專利名稱：：治療宿主中切割的嵌合分子的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及嵌合分子領(lǐng)域，該嵌合分子適于向宿主給藥以在體內(nèi)切割而在被治療宿主的體內(nèi)產(chǎn)生診斷、預(yù)防、治療和/或滋養(yǎng)效果。
背景技術(shù)：
：已制得嵌合分子使其在體外切割以在微生物宿主中制備和純化重組蛋白。另外，授予RegentsoftheUniversityofCalifornia，于1988年9月6日公告的題為″ExpressionLinkers″的美國專利No.4,769,326(″’326專利″)還公開了一種重組DNA序列“其在自然條件下含有三個不連續(xù)的片段，其中第一片段編碼真核蛋白且與第二片段相連續(xù)，該第二片段編碼至少由兩個氨基酸組成的特異性切割序列，并與第三片段相連續(xù)，其中所述DNA表達(dá)產(chǎn)物至少被一種酶或化學(xué)試劑在連接真核蛋白和特異性切割序列的肽鍵處切割；第三片段編碼一種宿主肽，其中該肽是...非天然地與所述的真核蛋白相連接”(權(quán)利要求1)。自此，有人設(shè)計出了其它的體外生產(chǎn)和加工系統(tǒng)。這些改進(jìn)的例子如下。美國專利No.4,745,069，公告于1988年5月17日，授予EliLilly&Company題為″CloningVectorsforExpressionofExogenousprotein″涉及到″一種用于表達(dá)外源蛋白的重組DNA克隆載體″，其中該克隆載體“構(gòu)建為依次含有定義為脂蛋白啟動子區(qū)域的核苷酸序列、定義為脂蛋白5’非翻譯區(qū)的核苷酸序列和編碼外源蛋白產(chǎn)物的序列、編碼由翻譯起始信號密碼子連接的產(chǎn)物的序列、和編碼脂蛋白基因5’非翻譯區(qū)的3’末端的腸激酶剪切位點(diǎn)的核苷酸序列″(第2欄，第45-62行)。這個發(fā)明的原理表明“脂蛋白基因表現(xiàn)出高水平的組成性轉(zhuǎn)錄...推薦將其作為表達(dá)外源DNA片段的載體。”(第2欄，第14-17行)。美國專利No.4,828,988，公告于1989年5月9日，授予了SmithKline-RIT，題為″HybridpolypeptidesComprisingSomatocrinineandA1-Antitrypsin，MethodforTheirProductionfromBacterialClonesandUseThereoffortheProductionofSomatocrinine″涉及到″通過將hGRF的編碼序列與hAT的編碼序列或能表達(dá)的其片段以理想的方式在細(xì)菌中融合可以大大地和意想不到地提高細(xì)菌中hGRF的表達(dá)....″(第3欄，第4-9行)。美國專利No.5,292,646(“’646專利”)，公告于1994年5月8日，授予了基因ticsInstitute，Inc.，題為″peptideandproteinfusionstoThioredoxinandThioredoxin-likeMolecules″涉及到″一種融合序列，其含有一種與經(jīng)挑選的異源肽或蛋白融合的硫氧還原類蛋白序列″，其中該融合蛋白″可以任選地含有一種連接肽″，該連接肽″在需要的地方產(chǎn)生選擇性切割位點(diǎn)...″(第2欄，第47-60行)。’646專利中描述的發(fā)明旨在提供″一種提供可溶性重組蛋白表達(dá)的新方法″，該方法包括″在合適的條件下培養(yǎng)上述宿主細(xì)胞以產(chǎn)生融合蛋白″。(第3欄，第6-10行)。美國專利No.6,080,559，公告于2000年6月27日，授予了AGENNIX，Inc.，題為″ExpressionofProcessedRecombinantLactoferrinandLactoferrinPolypeptideFragmentsfromaFusionsProductinAspergillus″公開了″通過一種方法產(chǎn)生的一種完整的、去糖基化的乳鐵蛋白或單鏈區(qū)、去糖基化的乳鐵蛋白多肽片段，該方法包括培養(yǎng)含有重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化曲霉菌真菌細(xì)胞，其中所述質(zhì)粒從5’到3’含有可操作連接的下列部件(a)啟動子；(b)編碼信號肽的核苷酸序列；(c)編碼高水平表達(dá)的內(nèi)源分泌的曲霉菌多肽的氨基末端部分的基因的核苷酸序列的5’部分；(d)編碼肽連接子的核苷酸序列，所述肽連接子含有曲霉菌內(nèi)源蛋白酶的切割位點(diǎn)；和(e)編碼乳鐵蛋白或乳鐵蛋白多肽片段的核苷酸序列；其中所述轉(zhuǎn)化的曲霉菌真菌細(xì)胞在合適的營養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)直到乳鐵蛋白或乳鐵蛋白多肽片段以融合產(chǎn)物的形式產(chǎn)生，然后被特異于所述的連接子序列的蛋白水解酶處理，其中所述經(jīng)處理的乳鐵蛋白或乳鐵蛋白多肽片段分泌到營養(yǎng)培養(yǎng)基中，然后從培養(yǎng)基中分離，其中的乳鐵蛋白或乳鐵蛋白多肽片段已經(jīng)去糖基化″。(權(quán)利要求1)WO97/28272，由Technologene公司申請，公開于1997年8月7日，題為″蛋白ExpressionSystem″涉及到″表達(dá)和從融合蛋白中純化確實(shí)重組蛋白的發(fā)方法。具體地，本發(fā)明涉及到融合蛋白，其中向融合蛋白中加入額外，這些區(qū)域和/或元件包括通過一個含有鉸鏈區(qū)域(3)的多肽與有益蛋白融合的Fc片段(1)、親水的間隔子(4)和氨基酸二鹽的內(nèi)源蛋白酶切位點(diǎn)(5)，其中該間隔子可以被剪切，然后由羧肽酶B(6)消化從而產(chǎn)生可信蛋白(2)″(摘要)。WO99/58662，是日本申請，于1995年5月13日公開，題為″Fusedgene″公開了一種融合蛋白，該融合蛋白含有“靶蛋白，其從N末端到C末端方向含有a)信號序列，b)至少CH1區(qū)域被刪除的免疫球蛋白Fc區(qū)，c)在C末端含有使腸激酶等發(fā)生剪切作用的酶切位點(diǎn)的肽連接子；和d)靶蛋白，如促紅細(xì)胞生成素的氨基酸序列，其特征在于在酶切割完成后，該靶蛋白的N末端不含有起始于肽連接子的氨基酸殘基，因此，通過酶處理可以有效的生產(chǎn)N末端氨基酸沒有修飾的靶蛋白”(摘要)。WO00/23472，由Biogen公司申請，題為″Interferon-BetaFusionProteinsandUses″涉及到“與干擾素-β-1b相比活性提高的干擾素-β-1a組合物，其通常還具有融合蛋白的有益屬性且活性沒有有效丟失....”(第2頁，第17-19行)。該說明書描述這個發(fā)明為涉及“一種分離的多肽，其具有氨基酸序列X-Y-Z，其中X是具有含干擾素β氨基酸序列的氨基酸序列的多肽或其片段；Y是任選的連接子部分；和Z是含有至少一種除干擾素β外的多肽部分的多肽”(第3頁，第1-5行)。這個發(fā)明還涉及到“一種制備重組多肽的方法，該方法包括根據(jù)該發(fā)明制備宿主細(xì)胞群落；在一定條件下生長細(xì)胞群落，于是由重組DNA編碼的多肽得到表達(dá)；和分離表達(dá)的多肽”(第4頁，第3-6行)。WO00/39310，由UniversityofGeorgiaResearchFoundation申請，題為″RubredoxinFusionProteins，ProteinExpressionSystemandMethods”涉及″一種重組的紅素氧還蛋白融合蛋白，其含有N-末端的紅素氧還蛋白組分和C-末端的融合多肽″(第3頁，第3-5行)。這種融合蛋白″在正確折疊時能結(jié)合Fe2+，使其變成紅色從而使接下來的純化容易″(第3頁，第5-6行)?！錘-末端的紅素氧還蛋白組分和C-末端的融合多肽間的連接處理不需要外是剪切連接″(第3頁，第15-17行)。WO00/61768，由YedaResearchandDevelopment有限公司申請，題為″PreparationofBiologicallyActiveMolecule″涉及″分子的制備方法，該分子在自然的形成過程中以生物失活形式產(chǎn)生，在其前體切割后變得有活性″。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中該說明書提供了″該方法包括用載體轉(zhuǎn)化宿主，該載體含有編碼在其切割位點(diǎn)發(fā)生突變的生物活性分子的前體的cDNA，培養(yǎng)該轉(zhuǎn)化的宿主，表達(dá)該前體，用蛋白酶處理后分離該生物活性分子″(第3頁，第27-31行)。WO01/14570，由AllerganSales，Inc申請，題為″ActivableRecombinantNeurotoxins″涉及″重組的分離蛋白，其含有功能結(jié)合區(qū)易位區(qū)和治療區(qū)，其中該蛋白還含有容易在體外被特異性切割并表達(dá)位單鏈的氨基酸序列”(第7頁，第19-22行)。其中該易位元件“含有具有易位活性的梭菌神經(jīng)毒素H鏈的部分”(第19頁，第11-12行)。這個發(fā)明公開了″構(gòu)建的梭菌毒素的活化程度″是″制造這些材料需加考慮的重要事項(xiàng)″。因此，“如果神經(jīng)毒素，如BoNT[肉毒瘤神經(jīng)毒素]和TeTx[tentanus神經(jīng)毒素]能在快速生長的細(xì)菌(如異源E.coli細(xì)胞)中高產(chǎn)量表達(dá)，如同安全、容易分離和簡單轉(zhuǎn)變?yōu)槿钚孕问降南嚓P(guān)無毒單鏈(或具有減毒活性的單鏈)一樣，那么這就會是一重大進(jìn)步”(第6頁，第5-11行)。融合分子的體內(nèi)產(chǎn)生和該分子的體外將的描述見Proc.NatlAcad.SciUSA91(20)9337-41(Sep27，1994)，題為″High-efficiencysynthesisofhumanα-endorphinandmagaininintheerythrocytesoftransgenicmiceaproductionsystemfortherapeutypeptides″。在某些情況下，在體內(nèi)表達(dá)多肽比運(yùn)輸體外合成的多肽要理想。例如，在宿主體內(nèi)合成的多肽可以進(jìn)行有利的翻譯后修飾，如C-末端酰胺化或糖基化(參見US5,707,826，公告于1998年1月13日，授予了BioNebraska，Inc.，第1欄，第18-25行；和EP0134085，公告于1985年5月13日，由SalkInstituteforBiologicalStudies申請，第3頁，第13-16行；第4頁，第3-5行)。因此，已經(jīng)將基因治療方法應(yīng)用于將治療基因運(yùn)輸?shù)接袡C(jī)體中以在體內(nèi)生產(chǎn)蛋白。然而基因治療的實(shí)現(xiàn)仍然還很遙遠(yuǎn)，且作為治療形式的基因治療仍需要驗(yàn)證。核酸的基因治療運(yùn)輸?shù)睦影绹鴮＠鸑o.6,228,356，公告于2001年5月8日，授予了UniversityofPittsburghoftheCommonwealthSystemofHigherEducation，題為″ViralVectorstoInhibitLukocyteInfiltrationorCartilageDegradationofJoints″涉及到一種“抑制哺乳動物關(guān)節(jié)白細(xì)胞滲透或軟骨退化的”方法，“該方法包括直接向所述的關(guān)節(jié)用含有可操作地與啟動子連接的核酸序列的病毒載體給藥，該核酸序列在關(guān)節(jié)中編碼能中和IL-1效果的蛋白，其中在所述關(guān)節(jié)內(nèi)所述蛋白的表達(dá)抑制所述關(guān)節(jié)內(nèi)的白細(xì)胞滲透和軟骨退化″(權(quán)利要求1)。能中和IL-1效果的這種蛋白的例子如白介素-1受體拮抗蛋白(IRAP)(權(quán)利要求2)，可溶性白介素-1受體(權(quán)利要求3)，可溶性TNF受體(權(quán)利要求4)或白介素-10(權(quán)利要求5)。進(jìn)一步地還揭露了制備一種研究連接組織病理學(xué)的動物模型的方法，其中該方法“包括使用選自細(xì)胞因子和蛋白酶的材料作為基因”，其中該蛋白酶是基質(zhì)金屬蛋白酶，該基質(zhì)金屬蛋白酶“選自膠原酶，白明膠酶和基質(zhì)切割素”(第14欄，第36頁至第15欄，第1行)。雖然該說明書公開了″將至少一種編碼產(chǎn)物的基因?qū)氲讲溉閯游镞B接組織的至少一種細(xì)胞中”(摘要)，但是沒有給出同時運(yùn)輸多個基因的具體方法。與此相關(guān)的是美國專利No.5,858,355，題為″IRAPgeneastreatmentforarthritis″，公開于1999年1月12日。其公開了在體外轉(zhuǎn)化滑膜細(xì)胞細(xì)胞，通過關(guān)節(jié)內(nèi)注射將該感染的滑膜細(xì)胞移植到關(guān)節(jié)炎連接區(qū)，從而減少軟骨退化和減少滑膜炎的發(fā)生。美國專利No.6,017,896，公告于2000年1月25日，授予了UniversityofAlabamaResearchFoundationandSouthernResearchInstitute，題為″PurineNucleosidePhosphorylaseGeneTherapyforHumanMalignancy″涉及一種通過(a)用編碼能剪切腺苷的嘌呤切割酶的核酸來轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)哺乳動物細(xì)胞；和(b)將轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞與有效量的嘌呤切割酶底物接觸″來殺死復(fù)制或非復(fù)制、轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)的哺乳動物細(xì)胞和旁觀細(xì)胞的″方法，“其中該底物對于哺乳動物細(xì)胞完全無毒，經(jīng)酶剪切后對轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)的哺乳動物細(xì)胞和旁觀細(xì)胞產(chǎn)生嘌呤毒性，從而殺死表達(dá)該酶的哺乳動物細(xì)胞和旁觀細(xì)胞”(權(quán)利要求1)。US6,080,575，公告于2000年6月27日，授予了HoechstAktiengeselschaftAG，題為″NucleicacidConstructforExpressingActiveSubstanceswhichcanbeActivatedbyProteases，andPreparationandUse″涉及″一種核酸構(gòu)建體″，其“由哺乳動物細(xì)胞釋放的酶激活，該構(gòu)建體包括下列部件a)至少一個啟動子元件；b)至少一種編碼活性化合物(蛋白B)的DNA序列；c)至少一種編碼能被哺乳動物釋放的酶特異性剪切的氨基酸序列(部分構(gòu)建體C)的DNA序列，和d)至少一種編碼肽或蛋白(部分結(jié)構(gòu)D)的DNA序列，該肽或蛋白通過剪切氨基酸序列(部分結(jié)構(gòu)C)而與活性化合物結(jié)合并抑制活性化合物的活性....″(摘要)。美國專利No.6,147,055，公告于2000年11月14日，授予了VicalIncorporated，題為″CancerTreatmentMethodUtilizingPlasmidsSuitableforIL-2Expression″涉及″一種治療人患者癌癥的方法，包括向所述的患者的腫瘤直接體內(nèi)給予帶有陽離子脂的DNA質(zhì)粒，其中所述質(zhì)粒包括(1)編碼成熟人白介素2(IL-2)多肽的第一多核苷酸；(2)編碼與所述的第一多核苷酸可操作連接的肽引導(dǎo)子的第二多核苷酸，其中所述肽引導(dǎo)子指導(dǎo)所述的IL-2的分泌；和(3)與第一和第二多核苷酸可操作連接的啟動子....″(權(quán)利要求1)。外源基因也已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了導(dǎo)入并在植物中表達(dá)，例如，美國專利No.5,939,541，公告于1999年8月17日，授予了UniversityofSouthCarolina，題為″MethodforEnhancingExpressionofaForeignGeneorEndogenousGeneProductinPlants″涉及″一種增強(qiáng)序列，其含有P1密碼區(qū)、輔助成分-蛋白酶(HC-Pro)和P3部分，因此所述的增強(qiáng)序列包括編碼蛋白切割位點(diǎn)的區(qū)域，該蛋白切割位點(diǎn)是所述植物細(xì)胞、植物原生質(zhì)體或整株植株的馬鈴薯Y病毒屬(potyvirus)基因組的HC-Pro羧基末端自身水解加工所必需的，因此，所述外源基因或內(nèi)源植物基因與不含所述增強(qiáng)序列的所述植物細(xì)胞、植物原生質(zhì)體或整株植株的表達(dá)相比得到了提高″(權(quán)利要求1)。美國專利No.5,491,076，公告于1996年1月13日，授予了TexasA&MUniversitySystem，題為″ExpressionofForeignGenesUsingaReplicatingPolyproteinProducingVirusVector″涉及″適于在多蛋白產(chǎn)生植物病毒(Polyprotein-producingplantvirus)易感植物中表達(dá)異源但蛋白的表達(dá)載體。該載體利用獨(dú)特的病毒多蛋白蛋白酶的能力來從病毒多蛋白中剪切異源蛋白″(摘要)。值得注意的是，該病毒載體含有cDNA，“其中所述cDNA含有編碼多蛋白產(chǎn)生TobaccoEtch病毒的可復(fù)制型基因組的序列″(權(quán)利要求1和2)。WO00/11175A1，公開于2000年3月2日，由ZenecaLimited申請，題為″GeneticMethodfortheExpressionofPolyproteininPlants″涉及″一種在轉(zhuǎn)基因植物中表達(dá)或提高一種或多種蛋白表達(dá)水平的方法，包括將DNA序列插入到所述的植物基因組中，該DNA含有與兩個或多個蛋白編碼區(qū)可操作連接的啟動子區(qū)和3’-末端區(qū)域，其中所述蛋白編碼區(qū)域由連接子前肽的編碼序列彼此間隔，所述的前肽提供切割位點(diǎn)，因此該表達(dá)的多蛋白翻譯后加工成組分蛋白分子。具體地，還含有信號序列，因此翻譯后加工在植物的分泌途徑中發(fā)生作用。在該方法中所用的合適連接子序列和DNA構(gòu)建體也有描述″(摘要)。美國專利No.5,912,167，公告于1999年6月5日，由WisconsinAlumniResearchFoundation申請，題為″AutocatalyticCleavageSiteandUseThereofinaProteinExpressionVector″涉及″利用在小核糖核酸病毒中發(fā)現(xiàn)的自身催化切割位點(diǎn)有效地表達(dá)重組肽或蛋白的方法”(第3欄，第24-26行)。還公開了″一種核酸構(gòu)建體，其至少含有兩個拷貝的編碼自身催化的肽切割位點(diǎn)的核酸序列″，其中該位點(diǎn)含有特異性氨基酸序列和“其中該構(gòu)建體是復(fù)制型小核糖核酸病毒序列的一部分及其中的拷貝位于自然發(fā)生自身催化切割位點(diǎn)的位點(diǎn)”(權(quán)利要求1)。權(quán)利要求4是權(quán)利要求1的從屬權(quán)利要求，描述了一種聚合連接子，其“位于兩拷貝編碼自身催化位點(diǎn)的核酸序列之間”。權(quán)利要求6是權(quán)利要求5的從屬權(quán)利要求，權(quán)利要求5引用權(quán)利要求4，描述了由該核酸序列編碼的氨基酸序列，該氨基酸序列含有“多蛋白，其中該多蛋白含有被自身催化切割位點(diǎn)分離的異源蛋白”。在另一從屬權(quán)利要求中，權(quán)利要求1所述的載體是門果病毒(mengovirus)(權(quán)利要求7)。