專利名稱：人纖溶酶原Kringle 5缺失突變重組多肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抗血管增生活性的人纖溶酶原Kringle5的突變體，特別是涉及一種人纖溶酶原Kringle5缺失突變重組多肽(簡(jiǎn)稱K5mut1)。
血管刺激因子(如VEGF)和抑制因子(如PEDF)之間的平衡在血管增生的調(diào)節(jié)中起關(guān)鍵作用(Bussolino，F(xiàn).et al.Trends Biochem.Sci.，22251-256，1997；Jimenez，B.，Volpert，O.V.，J.Mo1.Med.Jmm，78663-672，2001；Miller，J.W.et al.Diabetes Metab.Rev.，1337-50，1997)。在各種原因引起的角膜新生血管性病變、糖尿病性視網(wǎng)膜病、早期視網(wǎng)膜病和年齡相關(guān)性黃斑變性等病理狀態(tài)下，刺激因子過度產(chǎn)生而抑制因子產(chǎn)生下降，對(duì)局部缺氧作出反應(yīng)(Gao G.et al.FEBS Lett.，489270-276，2001；Pierce，E.A.et al.PNAS，92905-909，1995)，正常的平衡被打破從而導(dǎo)致大量不正常的新生血管形成。角膜新生血管、視網(wǎng)膜血管增生是致盲的一個(gè)普遍原因(Blom，M.L.et al.Del.Med.J.，66379-388，1994；Bussolino et al1997；Miller et al1997)。目前，導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管增生的分子機(jī)制尚不清楚。
有證據(jù)顯示，視網(wǎng)膜和玻璃體液中含有內(nèi)源性血管增生抑制因子(Jacobson，B.et al.Arch Ophthalmol.，1021543-1545，1984；Raymond，L.&Jacobson，B.，Exp.Eye Res.，34267-286，1982)。PEDF，一種絲氨酸蛋白酶抑制劑，被證明是視網(wǎng)膜內(nèi)一種內(nèi)源性表達(dá)的強(qiáng)力血管增生抑制因子(Dawson，D.W.et al.Science，285245-258，1999)。血管抑素被證明也是一種內(nèi)源性血管生成抑制因子(Spranger，J.et al.Diabetologia，431404-1407，2000)。血管抑素和PEDF伴隨進(jìn)行性糖尿病性視網(wǎng)膜病的發(fā)展而降低(Spranger et al2000；Spranger，J.et al.Exp.Clin.Endocrinol.Diabetes，10721-28，1999)。
在過去幾年中有一些內(nèi)源性血管增生抑制因子已被證實(shí)。這些抑制因子主要分為兩類一類是絲氨酸蛋白酶抑制劑，包括PEDF、maspin和抗凝血酶III(Dawson et al1999；O′Reilly，M.S.et al.Science，2851926-1928，1999；Zhang，M.etal.Nature Med.，6196-199，2000)，另一類是胞外蛋白肽片段，包括內(nèi)皮抑素、血管抑素、人纖溶酶原Kringle5(簡(jiǎn)稱K5)和腫瘤抑素等(Cao Y.et al.J.Biol.Chem.27222924-22928，1997；Cao Y.et al.J.Biol.Chem.27129461-29467，1996；Maeshima，Y.et al.J.Biol.Chem.，27631959-31968，2001；O′Reilly，M.S.et al.Cell，88277-285，1997；O′Reilly，M.S.et al.Cell，79315-328，1994)。在這些因子中，K5是最強(qiáng)的血管增生抑制因子之一(Cao Y.et al.J.Biol.Chem.27222924-22928，1997)。人纖溶酶原含有5個(gè)Kringle結(jié)構(gòu)域(Castellino，F(xiàn).J.&McCance，S.G CibaFound Symp.，21246-60，1997)，每個(gè)Kringle環(huán)由80個(gè)氨基酸組成，含3個(gè)二硫鍵，形成雙環(huán)狀構(gòu)象。