專利名稱：人體基因組dna樣本的制備封存方法及封存裝置的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及基因樣本的制備與封存方法及所用的封存裝置，特別是人體基因組樣本的制備與封存方法及所用的封存裝置。
背景技術(shù)：
人體基因組是指人體細胞內(nèi)全部的遺傳物質(zhì)DNA?；蚪MDNA通過4種核苷酸的組合排列，蘊藏人體全部的遺傳信息，經(jīng)表達呈現(xiàn)人體全部的生命特征。保存人體基因組DNA樣本即保存人體的全部生命信息。近代分子生物學技術(shù)的進步，已能在體外對基因組DNA的各種基因進行檢測分析和克隆，用于疾病的基因診斷、個體識別、親權(quán)鑒定、基因家譜的構(gòu)建及遺傳疾病的調(diào)查等。
目前，某些發(fā)達國家如美國、日本等已成立許多專業(yè)公司，面向普通人群，開展個人基因樣本保存的服務，保存的基因組DNA可以長期維持其理化性質(zhì)及生物學活性的穩(wěn)定性。有的從商業(yè)角度出發(fā)，將某個人的基因組DNA封裝在首飾上，隨身佩帶，作為一種具有特殊意義的紀念物。但到目前為止，國外開展基因樣本保存服務的公司，為保持基因結(jié)構(gòu)的完整性和性質(zhì)的穩(wěn)定性，都將分離獲得的基因組DNA樣本存貯在超低溫條件下，費用甚為昂貴，個人難以實施。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決已有技術(shù)中人體基因組樣本制備和保存所存在的實施條件苛刻、費用昂貴、個人難以實現(xiàn)的問題，為此而提供本發(fā)明的人體基因組DNA樣本的制備封存方法及封存裝置，本方法操作比較簡單，費用省，所制樣本保存簡便且能在室溫下長期保存；本發(fā)明所用封存裝置，結(jié)構(gòu)簡明，實用性強，并具有長期保存、收藏的特殊價值與紀念意義。
為解決上述問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案其一是指人體基因組DNA樣本的制備封存方法，其二是指用于封存所述DNA樣本的封存裝置。
本發(fā)明所述人體基因組DNA樣本的制備封存方法，包括取人體組織細胞樣品，此樣品經(jīng)細胞裂解和RNA水解后，去除水解液中的蛋白質(zhì)，獲取含DNA的溶液，其特殊之處是在所述含DNA的溶液中加入沉淀劑使DNA呈絮狀沉淀的同時加入微孔玻璃顆粒并振搖，使沉淀的DNA吸附于微孔玻璃顆粒，經(jīng)液-固分離后制得包含DNA的粒狀樣本，將所述的粒狀樣本裝入玻璃安瓿并封口，再將裝有所述粒狀樣本的封口的玻璃安瓿置入金屬套筒，最后將所述的裝置有玻璃安瓿的金屬套筒嵌置于設有盲孔的透明封裝體的所述的盲孔內(nèi)。
所述將所述的粒狀樣本裝入玻璃安瓿并封口可以是指將粒狀樣本裝入玻璃安瓿經(jīng)除氧、充氮后封口，如此更有利于長期保存。
所述的微孔玻璃顆?？梢允侨缦骂w粒I、顆粒II或顆粒III之一種或數(shù)種，即微孔玻璃顆粒的直徑為顆粒I 43微米～74微米，顆粒II 74微米～125微米，顆粒III 125微米～177微米，微孔玻璃顆粒的孔徑為50納米～100納米。
使所述的樣本得以去雜純化，可將所述液-固分離后得到的包含DNA的粒狀樣本經(jīng)洗滌后干燥。洗滌所用洗滌液可以是濃度70％(W/W)的乙醇-水溶液或丙酮，干燥可以是室溫空氣中自然干燥或低溫真空干燥。
本發(fā)明所述的沉淀劑可以是異丙醇或無水乙醇。
本發(fā)明用于封存所述的DNA樣本的封存裝置，其特殊之處是設有透明封裝體，透明封裝體中設有盲孔，盲孔內(nèi)嵌置有金屬套筒，金屬套筒內(nèi)放置有用于封裝所述DNA樣本的玻璃安瓿。
所述的金屬套筒可以由套體I和套體II相互套合而成—相互卡套或經(jīng)螺紋配合而套合；于金屬套筒內(nèi)壁宜貼合有軟質(zhì)襯層，以防玻璃安瓿因碰撞而破碎；可以在金屬套筒外壁鍍設有鍍金(黃金或白金)層；金屬套筒外壁可以刻設有字符和/或圖案體，包括本品名稱和/或編號和/或本品生產(chǎn)廠名和/或有關(guān)徽標。