US6,221,355，公告于2001年4月24日，授予了WashingtonUniversity，題為″Anti-phathogenySystemandMethodsofUseThereof″涉及“一種或多種融合蛋白”的用途，“該融合蛋白含有轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)和細(xì)胞毒性區(qū)。該細(xì)胞毒性區(qū)由病原體感染特異性激活，該抗病原體系統(tǒng)能有效地殺死或破壞被一種或多種不同病原體組合感染的細(xì)胞”(摘要)。WO98/13059，由Bristol-MyersSquibbCo申請，題為″HydrolyzableprodrugsforDeliveryofAnticancerDrugstoMetastaticCells″涉及可水解的前藥，其“由位于轉(zhuǎn)移性細(xì)胞的細(xì)胞膜的蛋白酶激活，從而產(chǎn)生能被轉(zhuǎn)移性細(xì)胞吸收的活性抗癌藥物。一般來說，本發(fā)明的可水解前藥含有氨基末端的帽肽，其是位于轉(zhuǎn)移性細(xì)胞表面的肽水解酶的底物，通過足夠長的自我犧牲型間隔子(self-immolatingspacer)與治療藥物共價連接從而防止發(fā)生空間阻礙。該治療藥物一般是抗癌藥。該抗癌藥一般是阿霉素、紫衫醇、喜樹堿、絲裂霉素C或esperamycin。一般地，水解可水解前藥底物肽水解酶是組織蛋白酶B”(摘要)。US6,251,392，于2001年6月26日授予了EpicytePharmaceuticals，Inc，題為″EpithelialCellTargetingAgent″涉及“用于將生物試劑運(yùn)輸?shù)椒菢O性上皮細(xì)胞的”靶分子，如果實(shí)現(xiàn)運(yùn)輸，“該生物試劑對上皮細(xì)胞是致死的。例如，可以將該靶分子用于殺死轉(zhuǎn)移性上皮細(xì)胞”(摘要)。許多疾病或癥狀都與幾種基因產(chǎn)物的存在或缺乏有關(guān)，因此，用含有一種活性成分的藥物給藥來調(diào)節(jié)幾種基因產(chǎn)物的存在或缺乏可能還不能非常有效地控制該疾病或癥狀。另外，如果藥物的半衰期能夠延長，那么就可能每天給予較少次數(shù)的藥，根據(jù)許多因素，如方便、價格和安全性來確定優(yōu)選的給藥方案。還有，如果給藥的劑量能減少，那將是理想的，因?yàn)檫@樣，當(dāng)該藥被有效地運(yùn)輸?shù)叫枰饔玫牟课粫r其副作用就降低。此外，如果有方法將用于運(yùn)輸?shù)街委熕拗鞯募兓^90％純度所需費(fèi)用低，而不是高的活性分子運(yùn)輸，那么將是理想的。因此需要更有效低或有效率地將一個或多個活性分子運(yùn)輸?shù)街委熕拗鞯哪繕?biāo)位點(diǎn)。進(jìn)一步地認(rèn)識到，需要表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)在宿主中不會被降解的小分子，如重組小分子肽。發(fā)明概述本發(fā)明的一個目標(biāo)是滿足如上所述的本領(lǐng)域未滿足的需要。本發(fā)明的另一個目標(biāo)是提供一種一次運(yùn)輸多個組分分子到多細(xì)胞宿主(“治療宿主”)中以實(shí)現(xiàn)診斷、治療、預(yù)防或滋養(yǎng)的方法。本發(fā)明的又一目標(biāo)是提供一種運(yùn)輸分子到治療宿主中的方法，該分子在治療宿主中被正常降解。本發(fā)明的又一目標(biāo)是將分子運(yùn)輸?shù)街委熕拗鞯淖饔梦稽c(diǎn)，以使該分子的治療效果最大化和副作用最小化。根據(jù)本發(fā)明的目標(biāo)之一，本發(fā)明提供了運(yùn)輸多個組分分子到多細(xì)胞宿主的方法，該方法包括(a)提供含有嵌合分子的組合物；和(b)將該嵌合分子給予宿主以產(chǎn)生治療宿主，其中該嵌合分子含有至少一個第一組分分子、至少一個連接子和至少一個第二組分分子。其中的連接子含有酶切位點(diǎn)且其中至少第一連接子與第一組分分子和第二組分分子可操作連接，從而在第一組分分子和第二組分分子間產(chǎn)生非天然發(fā)生的連接和切割位點(diǎn)。其中該切割位點(diǎn)構(gòu)建成在體內(nèi)由宿主酶切割且在生產(chǎn)宿主中抵抗切割，其中，在切割位點(diǎn)切割嵌合分子后，至少一個組分分子被功能活化，其中第一和第二組分分子中至少有一個含有肽、蛋白和/或其活性片段。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來在體內(nèi)由系統(tǒng)循環(huán)的酶切割，因此，該剪切酶可以定位于，如消化道、生殖泌尿道、眼淚、唾液等中。該剪切酶還可以存在于全身。在一個具體實(shí)施方案中，該剪切酶存在于宿主的胃腸道中，如任何消化酶，包括任何腸肽酶，如胰島素、糜蛋白酶、胰蛋白酶E、腸激酶，或組織型纖溶酶原激活物，如與轉(zhuǎn)移過程有關(guān)的酶和同樣相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來在治療宿主體內(nèi)的細(xì)胞外切割，而不是在細(xì)胞表面切割，例如其中的一個或兩個組分分子都不是或不同于干擾素-β。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了提供了如上所述的方法，其中上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來在治療宿主體內(nèi)的細(xì)胞表面切割，例如其中的第一組分分子不是或不同于抗體或抗體片段。根據(jù)根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了提供了如上所述的方法，其中上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來由內(nèi)源的治療宿主酶切割。在一具體實(shí)施方案中，上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來由內(nèi)源的治療宿主的酶切割，該酶選自凝血因子、ADAMTS4和5、Aggreganases1和2、凝血酶、纖溶酶、補(bǔ)體因子、gastricin、顆粒蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、膜型基質(zhì)金屬蛋白酶、II型跨膜絲氨酸蛋白酶、ADAM、中性溶酶、尿激酶型纖溶酶原激活物、組織型纖溶酶原激活物和胱冬酶。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來在體內(nèi)由治療宿主中的酶細(xì)胞外切割，第一和第二組分分子的組合不是蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)和細(xì)胞毒性區(qū)的組合。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來在體內(nèi)由治療宿主中的酶細(xì)胞外切割，且該切割位點(diǎn)不是病毒病原體活化的切割位點(diǎn)。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來在體內(nèi)由治療宿主中的酶細(xì)胞外切割，且第二組分不是或不同于細(xì)胞毒性分子。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來在治療宿主體內(nèi)的細(xì)胞外由酶切割，其中，在酶切割位點(diǎn)切割嵌合分子后，至少兩個組分分子被功能活化。根據(jù)本發(fā)明的又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中，在嵌合分子切割前至少有一個組分分子被功能活化。在一具體實(shí)施方案中，上述組分分子是非抑制分子。在另一具體實(shí)施方案中，該組分分子是非細(xì)胞毒性分子。在某具體實(shí)施方案中，上述第一和第二組分分子是相同的。在另一具體實(shí)施方案中，該第一和第二組分分子是不同的。根據(jù)本發(fā)明的又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子具有結(jié)構(gòu)式A(xiBi)n，其中A代表第一組分分子，x代表連接子，B代表第二組分分子，i和n是正整數(shù)。根據(jù)本發(fā)明的又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中結(jié)構(gòu)式選自(a)A(x1B1)；(b)A(x1B1)(x2B2)，其中x1和X2可以相同或不同，B1和B2可以相同或不同，A和B1、B2可以相同或不同；(c)A(x1B1)(x2B2)(x3B3)，其中x1、x2和x3可以相同或不同，B1、B2和B3相同或不同，A與B1、B2和B3相同或不同；(d)A(x1B1)(x2B2)(x3B3)(x4B4)，其中x1、x2、x3和x4可以相同或不同，B1、B2、B3和B4相同或不同，A與B1、B2和B3和B4相同或不同；和(e)A(x1B1)(x2B2)(x3B3)(x4B4)(x5B5)，其中x1、x2、x3、x4和x5可以相同或不同，B1、B2、B3、B4和B5相同或不同，A與B1、B2和B3、B4和B5相同或不同。例如，A可以是在生產(chǎn)宿主中高水平表達(dá)的肽或多肽，因此嵌合分子促進(jìn)提高組分分子的生產(chǎn)。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中第一組分分子是肽或蛋白或其活性片段，至少一個第二組分分子選自肽、蛋白質(zhì)、核酸、糖類、合成的聚合物、植物產(chǎn)物、真菌產(chǎn)物、小分子藥物、可探測分子、半抗原、配體、抗感染物及其類似物和片段。根據(jù)該嵌合分子是多蛋白。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中至少一個組分分子選自抗原、可溶性受體、生長因子、細(xì)胞因子、淋巴因子、趨化因子、酶、抗感染物、前藥、毒素及其活性片段。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中至少一個組分分子選自可溶性p75TNFα受體Fc融合體、人生長激素、粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、干擾素-α2b、聚乙二醇化(PEG)干擾素-α、PEG-asparagase、PEG-adamase、抗-C017-1A、水蛭素、組織型纖溶酶原激活物、促紅細(xì)胞生成素、人DNA酶、IL-2、凝血因子IX、IL-11、TNK酶、活化的蛋白C、PDGF、凝血因子VIIa、胰島素、干擾素α-N3、干擾素γ1b、干擾素α共有序列、血小板活化因子乙酰水解酶及其活性片段。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中第一組分分子是肽、蛋白或其活性片段，第二組分分子是化學(xué)化合物。在一可選擇的具體實(shí)施方案中，兩個或多個或所有的組分分子是化學(xué)化合物，如激素、糖類或小分子。在這種情況下，用常規(guī)技術(shù)將這些化學(xué)化合物在體外與本發(fā)明的連接子連接在一起。根據(jù)本發(fā)明的另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了上述方法，其中至少一個組分分子是抗體。在一具體實(shí)施方案中，該第一組分分子是抗體或其活性片段，該第二組分分子不是抗體。在另一具體實(shí)施方案中，第二組分分子是抗體或其活性片段，該第一組分分子不是抗體。在又一具體實(shí)施方案中，該第一和第二組分分子分別是抗體或其活性片段。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中至少一個組分分子選自抗微生物的肽、蛋白質(zhì)、其類似物或活性片段。在一具體實(shí)施方案中，至少一個組分分子是防衛(wèi)肽、溶菌酶或乳鐵蛋白。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中至少一個組分分子選自肽、蛋白質(zhì)、其類似物或活性片段，它們是人或非人動物的肽、蛋白質(zhì)、其類似物或活性片段。在另一具體實(shí)施方案中，它們是植物的肽、蛋白質(zhì)、其類似物或活性片段。在又一具體實(shí)施方案中，它們是魚或微生物的肽、蛋白質(zhì)、其類似物或活性片段。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中至少兩個組分分子選自肽、蛋白質(zhì)、其類似物或活性片段。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的肽，其中該肽選自IGF-I、EGF、PDGF、ITF、KGF、乳鐵蛋白質(zhì)、溶菌酶、血纖蛋白原、α1-抗胰蛋白酶、促紅細(xì)胞生成素、hGH、tPA、干擾素α、干擾素β、干擾素γ、共有序列干擾素、胰島素、人絨毛膜促性腺素、白喉蛋白和抗嗜血因子。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中至少一個組分分子是激素。在一具體實(shí)施方案中，該激素選自雌激素、睪酮和孕酮。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中至少一個組分分子選自細(xì)胞毒性化合物，如紫衫醇或其類似物或衍生物，酶抑制劑，如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑和抗感染物。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中至少兩個組分分子選自乳鐵蛋白/乳鐵蛋白質(zhì)、乳鐵蛋白/溶菌酶、溶菌酶/溶菌酶、乳鐵蛋白/EGF、EGF/EGF、乳鐵蛋白/ITF、ITF/ITF、ITF/EFG、EGF/KGF、KGF/KGF、ITF/KGF、KGF/PDGF、PDGF/PDGF、α1-抗胰蛋白酶/MMP抑制劑、雌激素/孕酮、抗體/抗體、ITF/ITF及其類似物、變體或衍生物。根據(jù)一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子是疫苗。在一具體實(shí)施方案中，該嵌合分子含有作為組分分子之一的輔助物。在另一具體實(shí)施方案中，該疫苗含有病原有機(jī)體組分。在又一具體實(shí)施方案中，該疫苗是癌癥疫苗，該組分分子是在癌細(xì)胞中過量表達(dá)的分子。根據(jù)一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子的給藥達(dá)到選自下列的生物效果診斷、預(yù)防、治療和滋養(yǎng)。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子還含有至少一種其它多肽片段，其中該多肽在生產(chǎn)宿主中高度表達(dá)。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子還至少含有引導(dǎo)序列以指導(dǎo)該嵌合分子從生產(chǎn)宿主，如酵母宿主、哺乳動物細(xì)胞宿主或E.coli宿主中分泌，或指導(dǎo)該嵌合分子在生產(chǎn)宿主，如植物宿主或E.coli宿主中儲存。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子還含有靶分子。例如，該靶分子可以指導(dǎo)該嵌合分子到治療宿主的特定位點(diǎn)以發(fā)生作用。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子還含有純化標(biāo)記，其中該純化標(biāo)記方便于該嵌合分子從生產(chǎn)宿主中產(chǎn)生后的體外純化。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述連接子含有兩切割位點(diǎn)和這兩個連接位點(diǎn)間的間隔子。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子是可食用產(chǎn)品的組分。在一具體實(shí)施方案中，該可食用產(chǎn)品選自牛奶，植物，種子，如谷物，微生物細(xì)胞，如酵母或細(xì)菌，例如乳酸菌及其衍生物和提取物。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子通過口服，腸胃外，如靜脈內(nèi)、皮下、腹腔內(nèi)、透皮、心臟內(nèi)或通過吸入給藥。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述嵌合分子不是核酸分子。根據(jù)又一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中第一和第二組分分子中的至少一個是抗體或其活性片段，該抗體選自抗-IL8、抗-CD11a、抗-ICAM-3、抗-CD80、抗-CD2、抗-CD3、抗-補(bǔ)體C5，抗-TNFα、抗-CD4、抗-α4β7、抗-CD40L(配體)、抗-VLA4、抗-CD64、抗-IL5、抗-IL4、抗-IgE、抗-CD23、抗-CD147、抗-CD25、抗-整聯(lián)蛋白、抗-CD18、抗-TGFβ2、抗-因子VII、抗-IIBIIA受體、抗-PDGFβR、抗-F蛋白(來自RSV)、抗-gp120(來自HIV)、抗-HepB、抗-CMV、抗-CD14、抗-VEFG、抗-CA125(卵巢癌)、抗-17-LA(結(jié)腸細(xì)胞表面抗原)、抗-抗-獨(dú)特型GD3表位、抗-EGFR、抗-HER2/neu、抗-αVβ3整聯(lián)蛋白、抗-CD52、抗-CD33、抗-CD20、抗-CD22、抗-HLA和抗-HLADR或其活性片段。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明還提供了如上所述的方法，其中上述組合物還含有藥物學(xué)上可接受的載體或賦形劑。根據(jù)本發(fā)明的另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了一種試劑盒，其包括含有嵌合分子的組合物和套裝插件，其中該套裝插件包括向人或非人治療宿主給予組合物的說明書，該嵌合分子含有至少一個第一組分分子、至少一個連接子和至少一個第二組分分子。其中的連接子含有酶切位點(diǎn)且至少第一連接子與第一組分分子和第二組分分子可操作連接，從而在第一組分分子和第二組分分子間產(chǎn)生非天然發(fā)生的連接和切割位點(diǎn)。其中該切割位點(diǎn)構(gòu)建成在體內(nèi)由治療宿主酶切割且在生產(chǎn)宿主中抵抗切割，其中，在酶切割位點(diǎn)切割嵌合分子后，至少兩個組分分子被功能活化，其中第一和第二組分分子中至少有一個含有肽、蛋白和/或其活性片段。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的試劑盒，其中嵌合分子中的該切割位點(diǎn)構(gòu)建來由酶體內(nèi)切割，如在治療宿主的胃腸道中切割，該酶是，例如腸激酶。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的試劑盒，其中嵌合分子中的該切割位點(diǎn)構(gòu)建來在細(xì)胞外或細(xì)胞表面或其它地方體內(nèi)切割。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的試劑盒，其中嵌合分子中的該切割位點(diǎn)構(gòu)建來在治療宿主中由內(nèi)源宿主酶等在細(xì)胞外體內(nèi)切割。在一具體實(shí)施方案中，該嵌合分子不是蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)和細(xì)胞毒性區(qū)的結(jié)合。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的試劑盒，其中嵌合分子中的該切割位點(diǎn)構(gòu)建來在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割，該切割位點(diǎn)不是病原體激活切割位點(diǎn)。