人纖溶酶原水解后可產(chǎn)生一組具有抑制血管增生作用的小分子片段血管抑素(Kringles1-4)，Kringles1-5，Kringles1-3和Kringle5(K5)。不同的Kringle結(jié)構(gòu)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性的抑制能力順序?yàn)镵5＞K1＞K3＞K2＞K4(Cao et al.J.Biol.Chem.27129461-29467，1996；Cao et al.J.Biol.Chem.27222924-22928，1997)。人纖溶酶原Kringle5不僅能抑制內(nèi)皮細(xì)胞增生，且其抑制活性比血管抑素(即Kringle1-4)更強(qiáng)(Cao et al1997；Cao et al 1996；O′Reilly etal1994)，而且，K5也抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移，而內(nèi)皮細(xì)胞遷移在血管生成過程中是很重要的一個(gè)過程(Ji，W.R.et al.Biochem.Biophys.Res.Commun.，247414-419，1998；Lu，H.et al.Biochem.Biophys.Res.Commun.，258668-673，1999)。近來，已發(fā)現(xiàn)K5能抑制視網(wǎng)膜血管增生，因此，可能具有潛在的治療糖尿病性視網(wǎng)膜病、早期視網(wǎng)膜病和年齡相關(guān)性黃斑變性等疾病的價(jià)值(Zhang，D.et al.Daibetologia，44757-765，2001)，完整K5抑制RCEC細(xì)胞增值的EC50(EC50即抑制50％細(xì)胞增殖所需的藥物濃度)為70nM/L。
血管滲漏是包括腫瘤血管增生、糖尿病性斑點(diǎn)水腫和慢性炎癥等多種疾病的一個(gè)普遍的病理特征(Ciulla，T.A.et al.Surv.Ophthalmol.，43134-146，1998；Cunha-Vaz，J.G et al.Diabetes，3453-59，1985；Dvorak，H.F.N.Engl.J.Med.，3151650-1659，1986)。目前對(duì)血管滲漏還沒有滿意的治療手段。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明通過去掉K5分子的15個(gè)氨基酸殘基同時(shí)保留K5分子中的所有3個(gè)二硫鍵而得到，并在大腸桿菌中表達(dá)，親和層析純化，所述的纖溶酶原Kringle5缺失突變重組多肽的cDNA序列如序列表中的SEQ IDNO1所示，其氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO2所示。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)①抗血管生成活性本發(fā)明所述的K5mut1以濃度依賴的方式抑制原代培養(yǎng)視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞。在同樣濃度范圍內(nèi)，該肽并不抑制同源的外周細(xì)胞，表明具有內(nèi)皮細(xì)胞特異性抑制作用。該K5mut1的體內(nèi)作用采用氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜大鼠血管增生模型，注射K5mut1后，通過熒光血管造影術(shù)和血管細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示，視網(wǎng)膜新生血管叢和視網(wǎng)膜內(nèi)層血管細(xì)胞比注射PBS的對(duì)照組出現(xiàn)有意義性減少(P＜0.05)。未發(fā)現(xiàn)K5mut1對(duì)正常視網(wǎng)膜和正常血管有毒性作用。②降低視網(wǎng)膜中血管滲漏通過Evan藍(lán)—血清蛋白滲漏方法，注射K5mut1可降低視網(wǎng)膜內(nèi)血管滲漏。這些結(jié)果表明，K5mut1是一種比K5作用更強(qiáng)的血管增生抑制因子，在諸如糖尿病性視網(wǎng)膜病、年齡相關(guān)性黃斑變性和實(shí)體瘤等血管增生異常和血管滲漏疾病紊亂的治療中具有潛在的治療價(jià)值。
下面將結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
