專利名稱：培養(yǎng)和增殖脂肪組織來源的干細(xì)胞的方法
發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及脂肪組織衍生的干細(xì)胞，特別是涉及一種在細(xì)胞未分化條件下以較高的增殖速率培養(yǎng)成人脂肪組織衍生的干細(xì)胞的方法。
發(fā)明的背景機(jī)體對(duì)細(xì)胞和組織的損傷有著巨大的修補(bǔ)和恢復(fù)能力，不僅可以恢復(fù)細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)，而且還可在不同程度上恢復(fù)其功能。。一般說來，這些修復(fù)過程都是通過局部未受損組織細(xì)胞的分裂和增殖來完成的。目前臨床上廣泛采用的組織修復(fù)方法包括自體組織移植、異體組織移植和使用天然或化學(xué)合成的組織替代物。其中自體組織移植雖然避免了免疫排斥反應(yīng)，但一般都要損傷人體自身的正常組織；而異體移植則可導(dǎo)致免疫排斥，并存在供體來源有限和論理問題。使用人工組織替代物同樣也存在異物排斥問題，并且有造成感染的危險(xiǎn)。
隨著再生醫(yī)學(xué)的建立和發(fā)展，科學(xué)家們已經(jīng)有可能應(yīng)用細(xì)胞工程和組織工程技術(shù)，基于基質(zhì)網(wǎng)架、相應(yīng)的組織細(xì)胞和生長因子三個(gè)基本要素，模擬機(jī)體組織器官的天然條件和發(fā)育生物學(xué)規(guī)律，摻入活細(xì)胞、天然細(xì)胞成分、細(xì)胞合成產(chǎn)物及細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間調(diào)節(jié)物質(zhì)等，人工構(gòu)建例如軟骨、骨、肌腱、肌肉、皮膚、血液、心瓣膜及血管等不同的生物組織和器官。再生醫(yī)學(xué)包括組織器官形態(tài)再生和功能再生兩個(gè)方面。一般說來，人們總是期望再生的組織不僅能夠從形態(tài)學(xué)上修復(fù)或替代受到損傷的局部細(xì)胞或組織，同時(shí)更希望能夠恢復(fù)和補(bǔ)償受損傷細(xì)胞或組織的生理功能。
近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)和臨床醫(yī)學(xué)的不斷進(jìn)步，基因治療這一醫(yī)療方法已引起了越來越多的醫(yī)學(xué)研究與臨床工作者的關(guān)注和積極參與。目前，已出現(xiàn)了許多將轉(zhuǎn)移或修飾遺傳材料的技術(shù)與細(xì)胞工程或組織工程技術(shù)相結(jié)合，用于修復(fù)或補(bǔ)償局部組織或器官的遺傳缺陷或功能缺失(或低下)的研究報(bào)導(dǎo)(如參見美國專利6,077,981、6,103,230、6,264,941等)。然而，這些技術(shù)非常復(fù)雜，所需成本很高，目前仍處于早期實(shí)驗(yàn)室研究階段。
為了有效地修補(bǔ)和恢復(fù)局部受損傷細(xì)胞的正常形態(tài)與功能，除了目前尚存在大量的技術(shù)問題有待解決和選擇使用即有良好的組織相容性，又能極好地模擬體內(nèi)環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)外，順利地取得并培養(yǎng)移植后持續(xù)保留其固有形態(tài)與功能的種子細(xì)胞，仍是細(xì)胞工程和組織工程領(lǐng)域內(nèi)一個(gè)亟待解決的問題。
近年來，由于不受人類倫理觀念的影響而且沒有免疫學(xué)排斥問題，所以使用骨髓干細(xì)胞再造各種中胚層起源的組織的研究已取得了很大進(jìn)展。人骨髓是由胚胎的中胚層演化來的，主要由造血干細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞組成(Paul，SR.，Blood771723，1991)。雖然目前人們對(duì)造血干細(xì)胞的分裂和分化已有了較多的了解，但有關(guān)基質(zhì)細(xì)胞群的研究還有待深入。人和哺乳動(dòng)物的骨髓基質(zhì)細(xì)胞是包括多種細(xì)胞成份的異質(zhì)細(xì)胞群體，其中之一即是能夠分化成脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞和成骨細(xì)胞等多種細(xì)胞成分的多潛能基質(zhì)干細(xì)胞(Caplan，AI.etal.，J.Orthop.Res.9641，1991)。并且提示這些細(xì)胞有可能用于軟骨、脂肪和骨等組織的修復(fù)(參見美國專利5,827,735、5,906,934、5,908,784和6,322,784)以及細(xì)胞或組織的遺傳修飾(參見美國專利5,591,625)。雖然基質(zhì)干細(xì)胞的研究為組織再生和分化提供了有希望的材料來源，但其應(yīng)用研究還存在不少的技術(shù)問題。首先，這些細(xì)胞在骨髓細(xì)胞中的含量很低(只占大約1/100,000)，從而增加了獲得并分離細(xì)胞的難度和成本。另外，傳統(tǒng)的骨髓穿刺方法也不可避免地給供體帶來某些疼痛和術(shù)后不適。再者，這些細(xì)胞的采集和培養(yǎng)也比較困難。因此，本領(lǐng)域特別需要進(jìn)一步提供來源普遍、無須對(duì)培養(yǎng)材料進(jìn)行過多預(yù)篩選的多能干細(xì)胞來源，以及由之衍生其他體細(xì)胞和結(jié)締組織細(xì)胞的方法。這樣，人們未來就有可能利用組織工程技術(shù)，已有可能借助基質(zhì)網(wǎng)架或無細(xì)胞支架，使細(xì)胞按照限定的三維空間結(jié)構(gòu)生長和繁殖，以再生整個(gè)組織甚至器官。