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的試劑盒，其中上述切割位點(diǎn)構(gòu)建來在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割，該第二組分分子不是細(xì)胞毒性分子。根據(jù)本發(fā)明的另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了具有下列結(jié)構(gòu)式的嵌合分子A(xiBi)n，其中A代表第一組分分子，x代表連接子，B代表第二組分分子，i和n是正整數(shù)。其中該嵌合分子含有至少一個第一組分分子、至少一個連接子和至少一個第二組分分子。其中的連接子含有酶切位點(diǎn)且其中至少第一連接子與第一組分分子和第二組分分子可操作連接，從而在第一組分分子和第二組分分子間產(chǎn)生非天然發(fā)生的連接和切割位點(diǎn)。其中該切割位點(diǎn)構(gòu)建成在體內(nèi)由宿主酶切割且在生產(chǎn)宿主中抵抗切割，其中，在酶切割位點(diǎn)切割嵌合分子后，至少兩個組分分子被功能活化，其中第一和第二組分分子中至少有一個含有肽、蛋白和/或其活性片段。根據(jù)本發(fā)明的另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的嵌合分子，其中所述結(jié)構(gòu)式選自(a)A(x1B1)；(b)A(x1B1)(x2B2)，其中x1和X2可以相同或不同，B1和B2可以相同或不同，A和B1、B2可以相同或不同；(c)A(x1B1)(x2B2)(x3B3)，其中x1、x2和x3可以相同或不同，B1、B2和B3相同或不同，A與B1、B2和B3相同或不同；(d)A(x1B1)(x2B2)(x3B3)(x4B4)，其中x1、x2、x3和x4可以相同或不同，B1、B2、B3和B4相同或不同，A與B1、B2和B3和B4相同或不同；和(e)A(x1B1)(x2B2)(x3B3)(x4B4)(x5B5)，其中x1、x2、x3、x4和x5可以相同或不同，B1、B2、B3、B4和B5相同或不同，A與B1、B2和B3、B4和B5相同或不同。例如，A可以是在生產(chǎn)宿主中高水平表達(dá)的肽或多肽，因此嵌合分子促進(jìn)提高組分分子的生產(chǎn)。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的嵌合分子，其中該嵌合分子是多蛋白。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了編碼上述嵌合分子的核酸分子。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提供了含有編碼該嵌合分子的核酸分子的載體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了含有上述核酸分子的宿主細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了在生產(chǎn)宿主中制備給予治療宿主的嵌合分子的方法，該方法包括(a)制備編碼嵌合分子的核酸；(b)用該核酸轉(zhuǎn)化生產(chǎn)宿主；(c)使生產(chǎn)宿主生產(chǎn)該嵌合分子；(d)從生產(chǎn)宿主中回收該嵌合分子；和(e)調(diào)節(jié)收集的嵌合分子的質(zhì)量以使其滿足向治療宿主給藥所規(guī)定的要求。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了制備如上所述的嵌合分子的方法，其中該生產(chǎn)宿主選自細(xì)菌細(xì)胞，如E.coli，真菌細(xì)胞，如酵母或曲霉菌，植物細(xì)胞，植物種子，如谷物，例如稻、小麥、黑麥、燕麥和大麥，哺乳動物細(xì)胞，如CHO細(xì)胞，昆蟲細(xì)胞，如SF9細(xì)胞，植物，如煙草植物，和動物，如轉(zhuǎn)基因牛、山羊、綿羊或豬。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了含有如上所述的嵌合分子和藥物學(xué)上可接受的載體的組合物用于向治療宿主給藥，。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的組合，其中的切割位點(diǎn)構(gòu)建來由治療宿主胃腸道的治療宿主酶切割，如該酶使腸激酶。在一具體實(shí)施方案中，該切割位點(diǎn)構(gòu)建來在發(fā)炎位點(diǎn)，如滑膜或在腫瘤位點(diǎn)，如胃癌處切割。根據(jù)另一目標(biāo)，本發(fā)明提供了如上所述的方法，其中的組合物被包裹。具體來說，本發(fā)明不是現(xiàn)有技術(shù)中所揭露的任何方法或組合物，但可以是其改良或改進(jìn)。只要閱讀本說明書，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將會明白本發(fā)明的其它目標(biāo)、特征和優(yōu)點(diǎn)。這些其它的目標(biāo)、特征和優(yōu)點(diǎn)是本發(fā)明的一部分。附圖的簡要說明圖1是酶(“靶酶”)類型的示意圖，對于該酶，設(shè)計切割位點(diǎn)來連接本發(fā)明的嵌合分子。發(fā)明詳述由于本說明書所用的技術(shù)術(shù)語是本領(lǐng)域常用的，因此這些術(shù)語是清楚的，可以參考如下技術(shù)詞典Lewin，GenesV，OxfordUniversityPress出版，1994(ISBN0-19-854287-9)；Kendrew等(編)，TheEncyclopediaofMolecularBiology，BlackwellScienceLtd出版，1994(ISBN0-632-02182-9)；和RobertA.Meyers(編)，MolecularBiologyandBiotechnologyaComprehensiveDeskReference，VCHPublishers，Inc出版，1995(ISBN1-56081-8)。可選擇地，可以通過網(wǎng)站獲得生物技術(shù)術(shù)語的定義，如http://biotechterms.org。為了更好地理解本發(fā)明，下列術(shù)語有其特定的含義術(shù)語“活性片段”或“生物活性片段”意思是指分子，如蛋白質(zhì)、核酸或抗體，該分子具有生物活性或具有參與該活性的能力，該能力包括但不限于特異性結(jié)合另一種分子的能力，如在抗體/抗原反應(yīng)或DNA/DNA或DNA/RNA雜交中；為了診斷的目的，作為抗原或免疫原的能力；具有酶活性；具有酶識別位點(diǎn)；作為酶底物；與配體或受體反應(yīng)的能力和抑制其它生物活性分子的能力。這些片段與天然產(chǎn)生的核酸、多肽或抗體具有相似的活性，但不必要完全相同。該片段的生物活性包括提高需要的活性或降低不需要的活性。抗體活性片段的例子如免疫球蛋白的Fc或Fab片段，或免疫球蛋白重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)。術(shù)語“類似物”意思是指與上述分子相比具有至少70％序列同源性的分子。分子及其相應(yīng)的類似物的差別的例子可以包括但不限于，保守氨基酸改變或其相應(yīng)密碼子改變；刪除一個或多個氨基酸殘基或其相應(yīng)密碼子，例如刪除一個或多個二硫鍵連接位點(diǎn)；增加氨基酸或其相應(yīng)密碼子，如甲硫氨酸，例如，來協(xié)助細(xì)菌中的表達(dá)；不影響化學(xué)分子結(jié)合效果的該化學(xué)分子側(cè)鏈的保守改變，例如，將甲基改變?yōu)橐一?、丙基或丁基；或其它相似例子。術(shù)語“抗體”指在人或非人動物中天然產(chǎn)生或誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體、多克隆抗體、單克隆抗體、人化抗體、單鏈抗體及其片段，如Fab或Fc片段或免疫球蛋白的重鏈或輕鏈可變區(qū)。術(shù)語“抗感染物”包括抗細(xì)菌、抗病毒、抗真教及其它抗病原體的分子或化合物，其具有抑制細(xì)胞生長或殺細(xì)胞活性，通過誘導(dǎo)具有直接抑制細(xì)胞生長或殺細(xì)胞作用的分子的產(chǎn)生直接或剪接地發(fā)生作用?？垢腥疚锏睦邮嵌x，對其不產(chǎn)生限制。在抗體結(jié)合的上下文中，術(shù)語“特異性結(jié)合”是指抗體與特定多肽，或更準(zhǔn)確地與特定多肽的特定表位高活性和/或高親和力結(jié)合?？贵w與該特定表位的結(jié)合一般強(qiáng)于同一抗體與其它任何表位或不含有該特定表位的任何其它多肽的結(jié)合，該特異性抗體一般是通過向動物注射上述特異性多肽來誘導(dǎo)產(chǎn)生該抗體而獲得，這種特異性抗體可以與其它多肽弱結(jié)合，但仍可檢測(例如，是特異性多肽所表現(xiàn)出的結(jié)合的10％或更小)。這種弱結(jié)合可以與特異性抗體結(jié)合容易地區(qū)分，例如，通過使用合適的對照。一般地，本發(fā)明的抗體與特定多肽特異性結(jié)合，其親和力為大于或等于10-7M，優(yōu)選地為大于或等于10-8M(如10-9M、10-10M、10-11M等)。關(guān)于分子的術(shù)語“生物活性”包括如果可以檢測該分子，則是診斷活性；如果該分子能作為疫苗或佐劑，則是預(yù)防活性；如果該分子可以作為治療基本或癥狀的治療劑，則是治療活性；如果該分子可以抑制微生物，如細(xì)菌、病毒、真菌、變性蛋白顆粒(prions)、寄生蟲等的生長和增值，則為抗感染活性；如果該分子具有提高食品的營養(yǎng)價值的能力，則為滋養(yǎng)活性和該分子參與其它的生物反應(yīng)的能力，如酶反應(yīng)；在免疫學(xué)、抗體-抗原結(jié)合、配體-受體結(jié)合或信號轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)等中的結(jié)合活性；和相似的活性。術(shù)語“生物學(xué)效果”是指任何生物活性的結(jié)果，例如包括診斷效果、預(yù)防效果、治療效果、抗感染效果、滋養(yǎng)及其它公知的常規(guī)生物學(xué)效果。術(shù)語“內(nèi)源的治療宿主分子”或“內(nèi)源的治療宿主酶”是指由治療宿主的基因組編碼的分子或酶。術(shù)語“表達(dá)盒”是重組或合成產(chǎn)生的核酸結(jié)構(gòu)，其含有一系列在宿主表達(dá)系統(tǒng)中能被轉(zhuǎn)錄或翻譯成一種或多種重組多肽的特定核酸元件。該表達(dá)盒可以通過粒子轟擊整合道質(zhì)?；虿《据d體中，如形成表達(dá)載體，或者整合到宿主染色體、線粒體DNA、質(zhì)體DNA、病毒或核酸片段中。一般該表達(dá)盒的序列中包括啟動子、轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)、翻譯起始點(diǎn)、異源有益基因、翻譯終止子和轉(zhuǎn)錄終止子?？蛇x擇地，該表達(dá)盒可以含有一個或多個選擇性標(biāo)記?！氨磉_(dá)載體”是指含有或適于用于表達(dá)盒以在宿主細(xì)胞中表達(dá)異源DNA或RNA的載體。許多原核或真核表達(dá)載體可以從商業(yè)途徑獲得，合適表達(dá)載體的選擇是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的。任選地，表達(dá)載體可以含有一種或多種選擇性標(biāo)記以用于篩選含有該表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。與本發(fā)明的嵌合分子的剪切有關(guān)的術(shù)語“細(xì)胞外”是指在治療宿主的細(xì)胞的外面剪切該嵌合分子，例如，在胃腸道中、血液中、淋巴液中、腹膜液中、組織間液、脊髓液、滑液、陰道液或肺液及其類似空間中。與本發(fā)明的嵌合分子的剪切有關(guān)的術(shù)語“細(xì)胞內(nèi)”是指在治療宿主的細(xì)胞的里面剪切該嵌合分子。在可食用產(chǎn)品中使用的術(shù)語“微生物細(xì)胞”包括微生物體，如酵母和乳酸菌，其適合于人或動物消費(fèi)。術(shù)語“微生物蛋白”意思是指與從微生物體獲得的那些蛋白完全相同或從其衍生的蛋白，這些微生物體包括但不限于細(xì)菌、病毒、真教、變性蛋白顆粒、其它的單細(xì)胞有機(jī)體、寄生蟲及其類似物。術(shù)語“分子”包括任何化合物或其鹽，無論是天然產(chǎn)生的還是合成的，包括寡肽；多肽；蛋白，如糖蛋白；核酸，無論是DNA還是RNA；糖；天然產(chǎn)物，如植物產(chǎn)物；其它聚合物，如合成的聚合物和片段；激素；化學(xué)化合物，如紫衫醇，其類似物或衍生物；其組合物和類似物。術(shù)語“天然產(chǎn)生的”是指以非人工介入而產(chǎn)生的形式天然存在的任何分子。在嵌合分子的組分分子與切割位點(diǎn)間的連接中引用的術(shù)語“可操作連接”意思是組分分子以這種方式連接，例如，一旦嵌合分子在切割位點(diǎn)切割，那么該組分分子就能表現(xiàn)出一種或多種生物活性。在本申請中使用的“藥物學(xué)上可接受的載體”意思是指適于上述嵌合分子或含有該嵌合分子的組合物的運(yùn)輸模式的載體。例如，對于腸胃外給藥，可接受的載體可以是生理鹽水；對于口服給藥，可接受的載體可以是經(jīng)遺傳構(gòu)建而含有上述嵌合分子的食品，如稻米、牛奶、蔬菜等，其中該食品可以是經(jīng)過加工或抽提的。藥物學(xué)上可接受的載體一般是無毒性的固態(tài)、半固態(tài)或液態(tài)填充劑、稀釋劑、包被材料或任何常規(guī)形式的劑型佐劑，其使用的劑量和濃度對受體無毒性，且與制劑的其它成分相容。例如，用于制劑的含有多肽的該載體優(yōu)選地不含有氧化劑和已知會損害該多肽的半衰期或保存期的其它化合物。合適的載體包括但不限于水、葡萄糖、甘油、生理鹽水及其組合。該載體可以含有附加試劑，如加濕劑或乳化劑、pH緩沖劑或能提高制劑效果的佐劑。在需要時，可以加入其它材料，如抗氧化劑、保濕劑、粘性穩(wěn)定劑和相似試劑。還可以加入經(jīng)皮膚滲透的增強(qiáng)劑，如氮酮。在本申請中用于口服給藥的組合物可以形成溶液、懸液、片劑、藥丸、膠囊、持續(xù)釋放制劑或粉末。術(shù)語本申請使用的術(shù)語“藥物學(xué)上可接受的鹽”包括酸性加成鹽(由多肽的游離氨基形成)和與無機(jī)酸，如鹽酸、磷酸或有機(jī)酸，如乙酸、苦杏仁酸、草酸、酒石酸形成的鹽。與羧基形成的鹽也可以衍生自無機(jī)堿，如氫氧化哪、鉀、銨、鈣或鐵。這種有機(jī)堿是異丙胺、三甲胺等。在可食用產(chǎn)品中使用的術(shù)語“植物”包括蔬菜和谷類，如谷物，典型地如稻、小麥、大麥、玉米、粟、高梁和燕麥。術(shù)語“多肽”是氨基酸聚合物“分子”，其可以或不可以經(jīng)“生產(chǎn)宿主”進(jìn)行額外的翻譯后修飾，如糖基化或體外修飾，如合成的聚合物，如聚乙二醇的化學(xué)加成。術(shù)語“多肽”和“多肽組合物”用于指肽、寡肽、蛋白質(zhì)及其活性片段或衍生物。術(shù)語“生產(chǎn)宿主”是指生產(chǎn)本發(fā)明的嵌合分子的宿主系統(tǒng)，該宿主系統(tǒng)包括體內(nèi)或體外的宿主細(xì)胞，其可以是或已經(jīng)是任何重組載體、質(zhì)粒或編碼上述嵌合分子的分離多核苷酸的受體或后裔。術(shù)語“蛋白”可以與術(shù)語“多肽”同義，或可以另外地指兩個或多個多肽復(fù)合體，可以是一級、二級或三級結(jié)構(gòu)。術(shù)語“靶酶”是指又來消化本發(fā)明的嵌合分子的切割位點(diǎn)的酶。例如，如果本發(fā)明的嵌合分子設(shè)計為由腸激酶消化切割位點(diǎn)，那么“腸激酶”就是靶酶。術(shù)語“治療宿主”是指預(yù)備將本發(fā)明的嵌合分子運(yùn)輸?shù)狡渲袕亩l(fā)生生物效果，如診斷、預(yù)防或滋養(yǎng)效果的宿主。這種治療宿主包括但不限于人，非人動物，如耕畜，如牛、豬、山羊和馬和家畜，如狗和貓，還有嚙齒動物，非人靈長類，鳥類，如雞，植物，微生物，寄生蟲和魚類?！爸委熕拗鳌笨梢园▋蓚€宿主，例如，如果將含有微生物(下文稱作“靶微生物”)特異性切割位點(diǎn)的嵌合分子向?qū)ο蠼o藥，那么使該微生物通過該患者的胃腸道。該嵌合分子可以在細(xì)胞內(nèi)被靶微生物剪切，或者靶微生物將其完整釋放而患者中的“治療宿主”酶將其切割。例如，如果該嵌合分子攜帶由可檢測信號，如切割活化的綠色熒光蛋白，那么該綠色熒光蛋白就能顯示人內(nèi)臟中存在的微生物。在本說明書中術(shù)語“個體”、“對象”、“患者”和“治療宿主”可以互換。在對本發(fā)明作進(jìn)一步描述之前，應(yīng)該明白本發(fā)明并不以任何方式限定到所描述的具體實(shí)施方案。應(yīng)該明白，本說明書中所使用的術(shù)語僅是為了描述具體實(shí)施方案，并不產(chǎn)生限定作用，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍僅由所附的權(quán)利要求書來限定。如果提供了值的范圍，那么很明顯除非上下文中有相反聲明，在該范圍上下限之間的每一中間值到該下限單位的十分之一和任何其它的引用值或中間值都包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。這些更小范圍的上下限可以獨(dú)立地從該更小范圍中導(dǎo)出，且仍包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，除非在該范圍的陳述中有特定的排除性限定。如果所述的范圍包括一個或兩個限定值，那么不包括這些限定值的一個或兩個的范圍液包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。必須注意，在本申請的所附權(quán)利要求中所使用的單數(shù)形式的術(shù)語，如“一”、“一種”、“該”、“多肽”、“多核苷酸”、“嵌合分子”和“分子”，包括其相應(yīng)的復(fù)數(shù)形式，除非有明確的聲明或描述。例如“多肽”包括多個多肽，“一種試劑”包括一個或多個試劑。在本申請中討論的文獻(xiàn)僅用來公開本發(fā)明申請日前的現(xiàn)有技術(shù)，其中的任何文獻(xiàn)都不能說明本發(fā)明不具有先于在先發(fā)明公開的資格。另外，本申請中提供的公開日期可能不同于實(shí)際的公開日，其各自需要進(jìn)行確認(rèn)。下文將通過實(shí)施例的方式對本發(fā)明進(jìn)行描述，但不以任何方式對本發(fā)明產(chǎn)生限定作用。在本申請中，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)通過使用一個或多個含有切割位點(diǎn)的連接子，兩個或多個組分分子可以有利地組合形成一非天然發(fā)生的嵌合分子以向宿主(即“治療宿主)給藥，其中所述組分分子可以由存在于治療宿主的切割分子，如酶釋放。在本申請中該嵌合分子設(shè)計成能被剪切成組分部分的形式，優(yōu)選地，在治療宿主的目標(biāo)部位剪切，從而在切割位點(diǎn)或部位附近產(chǎn)生生物學(xué)效果。該嵌合分子的切割可以在治療宿主的一完全限定范圍內(nèi)發(fā)生，如在胃腸道(“G.I”)、滑液或細(xì)胞里面，或者切割可以系統(tǒng)發(fā)生，如在血液或其它體液中。該嵌合分子切割釋放出在治療宿主中具有功能的組分分子，這些組分分子在從該嵌合分子切割前可以具有或不具有活性。在本發(fā)明的一具體實(shí)施方案中，在該嵌合分子中，至少有一個組分分子是肽、多肽或其活性片段。因此，本發(fā)明包括通過向治療宿主給予嵌合分子來運(yùn)輸組分分子到該治療宿主中以在其中達(dá)到生物效果的方法。每個嵌合分子至少含有兩個組分分子，每個組分分子通過含有一個或多個切割位點(diǎn)的連接子彼此相連，其中的切割位點(diǎn)由宿主細(xì)胞中的切割分子切割。