圖2是本發(fā)明實(shí)施例中K5mut1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的濃度依賴性作用和特異性抑制作用曲線。
圖3是本發(fā)明實(shí)施例中K5mut1在氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病模型中的抗血管增生作用示意圖。
圖4是本發(fā)明實(shí)施例中K5mut1體內(nèi)實(shí)驗(yàn)降低視網(wǎng)膜血管內(nèi)層增生細(xì)胞計(jì)數(shù)的示意圖。
圖5是本發(fā)明實(shí)施例中在氧誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜中K5mut1以濃度依賴性方式降低血管滲透性的示意圖。
1、K5mut1的構(gòu)建人K5cDNA通過RT-PCR從肝RNA擴(kuò)增(Ma J.X.et al.FEBS Lett，452199-204，1999)。缺失型突變體采用人K5本模板通過PCR擴(kuò)增得到。5′PCR引物(5′-ATGAATTCGTGTATGTTTGGGAATGGG-3′)和3′PCR引物(5′-GCCAAGCTTACACTGAGGGACATCACAGTAG-3′)各自含有EcoR I和HindIII位點(diǎn)以利于克隆。PCR刪除了K5分子N端編碼10個(gè)氨基酸殘基的核苷酸序列和C端編碼5個(gè)氨基酸殘基的核苷酸序列。PCR產(chǎn)物EcoR I和HindIII位點(diǎn)克隆到pET22載體(Novagen，Inc.，Madison，WI)，插入位點(diǎn)的5′端具有編碼信號(hào)肽的序列，在3′端含有編碼6個(gè)組氨酸的序列，K5/pET22重組體的準(zhǔn)確性和正確讀碼框架均經(jīng)序列測(cè)定確認(rèn)。
2、K5mut1在大腸桿菌中的表達(dá)和純化將突變型K5/pET22重組體導(dǎo)入大腸桿菌BL21/DE3(Novagen，Inc.，Madison，WI)株中。BL21/DE3本為載體能提供一種信號(hào)肽，使重組多肽進(jìn)入細(xì)菌細(xì)胞壁中。在25℃下用IPTG本用10小時(shí)能誘導(dǎo)突變型K5的表達(dá)，并用溶菌酶消化使細(xì)胞壁中的蛋白質(zhì)釋放，通過組氨酸親和層析柱(Novagen，Inc.，Madison，WI)來純化K5mut1。K5mut1的純度和鑒定采用SDS-PAGE和Western-blot的方法來分析，所用的抗體為組氨酸特異性抗體(Zhang et al2001)。
上述純化的重組多肽分子量為14kDa，與從序列翻譯計(jì)算而來的分子量相符，如

圖1A所示。采用抗組氨酸抗體進(jìn)行Western blot分析進(jìn)一步證實(shí)該純化重組多肽為導(dǎo)入目的基因編碼的K5mut1，如圖1B所示。從1L培養(yǎng)物中可平均獲得10mg純化肽。
3、重組K5mut1的活性檢測(cè)(1)重組K5mut1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的特異性抑制采用細(xì)胞計(jì)數(shù)方法，即細(xì)胞平鋪在12孔平板上，每組3孔，在培養(yǎng)基中培養(yǎng)直至60-70％細(xì)胞融會(huì)在一起。然后用含1％胎牛血清的培養(yǎng)基置換，重組K5mut1以各種濃度加在培養(yǎng)基中，與細(xì)胞共培養(yǎng)72小時(shí)，用MTT法定量測(cè)定存活內(nèi)皮細(xì)胞(Roche，Mannheim，Germany)。實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次，用t檢驗(yàn)法分析突變型K5對(duì)牛視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的抑制作用。