中國專利申請(qǐng)00807461號(hào)公開了衍生于人脂肪組織的干細(xì)胞(ADSC)和網(wǎng)架(結(jié)締組織干細(xì)胞)及其克隆群體。該專利申請(qǐng)進(jìn)一步涉及通過擴(kuò)充和培養(yǎng)所說的干細(xì)胞以產(chǎn)生有用的生物學(xué)活性物質(zhì)和條件培養(yǎng)基的方法，以及由之產(chǎn)生分化的組織和結(jié)構(gòu)的方法。其中所用的培養(yǎng)基是含血清的F12培養(yǎng)基和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的混合物。在此現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)上，如果能夠進(jìn)一步改善未分化干細(xì)胞的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，將會(huì)在一定程度上改善衍生于成人脂肪組織的多潛能干細(xì)胞的增殖和擴(kuò)充速度以及細(xì)胞活力，為所說的干細(xì)胞的進(jìn)一步定向分化和其在組織工程或基因治療中的應(yīng)用提供必要的細(xì)胞準(zhǔn)備。
發(fā)明的目的本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種培養(yǎng)和增殖衍生于人脂肪組織的多潛能干細(xì)胞的方法，該方法包括(1)提供從3-18歲少年健康人體采集的脂肪組織干細(xì)胞并常規(guī)培養(yǎng)以制備條件培養(yǎng)基；(2)提供由人成年個(gè)體脂肪組織分離并純化的干細(xì)胞；(3)于未分化條件下，在步驟(1)得到的條件培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)步驟(2)得到的干細(xì)胞以進(jìn)一步純化之；(4)分離步驟(3)得到的干細(xì)胞并于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下在細(xì)胞形態(tài)分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所說的干細(xì)胞以促使其定向分化。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說的少年人和成人可以是同一或不同個(gè)體。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說的脂肪組織是通過吸脂手術(shù)得到的。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說的條件培養(yǎng)基是在普通DMEM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)少年兒童脂肪組織衍生的干細(xì)胞后得到的。
發(fā)明的詳細(xì)內(nèi)容本發(fā)明涉及脂肪組織來源的干細(xì)胞，更具體地說，本發(fā)明涉及一種在細(xì)胞未分化條件下以較高的增殖速率培養(yǎng)成人脂肪組織衍生的干細(xì)胞的方法，特征在于所說的干細(xì)胞是在含有血清的條件培養(yǎng)基中維持并增殖的，其中所說的條件培養(yǎng)基是經(jīng)培養(yǎng)嬰幼兒脂肪組織衍生的干細(xì)胞得到的。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，所說的方法包括以下步驟(1)提供從3-18歲少年健康人體采集的脂肪組織干細(xì)胞并常規(guī)培養(yǎng)以制備條件培養(yǎng)基；(2)提供由人成年個(gè)體脂肪組織分離并純化的干細(xì)胞；(3)于未分化條件下，在步驟(1)得到的條件培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)步驟(2)得到的干細(xì)胞以進(jìn)一步純化并之；(4)分離步驟(3)得到的干細(xì)胞并于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下在細(xì)胞形態(tài)分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所說的干細(xì)胞以促使其定向分化。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說的少年人和成人可以是同一或不同個(gè)體。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說的脂肪組織是通過吸脂手術(shù)得到的。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，其中所說的條件培養(yǎng)基是在普通DMEM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)少年兒童脂肪組織衍生的干細(xì)胞后得到的。