本發(fā)明包括嵌合分子，編碼其的核酸，含有該核酸分子的載體和宿主細(xì)胞，含有該嵌合分子或編碼的核酸分子的試劑盒和組合物及其制備和使用方法。具體地，本發(fā)明的嵌合分子是非天然發(fā)生的。在其最簡單的結(jié)構(gòu)中，本發(fā)明的嵌合分子具有結(jié)構(gòu)式“AxB，”其中“A”是第一組分分子，“B”是第二組分分子和“x”是含有一個或多個切割位點(diǎn)的連接子。但是，本發(fā)明的該嵌合分子并不限于AxB，還包括具有結(jié)構(gòu)式(xiBi)n的嵌合分子，其中“i”和“n”分別是正整數(shù)，“xB”是主要單元，可重復(fù)(后文為“重復(fù)”)。本發(fā)明的嵌合分子包括具有結(jié)構(gòu)式x1B1或(x1B1)(x2B2)的嵌合分子。優(yōu)選地，該嵌合分子可以具有結(jié)構(gòu)式(x1B1)(x2B2)(x3B3)、(x1B1)(x2B2)(x3B3)(x4B4)或(x1B1)(x2B2)(x3B3)(x4B4)(x5B5)等，包括可以合理制備和給藥的任何數(shù)量的(xB)重復(fù)，其中各個“B”可用相同或不同，還可以與“A”相同或不同，各個“x”可以相同或不同。在一些具體實(shí)施方案中，形成重復(fù)的組分分子B很小。例如，如果該分子很小，在單獨(dú)給藥時，其就會很快被降解。如抗感染肽，如抗菌肽或小腸三葉因子(″ITF″)。另外，沒有必要將嵌合分子中的切割位點(diǎn)同時或完全切割，該嵌合分子中的一個或多個組分分子遭切割，而其它組分分子仍然保留作為剩余嵌合分子的一部分。例如，本申請的嵌合分子可以以未切割或部分切割的形式與組織結(jié)合，如與細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合，而且在其部位的酶水平很高時組分分子可以從中逐個地釋放。另外，該組分分子可以不經(jīng)切割而作為該嵌合分子的一部分被激活，只要該組分分子具有與其它分子發(fā)生翻譯的自由活性。本發(fā)明包括含有切割位點(diǎn)的嵌合分子，該切割位點(diǎn)設(shè)計來在治療宿主的目標(biāo)部位切割。例如，本發(fā)明的嵌合分子可以設(shè)計為在治療宿主中由胃腸道中的酶切割以釋放組分分子從而激活活性，如抗感染活性。該具體實(shí)施方案的具體應(yīng)用是用于動物或雞飼料，該飼料中含有本發(fā)明的嵌合分子而具有抗感染活性，避免抗生素。本發(fā)明還可用于人，特別是嬰兒食品，如牛奶、奶產(chǎn)品、水果、谷物、肉類和果汁。在本發(fā)明中，該嵌合分子由連接子構(gòu)建，該連接子含有針對胃腸道的一種或多種酶的切割位點(diǎn)，如腸激酶切位點(diǎn)。該腸激酶識別位點(diǎn)或切割位點(diǎn)的氨基酸序列是公知的，該氨基酸序列一般為-Lys-Lys-Lys-Lys-Asp-?？梢岳弥亟M技術(shù)通過任何常規(guī)方法在任何數(shù)量的合適宿主表達(dá)系統(tǒng)(“生產(chǎn)宿主”)中制備具有腸激酶切位點(diǎn)的嵌合分子。這樣的例子在題為″ExpressionLinkers″的美國專利No.4,769,326及其相應(yīng)的歐洲同族專利EP0035384中有描述。除了胃腸道中的腸激酶可以用來切割該嵌合分子外，連接子中的切割位點(diǎn)還可以針對其它胃腸道酶。適于整合到本發(fā)明嵌合分子的連接子中的切割位點(diǎn)的類型可以是能由某種治療宿主酶切割(下文為“靶酶”)的某一種，如圖1所示。宿主中存在的蛋白酶包括宿主細(xì)胞的內(nèi)源酶和由感染病原體導(dǎo)入的酶。在本申請中適于使用的切割位點(diǎn)不包括那些是氨或羧肽酶底物的切割位點(diǎn)，也不包括非特異性切割位點(diǎn)。然而，在本發(fā)明中使用較低特異性的肽鏈內(nèi)切酶，如胰島素、糜蛋白酶和胰蛋白酶。在本發(fā)明的一具體實(shí)施方案中，該切割位點(diǎn)包括那些是肽鏈內(nèi)切酶底物的切割位點(diǎn)。在本發(fā)明的一方面，適于本發(fā)明使用的該切割位點(diǎn)包括那些是細(xì)胞內(nèi)酶底物的切割位點(diǎn)。在本發(fā)明的另一方面，該切割位點(diǎn)包括那些是酶底物的切割位點(diǎn)，該酶在細(xì)胞表面具有活性。需要注意的是，該靶酶是組成性地或誘導(dǎo)性地表達(dá)，它們系統(tǒng)地或局部地循環(huán)。本發(fā)明還包括具有切割位點(diǎn)的嵌合分子，該切割位點(diǎn)設(shè)計為在治療宿主的細(xì)胞外切割。在本發(fā)明的一方面，該切割位點(diǎn)設(shè)計為治療宿主的內(nèi)源細(xì)胞外酶切割。在本發(fā)明的另一方面，如果該嵌合分子不是由轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)和細(xì)胞毒性區(qū)組合組成，或者第二組分分子不是細(xì)胞毒性分子，那么該切割位點(diǎn)就設(shè)計為由治療宿主細(xì)胞外存在的任何酶切割，無論是否是內(nèi)源酶。在本發(fā)明的另一方面，如果該切割位點(diǎn)不是來自病原體感染的治療宿主細(xì)胞的病原體激活型切割位點(diǎn)，那么該切割位點(diǎn)就設(shè)計或構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)切割。例如，本發(fā)明的該切割位點(diǎn)可以針對在治療宿主中單獨(dú)誘導(dǎo)或單獨(dú)導(dǎo)入到治療宿主中的酶來設(shè)計。本發(fā)明還包括將具有上述結(jié)構(gòu)的嵌合分子給藥，但是其中的切割位點(diǎn)設(shè)計為在治療宿主的細(xì)胞外由酶切割，而不考慮該酶是否是宿主的內(nèi)源的，在宿主中是組成型表達(dá)還是誘導(dǎo)表達(dá)。細(xì)胞外切割可以在宿主的任何部位發(fā)生，如在體液中，包括但不限于在淋巴液、血液、滑液、腹膜液、骨髓液、陰道分泌物和肺液中。細(xì)胞外切割可以是在細(xì)胞表面切割，因此本發(fā)明包括含有連接子的嵌合分子，該連接子的切割位點(diǎn)設(shè)計為在治療宿主的細(xì)胞表面酶切割。根據(jù)本發(fā)明，挑選合適切割位點(diǎn)及其序列，以用于本發(fā)明的嵌合分子使其在治療宿主內(nèi)的目標(biāo)部位切割是本領(lǐng)域公知的。關(guān)于酶及其切割位點(diǎn)的信息可以從許多來源中得到，例如，網(wǎng)站http://us.expasy.or/cgi-bin/enzyme-search-cl中列出了酶種類的列表。如其顯示，類“3.4.-.-”是“作用于肽鍵(肽酶)”的酶，類“3.4.24.-”是“金屬肽鏈內(nèi)切酶”。另外，點(diǎn)擊“3.4.21.9肽鏈內(nèi)切酶”的鏈連進(jìn)入下一頁，得到該酶的更多信息，其顯示“腸激酶”是選擇性名稱。當(dāng)進(jìn)行催化反應(yīng)時，其特異地“選擇性切割胰蛋白酶原的-Lys-/-Ile鍵”。其提供了在Medline中與該酶相關(guān)的參考文章。在另一個例子中，點(diǎn)擊“3.4.21.38凝血因子XIIa”的鏈連進(jìn)入下一頁，該頁將哈格曼因子作為凝血因子XIIa的另一名稱，在進(jìn)行催化反應(yīng)時，其作用于因子VII的“選擇性剪切的Arg-/-Ile鍵產(chǎn)生因子VIIa，作用于因子VI形成因子XIa”關(guān)于酶及其切割位點(diǎn)的其它參考信息源有AHFS藥物信息(AHFSDrugInformation)，由AmericanSocietyofHealth-SystemPharmacists，Inc.(7272WisconsinAvenue，Bethesda，MD20814，USA)每年公開一次。例如，在“20:40ThrombolyticAgentsp.1477”中，列出了作為溶血栓試劑的阿替普酶，其是“酶人組織型纖溶酶原激活物(t-PA)的生物合成(重組DNA來源的)形式”。而且，“內(nèi)源人t-PA分泌成單鏈多肽，其由幾種內(nèi)源酶，如纖溶酶、組織激肽釋放酶、活性因子X(因子Xa)和胰島素在精氨酸275-異亮氨酸276肽鍵處切割，從而形成兩條鏈的衍生物?！绷硗?，關(guān)于用于本發(fā)明嵌合分子的酶和剪切位點(diǎn)的其它信息有公開的文獻(xiàn)，如政府網(wǎng)站http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi中公開的文獻(xiàn)。例如，輸入檢索式“arthritis”和“protease”，就會出現(xiàn)超過200篇相關(guān)文章。人們能很快明白基質(zhì)金屬蛋白酶3(″MMP-3″，公知為″基質(zhì)切割素-1″)在正常的和骨關(guān)節(jié)炎的早期變性階段強(qiáng)烈表達(dá)，MMP-2和MMP-11在疾病的晚期階段正向調(diào)節(jié)，如Aigner，T等，ArthritisRheum.44(12)2777-89(2001年12月)的描述。另外，發(fā)現(xiàn)具有強(qiáng)烈蛋白聚糖降解活性的組織蛋白酶K在滑膜成纖維細(xì)胞中也高度表達(dá)，而且發(fā)現(xiàn)組織蛋白酶K產(chǎn)生的蛋白聚糖切割產(chǎn)物特異性地加強(qiáng)組織蛋白酶K的活性，如HouW.S等，Am.J.Pathol.159(6)2167-77(2001年11月)的描述。因此，鑒定用于整合本發(fā)明的嵌合分子的合適治療宿主酶剪切位點(diǎn)式本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員公知的。另外，Tortorella，M.D等，J.Biol.Chem.275(24)18566-18573(2000年6月16日)公開了重組人蛋白聚糖酶-11(″ADAMTS-4″)對蛋白聚糖的切割，蛋白聚糖是一種主要的軟骨蛋白聚糖，是在關(guān)節(jié)炎疾病中遭到可檢測損傷的主要基質(zhì)成分。蛋白聚糖酶-1和蛋白聚糖酶-2(″ADAMTS-11/5″)是鋅結(jié)合金屬蛋白酶的adamalysin家族成員。Tortorella等報道了重組人蛋白聚糖酶-1在幾個位點(diǎn)剪切蛋白聚糖，所有的位點(diǎn)在P1位點(diǎn)含谷氨酸殘基，在P1’位點(diǎn)含非極性或無電荷極性的殘基(丙氨酸、亮氨酸或甘氨酸)。最有效的剪切位點(diǎn)是分子的Glu1667-Gly1668鍵和G2-G3區(qū)，G1片段進(jìn)一步地還在Glu1480-Gly1481處遭剪切，接著在Glu373-Ala374處發(fā)生剪切。另外，該作者報道了蛋白聚糖酶-1和蛋白聚糖酶-2不在Asn341-Phe342處發(fā)生剪切，其是至今為止唯一的在蛋白聚糖酶的Glu373-Ala374位點(diǎn)處發(fā)生剪切，而不在基質(zhì)金屬蛋白酶(“MMP”)位點(diǎn)發(fā)生剪切的酶。該作者還報道了其它的研究，這些研究表明在蛋白酶Glu373-Ala374位點(diǎn)發(fā)生剪切的兩種酶，MMP-8和衲脊蛇溶血素-C在Asn341-Phe342MMP位點(diǎn)處也發(fā)生剪切。因此，在設(shè)計用于將組分分子運(yùn)輸?shù)交褐幸灾委熽P(guān)節(jié)炎的連接子時，例如，Glu-Ala序列可以插入到在P1位點(diǎn)具有谷氨酸殘基和在P1’位點(diǎn)具有無電荷極性殘基(丙氨酸、亮氨酸或甘氨酸)的本發(fā)明的連接子中，或者使用Glu-Gly序列。在本發(fā)明的上述嵌合分子中含有剪切位點(diǎn)的靶酶的例子有許多，且是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員公知的。在表1中列出了一些例子，但不限于腸激酶(在內(nèi)臟中激活)，凝血因子，如因子VIIa、Ixa、Xa、XIa和XIIa(在血液中激活)，ADAMTS-4、-5(蛋白聚糖酶-1、-2)(在關(guān)節(jié)、心臟、腦、肺中激活)，凝血酶(在血液中激活)、纖溶酶(在血液中激活)，補(bǔ)體因子，如因子D、Clr、C3/C5轉(zhuǎn)化酶(在血液中激活)，胃分泌激素(在胃中激活)，顆粒蛋白酶，如胰蛋白酶E和PR-3(在中性粒細(xì)胞和白細(xì)胞中激活并以活性形式分泌)，基質(zhì)金屬蛋白酶(″MMP″，大多數(shù)作為酶原分泌)，如MMP-2(在乳腺癌和前列腺癌和受傷的肝中被正向調(diào)節(jié))、MMP-7(基質(zhì)切割蛋白，在腺上皮，如結(jié)腸中激活，在腫瘤中被正調(diào)節(jié))、MMP-9、MMP-11、MMP-13(MMP-11和MMP-13在乳腺癌中被正向調(diào)節(jié))，膜型MMP，如MT-1、MT-2、MT-3和MMP-14、MMP-15、MMP-16、MMP-24(在細(xì)胞表面活化的跨膜蛋白，一些被排出，在轉(zhuǎn)移中被正向調(diào)節(jié))，II型跨膜絲氨酸蛋白酶，如TMPRSS-2、-4和Matriptase(在細(xì)胞表面活化的跨膜蛋白，其在腫瘤中被正向調(diào)節(jié))，30種去組合蛋白和金屬蛋白酶的ADAM家族，如ADAM-10、ADAM-17和TACE(TNF轉(zhuǎn)化酶)(在大多數(shù)組織種表達(dá)，在質(zhì)膜中激活)，中性溶酶(在正常和損傷肝細(xì)胞中表達(dá)，在質(zhì)膜上激活)、組織蛋白酶K(由滑膜成纖維細(xì)胞分泌)、肥大細(xì)胞類胰蛋白酶(在哮喘中激活)和組織型纖溶酶原激活物。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明嵌合分子的切割位點(diǎn)不僅僅包括蛋白酶底物，還包括其它酶的底物，如糖苷酶和肝素酶在另一具體實(shí)施方案中，嵌合分子中的酶切位點(diǎn)或構(gòu)建的位點(diǎn)設(shè)計為使酶在疾病、應(yīng)急、病原體、過敏、早期生長或衰老條件及其它需要治療的調(diào)節(jié)下表達(dá)或提高。本發(fā)明連接子包括具有一個或多個切割位點(diǎn)的連接子。例如，本發(fā)明的連接子可以有利地含有間隔子分子以使該切割位點(diǎn)更好地暴露與酶而切割。因此，在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的連接子中含有使酶更好地作用于切割位點(diǎn)的間隔子。在該實(shí)施方案中，該連接子可以是一系列不發(fā)生自身折疊的任意氨基酸殘基，因此，這些氨基酸的例子可以是一系列的親水氨基酸分子。另外，當(dāng)使用間隔子時，本發(fā)明的連接子中可以任選地含有額外的另一切割位點(diǎn)，因而該間隔子可以與切割位點(diǎn)一起遭剪切而產(chǎn)生具有合適或天然C-末端或N-末端的組分分子或合適活性片段。在本發(fā)明的另一方面，如果在連接子各邊的組分分子在切割之前都具有活性且有良好的蛋白酶親和性，那么本發(fā)明的該連接子優(yōu)選含有大約10-20各氨基酸殘基，更優(yōu)選為約11-l7個氨基酸殘基(后文稱為“間隔子”)。例如，本發(fā)明可以在蛋白X和Y之間含有間隔子，其中該間隔子含有氨基酸序列如蛋白X-ASGGGGGGGGSA-蛋白Y，其中黑體和下劃線標(biāo)出的序列代表因子Va切割位點(diǎn)，蛋白X和Y是組分分子。因此在保證組分分子活性的情況下，可以將額外的氨基酸構(gòu)建到該嵌合分子的酶切位點(diǎn)的上游和/或下游以確保該切割位點(diǎn)暴露于剪切酶。這種氨基酸的例子是本領(lǐng)域公知的，如參考Hosfield，T和Lu，Q.，″InfluenceoftheAminoAcidsResidueDownstreamof(ASP)4LysonEnterokinaseCleavageofaFusionProtein″，Anal.Biochem.26910-16(1999)。在本發(fā)明的另一方面，如果上述組分分子直到剪切后才具有活性，那么使用較少的氨基酸，例如，該嵌合分子可以含有氨基酸序列蛋白X-GGGG-蛋白Y，其中RS代表纖溶酶的切割位點(diǎn)，蛋白X和Y是組分分子。本發(fā)明還包括很少發(fā)生的具體實(shí)施方案，其中當(dāng)一組分分子的C末端與第二組分分子的N末端相連時，該融合組分分子可以自身產(chǎn)生用于切割的切割位點(diǎn)，而不需要額外的連接子分子。在本發(fā)明的一具體實(shí)施方案中，當(dāng)該切割位點(diǎn)設(shè)計為在非細(xì)胞表面的細(xì)胞外切割時，該嵌合分子不是糖基干擾素β。本發(fā)明的組分分子可以是在宿主中可能實(shí)現(xiàn)生物學(xué)功能的任何分子，因此，本發(fā)明的組分分子包括肽、蛋白質(zhì)、核酸、糖類、其它天然或合成的聚合物、小分子藥物、用于診斷的可探測分子、半抗原、配體、抗感染物及其類似物和活性片段。本發(fā)明的組分分子可以是任何起源或來源、人或非人、天然或合成的。因此，該組分分子可以是肽、蛋白或其類似物或衍生物，其與從人、非人動物、植物、魚、昆蟲和微生物，如細(xì)菌、病毒、真菌和寄生蟲中獲得的組分分子完全一致。在本發(fā)明的另一方面，該嵌合分子是多蛋白，其中的組分分子至少有兩個或全部是肽或多肽或其活性片段(后文稱為“蛋白組分”)。在本發(fā)明中適于使用的蛋白組分包括但不限于抗體、抗原、受體、生長因子、激素、細(xì)胞因子、淋巴因子、趨化因子、酶、抗感染物、前藥、毒素、營養(yǎng)改良分子及其活性片段。表1樣品靶酶用于切割治療宿主體內(nèi)的嵌合分子的內(nèi)源蛋白酶在本發(fā)明另一具體實(shí)施方案中，至少一組分分子選自可溶性p75TNFα受體Fc融合體、人生長激素、粒細(xì)胞集落刺激因子(GCSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、干擾素-α2b、聚乙二醇化(PEG)干擾素-α、PEG-asparagase、PEG-adamase、抗-C017-1A、水蛭素、組織型纖溶酶原激活物、促紅細(xì)胞生成素、人DNA酶、IL-2、凝血因子IX、IL-11、TNK酶、活化的蛋白C、PDGF、凝血因子VIIa、胰島素、干擾素α-N3、干擾素γ1b、干擾素α共有序列、血小板活化因子乙酰水解酶及其活性片段。在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方案中，上述嵌合分子含有作為組分分子的肽、蛋白或其活性片段，其選自白介素，生長因子，如IGF-I、EGF、FGF、PDGF、ITF和KGF，集落刺激因子，如GM-CSF和M-CSF，凝血因子，如因子VIII或因子IX、tPA，生長激素，如hGH，抗感染物，如乳鐵蛋白和溶菌酶，血纖蛋白原，α1-抗胰蛋白酶，促紅細(xì)胞生成素，干擾素，如干擾素α、干擾素β、干擾素γ和共有序列干擾素，胰島素，人絨毛膜促性腺素，白喉蛋白，抗嗜血因子，受體，疫苗，抗生素或其類似物或片段。在本發(fā)明的優(yōu)選具體實(shí)施方案中，將食品藥物管理局(“FDA”)核準(zhǔn)的那些藥物用作組分分子是特別理想的，這些藥物在網(wǎng)站www.FDA.gov.中有列出。例如在生物制劑下被核準(zhǔn)的生物分子，在2002BiologicalLicenseApplicationApprovals下的鏈連列出了分子，如用于治療復(fù)合硬化癥的回復(fù)形式的干擾素β-1a(商業(yè)名稱為“Rebif”)，白喉和破傷風(fēng)毒素和非細(xì)胞百日咳疫苗(商業(yè)名稱為“Daptacel”)，用于治療成年C型慢性肝炎的聚乙二醇干擾素α-2a(peginterferonα-2a)(商業(yè)名稱為“Pegasys”)和阿達(dá)木單抗(商業(yè)名稱為“Humira”)，該阿達(dá)木單抗是特異于人腫瘤壞死因子(“TNF”)，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的重組人IgG1抗體。在核準(zhǔn)年份下還列出了其它核準(zhǔn)生物試劑。在本發(fā)明的一具體實(shí)施方案中，沒有組分分子是抗體。在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方案中，一個或兩個或多個組分分子是抗體或其活性片段(后文稱作“抗體組分“)。本發(fā)明中的抗體組分包括任何適于治療、預(yù)防或診斷的組分。