本發(fā)明中的金屬套筒，最好采用含鉛合金制成，這樣能防輻射。
本發(fā)明中的透明封裝體，采用水晶制成為合適，也可以由玻璃制成。
所述的透明封裝體可以是一體的。
所述的透明封裝體也可以是兩體結(jié)合而成的，即由支座及其上所嵌置的嵌合體構(gòu)成，所述的盲孔設于嵌合體。
在所述的透明封裝體上可以刻印有基因保存人的姓名和/或照像和/或其他個性化銘文。
可以在所述的透明封裝體上設有球缺狀弧形凹陷位于盲孔開口部位，在球缺狀弧形凹陷中可放置有具有裝飾效果的球體—水晶球體或玻璃球體，此球體也可以設制成地球儀樣式的。
透明封裝體上的所述的盲孔可以不限于一個。
在微孔玻璃顆粒上吸附有DNA的本發(fā)明的人體基因組DNA樣本，可用蒸餾水及TE緩沖液解析，得到溶有DNA的液體，該液體可直接用于基因分析。
本發(fā)明中的人體組織細胞樣品為何種組織無所限定，可以是血液樣品，也可以是口腔粘膜上皮細胞樣品或毛發(fā)樣品，還可以是其他樣品。此樣品作細胞裂解所用裂解液是本領域普通技術(shù)人員所能知曉的。細胞裂解后液體中含有DNA(脫氧核糖核酸)、RNA(核糖核酸)和蛋白質(zhì)，經(jīng)加入核糖核酸酶A溶液，使RNA水解溶于液體，再加入蛋白質(zhì)沉淀劑(有內(nèi)含醋酸銨的)使蛋白質(zhì)沉淀后除去之。
RNA水解及除去蛋白質(zhì)后的溶液含DNA，加入沉淀劑，如異丙醇、無水乙醇，使DNA呈絮狀沉淀。
適用于本發(fā)明的所述的微孔玻璃顆粒，可采用浙江省杭州市綠得力化工有限公司生產(chǎn)和銷售的微孔玻璃顆粒。
本發(fā)明由于在使DNA呈絮狀沉淀的同時加入微孔玻璃顆粒，使DNA吸附于微孔玻璃顆粒，經(jīng)液-固分離后制得包含DNA的粒狀樣本，故本發(fā)明制作簡便，費用省，所制樣本保存方便，并容易對樣本作DNA分析。微孔玻璃顆粒主要成分為二氧化硅，具有極高的物理化學穩(wěn)定性，不被酸、堿及有機溶劑溶解和改性；這種顆粒具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，有很大的吸附界面，能高效吸附DNA。本發(fā)明由于將所述的包含DNA的粒狀樣本裝入玻璃安瓿并封口，再將玻璃安瓿置入金屬套筒，最后將金屬套筒嵌置于透明封裝體的盲孔內(nèi)，故本發(fā)明的樣本封存較為方便，且可在室溫下長期保存，特別是玻璃安瓿除氧充氮后封口以及采用鉛合金的套筒，對DNA的長期保存更為有利。本發(fā)明的封存裝置，由透明封裝體、金屬套筒和玻璃安瓿組合而成，結(jié)構(gòu)簡明，對DNA樣本保存效果好，并可以室溫下長期保存；本封存裝置可以有多種形狀，使之具有特殊收藏價值與觀賞意義；封裝有人體基因組DNA樣本的本發(fā)明的封存裝置的保存，則更具有特殊紀念意義與收藏價值。


圖1是封存有人體基因組DNA樣本的一封存裝置結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是圖1裝置俯視圖；圖3是本發(fā)明中的玻璃安瓿示意圖；圖4是本發(fā)明中的金屬套筒示意圖；圖5是圖4金屬套筒局部放大示意圖；圖6是本發(fā)明中的一透明封裝體結(jié)構(gòu)示意圖；圖7是圖6封裝體俯視圖；
圖8是另一透明封裝體結(jié)構(gòu)示意圖；圖9是圖8封裝體俯視視圖；圖10是圖8封裝體右視圖；圖11是又一透明封裝體結(jié)構(gòu)示意圖；圖12是具有兩個盲孔的一透明封裝體結(jié)構(gòu)示意圖；圖13是圖11封裝體俯視圖；圖14是圖12封裝體俯視圖；圖15是具棱狀結(jié)構(gòu)的一透明封裝體結(jié)構(gòu)示意圖；圖16具有兩盲孔的又一透明封裝體結(jié)構(gòu)示意圖；圖17是圖15封裝體俯視圖；圖18是圖16封裝體俯視圖。