分別以5、10、20、40、80、160nM濃度的重組K5mut1處理RCEC細(xì)胞72小時(shí)，MTT分析計(jì)數(shù)活細(xì)胞，在10nM的低濃度下，用K5mut1處理，處理細(xì)胞比對(duì)照組細(xì)胞呈現(xiàn)有意義的下降(P＜0.05，n＝3)。而且K5mut1作用表現(xiàn)為濃度依賴性，如圖2所示。由圖2可知，在同樣濃度下，K5mut1對(duì)與RCEC同源的外周細(xì)胞沒有任何有意義的抑制作用，這表明K5mut1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞具有特異性的抑制作用。此外，由圖2還可看出，K5mut1的EC50為30nM/L，與文獻(xiàn)(ZhangD.et al.Diabetologia，44757-765，2001)中所公開的完整K5抑制RCEC細(xì)胞增值的EC50為70nM/L相比，K5mut1抑制視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞增生的效果較完整K5強(qiáng)約2.5倍。
(2)K5mut1在氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病模型中的抗血管增生作用氧誘導(dǎo)型視網(wǎng)膜血管增生大鼠模型為研究組建立(Gao G et al.Diabetes，511218-1225，2002)。簡(jiǎn)要如下新生有色Brown Norway大鼠出生7天后(P7)暴露于高氧(75％O2)5天，然后暴露于正常氧環(huán)境中。新生鼠12天(P12)，麻醉動(dòng)物，用玻璃毛細(xì)管將純化的K5mut1注射到右眼中。左眼用同樣容量的PBS作對(duì)照。注射后，動(dòng)物處于正常氧中飼養(yǎng)5天(P17)以便觀察K5mut1對(duì)視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。
通過把新生鼠暴露于高氧中在Brown Norway大鼠中誘導(dǎo)視網(wǎng)膜血管增生，方法如前所述(Gao et al.2002)。出生12天鼠(P12)玻璃體內(nèi)注射K5mut1，對(duì)照眼注射同體積PBS緩沖液。大鼠在正常氧中飼養(yǎng)5天，通過熒光血管造影術(shù)檢查大鼠(P17)視網(wǎng)膜血管增生情況。對(duì)照眼(PBS注射眼)有諸如新生血管叢、微動(dòng)脈瘤、擴(kuò)大化非充盈區(qū)域和血管滲漏等典型特征的血管增生，如圖3A所示，而K5mut1注射眼顯示明顯的視網(wǎng)膜血管改善的特征，如圖3B所示。在正常大鼠視網(wǎng)膜血管中，注射K5mut1未導(dǎo)致任何差異，如圖3C和圖3D所示。
定量分析顯示K5mut1劑量在3μg/眼時(shí)，視網(wǎng)膜內(nèi)層血管增生細(xì)胞顯著減少(P＜0.01，n＝8，圖4C所示)方法熒光標(biāo)記的高分子葡聚糖視網(wǎng)膜血管造影術(shù)和新生血管計(jì)數(shù)描述見Smith等方法(Smith，L.E.，et al.Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，35101-111，1994)。簡(jiǎn)要如下麻醉動(dòng)物，通過心室內(nèi)注射50mg/ml熒光標(biāo)記的高分子葡聚糖進(jìn)行熒光素灌注。立即處死大鼠，摘下眼球并用4％多聚甲醛固定10分鐘，顯微鏡下分離完整視網(wǎng)膜并用4％多聚甲醛固定3小時(shí)，剪切視網(wǎng)膜并在明膠包被的載玻片上制成扁平標(biāo)本。在熒光顯微鏡下檢查血管增生的程度。如前所述(Zhang D.，et al.Diabetologia44757-765，2001)，通過計(jì)數(shù)視網(wǎng)膜內(nèi)層血管細(xì)胞確定視網(wǎng)膜新生血管數(shù)量。注射PBS組為對(duì)照組。
視網(wǎng)膜內(nèi)層血管增生細(xì)胞計(jì)數(shù)表明，K5mut1劑量在3μg/眼時(shí)，視網(wǎng)膜血管增生細(xì)胞顯著減少(P＜0.01，n＝8)，而低劑量沒有明顯的抑制作用，如圖4所示。在缺氧條件下，單純注射該肽能抑制視網(wǎng)膜血管增生。在任何所分析的視網(wǎng)膜部分，注射K5mut1以后，沒有觀察到視網(wǎng)膜中毒的表觀組織學(xué)證據(jù)，這表明，該肽在所用的劑量范圍內(nèi)，對(duì)視網(wǎng)膜和正常血管系統(tǒng)不導(dǎo)致任何毒性。