在優(yōu)選具體實(shí)施方案中，該抗體組分選自FDA核準(zhǔn)的抗體系列。這種抗體的例子包括但不限于抗-IL8、抗-CD11a、抗-ICAM-3、抗-CD80、抗-CD2、抗-CD3、抗-補(bǔ)體C5、抗-TNFA、抗-CD4、抗-A4β7、抗-CD40L(配體)、抗-VLA4、抗-CD64、抗-IL5、抗-IL4、抗-IgE、抗-CD23、抗-CD147、抗-CD25、抗-J82整聯(lián)蛋白、抗-CD18、抗-TGFβ2、抗-因子VII、抗-IIBIIA受體、抗-PDGFβR、抗-F蛋白(來自RSV)、抗-gp120(來自HIV)、抗-HepB、抗-CMV、抗-CD14、抗-VEFG、抗-CA125(卵巢癌)、抗-17-LA(結(jié)腸細(xì)胞表面抗原)、抗-抗-獨(dú)特型GD3表位、抗-EGFR、抗-HER2/neu、抗-AVβ3整聯(lián)蛋白、抗-CD52、抗-CD33、抗-CD20、抗-CD22、抗-HLA、抗-TNF和抗-HLADR。在一具體實(shí)施方案中，該第一組分分子是抗體或其活性片段，該第二組分分子或其它組分不是抗體或抗體片段。在另一具體實(shí)施方案中，該第一組分分子不是抗體或抗體片段，但第二組分分子或其它組分分子是抗體或其片段。在本發(fā)明的變體中，嵌合分子的所有的組分分子是抗體或其活性片段。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明還包括其中至少有一個組分分子是抗微生物的肽、蛋白或其類似物或活性片段的嵌合分子。該抗微生物的肽是公知的，如包括抗菌肽、溶菌酶、乳鐵蛋白質(zhì)、ITF、蛙皮素及其它天然抗感染物。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括其中的第一組分分子是上述的肽、蛋白或其活性片段，第二組分分子是化學(xué)化合物的嵌合分子。適于本發(fā)明的化學(xué)化合物優(yōu)選是FDA核準(zhǔn)的化合物，例如，在www.FDA.gov中由CDER核準(zhǔn)的化合物。在本發(fā)明的一方面，該化合物是激素，如睪酮、雌激素、孕酮或其類似物或衍生物。在本發(fā)明的另一方面，該化合物是有毒化合物，如紫衫醇、阿霉素，順鉑或其類似物或衍生物。在本發(fā)明的變體中，該化合物是抑制劑，如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑或化學(xué)抗感染劑。嵌合分子的例子包括兩組分分子，包括但不限于下列組合乳鐵蛋白/乳鐵蛋白質(zhì)、乳鐵蛋白/溶菌酶、溶菌酶/溶菌酶、乳鐵蛋白/EGF、EGF/EGF、乳鐵蛋白/ITF、ITF/ITF、ITF/EFG、EGF/KGF、KGF/KGF、ITF/KGF、KGF/PDGF、PDGF/PDGF、α1-抗胰蛋白酶/MMP抑制劑、雌激素/孕酮、抗體/抗體、ITF/ITF及其類似物、變體或衍生物。上述嵌合分子的組分分子可以具有不同活性，例如，如果該組分分子是基質(zhì)金屬蛋白酶(″MMP″)，挑選該組分分子用來改變細(xì)胞生長，調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡，影響細(xì)胞遷移、影響細(xì)胞與細(xì)胞間的交流和影響腫瘤進(jìn)程。如同McCawley，L.J在″MMP-7-generatedsolubleFasligandiseffectiveinkillingFas-expressingtumorcells″和Matrisian，L.M在″Matrixmetalloproteinasethey’renotjustformatrixanymore″CurrentOpinioninCellBiology13534-540at536(2001)中的闡述。在可選擇的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的嵌合分子可以含有是MMP活性抑制劑的組分分子。將本發(fā)明的嵌合分子組合給予治療宿主以在該治療宿主中產(chǎn)生生物學(xué)效果，該生物學(xué)效果可以是診斷、治療、預(yù)防、抗感染或滋養(yǎng)。在需要調(diào)節(jié)宿主中目標(biāo)多肽的活性的情況下，可以將本發(fā)明的嵌合分子組合物用作治療劑以在特定解剖學(xué)位點(diǎn)提供活性。上述組分分子可以有利地組合成嵌合分子以用于運(yùn)輸或在治療宿主中的不同位點(diǎn)發(fā)生剪切。在一具體實(shí)施方案中，將嵌合分子，如含有抗感染物的嵌合分子運(yùn)輸?shù)街委熕拗鞯膬?nèi)臟中。這種組分的例子包括但不限于位于胃腸道中，例如包括但不限于抗感染物，如小腸三葉因子(″ITF″)和蛙皮素，乳鐵蛋白，如鐵蛋白，表面活性劑蛋白，如SP-A、SP-D和溶菌酶；抗-發(fā)炎分子，如環(huán)氧合酶(COX)-2抑制劑(J.Pharmacol.Exp.Ther.290551(1999))；抗-癌分子，例如是分泌的腫瘤抑制劑的DMBT1(Deletedinmalignantbraintumors1)，其在食道癌和消化道癌中被刪除，如同CancerRes.618880(2001)的描述；營養(yǎng)改良分子，如牛奶蛋白；和生長因子，如上皮生長因子(″EGF″)、胰島素類生長因子(″IGF-I″)和角化細(xì)胞生長因子(″KGF″)。在胃腸道中釋放的組分分子包括那些在胃腸道中具有活性的分子和那些被轉(zhuǎn)移到覆蓋內(nèi)臟的上皮細(xì)胞中的分子，如IgA。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，該酶一般存在于治療宿主的內(nèi)臟中，不需要加入或給予其它酶。也可以將組分分子有利地組合來向肺給藥，如使用合適的氣霧劑來防止或治療感染、疾病，如癌癥、充血或過敏反應(yīng)，或其它炎性條件。適于本發(fā)明使用的抗感染物包括作為組分分子的表面活性劑蛋白蛋白SP-B和SP-C。另外，組分分子可以有利地作為本發(fā)明的嵌合分子局部地給予發(fā)炎部位，如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)。這些組分分子包括但不限于IL-10、白介素1受體拮抗劑(IL-1Rα)和可溶性TNF-α受體(″solTNFR″)等。在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明嵌合分子適于靜脈內(nèi)給藥，例如但不限于刺激多元造血作用的GM-CSF和/或IL-3，用于乳腺癌的Flt2和TRAIL。在一些實(shí)施例中，可以通過蛋白酶切位點(diǎn)來提供治療效果，該蛋白酶切位點(diǎn)在體內(nèi)組分分子具有活性的位置或附近發(fā)生優(yōu)先切割。這通過在嵌合分子中設(shè)計一個或多個由蛋白酶選擇性識別的切割位點(diǎn)來實(shí)現(xiàn)，該蛋白酶的表達(dá)和/或活性在被治療條件下局部升高。在一具體實(shí)施方案中，在本發(fā)明嵌合分子中的至少一個組分分子可以是抑制分子，如α-天花粉蛋白，一種來自Trichosantheskirilowii的真核核糖體失活蛋白，其抑制人免疫缺陷病毒(“HIV”)的復(fù)制(參見Kumagai等，Proc.Natl.Acad.Sci.90427-430(1993))。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，如果該嵌合分子的第一組分分子通過連接子與第二組分分子相連，那么該第一組分分子不抑制第二組分分子的活性，反之亦然。在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的嵌合分子包括指導(dǎo)嵌合分子到宿主的作用部位的靶分子。該靶分子包括受體的配體，如細(xì)胞表面受體，或?qū)σ徊课痪哂杏H和性的其它分子。例如與T細(xì)胞結(jié)合但不使其活化的抗-CD40抗體或與EGF受體結(jié)合但不使其結(jié)合的EGF片段。該靶分子可以替換本發(fā)明嵌合分子中的第一組分分子或與第一組分分子連接并從其切割。任選地，本發(fā)明的嵌合分子包括指導(dǎo)該嵌合分子分泌或貯存的信號肽或引導(dǎo)序列，因而當(dāng)該嵌合分子在生產(chǎn)宿主中產(chǎn)生時，該嵌合分子可以從生產(chǎn)宿主分泌或指導(dǎo)在生產(chǎn)宿主中的貯存。引導(dǎo)序列的例子包括但不限于來源于釀酒酵母(S.cerevisiae)的α-因子分泌引導(dǎo)子，如同US4,870,008的描述；或如果該嵌合分子是在單子葉植物的種子中生產(chǎn)，來源于種子貯存蛋白，如來源于Gt1和G1b基因的信號肽，如同WO01/83792的描述。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的嵌合分子還含有作為第一組分分子的在生產(chǎn)宿主中高度表達(dá)的生產(chǎn)宿主蛋白或其部分(后文稱為“生產(chǎn)宿主肽“)。在本發(fā)明的一方面，具有高度表達(dá)的生產(chǎn)宿主肽的嵌合分子同時與一個或多個第二組分分子相連，該第二組分分子在缺乏生產(chǎn)宿主肽時一般很難表達(dá)。這種第二組分分子的例子包括小分子肽，如ITF、蛙皮素及其它天然抗感染物。因此，在本發(fā)明的一具體實(shí)施方案中，該嵌合分子可以用下列通式表示生產(chǎn)宿主肽-(連接子-小分子肽)n，或者生產(chǎn)宿主肽-連接子-(小分子肽)n，其中n是1-10的正整數(shù)，任選為2-7，更任選為3-5。該小分子可以是任何表達(dá)有益的小分子，例如可以含有約2-60個氨基酸殘基的序列，任選地約5-40個，更任選地約7-25個，更任選地約10-20。任選地，本發(fā)明的嵌合分子還可以含有便于在從生產(chǎn)宿主中生產(chǎn)出來后純化的部分，如組氨酸標(biāo)記。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明還包括其中的連接子含有間隔子的嵌合分子。該間隔子可以僅含有幾個氨基酸殘基，例如不影響該嵌合分子在切割位點(diǎn)的酶切割，但仍可以使切割位點(diǎn)更容易地切割的氨基酸殘基。在另一具體實(shí)施方案中，該連接子含有兩個切割位點(diǎn)，在該間隔子的每一端各一個，因此該間隔子不與任一組分分子相連接。本發(fā)明的嵌合分子可以制成許多形式而運(yùn)輸?shù)街委熕拗髦小＠?，在一具體實(shí)施方案中，當(dāng)將編碼該嵌合分子的核酸倒入到治療宿主中時，該嵌合分子是可食用產(chǎn)品的組分。該可食用產(chǎn)品包括但不限于牛奶(當(dāng)該生產(chǎn)宿主時動物，如山羊或牛時)、植物(當(dāng)該生產(chǎn)宿主時蔬菜，如西紅柿?xí)r)、種子(當(dāng)該生產(chǎn)宿主時谷物，如稻、小麥、大麥、燕麥或粟)、微生物細(xì)胞(當(dāng)該生產(chǎn)宿主時乳酸菌或酵母時)及其衍生物和提取物。因此，本發(fā)明包括通過口服、口腔、陰道、直腸、顱內(nèi)、心室內(nèi)、腸胃外或通過吸入給予嵌合分子而將該嵌合分子運(yùn)輸?shù)街委熕拗髦械姆椒?，運(yùn)輸?shù)哪c胃外路徑包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、鼻內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、透皮或經(jīng)皮膚。在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方案中，上述嵌合分子包括作為組分分子的多肽或核酸疫苗和/或作為組分分子的輔助分子或其結(jié)合。疫苗可以是感染性有機(jī)體的組分、毒素或在癌細(xì)胞中過量表達(dá)的癌抗原。在一具體實(shí)施方案中，該嵌合分子不是核酸分子。但是，如果該嵌合分子是多蛋白，本發(fā)明就包括編碼該嵌合分子的核酸分子和含有該核酸分子的載體及含有該核酸分子的宿主細(xì)胞。因此，一般地，如果該嵌合分子是多蛋白，那么本發(fā)明就提供核酸分子，其從5’到3’方向依次編碼第一組分分子，與第一組分分子相連的編碼連接子的核酸，與該核酸連接的編碼第二核酸分子的核酸分子。本發(fā)明的嵌合分子可以構(gòu)建成表達(dá)盒的形式，該表達(dá)盒含有啟動子，和任選的轉(zhuǎn)錄終止子和更任選的翻譯終止子，所有的這些都插入到可用于轉(zhuǎn)染適合宿主的表達(dá)載體中，如表達(dá)該嵌合分子的生產(chǎn)宿主中。在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方案中，上述嵌合分子含有的組分分子是核酸分子，其中的連接子含有如上所述的酶切位點(diǎn)。可以將這種嵌合分子運(yùn)輸?shù)街委熕拗髦?，在治療宿主中，一旦切割，該核酸組分分子就被轉(zhuǎn)錄和/或翻譯而在治療宿主中發(fā)生作用。本發(fā)明還包括含有上述嵌合分子的組合物和藥物學(xué)上可接受的載體或賦形劑。適于本發(fā)明使用的藥物學(xué)可接受的載體或賦形劑是本領(lǐng)域常用的。該組合物形成適于向治療宿主給予該嵌合分子的路徑的形式，因此，該組合物可以制成適于口服運(yùn)輸，口腔運(yùn)輸，直腸運(yùn)輸，陰道運(yùn)輸，顱內(nèi)運(yùn)輸，心室內(nèi)運(yùn)輸，腸胃外運(yùn)輸，如靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、鼻內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、透皮運(yùn)輸和吸入的形式在另一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括包含本發(fā)明的嵌合分子組合物和向治療宿主給予該組合物的說明書的試劑盒。該說明書一般描述組合物的給藥路徑，如口服運(yùn)輸，口腔運(yùn)輸，直腸運(yùn)輸，陰道運(yùn)輸，顱內(nèi)運(yùn)輸，心室內(nèi)運(yùn)輸，腸胃外運(yùn)輸，如靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、鼻內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、透皮運(yùn)輸和吸入。將含有組分分子的嵌合分子運(yùn)輸?shù)街委熕拗魇菍⒒钚苑肿舆\(yùn)輸?shù)街委熕拗饕援a(chǎn)生生物效果的一種有效方法，當(dāng)該嵌合分子在體內(nèi)由一種或多種治療宿主中存在的酶切割時，本發(fā)明的嵌合分子可以構(gòu)建來將活性分子運(yùn)輸?shù)剿拗髦校溥\(yùn)輸時間比運(yùn)輸單個組分分子藥長。本發(fā)明的嵌合分子也可以構(gòu)建來將活性分子運(yùn)輸?shù)街委熕拗鞯哪骋晃稽c(diǎn)以使其切割并發(fā)生作用。本發(fā)明的嵌合分子還可以構(gòu)建來組合一個或多個能發(fā)生協(xié)同作用或其它作用的活性分子以治療疾病或癥狀。本發(fā)明的嵌合分子可以用本領(lǐng)域的常規(guī)方法制備，例如這樣一種方法將編碼第一組分分子的核酸序列在5’到3’方向與含有至少一個切割位點(diǎn)的連接子連接，該連接子再與第二組分分子連接。一般連接子在合適的限制酶識別位點(diǎn)和切割位點(diǎn)處產(chǎn)生，其中將不同的核酸片段與調(diào)控序列，如啟動子、轉(zhuǎn)錄和翻譯終止子及任選的增強(qiáng)子連接，從而產(chǎn)生一個含有或不含有選擇性標(biāo)記的表達(dá)盒。任選地，該選擇性標(biāo)記可以存載體中，該表達(dá)盒可以插入到該載體中而形成表達(dá)載體，從而用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞(“生產(chǎn)宿主”)以產(chǎn)生嵌合分子。為了說明的目的，下文描述了怎樣制備本發(fā)明的嵌合分子的實(shí)施例，它們不產(chǎn)生限制。雖然該嵌合分子、組合物和含有其的試劑盒是新的，但是所用的都是常規(guī)技術(shù)。多肽組合物術(shù)語“目標(biāo)蛋白和多肽”是指一個具體實(shí)施方案，在該具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的嵌合分子的組分分子是蛋白和多肽。這些目標(biāo)蛋白和多肽可以從天然發(fā)生的來源中獲得或合成制得，如通過重組技術(shù)制得。天然發(fā)生的蛋白和多肽的來源一般依賴于該蛋白來源的種，該目標(biāo)蛋白也可以通過合成方式制得，例如通過在合適宿主中表達(dá)編碼有益蛋白的基因。使用任何常規(guī)的蛋白純化步驟來純化。例如，可以用最初原料制得溶解產(chǎn)物并用HPLC、篩析色譜法、凝膠電泳或親和層析純化。單個的組分分子可以通過化學(xué)方式連接在一起或表達(dá)成單鏈多肽，例如通過在生產(chǎn)宿主中表達(dá)編碼核酸分子。本發(fā)明還提供了在本發(fā)明的嵌合分子中作為組分分子的多肽片段的用途。在一些具體實(shí)施方案中，片段表現(xiàn)出一種或多種與相應(yīng)的天然發(fā)生多肽相關(guān)的活性。例如，片段可以用于產(chǎn)生全長多肽的抗體和檢測與多肽活性有關(guān)的和/或調(diào)節(jié)多肽活性的試劑的方法。目標(biāo)多肽片段一般長度至少有約10-300個氨基酸，任選地，該片段的長度至少約為25個氨基酸，更任選地，該片段的長度為約50個氨基酸，更任選地，該片段的長度為約75個氨基酸，更優(yōu)選地，該片段的長度約為100個氨基酸，更優(yōu)選地，該片段的長度約為200個氨基酸。特定的目標(biāo)片段包括那些具有酶活性的片段，那些具有生物活性的片段或能與其它蛋白或核酸結(jié)合的片段。除了天然發(fā)生蛋白，本發(fā)明的組嵌合蛋白的組分分子可以含有非天然發(fā)生形式的多肽，例如變體，如融合蛋白，其類似物和衍生物，其中該變體與天然發(fā)生蛋白同源或完全相似。在實(shí)施例中，該融合蛋白可以含有目標(biāo)多肽或其片段，和與在目標(biāo)蛋白的C末端和/或N末端框架內(nèi)融合的非目標(biāo)多肽的多肽，或插入到目標(biāo)多肽的非目標(biāo)多肽的多肽。該融合組分可以或不可以通過本發(fā)明的連接子與組分分子連接。合適的融合組分包括但不限于能與特異于該融合組分的抗體結(jié)合的多肽(如，表位標(biāo)記，如紅血球凝聚謖、FLAG和c-myc)，能提供可檢測信號的多肽(如熒光蛋白，如綠熒光蛋白質(zhì)、來自珊瑚蟲種的熒光蛋白質(zhì)、β-牛乳糖，熒光素酶，cre重組酶)，具有催化作用或誘導(dǎo)細(xì)胞反應(yīng)的多肽，能使融合蛋白從真核細(xì)胞中分泌的多肽，能使融合蛋白從原核細(xì)胞中分泌的多肽，能結(jié)合金屬例子的多肽(如，Hisn，其中n＝3-10，如6His)。例如，如果上述融合組分具有免疫識別表位，那么就可用表位特異性抗體來定律檢測多肽的水平。在一些具體實(shí)施方案中，該融合組分具有可檢測信號，在這些具體實(shí)施方案中，基于該融合組分產(chǎn)生的信號的類型選自檢測方法。例如，如果該融合組分是熒光蛋白，那么就檢測該熒光。如果上述融合組分是能產(chǎn)生可檢測產(chǎn)物的酶，那么可以用合適的方法來檢測該產(chǎn)物。例如，β-牛乳糖酶作用底物可以產(chǎn)生能用分光光度計檢測到的有色產(chǎn)物，熒光酶、熒光素酶可以產(chǎn)生用光度計檢測的發(fā)光產(chǎn)物。本發(fā)明的嵌合分子多肽在非天然發(fā)生環(huán)境中存在，即它們已從其天然發(fā)生環(huán)境中分離出來。例如，在某些具體實(shí)施方案中，如果該嵌合分子存在于不含其它蛋白的組合物中，則該嵌合分子完全純化。本發(fā)明的嵌合分子多肽可以以與其它蛋白或其它天然發(fā)生的生物分子，如寡糖、多核苷酸及其片段等完全分離的形式存在。在某些具體實(shí)施方案中，該嵌合分子純度至少為約95％，通常為至少約97％，更通常地為約97％，任選地為至少約98％或99％。任何常規(guī)的純化方法都可以使用以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的。