為了得到ADSC，一種優(yōu)選的材料來源是人吸脂手術(shù)得到的吸出物。在保證細(xì)胞存活的前提下無菌收集所說的吸出物后，首先用含膠元酶(10-40μg/ml)的等滲磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)沖洗組織以除去殘余的游離脂質(zhì)和血液。然后可用攪拌和/或用酶(例如胰蛋白酶或膠元蛋白酶)水解方法解離組織，以從脂肪結(jié)締組織基質(zhì)中釋放出游離的脂肪細(xì)胞。由于成熟脂肪細(xì)胞的BUOYANT密度較低，所以通常浮在等滲緩沖溶液的上層；ADSC將沉淀到溶液下層；而中間層則包括結(jié)締組織基質(zhì)和脂肪細(xì)胞聚集體。可以使用平衡密度離心等方法很容易地分離得到富含脂肪細(xì)胞群體的部分(下層)，并使用熒光活化的細(xì)胞篩分、水或去污劑洗滌、過濾和有機(jī)溶劑提取等方法濃縮去除了脂肪細(xì)胞的結(jié)締組織基質(zhì)部分。
可以利用紅細(xì)胞的滲透敏感性，以在高張鹽溶液中保溫等方法破壞并除去殘留的紅血細(xì)胞。這一過程和洗滌(例如使用PBS)步驟可以反復(fù)進(jìn)行數(shù)次，以使ADSC提取物達(dá)到相當(dāng)?shù)募兌?。然后，可根?jù)細(xì)胞大小和形態(tài)，使用密度梯度離心和細(xì)胞分選裝置將懸浮的ADSC與其他細(xì)胞分離開。作為可供選擇的分子方法，也可以根據(jù)干細(xì)胞具有較長的端粒和較高的端粒酶活性這一特征，從已分化細(xì)胞中分離出干細(xì)胞。上述這些操作都是在嚴(yán)格無菌和保證細(xì)胞存活性的條件下進(jìn)行的。
可以按照基本上相似的方法，由少年兒童或成人皮下脂肪組織中分離、提取并純化ADSC細(xì)胞。
可將如上制備的ADSC直接用于在特定培養(yǎng)基中的定向分化培養(yǎng)。然而，通常從成人脂肪組織中分離并純化的ADSC細(xì)胞的收率均相對(duì)較低，而且有時(shí)純度不夠，從而限制了細(xì)胞的使用。因此，為了進(jìn)一步得到定向形態(tài)和功能發(fā)生、發(fā)育的細(xì)胞，確保ADSC的在治療(特別是基因治療)、組織結(jié)構(gòu)重建和美容等方面的應(yīng)用，通常有必要對(duì)如上得到的多潛能或多譜系A(chǔ)DSC細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的體外培養(yǎng)和增殖。
基于ADSC的生物學(xué)特性，可以在標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞增殖培養(yǎng)基例如添加有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)所說的干細(xì)胞，并在細(xì)胞沒有分化并且保留多潛能的條件下傳代5-15次，以利于ADSC的進(jìn)一步純化和克隆形成。然而，使用常規(guī)培養(yǎng)基常常會(huì)因?yàn)榧?xì)胞傳代次數(shù)較多而導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)和/或功能的退化與逐漸衰減。另一方面，即使傳代次數(shù)較少，干細(xì)胞在常規(guī)培養(yǎng)基中的擴(kuò)充和增殖的速率以及活力也是有限的。推測(cè)原因，可能是由于常規(guī)培養(yǎng)基缺少某些天然存在的、脂肪干細(xì)胞生長所必需的因子為此，本發(fā)明提供了一種改良的培養(yǎng)成人脂肪組織來源的干細(xì)胞的方法，該方法包括(1)提供從3-18歲少年健康人體采集的脂肪組織干細(xì)胞并常規(guī)培養(yǎng)以制備條件培養(yǎng)基；(2)提供由人成年個(gè)體脂肪組織分離并純化的干細(xì)胞；
(3)于未分化條件下，在步驟(1)得到的條件培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)步驟(2)得到的干細(xì)胞以進(jìn)一步純化并之；(4)分離步驟(3)得到的干細(xì)胞并于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下在細(xì)胞形態(tài)分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所說的干細(xì)胞以促使其定向分化。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，可基本上按照如前所述的方法，使用小型吸脂泵以低強(qiáng)度從健康少年兒童的腹部皮下抽吸脂肪組織，然后分離、提取并純化富含干細(xì)胞的細(xì)胞群體。將細(xì)胞純化到足夠的程度后，在含有10-15％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)所說的細(xì)胞。培養(yǎng)后，分別收集并在液氮環(huán)境下冷凍保存干細(xì)胞和同時(shí)收集的條件培養(yǎng)基。一般情況下，這些細(xì)胞和培養(yǎng)基均可保存大約30年。
