專利名稱：Pcr微板核酸雜交elisa試劑盒中微孔板包被探針的技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
體外生物醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)背景技術(shù)：
PCR微板核酸雜交ELISA試驗融合了基因擴增(PCR)、核酸雜交、酶聯(lián)顯色技術(shù)(ELISA)三種技術(shù)。
1、基因擴增(PCR)技術(shù)PCR是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法在一定溫度控制下通過變性—復(fù)性—延伸的循環(huán)過程使靶核酸分子快速復(fù)制，被擴增的核酸產(chǎn)量呈指數(shù)上升，將極微量的靶核酸成百萬倍地擴增到足夠檢測到的水平。因此PCR技術(shù)的敏感性非常高。但因諸多因素的影響，限制了PCR技術(shù)的發(fā)展①假陰性 Tag酶活力不夠或活性受到抑制、引物設(shè)計不合理、提取模板質(zhì)量不過關(guān)等等會導(dǎo)致假陰性結(jié)果出現(xiàn)。②假陽性 PCR技術(shù)的高度敏感，極其微量的靶基因污染都會影響結(jié)果判斷出現(xiàn)假陽性。③相對特異性 由于存在同源序列，隨意設(shè)計的引物，其PCR產(chǎn)物在電泳分析時可能出現(xiàn)多條鏈。因此在設(shè)計引物時要考慮其絕對特異性和相對特異性。
2、核酸雜交技術(shù) 核酸雜交技術(shù)從上世紀(jì)60年代發(fā)展至今在諸多領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，特別是在分子生物學(xué)技術(shù)方面有突破性進(jìn)展。但目前在臨床應(yīng)用中，還沒有哪種方法能運用此技術(shù)很大規(guī)模的進(jìn)行臨床標(biāo)本檢測。如各臨床實驗室較普遍應(yīng)用的斑點雜交技術(shù)，盡管特異性高、但靈敏度低、操作復(fù)雜、存在放射性污染，因此極大限制了該技術(shù)在臨床中的普及。我們創(chuàng)立的PCR核酸雜交ELISA試驗中的核酸雜交技術(shù)是以微孔板作雜交載體，將捕捉探針固定在微孔板內(nèi)捕捉待測核酸，再與用酶標(biāo)記的探針(指示探針)進(jìn)行雜交(夾心雜交)。這是核酸雜交技術(shù)的重大突破，是我們創(chuàng)立的PCR微板核酸雜交ELISA試驗核心內(nèi)容。
3、酶聯(lián)顯色技術(shù)(ELISA) ELISA集中了抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶促反應(yīng)的放大作用，有效的顯示雜交信號，使結(jié)果判讀客觀、簡單、快捷。
我們集中了上述三種技術(shù)的優(yōu)勢，避開他們各自的不足，創(chuàng)建PCR微板核酸雜交ELISA試驗，在體外生物醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)領(lǐng)域開辟了一塊新天地。

發(fā)明內(nèi)容
我們發(fā)明的微孔包被探針技術(shù)是PCR微板核酸雜交ELISA試驗的核心技術(shù)。該技術(shù)的原理是先將捕捉探針的5′端氨基進(jìn)行修飾，再將微孔板活化(活化劑配方保密)，顯示羧基基團(tuán)，捕捉探針通過共價鍵牢固地結(jié)合在微孔上，以捕捉待測樣本中的靶核酸。
具體實施方法是1、向微孔內(nèi)加入活化劑室溫進(jìn)行活化。2、用經(jīng)碳酸鹽緩沖液稀釋的捕捉探針在適宜的溫度下包被。3、在適宜溫度下封閉微孔一段時間，真空干燥封板。
權(quán)利要求
PCR核酸雜交ELISA試劑盒中微孔板包被探針的技術(shù)是體外診斷生物試劑的一部分。該技術(shù)方案為向微孔板內(nèi)加入活化劑室溫進(jìn)行活化，用經(jīng)碳酸鹽緩沖液稀釋的包被探針在適宜溫度下將板條進(jìn)行包被，在適宜溫度下封閉板條一段時間，干燥真空封板。1、微孔板加入活化劑進(jìn)行活化顯示氨基基團(tuán)的方法。
2.寡核苷酸探針的5’進(jìn)行羧基化羧基化的探針與微孔板上的氨基結(jié)合的方法及相關(guān)技術(shù)。
全文摘要
微孔板包被探針技術(shù)是體外生物醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)——PCR微孔板核酸雜交ELISA試驗中的一部分。該技術(shù)以微孔板作載體，先將捕捉探針固定于微孔板內(nèi)，加入指示探針和擴增產(chǎn)物進(jìn)行夾心雜交，通過對指示信號的檢測顯示試驗結(jié)果。微孔板包被探針技術(shù)的原理是先將捕捉探針的5′端氨基進(jìn)行修飾，再將微孔板活化(活化劑配方保密)，顯示羧基基團(tuán)，捕捉探針通過共價鍵牢固地結(jié)合在微孔板上，以捕捉待測樣本中的靶核酸。具體實施方法是1.向微孔板內(nèi)加入活化劑室溫進(jìn)行活化。2.用經(jīng)碳酸鹽緩沖液稀釋的捕捉探針在適宜的溫度下包被。3.在適宜溫度下封閉微孔板一段時間，真空干燥封板。
文檔編號C12P19/00GK1530447SQ0310697
公開日2004年9月22日 申請日期2003年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月12日
發(fā)明者王虹, 王 虹 申請人:王虹, 王 虹