例如，如果合適，可以參考GuidetoProteinPurification(Deuthser編)(AcademicPress，1990)中的蛋白質(zhì)純化技術(shù)的描述。肽在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，上述組分分子是肽。在一些具體實(shí)施方案咱紅，該肽顯示處一種或多種下列活性抑制目標(biāo)多肽與作用蛋白的結(jié)合，抑制目標(biāo)多肽與另一多肽的結(jié)合，抑制目標(biāo)多肽的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性，抑制目標(biāo)多肽的酶活性，抑制目標(biāo)多肽的DNA結(jié)合活性。在一些具體實(shí)施方案中，該多肽含有相應(yīng)的天然發(fā)生蛋白的3-10個、5-30個或10-25個氨基酸的序列。肽可以是天然發(fā)生或非天然發(fā)生的氨基酸，肽可以是D-氨基酸，D-氨基酸和L-氨基酸的組合和具有特定屬性的不同“類型”氨基酸(如，β-甲基氨基酸，Cα-甲基氨基酸和Nα-甲基氨基酸等)。另外，肽還可以是環(huán)肽。為了導(dǎo)入特定的結(jié)構(gòu)部分，肽可以含有非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸，任何已知的非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸都可以使用。非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸包括但不限于1，2，3，4-四氫異唑碄-3-羧酸酯、(2S，3S)-甲基苯基丙氨酸、(2S，3R)-甲基-甲基苯基丙氨酸、(2R，3S)-甲基-苯基丙氨酸和(2R，3R)-甲基-苯基丙氨酸、2-氨基四氫化萘-2-羧酸、羥基-1，2，3，4-四氫異唑碄-3-羧酸酯、β-咔啉(D和L)、HIC(組氨酸異喹啉羧酸)和HIC(組氨酸環(huán)脲)。氨基可以將酸類似物和類肽(peptidomimetics)插入到肽中以誘導(dǎo)或幫助特定二級結(jié)構(gòu)的形成，該類似物和類肽包括但不限于LL-Acp(LL-3-氨基-2-propenidone-6-羧酸)、β-轉(zhuǎn)角誘導(dǎo)二肽類似物、β-片層誘導(dǎo)類似物、β-轉(zhuǎn)角誘導(dǎo)類似物、α-螺旋誘導(dǎo)類似物、γ-轉(zhuǎn)角誘導(dǎo)類似物、Gly-Ala轉(zhuǎn)角類似物、氨基結(jié)合等構(gòu)物(amidebondisoster)或tretrazol。肽可以是線狀或環(huán)狀假肽(Kuisle等，1999)，可以是環(huán)肽或雙環(huán)肽，例如，可以將C-末端羧基或C-末端酯基誘導(dǎo)形成環(huán)將羧基或酯基內(nèi)的-OH或酯基(-OR)分別替換為N-末端氨基從而形成環(huán)肽。例如，在合成和切割而得到肽酸后，用合適的羧基激活物，如二環(huán)己基碳二亞胺(DCCI)在溶液中，如在二氯甲烷CH2Cl2)、二甲替甲酰胺(DMF)混合物中將自由酸轉(zhuǎn)化為活性酯，然后通過用N-末端胺替換內(nèi)部的該活性酯而形成環(huán)肽。使用非常稀的溶液可以提高內(nèi)環(huán)化而防止聚合。產(chǎn)生環(huán)肽的方法是本領(lǐng)域公知的。抗體本發(fā)明提供了含有作為組分分子的特異性識別一特定多肽(后文稱作“靶多肽”)的抗體或其活性片段的嵌合分子，可以用本領(lǐng)域的各種常規(guī)方法生產(chǎn)合適抗體，如多克隆抗體、單克隆抗體、單鏈抗體和抗體片段。本發(fā)明的抗體包括本領(lǐng)域常規(guī)的非人靈長類抗體、鼠抗體、家鼠抗體、綿羊抗體、山羊抗體、兔抗體、豬抗體、?？贵w等，無論其是否是內(nèi)源形式或“人源化的”。本發(fā)明的抗體還包括靈長源抗體和嵌合抗體。本發(fā)明的抗體可以執(zhí)行各種功能，它們能作為靶抗體、中和抗體、穩(wěn)定抗體或增強(qiáng)抗體而發(fā)生作用。它們能作為其它抗體的激動劑或拮抗劑而發(fā)生作用，它們能接到ADCC。它們能阻斷抗體，能抑制結(jié)合多肽與其配體或其底物的特異性結(jié)合。另外，本發(fā)明的抗體能特異性抑制其它分子底物的與其結(jié)合肽的結(jié)合。在一具體實(shí)施方案中，可以通過用含有靶多肽或其部分的多肽來免疫宿主動物而制備多克隆抗體。例如，為了制備抗人靶多肽的抗體，合適的宿主動物包括但不限于鼠、家鼠、綿羊、山羊、倉鼠、豚鼠、雞和兔。蛋白免疫原可以來源于任何物種，包括鼠、人、非人靈長類、兔、猴、鳥、昆蟲、爬蟲或甲殼蟲。宿主動物一般與免疫原不同種?？贵w的制備方法是本領(lǐng)域公知的，如Howard和Bethell(2000)的描述。一般地，用作組分分子的抗體是與治療宿主相容的，例如，如果該抗體作為嵌合分子的組分想人給藥以達(dá)到治療、預(yù)防或診斷的目的，那么該抗體優(yōu)選為人抗體或人源化抗體或其活性片段。上述免疫原可以包括完整蛋白或其片段或衍生物。假如是蛋白或其片段，那么該免疫原可以包括翻譯后修飾，如糖基化，如同內(nèi)源靶蛋白那樣。含有靶蛋白細(xì)胞外區(qū)，如癌抗原的免疫原可以用本領(lǐng)域公知的各種方法制備，例如通過用常規(guī)重組方法表達(dá)克隆基因，或者從腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)物上清中分離。本發(fā)明的多克隆抗體用常規(guī)技術(shù)制備，這些技術(shù)包括用含有少于約1％雜質(zhì)的基本純的靶蛋白免疫宿主動物?？蛇x自地，該宿主動物可以用經(jīng)編碼靶蛋白或其抗原部分的分子轉(zhuǎn)化的全細(xì)胞免疫，而使該全細(xì)胞在細(xì)胞表面高密度表達(dá)免疫原或其抗原部分，如膜蛋白。這樣的例子是使用含有編碼靶多肽的核酸的桿狀病毒轉(zhuǎn)化的昆蟲細(xì)胞或含有該核酸分子的載體轉(zhuǎn)化的鼠細(xì)胞。為了增強(qiáng)宿主動物對免疫原的免疫反應(yīng)，可以將該靶蛋白與佐劑結(jié)合。合適的佐劑包括但不限于明礬，糖苷，硫酸鹽，大的聚合陰離子和油與水的乳液，如弗氏佐劑，完全的或不完全的。該靶蛋白還可以和合成的載體蛋白或合成抗原結(jié)合。該靶蛋白通過皮內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)或腹腔內(nèi)以初始劑量，接著一次或多次，通常至少兩次額外的加強(qiáng)劑量向宿主給藥。在免疫后，從免疫動物中采集血清，用于抗體產(chǎn)量測試，存在于最終抗血清中的免疫球蛋白還可以用已知方法分離，如銨鹽分餾法或DEAE色譜法。本發(fā)明的單克隆抗體還可以用常規(guī)方法制備。一般地，如上所述的免疫宿主動物的脾和/或淋巴結(jié)是血漿細(xì)胞的來源，然后將該血漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合以制得分泌抗體的雜交瘤細(xì)胞。培養(yǎng)該雜交瘤細(xì)胞，用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)監(jiān)測單個雜交瘤的培養(yǎng)上清，以鑒定產(chǎn)生具有目的特異性的抗體的克隆。該抗體可以用常規(guī)技術(shù)從雜交瘤細(xì)胞上清或從宿主中存在的腹水液中純化，如使用與不溶性支持物，如蛋白A瓊脂糖結(jié)合的抗原的親和層析。用這種方式產(chǎn)生的抗體隨后可以修飾或優(yōu)化以使其具有目的特性。該抗體可以制備成單鏈，替換免疫球蛋白分子的正常多聚合結(jié)構(gòu)，單鏈抗體在Jost等(1994)中有描述。將編碼重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的DNA序列與編碼至少四個小中心氨基酸，即丙氨酸或絲氨酸的間隔子相連，由這種融合體編碼的蛋白使功能可變區(qū)集合保留了原始抗體的特異性和親和性。本發(fā)明還提供了“人造”抗體，如單鏈抗體和在體外產(chǎn)生和篩選的抗體片段。在一些具體實(shí)施方案重，這些抗體展示在噬菌體或其它病毒顆粒的表面。在另一具體實(shí)施方案重，人造抗體與病毒或噬菌體結(jié)構(gòu)蛋白，包括但不限于M13基因III蛋白一起作為融合蛋白存在。制備這種人造抗體的方法是本領(lǐng)域公知的(美國專利No.5,516,637、5,223,409、5,658,727、5,667,988、5,498,538、5,403,484、5,571,698和5,625,033)。在一些具體實(shí)施方案重，本發(fā)明使用的抗體包括一個或多個重鏈，一個或多個輕鏈，一個或多個與一個或多個輕鏈一起的重鏈，或僅其可變區(qū)。對于體內(nèi)應(yīng)用，特別是向人注射，在一些具體實(shí)施方案中，降低非人抗體的抗原性是理想的。治療宿主對含有非人抗體的嵌合分子的免疫反應(yīng)可以潛在地減少治療有效周期。人源化抗體的方法是本領(lǐng)域公知的，該人源化抗體可以是具有轉(zhuǎn)基因的人免疫球蛋白不變區(qū)基因的動物的產(chǎn)物，如國際專利WO90/10077和WO90/04036中的描述。可選擇地，該目標(biāo)抗體可以通過重組DNA技術(shù)構(gòu)建，用相應(yīng)的人序列替換CH1、CH2、CH3、鉸鏈區(qū)和/或框架區(qū)，如WO92/02190的描述。另外，編碼免疫球蛋白的基因可以用于本發(fā)明中作為嵌合分子的組分或作為編碼本發(fā)明嵌合分子的核酸。用免疫球蛋白cDNA構(gòu)建的免疫球蛋白基因是本領(lǐng)域公知的，如同Liu等(1987a)和Liu等(1987b)的描述。信使RNA從雜交瘤或脾或其它產(chǎn)生這種抗體的細(xì)胞中分離，用于制備cDNA文庫?？梢酝ㄟ^聚合酶鏈反應(yīng)(“PCR”)用特異性引物擴(kuò)增目的cDNA，如美國專利No.4,683,195和4,683,202的描述?？蛇x擇地，制備文庫并篩選以分離目標(biāo)序列?？梢詫⒕幋a抗體可變區(qū)的DNA序列與人不變區(qū)序列融合，該人不變區(qū)(“C區(qū)”)是本領(lǐng)域公知的，如Kabat等，1991的描述。人C區(qū)基因可以容易地從已知克隆中獲得，根據(jù)目標(biāo)效應(yīng)功能(effectorfunction)，如補(bǔ)體結(jié)合或抗體依賴型細(xì)胞毒性來選擇其異型?？梢允褂肐gG1、IgG3和IgG4異型和κ或λ輕鏈不變區(qū)，然后用常規(guī)方法表達(dá)該嵌合的、人源化的抗體。在另一具體實(shí)施方案中，用作本發(fā)明嵌合分子的組分分子的抗體可以是完全的人抗體，例如，可以使用與人抗體一致的異種抗體。異種人抗體意思即是完全是人抗體的抗體，但是其在的非人宿主中產(chǎn)生，該宿主通常構(gòu)建來表達(dá)人抗體，例如WO98/50433、WO98,24893和WO99/53049的描述。適于本發(fā)明使用的抗體片段，如Fv、F(ab’)2和Fab可以通過蛋白酶等切割或化學(xué)切割完整蛋白來制備。可選擇地例如，截短基因可以設(shè)計成編碼F(ab’)2片段的部分的嵌合基因，該片段包括編碼重(“H”)鏈的CH1區(qū)和鉸鏈區(qū)的DNA序列和緊鄰的反義終止密碼子。也可用H和輕(“L”)鏈J區(qū)的相同序列來設(shè)計用作引物的寡核苷酸，以向J區(qū)到入有用的限制性位點(diǎn)，從而隨后使可變(“V”)區(qū)片段與人C區(qū)片段相連接?？梢酝ㄟ^定點(diǎn)突變修飾C區(qū)cDNA以在人序列的類似位置產(chǎn)生限制性位點(diǎn)。一種用于制備抗體的常規(guī)表達(dá)載體是編碼功能完全的人CH或CL免疫球蛋白的載體，其帶有構(gòu)建合適的限制性位點(diǎn)，因而可以容易地插入和表達(dá)VH或VL序列，如質(zhì)粒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、YACS或EBV源游離基因。在這種載體中，剪切經(jīng)常發(fā)生在插入的J區(qū)的剪切供體位點(diǎn)和前述的人C區(qū)剪切受體位點(diǎn)之間和人CH外顯子內(nèi)產(chǎn)生的剪切區(qū)域中，多聚腺苷酸和轉(zhuǎn)錄終止發(fā)生在編碼區(qū)下游的內(nèi)源染色體位點(diǎn)處?？梢詫a(chǎn)生的嵌合抗體與任何強(qiáng)啟動子連接，例如逆轉(zhuǎn)錄病毒LTR，如SV-40早期啟動子，如Okayama等(1983)的描述；勞氏肉瘤病毒LTR，如Gorman等(1982)的描述；和Moloney鼠白血病病毒LTR，如Grosschedl等(1985)的描述或內(nèi)源免疫球蛋白啟動子。核酸組合物本發(fā)明還提供了核酸分子，該核酸分子每個具有編碼目標(biāo)多肽或其片段的開放閱讀框，該閱讀框在合適條件下能表達(dá)產(chǎn)生如上所述的嵌合分子的目標(biāo)多肽。該核酸分子可以以含有載體的核酸組合物形式存在。該術(shù)語包含DNA、cDNA、mRNA、剪切變體、反義RNA、核酶、RNAi、肽核酸核含有目標(biāo)核酸序列的載體。這個術(shù)語還包括與編碼目標(biāo)蛋白同源或完全相同或一致的核酸。因此本發(fā)明提供了編碼目標(biāo)蛋白及其同系物或衍生物的基因。本發(fā)明中使用的術(shù)語基因或基因組序列意思是指含有編碼本發(fā)明特定蛋白和多肽的開發(fā)閱讀框和可以在任何方向上含有大約20kb或以上的編碼區(qū)的cDNA或基因組DNA或mRNA，帶有或不帶有內(nèi)含子，含有或不含有與調(diào)控表達(dá)有關(guān)的5’和3’非編碼核苷酸序列?？梢詫⒃摶虿迦氲胶线m載體中以在染色體外保持或整合到宿主基因組中。在一具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的多核苷酸可以包括特異性轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控序列，如啟動子、增強(qiáng)子等，其在轉(zhuǎn)錄區(qū)的5’或3’末端含有大約1kb或更長的側(cè)翼基因組DNA。在某一具體實(shí)施方案中，該基因組DNA可以分離未100kbp或更小的片段和完全游離的側(cè)翼染色體序列。編碼區(qū)3’或5’的側(cè)翼基因組DNA或有時存在于內(nèi)含子中的內(nèi)部調(diào)控序列都含有在合適組織和階段特異性表達(dá)的序列。本發(fā)明的核酸組合物可以編碼目標(biāo)蛋白的所有或部分?？梢愿鶕?jù)常規(guī)方法通過化學(xué)合成的寡核苷酸用該DNA序列制備雙鏈或單鏈片段，如限制酶消化、PCR擴(kuò)增等。大多情況下，DNA片段至少為15nt，通常至少18-25nt，還可以至少50nt。當(dāng)將本發(fā)明的嵌合分子用作探針時，目標(biāo)核酸可以是插入了直接檢測標(biāo)記，如放射性標(biāo)記或熒光標(biāo)記的核酸類似物，或插入了在隨后反應(yīng)中可視的標(biāo)記，如可變半抗原的核酸類似物。普通的放射性標(biāo)記類似物包括用32P或35S標(biāo)記的類似物，如α-32P-dATP、-dTTP、-dCTP和dGTP和γ-35S-GTP，α-35S-dATP等。容易插入到目標(biāo)核酸中的商業(yè)可用的熒光核苷序列包括用Cy3、Cy5、德克薩斯紅、Alexa熒光染色、若丹明、cascadeblue、BODIPY等標(biāo)記的脫氧核糖核酸和/或核苷酸類似物。在隨后的標(biāo)記中一般用來連接核苷的半抗原包括生物素、digoxigenin和dinitrophenyl。本發(fā)明的核酸可用于反義抑制轉(zhuǎn)錄或翻譯，如下文所述。如參見Phillips(編)AntisenseTechnology，B部分MethodsinEnzymology314卷，AcademicPress，Inc.(1999)；Phillips(編)AntisenseTechnology，PartAMethodsinEnzymology313卷，AcademicPress，Inc.(1999)；Hartmann等(編)ManualofAntisenseMethodology(PerspectivesinAntisenseScience)KluwerLawInternational(1999)；Stein等(編)AppliedAntisenseOligonucleotideTechnologyWiley-Liss(1998)；Agrawal等(編)AntisenseResearchandApplicationsSpringer-VerlagNewYork，Inc.(1998)。上述目標(biāo)核酸分子還可以提供為載體的一部分(如，多核苷酸構(gòu)建體)，大量的這種部分是本領(lǐng)域公知的，在本發(fā)明中不需要詳細(xì)描述。載體包括但不限于質(zhì)粒、粘粒、病毒載體、人、酵母、細(xì)菌和P1源人造染色體(HAC’s、YAC’s、BAC’S、PAC’S等)、迷你染色體等。本領(lǐng)域中的已知的大量文獻(xiàn)中公開了載體，如包括ShortProtocolsinMolecularBiology，(1999)F.Ausubel等編，Wiley&Sons；Jones等(編)VectorsCloningApplicationsEssentialTechniquesJohnWiley&SonLtd(1998)；Jones等(編)VectorsExpressionSystemsEssentialTechniquesJohnWiley&SonLtd(1998)。載體可以提供來表達(dá)目標(biāo)核酸，可以提供來傳代核酸，或者兩者都可以。如果目標(biāo)核酸是載體或質(zhì)粒的一部分，那么該載體或質(zhì)?？梢苑Q作“重組載體”或“構(gòu)建體”。目標(biāo)構(gòu)建體可用于在生產(chǎn)宿主細(xì)胞中傳代目標(biāo)核酸(“克隆載體”)，在來源于不同有機(jī)體的宿主細(xì)胞間穿梭目標(biāo)核酸(“穿梭載體”)，表達(dá)本發(fā)明的有義或反義RNA轉(zhuǎn)錄子(例如，在細(xì)胞游離系統(tǒng)或在培養(yǎng)的宿主細(xì)胞中)(“表達(dá)載體”)和在生產(chǎn)宿主中生產(chǎn)目標(biāo)核酸編碼的目標(biāo)多肽(“表達(dá)載體”)。盡管許多整合載體缺乏在宿主體內(nèi)對染色體修飾具有作用的起點(diǎn)和許多載體缺乏選擇性標(biāo)記，但是載體一般包含至少一個復(fù)制起點(diǎn)，至少一個外源核酸的插入位點(diǎn)(例如，含有多個、緊密相連的、單剪切的限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)的聚合連接子形式)，和至少一個選擇性標(biāo)記。對于編碼本發(fā)明嵌合分子的核酸分子或含有作為組分分子的核酸分子的嵌合分子，該核酸分子一般含有分離的且基本純的基因或多核苷酸。通常地，該DNA與不含有目標(biāo)基因序列或其片段的其它核酸序列完全分離，其純度一般至少約為50％，通常至少約90％，是典型的“重組體”，該重組體與一個或多個在天然發(fā)生的染色體中通常與其無關(guān)的核苷側(cè)翼相連。反義寡核苷酸在本發(fā)明的另一具體實(shí)施方案中，用于細(xì)胞內(nèi)向治療宿主給予上述嵌合分子的組分分子是一種調(diào)節(jié)宿主中編碼靶蛋白的基因表達(dá)的試劑，一般是正或負(fù)調(diào)節(jié)，如反義分子、核酶或RNAi。反義試劑包括反義寡核苷酸(ODN)，其是用天然核酸或表達(dá)RNA反義分子的核酸構(gòu)建體經(jīng)過化學(xué)修飾而合成的ODN。該反義序列互補(bǔ)于靶基因的mRNA，并抑制靶基因產(chǎn)品的表達(dá)。反義分子通過不同的機(jī)制抑制基因表達(dá)，如通過降低可用于翻譯的mRNA的量，通過激活RNAseH或空間阻礙。可以給予一個反義分子或反義分子的組合，其中組合可以含有多種不同序列。