(3)K5mut1對(duì)血管滲透性的作用血管滲透性測(cè)定方法采用Even藍(lán)染料，血管滲透性測(cè)定通過Even藍(lán)染料從血管滲透到視網(wǎng)膜、虹膜和脈絡(luò)膜等組織來進(jìn)行，所用方法根據(jù)文獻(xiàn)(Xu Q.，etal.Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.，42789-794，2001)并略加修改。Even藍(lán)染料溶解于正常鹽中(30mg/ml)，超聲波處理5分鐘，通過0.45μm濾膜過濾。大鼠麻醉后，在顯微鏡下，采用玻璃毛細(xì)管，股動(dòng)脈注射Even藍(lán)染料(30mg/kg)。Even藍(lán)染料非共價(jià)結(jié)合到血漿清蛋白。注射Even藍(lán)染料后，大鼠立即顯現(xiàn)藍(lán)色，表明染料已被吸收并均勻分布。大鼠置于暖墊上2小時(shí)確保染料循環(huán)完全。然后打開胸腔，左心室灌注1％多聚甲醛檸檬酸緩沖液，緩沖液預(yù)熱37℃以防止血管收縮。在120mmHg生理壓力下灌注持續(xù)2分鐘以清除血管中的染料。灌注后立即摘下眼球，在顯微鏡下仔細(xì)分離視網(wǎng)膜、虹膜和脈絡(luò)膜。每個(gè)樣品在70℃與150μl甲酰氨共育18小時(shí)以提取Even藍(lán)染料。提取液在4℃，70000rpm離心20分鐘(轉(zhuǎn)子類型TLA100.3，Beckman)，取100μl上清液620nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度。每個(gè)樣品提取物中Even藍(lán)染料的濃度通過甲酰氨中Even藍(lán)染料的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，并通過總蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)化。結(jié)果表示為μg Even藍(lán)染料/mg總蛋白質(zhì)。
血管滲透性測(cè)定結(jié)果在新生鼠出生14天(P14鼠)，即大鼠置于正常氧下2天后，大鼠右眼玻璃體內(nèi)注射不同劑量K5mut1(0.1，0.3，1.0μg/眼)，左眼注射同體積的PBS緩沖液，每一劑量組4只大鼠。兩天后(P16)，用Evan藍(lán)—血清滲漏方法測(cè)定血管滲透能力。氧誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜血管滲透能力，對(duì)比年齡匹配正常大鼠，顯示有意義性升高，如圖5所示。由圖5還可看出，氧誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜中，K5mut1以劑量依賴性方式降低血管滲透性。顯著降低血管滲透性所需的劑量比抑制視網(wǎng)膜血管增生所需的劑量低十倍。
本實(shí)施例證實(shí)，除了抗血管生成作用外，K5mut1能降低視網(wǎng)膜中血管滲漏，這種作用比其抑制視網(wǎng)膜血管增生活性更強(qiáng)，例如它可把氧誘導(dǎo)大鼠滲漏降低到年齡相配正常大鼠的水平?？寡苌苫钚孕?μg/眼，而降低血管滲漏僅需0.3μg/眼；在滲漏試驗(yàn)所用的劑量時(shí)，沒有明顯的抑制視網(wǎng)膜血管增生的作用，這表明K5mut1降低血管滲漏不可能是抑制血管增生的結(jié)果。盡管作用于血管滲漏的機(jī)制還不明確，抑制VEGF產(chǎn)生可能起主要作用，正如以前研究所顯示的K5能下調(diào)氧誘導(dǎo)大鼠視網(wǎng)膜VEGF表達(dá)一樣(Gao G，et al.J.Biol.Chem.，277(11)9492-9497，2002)。減少血管滲漏可為該肽治療實(shí)體瘤、糖尿病性視網(wǎng)膜病和慢性炎癥提供另一有利的作用。
綜上所述，本發(fā)明所述的K5缺失突變重組多肽在抑制血管增生方面比K5擁有更強(qiáng)的抑制活性，在低濃度也能抑制血管滲漏，而且，它比K5更短，能在大腸桿菌中大規(guī)模地表達(dá)，這些特性表明該重組多肽在治療血管增生性疾病和諸如斑點(diǎn)水腫等血管滲漏中具有巨大的潛在治療價(jià)值。