同時(shí)可基本上按照如前所述的方法，使用吸脂泵從成人被試者的腹部皮下抽吸脂肪組織，然后分離、提取并純化富含干細(xì)胞的細(xì)胞群體。將細(xì)胞純化到足夠的程度后，在至少含有部分所說的條件培養(yǎng)基中細(xì)胞增殖培養(yǎng)基中，以常規(guī)克隆增殖方法培養(yǎng)成人脂肪組織來源的干細(xì)胞。其中，所說的條件培養(yǎng)基的總細(xì)胞增殖培養(yǎng)基中的含量約占5/4至1/5體積，并且細(xì)胞鋪板所采用的細(xì)胞密度一般為100-10000個(gè)/cm2。為了得到純化干細(xì)胞的單克隆，一般在培養(yǎng)板的每個(gè)孔中接種不超過1個(gè)細(xì)胞。經(jīng)如此的4-8次傳代培養(yǎng)和篩選后，足可以得到完全純的單克隆ADSC細(xì)胞群體。特別是，按照本發(fā)明的方法，使用培養(yǎng)來源于少年兒童體內(nèi)的ADSC所得到的新鮮或凍存的條件培養(yǎng)基，可使成人來源的ADSC的增殖數(shù)目以及細(xì)胞活力均得到明顯的提高或改善。我們的比較實(shí)驗(yàn)證明，與常規(guī)細(xì)胞增殖培養(yǎng)基(例如含有10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基)相比，使用按本發(fā)明方法得到的培養(yǎng)基可使ADSC的增殖數(shù)目增加約30％(參見實(shí)施例1)。
得到純化的ADSC克隆后，可以在超低溫條件下(例如在液氮中)長期冷凍保存這些細(xì)胞，或者直接將它們用于定向分化培養(yǎng)，以得到具有所需的發(fā)育表型的成熟細(xì)胞。一般說來，用于促使干細(xì)胞定向發(fā)育的培養(yǎng)基可含有適當(dāng)濃度的皮質(zhì)類固醇激素、胰島素、3′，5′-環(huán)磷酸腺苷、細(xì)胞生長因子及牛血清。但根據(jù)細(xì)胞發(fā)育表型的不同，所用培養(yǎng)基的組成可能是完全不同的。例如，在為了證實(shí)按本發(fā)明方法純化并擴(kuò)增得到的單克隆ADSC的定向表型分化能力的實(shí)驗(yàn)中，我們分別使用含有10-8M地塞米松、5μM胰島素、0.1mM咖啡因的DMEM培養(yǎng)基，和含有25μM氫化可的松、5μM胰島素15％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)ADSC細(xì)胞，結(jié)果按已公開的方法(參見中國專利申請(qǐng)00807461號(hào))證實(shí)，培養(yǎng)15天后我們的ADSC細(xì)胞分別分化成了成脂肪細(xì)胞和成肌細(xì)胞(參見實(shí)施例2)。
實(shí)施例實(shí)施例1人脂肪組織來源的干細(xì)胞群的傳代培養(yǎng)用10mM磷酸鹽緩沖溶液反復(fù)沖洗吸脂手術(shù)得到的吸出物，然后加入濃度約0。5％的胰蛋白酶，攪拌下37℃處理30分鐘。消化后，離心收集細(xì)胞沉淀物，并將沉淀懸浮于1％鹽水中。緩慢攪拌15分鐘后，再次離心收集細(xì)胞。如此反復(fù)處理兩次，以盡可能地破碎并除去污染的紅細(xì)胞。去除上層漂浮物并從細(xì)胞懸液中收集下層細(xì)胞沉淀物，然后使用溴酚蘭染料排除法檢測(cè)細(xì)胞的存活性并計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)。
存活細(xì)胞在含15％胎牛血清的基本培養(yǎng)基中37℃保溫24小時(shí)后，收集貼壁生長的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察光學(xué)顯微鏡(40X)下可見這些細(xì)胞為相對(duì)較小的有核細(xì)胞，并可見細(xì)胞內(nèi)有發(fā)亮脂質(zhì)小滴。油紅0染色顯示，大部分細(xì)胞呈陰性。因此，可將這些細(xì)胞提取物初步鑒定為富含ADSC的部分。
按所述相似方法制備得自某16歲少年自愿者皮下脂肪組織的富ADSC部分，常規(guī)培養(yǎng)這些細(xì)胞并常規(guī)制備用于本發(fā)明的條件培養(yǎng)基。