圖中標記為1透明封裝體，11盲孔，12支座，13嵌合體，14球缺狀弧形凹陷，2金屬套筒，21套體I，22套體II，3軟質(zhì)襯層，4含DNA的粒狀樣本，5玻璃安瓿。
具體實施例方式
實施例1 用人體血液制備基因組DNA樣本及其封存1、人體血液樣品采集和保存以乙二胺四乙酸(EDTA)做抗凝劑，采集全血500μl。此血樣在4℃可保存5天，如在-80℃冰凍保存，至少可維持2年而不變質(zhì)。
2、裂解細胞于300μl全血中加入紅細胞裂解液(內(nèi)含氯化銨、乙二胺四乙酸、碳酸氫鈉)900μl，使紅細胞裂解。經(jīng)離心沉淀，傾棄上清液，去除血紅蛋白，得白細胞沉淀。在沉淀中加入細胞裂解液(內(nèi)含三羥甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸鈉)300μl，裂解白細胞。
3、核糖核酸酶處理在細胞裂解物中加入核糖核酸酶A溶液(4mg/ml)1.5μl，經(jīng)混勻，37℃水浴保溫，使核糖核酸(RNA)降解，溶解于反應液中。
4、沉淀蛋白質(zhì)于上述反應液中加入蛋白質(zhì)沉淀劑(內(nèi)含醋酸銨)100μl，充分搖勻，使蛋白質(zhì)沉淀，經(jīng)離心，去除沉淀的蛋白質(zhì)，留取含DNA的上清液。
5、沉淀并吸附DNA在含DNA的上清液中加入100％異丙醇(或冷凍無水乙醇)300μl，結(jié)果DNA呈絮狀沉淀，同時加入微孔玻璃顆粒3mg，振搖，使沉淀的DNA吸附于微孔玻璃顆粒。再經(jīng)離心，傾去上清液(內(nèi)含RNA降解物及殘留的蛋白質(zhì))，留取的沉淀即為包含DNA的粒狀物(DNA緊密吸附于微孔玻璃顆粒)。此粒狀物用冷凍的70％乙醇(或丙酮)500μl洗滌兩次，以去除雜質(zhì)。最后得到吸附有DNA的微孔玻璃顆粒，置于室溫空氣中自然干燥或低溫真空干燥，目的物呈現(xiàn)白色干燥的細顆粒固型物，即為制得的人體基因組DNA純化樣本。
6、封存所制樣本4在安瓿拉絲灌封機上去氧充氮，封裝于玻璃安瓿5中；將封裝有所述樣本4的玻璃安瓿5放入外壁鍍金、內(nèi)壁貼合有軟質(zhì)襯層3的鉛合金制成的由套體I 21和套體II 22相互套合的金屬套筒2；將內(nèi)置有玻璃安瓿5(其內(nèi)裝有含DNA的粒狀樣本4)的金屬套筒2放置于水晶材料制成的透明封裝體1的盲孔11。
透明封裝體上的盲孔11可以是一個，也可以不限于一個。
實施例2 用人體口腔粘膜上皮細胞制備基因組DNA樣本及其封存用無菌專用尼龍刷在口腔內(nèi)壁刮擦數(shù)次，取出浸沒于500μl細胞裂解液中，并不時攪動；同時加入蛋白酶K溶液(20mg/ml)1.5μl，混勻后于55℃水浴中保溫過夜，使細胞充分裂解，釋出DNA，后續(xù)操作與上例步驟3、4、5、6相同。
實施例3 用人體頭發(fā)毛囊制備基因組DNA樣本及其封存用清潔不銹鋼鑷子拔取頭發(fā)3根，用蒸餾水清洗頭發(fā)及根部毛囊的附著物，然后從頭發(fā)根部剪取1cm，將發(fā)根毛囊部分浸入含有400μl細胞裂解液的離心管中，再加入蛋白酶K溶液2μl，56℃水浴保溫過夜。次日離心去除毛發(fā)及其它雜質(zhì)后，按例1步驟3、4、5、6程序操作。
實施例4 本發(fā)明一封存裝置如圖1所示，該封存裝置具有一透明封裝體1其上設有盲孔11，盲孔11內(nèi)嵌置有金屬套筒2，金屬套筒2內(nèi)放置有玻璃安瓿5，玻璃安瓿內(nèi)可裝入含人體基因組DNA的粒狀樣本4。金屬套筒2由套體I 21和套體II 22相互套合構(gòu)成(見圖5)，其外壁具有鍍金層，內(nèi)壁貼合有軟質(zhì)襯層3，金屬套筒2本體由鉛合金制成，其外壁刻有可反映本品名稱、編號、徽標的字符圖案體。透明封裝體1上刻印有基因保存人的姓名和/或照像和/或其他個性化銘文。
實施例5 另一封存裝置本例封存裝置，如圖8、9、10所示，具有透明封裝體1，該封裝體具有支座12，其上嵌設有嵌合體13，嵌合體上開設有盲目孔11，其他構(gòu)造與例4的相同。