序列表<110>廣州市啟源生物科技有限公司<120>人纖溶酶原Kringle 5缺失突變重組多肽<160>2<210>1<211>240<212>cDNA<213>人工序列<220><221><222><223><400>1tgtatgtttg ggaatgggaa aggataccga ggcaagaggg cgaccactgt tactgggacg 60ccatgccagg actgggctgc ccaggagccc catagacaca gcattttcac tccagagaca 120aatccacggg cgggtctgga aaaaaattac tgccgtaacc ctgatggtga tgtaggtggt 180ccctggtgct acacgacaaa tccaagaaaa ctttacgact actgtgatgt ccctcagtgt 240<210>2<211>80<212>PRT<213>人工序列<220><221>mutation<222><223><400>2Cys Met Phe Gly Asn Gly Lys Gly Tyr Arg Gly Lys Arg Ala Thr Thr15 10 15Val Thr Gly Thr Pro Cys Qln Asp Trp Ala Ala Gln Glu Pro His Arg20 25 30His Ser Ile Phe Thr Pro Glu Thr Asn Pro Arg Ala Gly Leu Glu Lys35 40 45Asn Tyr Cys Arg Asn Pro Asp Gly Asp Val Gly Gly Pro Trp Cys Tyr50 55 60Thr Thr Asn Pro Arg Lys Leu Tyr Asp Tyr Cys Asp Val Pro Gln Cys65 70 75 80
權(quán)利要求
1.人纖溶酶原Kringle5缺失突變重組多肽，其特征是該重組多肽的cDNA序列如序列表中的SEQ ID NO1所示，其氨基酸序列如序列表中的SEQ ID NO2所示。
2.如權(quán)利要求1所述的人纖溶酶原Kringle5缺失突變重組多肽，其特征是該突變重組體的構(gòu)建方法為采用人K5作模板通過PCR擴(kuò)增得到，5′PCR引物5′-ATGAATTCGTGTATGTTTGGGAATGGG-3′和3′PCR引物5′-GCCAAGCTTACACTGAGGGACATCACAGTAG-3′各自含有EcoR I和HindIII位點(diǎn)，PCR刪除了K5分子N端編碼10個(gè)氨基酸殘基的核苷酸序列和C端編碼5個(gè)氨基酸殘基的核苷酸序列，PCR產(chǎn)物EcoR I和HindIII位點(diǎn)克隆到pET22載體，插入位點(diǎn)的5′端具有編碼信號(hào)肽的序列，在3′端含有編碼6個(gè)組氨酸的序列。
3.如權(quán)利要求2所述的人纖溶酶原Kringle5缺失突變重組多肽，其特征是所述的突變型K5/pET22重組體在大腸桿菌中表達(dá)，親和層析純化。
4.如權(quán)利要求3所述的人纖溶酶原Kringle5缺失突變重組多肽，其特征是所述的大腸桿菌為BL21/DE3株。
5.如權(quán)利要求3所述的人纖溶酶原Kringle5缺失突變重組多肽，其特征是通過組氨酸親和層析柱來純化K5mut1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種人纖溶酶原Kringle 5缺失突變重組多肽(K5 mut1)，該重組多肽通過去掉K5分子的15個(gè)氨基酸殘基同時(shí)保留K5分子中的所有3個(gè)二硫鍵而得到，并在大腸桿菌中表達(dá)，親和層析純化。本發(fā)明所述的K5 mut1對(duì)血管增生和血管滲漏具有高效治療作用該K5 mut1以濃度依賴的方式抑制原代培養(yǎng)視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞，具有內(nèi)皮細(xì)胞特異性抑制作用；注射K5 mut1后，視網(wǎng)膜新生血管叢和視網(wǎng)膜內(nèi)層血管細(xì)胞比注射PBS的對(duì)照組出現(xiàn)有意義性減少(P＜0.05)；此外，注射K5 mut1還可降低視網(wǎng)膜內(nèi)血管滲漏。因此，K5 mut1是一種比K5作用更強(qiáng)的血管增生抑制因子，在諸如角膜新生血管性疾病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、年齡相關(guān)性黃斑變性和實(shí)體腫瘤等血管增生異常和血管滲漏疾病紊亂的治療中具有潛在的治療價(jià)值。
文檔編號(hào)C12N1/20GK1451746SQ0311395
公開日2003年10月29日 申請(qǐng)日期2003年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月20日
發(fā)明者高國(guó)全, 馬建興, 劉祖國(guó), 李民友 申請(qǐng)人:廣州市啟源生物科技有限公司