然后，將如上分離的細(xì)胞分成兩份，并分別按每平皿4×105個(gè)細(xì)胞的密度接種于直徑10cm的平皿中，所使用的培養(yǎng)基則分別是含10％胎牛血清的普通DMEM培養(yǎng)基(A對(duì)照組)，和DMEM培養(yǎng)基與如上制備的條件培養(yǎng)基的1∶1(V/V)混合物(B實(shí)驗(yàn)組)。接種后，在含5％ CO2的空氣環(huán)境下37℃培養(yǎng)細(xì)胞。培養(yǎng)期間，每隔24小時(shí)分別取樣(10μl)檢查細(xì)胞形態(tài)和活力，并計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)。培養(yǎng)第24小時(shí)，鏡下可見實(shí)驗(yàn)組(A)的細(xì)胞形態(tài)完好，并且平均細(xì)胞數(shù)明顯多于對(duì)照組(B)。第4天，可見有細(xì)胞克隆形成，其中實(shí)驗(yàn)組的平均克隆數(shù)為23個(gè)，而對(duì)照組的平均克隆數(shù)為16個(gè)。
傳代(10次)增殖培養(yǎng)后，挑選形態(tài)良好的細(xì)胞克隆并將它們?cè)倏寺〉?4孔培養(yǎng)板中，使用上述條件培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)至形成細(xì)胞成單層。解離單層并收集游離的細(xì)胞，然后在分化培養(yǎng)基中進(jìn)行干細(xì)胞定向分化培養(yǎng)(參見下列實(shí)施例2)。
實(shí)施例2傳代培養(yǎng)并純化的ADSC的定向表型分化分別使用含有10-8M地塞米松、5μM胰島素、0.1mM咖啡因的DMEM培養(yǎng)基(1)，和含有25μM氫化可的松、5μM胰島素15％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基(2)，以每孔500個(gè)細(xì)胞的密度在24孔培養(yǎng)板中繼續(xù)培養(yǎng)(37℃，5％ CO2)實(shí)施例1中得到的ADSC細(xì)胞。
培養(yǎng)15天后，在培養(yǎng)基(1)中培養(yǎng)的3個(gè)細(xì)胞克隆呈油紅0染色陽性，表明細(xì)胞內(nèi)有脂質(zhì)小泡存在。根據(jù)這一特征可判定這3個(gè)克隆化的已出現(xiàn)向成熟脂肪細(xì)胞分化的趨勢(shì)。其中以在常規(guī)細(xì)胞生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)的未分化細(xì)胞作為陰性對(duì)照。同樣，在上述定性誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)15天后，將熒光標(biāo)記的抗人骨骼肌肌球蛋白抗體與在培養(yǎng)基(2)中培養(yǎng)的細(xì)胞一起保溫，可見細(xì)胞有明顯的陽性熒光染色，表明這些培養(yǎng)的干細(xì)胞(兩個(gè)克隆)已表達(dá)了有肌球蛋白并出現(xiàn)向肌細(xì)胞分化的趨勢(shì)。其中使用正常人骨骼肌細(xì)胞作為陰性對(duì)照。
權(quán)利要求
1.一種培養(yǎng)和增殖衍生于人脂肪組織的多潛能干細(xì)胞的方法，該方法包括(1)提供從3-18歲少年健康人體采集的脂肪組織干細(xì)胞并常規(guī)培養(yǎng)以制備條件培養(yǎng)基；(2)提供由人成年個(gè)體脂肪組織分離并純化的干細(xì)胞；(3)于未分化條件下，在步驟(1)得到的條件培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)步驟(2)得到的干細(xì)胞以進(jìn)一步純化并之；(4)分離步驟(3)得到的干細(xì)胞并于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下在細(xì)胞形態(tài)分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)所說的干細(xì)胞以促使其定向分化。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說的少年和成人可以是同一或不同個(gè)體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說的脂肪組織是通過吸脂手術(shù)得到的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所說的條件培養(yǎng)基是在普通DMEM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)少年兒童脂肪組織衍生的干細(xì)胞后得到的。
全文摘要
本發(fā)明涉及脂肪組織衍生的干細(xì)胞，特別是涉及一種在細(xì)胞未分化條件下以較高的增殖速率培養(yǎng)成人脂肪組織衍生的干細(xì)胞的方法。
文檔編號(hào)C12N5/02GK1597936SQ0314684
公開日2005年3月23日 申請(qǐng)日期2003年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月17日
發(fā)明者周新宇, 程鋼, 何蘊(yùn)韶 申請(qǐng)人:中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司