圖6、7的透明封裝體，圖11、13的透明封裝體，圖12、14的透明封裝體，圖15、17的透明封裝體以及圖16、18的透明封裝體，分別可作為本發(fā)明中封存體的實施例中的透明封裝體。
權(quán)利要求
1.人體基因組DNA樣本的制備封存方法，包括取人體組織細胞樣品，此樣品經(jīng)細胞裂解和RNA水解后，去除水解液中的蛋白質(zhì)，獲取含DNA的溶液，其特征是在所述含DNA的溶液中加入沉淀劑使DNA呈絮狀沉淀的同時加入微孔玻璃顆粒并振搖，使沉淀的DNA吸附于微孔玻璃顆粒，經(jīng)液-固分離后制得包含DNA的粒狀樣本，將所述的粒狀樣本裝入玻璃安瓿并封口，再將裝有所述粒狀樣本的封口的玻璃安瓿置入金屬套筒，最后將所述的裝置有玻璃安瓿的金屬套筒嵌置于設有盲孔的透明封裝體的所述的盲孔內(nèi)。
2.如權(quán)利要求1所述的制備封存方法，其特征是將所述的粒狀樣本裝入玻璃安瓿并封口是指將粒狀樣本裝入玻璃安瓿經(jīng)除氧、充氮后封口。
3.如權(quán)利要求1所述的制備封存方法，其特征是所述的微孔玻璃顆粒為如下顆粒I、顆粒II或顆粒III之一種或數(shù)種微孔玻璃顆粒的直徑為顆粒I43微米～74微米，顆粒II74微米～125微米，顆粒III125微米～177微米，微孔玻璃顆粒的孔徑為50納米～100納米。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的制備封存方法，其特征是所述液-固分離后得到的包含DNA的粒狀樣本經(jīng)洗滌、干燥。
5.如權(quán)利要求4所述的制備封存方法，其特征是洗滌所用洗滌液為乙醇-水溶液或丙酮，干燥為室溫空氣中自然干燥或低溫真空干燥。
6.如權(quán)利要求5所述的制備封存方法，其特征是所述的沉淀劑為異丙醇或無水乙醇。
7.用于封存如權(quán)利要求1所述的DNA樣本的封存裝置，其特征是設有透明封裝體(1)，透明封裝體(1)中設有盲孔(11)，盲孔(11)內(nèi)嵌置有金屬套筒(2)，金屬套筒(2)內(nèi)放置有用于封裝所述DNA樣本的玻璃安瓿(5)。
8.如權(quán)利要求7所述的封存裝置，其特征是所述的金屬套筒(2)由套體I(21)和套體II(22)相互套合而成，金屬套筒(2)內(nèi)壁貼合有軟質(zhì)襯層(3)，金屬套筒(2)外壁鍍覆有鍍金層，金屬套筒(2)外壁刻設有字符和/或圖案體。
9.如權(quán)利要求7所述的封存裝置，其特征是透明封裝體(1)由支座(12)及其上所嵌置的嵌合體(13)構(gòu)成，所述的盲孔(11)設于嵌合體(13)。
10.如權(quán)利要求7所述的封存裝置，其特征是透明封裝體(1)上設有球缺狀弧形凹陷(14)位于盲孔(11)開口部位，在球缺狀弧形凹陷(14)中放置有一球體。
全文摘要
操作方便，費用省的人體基因組DNA樣本的制備封存方法，取人體組織細胞樣品，經(jīng)細胞裂解和RNA水解后去除水解液中的蛋白質(zhì)，獲取含DNA的溶液，在此溶液中加入沉淀劑使DNA呈絮狀沉淀的同時加入微孔玻璃顆粒并振搖，使沉淀的DNA吸附于微孔玻璃顆粒，經(jīng)液－固分離后制得包含DNA的粒狀樣本，將該粒狀樣本裝入玻璃安瓿并封口，再將該玻璃安瓿置入金屬套筒，最后將該金屬套筒嵌置于透明封裝體的盲孔內(nèi)。結(jié)構(gòu)簡明的封存裝置，設有透明封裝體(1)，透明封裝體(1)中設有盲孔(11)，盲孔(11)內(nèi)嵌置有金屬套筒(2)，金屬套筒(2)內(nèi)放置有用于封裝所述DNA樣本的玻璃安瓿(5)。本發(fā)明適用于人體基組DNA樣本的制備、保存以用于基因分析。
文檔編號C12Q1/68GK1537949SQ0311006
公開日2004年10月20日 申請日期2003年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月18日
發(fā)明者陳樞青, 厲朝龍, 陳亦勝 申請人:陳樞青, 陳亦勝, 厲朝龍