反義分子可以通過在合適載體中表達(dá)靶基因序列的全部或部分來生產(chǎn)，其中該轉(zhuǎn)錄抑制是定向的，因此反義鏈作為RNA分子產(chǎn)生?？蛇x擇地，該反義分子是合成的寡核苷酸。反義寡核苷酸的長度一般至少為約7個，通常至少為12個，更通常至少為20個核苷和不超過500個，不超過50個核苷，不超過35個核苷。其中該長度根據(jù)抑制效率，特異性，如無交叉反應(yīng)來確定，7-8個堿基長的短寡核苷酸能強(qiáng)烈且選擇性地抑制基因的表達(dá)，如Wagner等(1996)的描述。挑選內(nèi)源有義鏈mRNA序列的特異性區(qū)域使其互補(bǔ)于反義序列。寡核苷酸特異性序列的挑選可以使用試驗(yàn)的方法，其中檢測的幾個候選序列在體外或動物模型中抑制靶基因的表達(dá)。還可以使用序列的結(jié)合，其中挑選的mRNA序列的幾個區(qū)域反義互補(bǔ)。反義寡核苷酸可以用本領(lǐng)域公知的方法來化學(xué)合成，如Wagner等(1993)，Milligan等(1993)中的描述?？梢曰瘜W(xué)修飾寡核苷酸的內(nèi)源磷酰二脂結(jié)構(gòu)以增強(qiáng)其細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定性和結(jié)合親和性。作為反義抑制劑的一種選擇，接觸反應(yīng)的核酸化合物，如核酶或反義配體也可用來抑制基因表達(dá)。核酶可以在體外合成或在表達(dá)載體中編碼，在靶細(xì)胞中核酶從該表達(dá)載體中合成。如同WO9523225和Beigelman等，(1995)的描述。具有催化活性的寡核苷酸的例子在WO9506764中有描述。含有金屬復(fù)合物的反義ODN的配體，如terpyridylCu(II)能介導(dǎo)mRNA的雜交，如同Bashkin等(1995)的描述。干擾RNA在一些具體實(shí)施方案中，組分分子是干擾RNA(RNAi)，RNA干擾提供一種使真核基因沉默的方法。雙鏈RNA可以誘導(dǎo)線蟲(C.elegans)、真菌、植物、果蠅和哺乳動物中的其共軛mRNA的同源依賴性降解(homology-dependentdegradation)(Gaudilliere等，2002)。將RNAi用于降低特定mRNA和/或蛋白的水平是基于來源于基因編碼區(qū)的雙鏈RNA的干擾屬性。該技術(shù)是一種破壞基因功能的高通量方法(O’Neil，2001)。在本發(fā)明的一具體實(shí)施方案中，來源于目標(biāo)多核苷酸的完整部分的互補(bǔ)有義和反義RNA是在體外合成的。得到的有義和反義RNA在注射緩沖液中退火，將雙鏈DNA注射或以其它方法導(dǎo)入到受體中，如在食物中或浸泡在哈有RNA的緩沖液中(WO99/32619)。在另一具體實(shí)施方案中，通過刺激從合適定位的啟動子表達(dá)有義和反義RNA的而在體內(nèi)生產(chǎn)來源于本發(fā)明基因的dsRNA，該啟動子以有義和反義方向與編碼序列可操作相連。目標(biāo)多肽的制備除了下文更詳細(xì)描述的用途外，上述目標(biāo)核酸組合物可以用于制備本發(fā)明嵌合分子的多肽。一般地，為了表達(dá)多核苷酸，可以使用含有表達(dá)載體的表達(dá)盒，該表達(dá)載體含有可誘導(dǎo)性或組成性轉(zhuǎn)錄和翻譯抑制區(qū)，其中的編碼區(qū)可操作地連接在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)、轉(zhuǎn)錄和翻譯終止區(qū)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控下。因此，本發(fā)明的嵌合分子可以用本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)制備。很明顯，除非特別聲明，本發(fā)明并不限于任何特定的制備本發(fā)明嵌合分子的方法。例如，本發(fā)明的嵌合分子可以用重組技術(shù)制備，如同本發(fā)明所引用的專利和公開的描述或如Sambrook等(1989)MolecularCloningALaboratoryManual(第二版)，ColdSpringHarborPress，Plainview，N.Y.和AusubelF.M.等(1993)CurrentProtocolsinMolecularBiology，JohnWiley&Sons，NewYork，N.Y的描述。另外，生物學(xué)方案可以通過網(wǎng)站獲得，如http://www.bioprotocol.com。本發(fā)明中的嵌合分子也可以通過實(shí)驗(yàn)室合成，如制備幾個多肽序列、聚核苷酸序列或化學(xué)實(shí)體，并在體外連接這些序列或分子。在本發(fā)明的一具體實(shí)施方案中，編碼本發(fā)明嵌合分子的DNA分子可以插入到能在生產(chǎn)宿主中表達(dá)的表達(dá)載體中以生產(chǎn)該嵌合分子。該表達(dá)盒包括轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控序列，如啟動子，轉(zhuǎn)錄起始和終止序列及翻譯起始和終止序列。增強(qiáng)子可以以順或反位置存在。例如，在5’到3’方向，含有轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控序列的DNA片段可以與編碼該嵌合分子的DNA相連，其依次包括編碼第一組分分子的第一DNA片段，與其連接的編碼含有切割位點(diǎn)的連接子的第二DNA片段，與第二DNA片段連接的編碼第二組分分子的第三DNA片段，接著是翻譯和轉(zhuǎn)錄終止序列。連接一般在合適的限制性內(nèi)切酶限制位點(diǎn)處產(chǎn)生，利用DNA連接酶等將不同的片段連接在一起。該表達(dá)盒可以是質(zhì)粒和病毒載體的一部分。常用的載體包括Gateway載體(www.Invitrogen.com)和Creator載體(www.bdbioscience.com)。因此，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明多肽的方法，包括制備當(dāng)嵌合分子是多蛋白時的本發(fā)明的該嵌合分子，當(dāng)組分分子是肽和多肽及其活性片段時的該組分分子的方法。該方法一般包括導(dǎo)入如上所述的核酸構(gòu)建體到宿主細(xì)胞中以在體內(nèi)或體外進(jìn)行生產(chǎn)。對于該嵌合分子的體外生產(chǎn)，將該宿主細(xì)胞在適于核酸構(gòu)建體表達(dá)和編碼的目標(biāo)多肽的生產(chǎn)的條件下體外培養(yǎng)；收集目標(biāo)多肽，如從培養(yǎng)基中或從宿主細(xì)胞中(例如，通過切割該宿主細(xì)胞)或以這兩種方式收集。本發(fā)明還提供了用游離細(xì)胞體外轉(zhuǎn)錄/翻譯方法生產(chǎn)目標(biāo)多肽的方法，該方法時本領(lǐng)域公知的，如使用兔網(wǎng)狀細(xì)胞游離細(xì)胞切割液、青蛙卵母細(xì)胞切割液、小麥胚芽切割液、細(xì)菌切割液等。如WO00/68412、WO01/27260、WO02/24939、WO02/38790、WO91/02076和WO91/02075的描述。本發(fā)明還提供了在體內(nèi)制備目標(biāo)多肽的方法，例如在轉(zhuǎn)基因動物體內(nèi)。如同WO93/25567的描述。本發(fā)明還提供了宿主細(xì)胞，如含有目標(biāo)核酸的重組宿主細(xì)胞和含有目標(biāo)重組載體的宿主細(xì)胞。目標(biāo)宿主細(xì)胞可以在體外培養(yǎng)或是多細(xì)胞有機(jī)體的一部分。在下文種將詳細(xì)描述宿主細(xì)胞。任選地，如果合適，編碼用于指導(dǎo)上述嵌合分子到生產(chǎn)宿主的某些小室或細(xì)胞器中進(jìn)行加工和/或分泌的信號、引導(dǎo)或轉(zhuǎn)移肽的信號、引導(dǎo)或轉(zhuǎn)移序列可以插入到調(diào)控序列和編碼第一組分分子的第一DNA片段之間。這種信號序列可以來源于分泌蛋白的前或后序列，如酵母的α因此，如同美國專利No.4,870,008的描述?？蛇x擇地，如果生產(chǎn)宿主是植物，如稻，可以使用調(diào)控序列和引導(dǎo)序列來構(gòu)建表達(dá)盒以在植物種子中表達(dá)上述嵌合分子，如WO99/16890的描述。在植物生產(chǎn)宿主中生產(chǎn)本發(fā)明嵌合分子的表達(dá)盒還可以如同WO00/04146的描述來制備。還可以制備用于在真菌宿主，如曲霉菌中生產(chǎn)本發(fā)明嵌合分子的表達(dá)盒，如同WO97/45156和WO93/22348的描述。本發(fā)明的嵌合分子還可以用在生產(chǎn)宿主中高度表達(dá)的蛋白的全部或部分來制備。這種表達(dá)盒已有描述，如美國專利No.4,828,988和美國專利No.5,292,646。適于本發(fā)明用于生產(chǎn)編碼上述嵌合分子的核酸分子的表達(dá)盒通常含有方便的限制性位點(diǎn)，其位于啟動子序列附近以提供核酸分子的插入。在表達(dá)宿主中起作用的選擇性標(biāo)記可以任選地存在于該構(gòu)建體中。另外，表達(dá)載體可以含有編融合組分的核酸分子，其中該融合組分提供額外的功能，如增加蛋白合成、分泌引導(dǎo)序列、穩(wěn)定性、與已知抗血清的反應(yīng)性、酶標(biāo)記，如β-牛乳糖等。適于本發(fā)明使用的表達(dá)盒可以制備成含有轉(zhuǎn)錄起始區(qū)、基因或其片段和轉(zhuǎn)錄終止區(qū)。特別有利的是使用能表達(dá)功能表位或區(qū)域，通常長度為至少約8個氨基酸，更通常為至少約15-25個氨基酸的序列或任何上述片段及該基因的完整開放閱讀框。當(dāng)將該DNA導(dǎo)入到生產(chǎn)宿主后，含有該構(gòu)建體的細(xì)胞可以通過選擇性標(biāo)記的方式篩選，擴(kuò)增細(xì)胞，然后用于表達(dá)。根據(jù)表達(dá)的目的，可以根據(jù)常規(guī)方法將含有蛋白，多肽，如抗體作為組分分子的上述嵌合分子在原核或真核細(xì)胞中表達(dá)。為了大規(guī)模生產(chǎn)該蛋白，可以用單細(xì)胞有機(jī)體，如大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母、畢赤酵母或乳酸克魯維酵母、米曲霉，含有桿狀病毒載體的昆蟲細(xì)胞，如SF9細(xì)胞或HighFive細(xì)胞或更高級有機(jī)體的細(xì)胞，如植物或蔬菜細(xì)胞，特別地動物細(xì)胞，如COS7細(xì)胞作為表達(dá)宿主細(xì)胞。在一些情況下，在真核細(xì)胞中表達(dá)基因是理想的，這樣有利于編碼的蛋白進(jìn)行內(nèi)源折疊核翻譯后修飾。合適的植物細(xì)胞包括但不限于雙子葉植物，如煙草植株、西紅柿植株，或單子葉植物及其種子，如谷物燕麥、稻、小麥、大麥、高梁核其它可食植物。啟動子、增前子、終止子的組合可以優(yōu)化各個宿主中的表達(dá)。小肽還可以在實(shí)驗(yàn)室中合成。當(dāng)所有的在實(shí)施例中描述的上述宿主細(xì)胞或其它合適的宿主細(xì)胞或有機(jī)體被用來復(fù)制和/或表達(dá)含有本發(fā)明核苷酸或核酸的嵌合分子時，得到的復(fù)制的核酸、RNA、表達(dá)的蛋白或多肽作為生產(chǎn)宿主細(xì)胞或有機(jī)體的產(chǎn)物都包含在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。該產(chǎn)物可以用本領(lǐng)域公知的方法回收，如可以用原始原料制備切割液(如表達(dá)內(nèi)源目的多肽的細(xì)胞或含有標(biāo)目標(biāo)多肽的表達(dá)載體的細(xì)胞)，用HPLC、篩析色譜、凝膠電泳、親和層析等純化。適于本發(fā)明使用的表達(dá)系統(tǒng)的其它描述包括，如美國專利No.4,745,069、4,828,988、6,312,923、6,342,375、6,235,878、RE37,343、6,068,994、6,080,559、5,695,985、6,277,633、6,232,105、6,222,094、5,888,814、5,981,275、6,025,540、5,750,172、6,329,137、U.S.6,303,369。如果本發(fā)明的嵌合分子是在植物生產(chǎn)宿主中表達(dá)，那么該嵌合分子在植物的葉或芽中靶向表達(dá)。可選擇地，該嵌合分子可以在谷物或植物種子中靶向表達(dá)，如在谷類單子葉植物，如稻、小麥、大麥、燕麥、粟、玉米和高梁中表達(dá)。在植物生產(chǎn)宿主種子中表達(dá)能以該嵌合分子的活性保留或完全維持的方式進(jìn)行。因此，可以制備含有該嵌合分子的提取物，并將該提取物加入到食品中作為食品佐劑或滋養(yǎng)添加劑?？蛇x擇地，可以用低溫工藝處理種子或種子提取物，如在合適條件下向麥芽發(fā)酵液中加入提取物，其中谷物中的淀粉轉(zhuǎn)化為了麥芽糖且該多肽保持完整。加入本發(fā)明使用這種系統(tǒng)來生產(chǎn)該嵌合分子，那么不得不將該嵌合分子中的切割位點(diǎn)設(shè)計成使其在種子或提取物處理過程中不被激活。組合物本發(fā)明還提供了含有本發(fā)明嵌合分子的組合物，包括藥物組合物。這些組合物可以含有根據(jù)該嵌合分子的目的用途挑選的緩沖液，還可以含有其它適于目的用途的物質(zhì)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能容易地挑選合適的緩沖液，適于目的用途的大量的緩沖液是本領(lǐng)域公知的。在一些實(shí)施例中，該組合可以含有藥物學(xué)上可接受的賦形劑，大量賦形劑是本領(lǐng)域公知的，在此處不需要作詳細(xì)的描述。適于本發(fā)明使用的藥物學(xué)上可接受的賦形劑在許多公開中有描述，如包括A.Gennaro(1995)″RemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy″，第19版本，Lippincott，Williams，&Wilkins。根據(jù)可能的給藥方式來確定本發(fā)明的組合物的劑型，因此，如果本發(fā)明的組合物傾向于鼻內(nèi)或吸入給藥，那么可以將該組合物制成本領(lǐng)域常用的粉末形式以實(shí)現(xiàn)目的，其它的劑型，如口服或腸胃外運(yùn)輸也可以如本領(lǐng)域通用的方式使用。賦形劑和劑型在一些具體實(shí)施方案中，提供了含有藥物學(xué)上可接受的賦形劑的組合物，各種不同賦形劑是本領(lǐng)域公知的，例如Gennaro，2000；Ansel等，1999；Kibbe等，2000的描述。藥物學(xué)上可接受的賦形劑，如運(yùn)載體、佐劑、載體或稀釋劑可以容易的從公知領(lǐng)域得到，而且，藥物學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)，如pH調(diào)節(jié)和緩沖試劑、毒性調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、加濕劑等也能從公知領(lǐng)域得到。關(guān)于藥物學(xué)劑型，本發(fā)明的嵌合分子可以以其藥物學(xué)上可接受的鹽的形式給藥，可以單獨(dú)使用，也可以與其它藥物學(xué)上的活性化合物進(jìn)行合適組合而以組合物形式使用。下面的方法和賦形劑僅是舉例，并不產(chǎn)生任何限制。為了口服，上述嵌合分子可以單獨(dú)使用或與合適的添加劑組合而形成片劑、粉末、顆粒或膠囊來使用。合適的添加劑如常規(guī)添加劑，如乳糖、甘露糖、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；粘合劑，如結(jié)晶纖維素、纖維素衍生物、阿拉伯樹膠、玉米淀粉或白明膠；崩解劑，如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或羧甲基纖維素鈉；潤滑劑，如云母或硬脂酸鎂；如果需要，還可以是稀釋劑、緩沖劑、加濕劑、防腐劑和風(fēng)味劑。合適的賦形劑有如水、生理鹽水、葡萄糖、甘油和乙醇及其組合。另外，如果需要，該賦形劑可以含有少量的輔助物質(zhì)，如加濕或乳化劑或pH緩沖劑。制備這些劑型的實(shí)用方法是本領(lǐng)域公知的，或者對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說顯而易見的(Remington，1985)。在任何情況下，用于給藥的該組合物或劑型含有的嵌合分子的量足夠使被治療的患者達(dá)到目的狀態(tài)?？梢酝ㄟ^將上述嵌合分子溶解、懸浮或乳化在水或非水溶劑中而將其制成用于注射的制劑，這些溶劑如植物或其它相似油、合成的脂肪酸甘油酯、高級脂肪酸酯或丙二醇。如果需要，還可以添加常規(guī)的添加劑，如增溶劑、等滲試劑、懸浮劑、乳化劑、穩(wěn)定劑和防腐劑。上述嵌合分子可以用于氣霧劑中以通過吸入給藥。本發(fā)明的化合物可以配置成加壓可接受的壓縮劑，如二氯二氟甲烷、丙烷或氮。另外，可以通過與不同的堿，如乳化堿或水溶性堿混合而制成栓劑，本發(fā)明的化合物通過栓劑可以直腸給藥。該栓劑可以含有在體溫下融解而在室溫下固化的運(yùn)載體，如可可油、聚乙二醇和聚氧乙烯?？梢蕴峁┯糜诳诜蛑蹦c給藥的單位劑量形式，如糖漿、西也劑和懸浮液，其中每一劑量單位，如一茶匙的量，一大湯匙的量、片劑或栓劑含有預(yù)定量的包含一種或多種抑制劑的組合物。同樣，用于注射或靜脈內(nèi)給藥的單位劑量形式在組合物中可以含有抑制劑，如無菌水溶液、正常生理鹽水或另一種藥物學(xué)上可接受的載體。促進(jìn)診斷、預(yù)防、治療和滋養(yǎng)方法本發(fā)明提供了各種促進(jìn)診斷、預(yù)防、治療和滋養(yǎng)的方法，其中該方法包括向治療宿主給予有效量的本發(fā)明的嵌合分子或含有該嵌合分子的組合物，其中該嵌合分子中的組分分子具有促進(jìn)診斷、預(yù)防、治療和滋養(yǎng)的活性。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明包括向治療宿主給予嵌合分子或含有嵌合分子的組合物，其中的組分分子可以與生物分子結(jié)合而達(dá)到診斷目的。例如，該組分分子可以是攜帶有可檢測性標(biāo)記，能與編碼自體抗原或傳染性有機(jī)體抗原的循環(huán)核酸分子結(jié)合的多核苷酸。在一些具體實(shí)施方案中，上述方法包括向治療宿主給予嵌合分子或含有嵌合分子的組合物，其中該組分分子是可實(shí)現(xiàn)預(yù)防目的的疫苗。例如，該組分分子可以是多肽或DNA疫苗。該疫苗可以具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，其中的組分分子是不降解的小肽。在一些具體實(shí)施方案中，上述方法包括向治療宿主給予嵌合分子或含有嵌合分子的組合物，其中的組分分子具有治療屬性，如調(diào)節(jié)，如激活、增強(qiáng)或抑制治療宿主蛋白或載體的生物學(xué)活性。在一些具體實(shí)施方案中，該方法包括調(diào)節(jié)治療宿主蛋白的酶活性。在其它具體實(shí)施方案中，提供了調(diào)節(jié)治療宿主蛋白的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的方法。在另外的實(shí)施方案中，提供了調(diào)節(jié)目標(biāo)蛋白與另一反應(yīng)蛋白或其它大分子(如DNA、糖、酯)的相互反應(yīng)的方法。在一些具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括向治療宿主給予嵌合分子或含有嵌合分子的組合物以提高治療宿主的營養(yǎng)，或者提供具有滋養(yǎng)價值的組分分子或提供抗感染物來優(yōu)化食品營養(yǎng)價值。本發(fā)明還提供了向治療宿主給予或運(yùn)輸嵌合分子或含有嵌合分子的組合物，其中該嵌合分子有利地降低了組分分子的降解。本發(fā)明還還提供了向治療宿主給予或運(yùn)輸嵌合分子或含有嵌合分子的組合物，其中該嵌合分子有利地提高了組分分子的活性。根據(jù)本發(fā)明的方法可以治療各種宿主，如人或非人動物。