嬰兒哮喘、過敏性哮喘、內(nèi)因性哮喘、外因性哮喘、塵埃性哮喘、延時性哮喘、呼吸道超敏反應(yīng)、支氣管炎等)、過敏性鼻炎，以及類似疾病。
至于其它可能提及的TNF介導(dǎo)疾病，特別是指，抗胰島素II型糖尿病、耐受反應(yīng)、也就是在器官或組織移植(心、腎、肝、肺、骨髓、角膜、胰腺、島細(xì)胞、小腸、十二指腸、端、肌肉、神經(jīng)、黃骨髓、皮膚等的同源或異源移植)時發(fā)生的排斥和移植物抗宿主(GvH)疾病、骨質(zhì)疏松癥、癌性惡病質(zhì)、彌散性血管內(nèi)凝血、外傷、燒傷、例如被動物或植物成分(包括毒液等)誘導(dǎo)的、或由于服藥產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)(包括休克)，以及類似疾病。
實施本發(fā)明的最佳模式下述實施例更具體地舉例說明本發(fā)明。但這些實施例并非限定本發(fā)明的范圍。
(實施例1)肉桂提取物的制備用一個玻璃容器，將1000g肉桂粉(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸于5倍體積的乙酸乙酯中，室溫、避光靜置1星期，偶爾攪拌。接著將該混合物通過濾紙(ADVANTEC No.2)過濾兩遍，以除去粉末并回收提取物溶液。該提取物溶液經(jīng)減壓濃縮，去除溶劑并回收到59.57g肉桂提取物。
(實施例2)丁香提取物的制備用一個玻璃容器，將600g丁香粉(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸于5倍體積的乙酸乙酯中，室溫、避光靜置1星期，偶爾攪拌。接著將該混合物通過濾紙(ADVANTEC No.2)過濾兩遍，以除去粉末并回收提取物溶液。該提取物溶液經(jīng)減壓濃縮，去除溶劑并回收到47.59g丁香提取物。
(實施例3)甘草提取物的制備用一個玻璃容器，將500g甘草粉(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸于5倍體積的乙酸乙酯中，室溫、避光靜置1星期，偶爾攪拌。接著將該混合物通過濾紙(ADVANTEC No.2)過濾兩遍，以除去粉末并回收提取物溶液。該提取物溶液經(jīng)減壓濃縮，去除溶劑并由此獲得33.91g甘草提取物。
(實施例4)生姜提取物的制備用一個玻璃容器，將700g生姜粉(Kaneka Sun Spice Co.，Ltd.)浸于5倍體積的乙醇中，室溫、避光靜置1星期，偶爾攪拌。接著將該混合物通過濾紙(ADVANTEC No.2)過濾兩遍，以除去粉末并回收提取物溶液。該提取物溶液經(jīng)減壓濃縮，去除溶劑并由此獲得41.03g生姜提取物。
(實施例5)TNF生成抑制效應(yīng)從每一個健康志愿者身上采血(50ml，加入肝素)，然后用Ficoll-PaquePULS(Amersham Pharmacia Biotech)分離單核細(xì)胞。所得單核細(xì)胞用PBS(磷酸鹽緩沖液)洗3次，然后懸浮在RPMI 1640培養(yǎng)基(Life Technologies)中，使其濃度達(dá)到5×106細(xì)胞/ml，然后以160μl/孔(＝8×105細(xì)胞/孔)比率加入96孔培養(yǎng)板。在37℃、5％二氧化碳孵箱中培養(yǎng)1小時后，用PBS洗去沒有貼附在板上的細(xì)胞。在含10％FBS(胎牛血清)的RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入在實施例1～4的每一例中獲得的提取物(1～30μg/ml)以及PMA(佛波醇12-十四烷基13-乙酸酯，15ng/ml)，然后將此培養(yǎng)基以150μl/孔的量加入各孔中，接著在37℃、5％二氧化碳孵箱中培養(yǎng)18～20小時。然后，用ELISA試劑盒(Life Technologies)測定培養(yǎng)基中人TNF-α的濃度。此外，活細(xì)胞可用細(xì)胞計數(shù)試劑盒(DOJINDO LABORATORIES)計數(shù)。
這樣測得的TNF-α水平和活細(xì)胞數(shù)見表1，它們是以對照組(未加提取物，僅加了PMA)為100％得到的相對百分?jǐn)?shù)(％對照)。
表1

從表1中明顯看出，肉桂、丁香、甘草根和生姜的提取物都可以按照量效依賴的方式減少TNF-α水平。對所有這些提取物來說，活細(xì)胞數(shù)是對照組的79～128％，說明TNF-α含量的降低不會造成細(xì)胞死亡。這些結(jié)果證明肉桂、丁香、甘草根和生姜提取物均有TNF生成抑制效應(yīng)。
(實施例6)含肉桂提取物的片劑的制備肉桂提取物45重量份乳糖 35重量份晶體纖維素15重量份蔗糖脂肪酸酯 5重量份按照上述配方，用于食品/飲料的含肉桂提取物片劑可通過現(xiàn)有成熟工藝進(jìn)行規(guī)模生產(chǎn)。
(實施例7)含丁香提取物的軟膠囊的制備丁香提取物40重量份麻油 55重量份甘油脂肪酸酯 5重量份按照上述配方，用于食品/飲料的含丁香提取物軟膠囊可通過現(xiàn)有成熟工藝進(jìn)行規(guī)模生產(chǎn)。
(實施例8)含甘草提取物的日本小麥面條的制備甘草提取物1重量份硬面粉100重量份軟面粉100重量份食鹽 10重量份水100重量份按照上述配方，含甘草提取物的日本小麥面條可通過現(xiàn)有成熟工藝進(jìn)行規(guī)模生產(chǎn)。
(實施例9)含生姜提取物的脆餅干的制備生姜提取物1重量份軟面粉120重量份食鹽 1重量份發(fā)酵粉2重量份黃油 30重量份水40重量份按照上述配方，含生姜提取物的脆餅干可通過現(xiàn)有成熟工藝進(jìn)行規(guī)模生產(chǎn)。
工業(yè)應(yīng)用根據(jù)本發(fā)明，這里提供了一種具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物和TNF生成抑制劑。根據(jù)本發(fā)明，該具TNF抑制效應(yīng)的組合物和該TNF抑制劑，可用于預(yù)防或改善各種TNF介導(dǎo)的疾病，諸如慢性炎癥、急性炎癥、感染性炎癥、自身免疫疾病和過敏性疾病。
權(quán)利要求
1.一種具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物，其中至少包括肉桂提取物、丁香提取物、甘草根提取物和生姜提取物中的一種。
2.一種TNF生成抑制劑，其中至少包括肉桂提取物、丁香提取物、甘草根提取物和生姜提取物中的一種。
3.權(quán)利要求2的TNF生成抑制劑，其用作食品/飲料。
4.權(quán)利要求2的TNF生成抑制劑，其用作藥物。
5.一種用于預(yù)防或改善TNF介導(dǎo)的疾病的制劑，其中包含權(quán)利要求2的TNF生成抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明的目標(biāo)是提供一種具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物以及TNF生成抑制劑，其不會引起副作用或安全問題、可以抑制TNF的任何過量生成并且可用于預(yù)防或改善各種TNF介導(dǎo)的疾病，諸如慢性炎癥、急性炎癥、感染性炎癥、自身免疫疾病和過敏性疾病。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)肉桂、丁香、甘草根以及生姜的提取物中的每一種都有TNF生成抑制效應(yīng)。因此，上述目標(biāo)可以通過具有TNF生成抑制效應(yīng)的組合物和TNF生成抑制劑來達(dá)到，該組合物和抑制劑中至少包含肉桂、丁香、甘草根和生姜提取物中的一種。
文檔編號A23L1/30GK1533282SQ02814410
公開日2004年9月29日 申請日期2002年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月17日
發(fā)明者前辰正, 塚川美壽, 壽, 北原干郎, 郎, 中川格 申請人:鐘淵化學(xué)工業(yè)株式會社