一般地該宿主是“哺乳動物”。其中該術(shù)語用來寬泛地描述哺乳綱的有機(jī)體，包括食肉目(如狗和貓)、嚙齒目(如鼠、豚鼠、家鼠)及其它哺乳動物，如牛、山羊、綿羊、兔、豬和靈長類(如人、黑猩猩和猴)。在一些具體實(shí)施方案中，該宿主是人，動物模型對于試驗(yàn)研究、為人疾病的治療提供模型來說是有益的。劑型、劑量和給藥途徑向宿主給予有效率的上述嵌合分子(含有作為組分分子的小分子、特異于目標(biāo)多肽的抗體或目標(biāo)多肽)。其中“有效量”是指劑量足夠產(chǎn)生目的效果。例如，在一些具體實(shí)施方案中，目標(biāo)效果是與對照相比較至少降低了目標(biāo)多肽的原有的生物學(xué)活性。在其它具體實(shí)施方案中，該目的效果是與對照比較提高了目標(biāo)多肽的活性水平(個體或個體的局部解剖學(xué)位點(diǎn))。還有的例子如，在一些具體實(shí)施方案中，該目標(biāo)效果是與對照比較至少降低了目標(biāo)多肽的酶活性。在其它具體實(shí)施方案中，該目標(biāo)效果是與對照比較提供了目標(biāo)多肽的酶活性水平(個體或個體的局部解剖學(xué)位點(diǎn))。一般地，本發(fā)明的組合至少含有約1％-95％的活性組分，優(yōu)選為約10％-50％。一般地，給予小孩100mg-500mg，給予成人500mg-5g。一般通過注射給藥，通常注射到局部區(qū)域。根據(jù)病人的反應(yīng)和護(hù)理調(diào)節(jié)確定給藥的次數(shù)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通過常規(guī)試驗(yàn)建立劑量反應(yīng)曲線很容易確定其它的有效劑量。為了計算嵌合分子或組分分子的量，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以容易地得到有關(guān)達(dá)到目標(biāo)效果的組分分子的必需量的信息。提高本發(fā)明多肽活性水平的必需的組分分子的量可以用體外試驗(yàn)來計算，當(dāng)然，根據(jù)所使用的具體組分分子，組分分子的該量有不同。在本發(fā)明的方法中，上述嵌合分子可以用能產(chǎn)生目的活性的任何便利的方法向宿主給藥。因此，該嵌合分子可以制成不同的劑型以向宿主給藥。更具體地，本發(fā)明的嵌合分子可以通過與合適的、藥物學(xué)上可接受的載體或稀釋劑混合來制成藥物組合物，可以制成故態(tài)、半故態(tài)、液態(tài)或氣態(tài)形式的制劑，如片劑、膠囊、粉末、顆粒、藥膏、溶液、栓劑、注射液、吸入劑和氣霧劑。同樣地，上述嵌合分子可以通過不同方式給藥，如口服、口腔、直腸、腸胃外給藥，包括鼻內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、腹腔內(nèi)、皮內(nèi)、透皮、皮下、經(jīng)皮膚、intracheal、心臟內(nèi)、心室內(nèi)、顱內(nèi)等和通過吸入給藥。該試劑可以在適當(dāng)時或在確定的時候每天、每星期給藥。在本發(fā)明中所使用的術(shù)語“單位劑量形式”是指適于作為單一劑量用于人或動物對象的物理分散單元，每一單元含有預(yù)定量的本發(fā)明的化合物和藥物學(xué)上可接受的稀釋劑、載體或運(yùn)載體，其中的預(yù)定量根據(jù)產(chǎn)生目的效果的足夠量來計算。本發(fā)明對新的單位劑量形式的說明依賴于所使用的具體化合物和要達(dá)到的效果，及各種化合物在宿主中的藥效。如果該嵌合分子含有作為組分分子的多肽、多核苷酸或其類似物或模擬物，如抗體組合物，可以通過許多途徑，如病毒干擾、微注射、小泡融合而將其導(dǎo)入到組織或宿主細(xì)胞中。注射器注射可以用于肌肉內(nèi)給藥，如Furth等(1992)，AnalBiochem205365-368的描述?？梢詫NA包被成金微顆粒，通過粒子轟擊裝置或“基因槍”經(jīng)皮膚運(yùn)輸，如文獻(xiàn)(參見如Tang等(1992)，Nature356152-154)的描述。如果金微顆粒是用治療性DNA包被，那么就轟擊皮膚細(xì)胞。普通技術(shù)人員能夠理解，劑量水平可以根據(jù)特定化合物的功能、癥狀的嚴(yán)重性和患者對副作用的敏感性而發(fā)生變化。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員用各種方法可以容易地確定所給化合物的優(yōu)選劑量。治療至少意味著緩解困擾宿主的病理疾病的有關(guān)癥狀，如果在寬泛意義上使用，那么緩解是指至少降低一參數(shù)的大小，例如如病理疾病的相關(guān)癥狀，如由其引起的發(fā)炎和疼痛。同樣，治療還包括病理疾病狀況或至少與其相關(guān)的癥狀被完全抑制，如發(fā)生得到預(yù)防或阻止，例如治愈，以至于宿主不再患該病理疾病或出現(xiàn)該病理疾病的特征癥狀。本發(fā)明提供了含有單位劑量活性試劑的試劑盒，該活性試劑通常為口服或可注射劑量。在該試劑盒中，除了容器外，含有的單位劑量是一信息套裝插件，其描述了藥物在治療目的病理疾病方面的用途和附帶的優(yōu)點(diǎn)。優(yōu)選的化合物和單位劑量在上文中有描述。在一具體實(shí)施方案中，含有以抗體作為組分分子的上述嵌合分子向需要治療的患者給藥來治療癌癥或增生性失調(diào)、免疫紊亂、代謝失調(diào)。該抗體可以通過如下方式給藥系統(tǒng)性注射，如靜脈內(nèi)注射；注射或應(yīng)用到相關(guān)部位，如直接注射到腫瘤或直接應(yīng)用到受傷部位；局部應(yīng)用，例如在失調(diào)是在皮膚上時。該抗體可以單獨(dú)給藥或與其它試劑，如細(xì)胞毒性試劑組合給藥。可以用本發(fā)明的方法治療的腫瘤包括癌，如結(jié)腸、直腸、前列腺、乳腺、惡性皮膚瘤、血管、子宮內(nèi)膜、胃、胰腺、間皮瘤、發(fā)育異常的口腔粘膜、惡性口腔癌、非小細(xì)胞肺癌(″NSCL″)、轉(zhuǎn)移性鱗狀上皮細(xì)胞尿道癌等；神經(jīng)性惡性腫瘤，如成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠母細(xì)胞瘤、星細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等；血液惡性腫瘤，如兒童急性白血病、非霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴細(xì)胞白血病、惡性皮膚T-細(xì)胞、蕈樣肉芽腫、非MF皮膚性T細(xì)胞淋巴瘤、淋巴腫瘤淋巴瘤樣丘疹病、富含T細(xì)胞的皮膚性淋巴增生、類天皰瘡、盤狀紅斑狼瘡、扁平苔蘚等；婦科癌癥，如子宮頸和卵巢；睪丸癌；肝癌，如肝細(xì)胞癌(″HCC″)和膽汁導(dǎo)管腫瘤；多發(fā)性骨髓瘤；食道癌；其它腫瘤，如小細(xì)胞和透明細(xì)胞；霍奇金氏淋巴瘤；不同器官中的肉瘤等。在其它具體實(shí)施方案中，例如，當(dāng)需治療的疾病或癥狀時炎癥或免疫功能時，本發(fā)明的提供含有多核苷酸、多肽、抗體、小分子等的嵌合分子用來治療這種炎癥和免疫失調(diào)。使用本發(fā)明的制劑可以治療的疾病包括各種類型的關(guān)節(jié)炎，如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎，各種慢性的皮膚炎性疾病，如牛皮蘚，炎癥性腸疾病(″IBD″)，胰島素依賴型糖尿病，自體免疫疾病，如多發(fā)性硬化癥(″MS″)和系統(tǒng)性紅斑狼瘡(″SLE″)，過敏性疾病，移植排斥，成人呼吸窘迫綜合征，動脈硬化，由于外周血管系統(tǒng)、心臟血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(“CNS”)關(guān)閉導(dǎo)致的缺血性疾病。在閱讀了本發(fā)明的描述后，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠明白本發(fā)明的制劑給藥后能治療和/或緩解的前體疾病和/或癥狀。實(shí)施例下面的實(shí)施例用來向本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員提供怎樣實(shí)施和使用本發(fā)明的完整揭露和描述，并不限定本發(fā)明要求保護(hù)的范圍，也不代表下面的試驗(yàn)是本發(fā)明的所有或能實(shí)施的唯一試驗(yàn)。已經(jīng)作出了努力使所用的數(shù)值(如量、穩(wěn)定等)確保精確，但是一些試驗(yàn)錯誤和偏差是允許的。除非特別說明，份數(shù)是重量份數(shù)，分子量是重量平均分子量，溫度是攝氏度，壓力是大氣壓或接近大氣壓。實(shí)施例1在細(xì)菌中表達(dá)本發(fā)明的嵌合分子能在細(xì)菌生產(chǎn)宿主中表達(dá)。在細(xì)菌中的表達(dá)系統(tǒng)包括如Chang等，Nature(1978)275615；Goeddel等，Nature(1979)281544；Goeddel等，NucleiAcidesRes.(1980)84057；EP0036,776；美國專利No.4,551,433；DeBoer等，Proc.Natl.Acad.Sci(USA)(1983)8021-25；和Siebenlist等，Cell(1980)20269中描述的系統(tǒng)。實(shí)施例2在酵母中表達(dá)本發(fā)明的嵌合分子可以在酵母生產(chǎn)宿主中表達(dá)。在酵母中的表達(dá)系統(tǒng)包括Hinnen等，Proc.Natl.Acad.Sci(USA)(1978)751929；Ito等，J.Bacteriol.(1983)153163；Kurtz等，Mol.Cell.Biol.(1986)6142；Kunze等，J.BasicMicrobiol.(1985)25141；Gleeson等，J.Gen.Microbiol.(1986)1323459；Roggenkamp等，Mol.Gen.Genet.(1986)202302；Das等，J.Bacteriol.(1984)1581165；DeLouvencourt等，J.Bacteriol(1983)154737；VandenBerg等，Bioltechnology(1990)8135；Kunze等，J.BasicMicrobiol(1985)25141；Cregg等，Mol.Cell.Biol.(1985)53376；美國專利No.4,837,148和4,929,555；Beach和Nurse，Nature(1981)300706；Davidow等，Curr.Genet.(1985)10380；Gaillardin等，Curr.Genet.(1985)1049；Ballance等，Biochem.Biophys.Res.Commun.(1983)112284-289；Tilburn等，Gene(1983)26205-221；YELTON等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)(1984)811470-1474；Kelly和Hynes，EmboJ.(1985)4475479；EP0244,234和WO91/00357中描述的系統(tǒng)。實(shí)施例3在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)本發(fā)明的嵌合分子可以在昆蟲生產(chǎn)宿主中表達(dá)。在昆蟲中表達(dá)異源基因根據(jù)美國專利No.4,745,051；Friesen等，″THERegulationofBaculovirusGeneExpression″，摘自TheMolecularBiologyOfBaculoviruses(1986)(W.Doerfler編)；EP0127,839；EP0155,476；和Vlak等，J.Gen.Virol.(1988)69765-776；Miller等，Ann.Rev.Microbiol.(1988)42177；Carbonell等，Gene(1988)73409；Maeda等，Nature(1985)315592-594；Lebacq-Verheyden等，Mol.Cell.Biol.(1988)83129；Smith等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)(1985)828844；Miyajima等，Gene(1987)58273和Martin等，DNA(1988)799中的描述進(jìn)行。來自宿主的許多baculoviral菌株和變體和相應(yīng)的允許昆蟲細(xì)胞在Luckow等，Biotechnology(1988)647-55，Miller等，GenericEngineering(1986)8277-279和Maeda等，Nature(1985)315592-594中有描述。實(shí)施例4在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)上述嵌合分子還可以在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)，哺乳動物的表達(dá)根據(jù)Dijkema等，EmboJ.(1985)4761，GORMAN等，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)(1982)796777，Boshart等，Cell(1985)41521和美國專利No.4,399,216中的描述進(jìn)行。哺乳動物表達(dá)的其它特征如Ham和Wallace，Meth.Enz.(1979)5844，Barnes和Sato，Anal.Biochem.(1980)102255，美國專利No.4,767,704，4,657,866，4,927,762，4,560,655，WO90/103430，WO87/00195和U.S.RE30,985中的描述。實(shí)施例5含有EFG和TEF的嵌合分子在治療宿主的內(nèi)臟或腸道中有利釋放的組分分子包括那些具有抗微生物活性的分子，如乳鐵蛋白和溶菌酶和那些對粘膜組織具有保護(hù)或治療屬性的分子，如人上皮生長因子(EGF)和三葉草因子家族肽TFF1(以前稱作Ps2)、TFF2(以前稱作hSP)和TFF3(以前稱作小腸三葉因子)。在本發(fā)明的這樣一個具體實(shí)施方案中，該組合分子的切割位點(diǎn)設(shè)計來由在消化道的表面或里面活化的酶切割。例如人腸激酶在十二指腸和空腸中激活。在本發(fā)明的優(yōu)選具體實(shí)施方案中，該嵌合分子包括一個或多個人EGF和TFF2拷貝，每個通過含有腸激酶切位點(diǎn)的連接子相連。該重組產(chǎn)物作為純化藥與藥物學(xué)上可接受的載體或作為表達(dá)到轉(zhuǎn)基因牛、綿羊、山羊的奶或轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)物，如稻中的營養(yǎng)食品口服給藥。可以從這種治療中受益的病人人群包括但不限于急性胃腸炎性疾病，如潰瘍性大腸炎和flare-upsofCrohn’sdisease及這些疾病的慢性形式。由感染或飲酒或NSAID導(dǎo)致的潰瘍或粘膜損傷的病人也可以從該治療方法中受益。由于幾個原因，TEF2和EGF顯然地非常適于作為口服運(yùn)輸?shù)闹亟M嵌合分子的組分。它們通常在消化道中產(chǎn)生，對于其中的環(huán)境穩(wěn)定并表現(xiàn)出生物學(xué)協(xié)同作用(Oertel，M.等，AmJRespirCellMolBiol25418，2001)。EGF是具有廣泛生物學(xué)潛能的分子，其在患壞死性腸炎、卓艾綜合征、胃腸潰瘍和先天性微絨毛萎縮癥的患者中能檢測到(Guglietta.，A等，EurJGastroenterolHepatol7945-50，1995)。EGF促進(jìn)胃腸粘膜的有絲分裂，抑制胃酸分泌，這兩個作用能加速康復(fù)。據(jù)報道，重組人EGF在安慰劑對照，雙盲臨床研究中具有治療十二指腸潰瘍的口服活性(Palomino，A等，ScandJGastroenterol351066-22，2000)。由EGF的N末端，接著是含有腸激酶切位點(diǎn)的連接子和TFF2組成的嵌合分子可以在幾個方面提高EGF的產(chǎn)率和使用。成熟的EGF在MW中大約6kD，據(jù)報道由于生產(chǎn)或純化過程中的C末端加工，因而其在許多生產(chǎn)宿主中生產(chǎn)時不具有活性(Engler，D等，JBiolChem26312384-90，1986)。EGFC末端的融合組分可以防止或消除這種不需要的加工，同時可能地提高表達(dá)水平。將EGF與TFF2融合也可以在目標(biāo)部位維持EGF活性更長的時間，從而使TFFs具有結(jié)合胃和小腸粘膜中的粘液素糖蛋白的能力(Poulson，S.等，Gut43240-47，1998)。同樣地，在這種融合的構(gòu)建體中，靜脈內(nèi)給藥的重組EGF(Calnan，D等，Gut47622-27，2000)的8分鐘的半衰期預(yù)期會得到提高，因而使TFF2具有粘液素結(jié)合能力并在MW中得到提高。上述嵌合分子構(gòu)建體的TFF2組分在MW中大約12-14kD，依賴于所用的生產(chǎn)宿主是否能在信號N連接點(diǎn)處完全糖基化該分子。在鼠模型中，重組TFF2通過皮下和口服路徑加速了胃潰瘍的愈合(Poulsen，S等，Gut45516-22，1999)，提高了粘膜血流量并抑制胃分泌物(Konturek，P等，RegulPept6871-9，1997)，刺激人單核細(xì)胞的遷移(Cook.G等，F(xiàn)EBSLett456155-59，1999)。如同根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)所預(yù)測的那樣，TFF2受試鼠表現(xiàn)出胃粘膜生長降低、胃酸分泌增加且在用茚甲新治療后對胃潰瘍的敏感性增加(Farrell，J等，JClinInvest109193-204，2002)。在多種潰瘍病例中，形成產(chǎn)生三葉因子(threetrefoilfactor)，如EGF的腺結(jié)構(gòu)，其可能有利于局部愈合(Poulsom，R.，BaillieresClinGastroenterol110113-34，1996)。在夏天，構(gòu)建體分子中的TFF2可以和EGF一起有效地發(fā)生作用來促進(jìn)重組產(chǎn)物的生產(chǎn)和對上述胃腸不適的有效性。釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)已成功用來生產(chǎn)重組形式的EGF(HerberBioteSA，Havana，Cuba)和TFF2(Thim，L等，F(xiàn)EBSLett318345-52，1993)。Escherichiacoli也被成功用來制備再折疊的重組EGF(Lee，J等，BiotechnolApplBiochem31245-48，2000)和TFF1，一種與TFF2一致的分子，但有一個而不是兩個富含絲氨酸的三葉形區(qū)域。因此，可以使用這些生產(chǎn)宿主的一種或兩種來制備有用量的活性重組嵌合分子。實(shí)施例6含有人表皮生長因子、含有腸激酶切位點(diǎn)的連接子和人TFF2的嵌合分子的制備根據(jù)本發(fā)明，制備EGF/腸激酶切位點(diǎn)-連接子/TFF2融合復(fù)合物，用PCR擴(kuò)增在該復(fù)合物的末端設(shè)計合適的限制性位點(diǎn)，分別用商業(yè)上可用的限制酶和DNA連接酶剪切并將這些片段連接起來，于是在5’到3’方向連接成該復(fù)合物DNA序列，這是本領(lǐng)域公知的。依次地，該復(fù)合物含有酵母GAPDH啟動子序列、酵母α交配因子引導(dǎo)序列、編碼SEQIDNO1蛋白的人表皮生長因子的DNA序列。向其3’端加入編碼含有腸激酶剪切位點(diǎn)的連接子，如SEQIDNO2所示的DNA序列。最后，向3’端加入人三葉形家族因子2(TFF2，如已知的hSP，見Tomassetto，C.，EMBOJ9407，1990)的DNA序列，如編碼SEQIDNO3蛋白的序列，最后是酵母α交配因子終止子。上述構(gòu)建體的確認(rèn)通過DNA測序來證實(shí)，然后將其克隆到商業(yè)可用的酵母表達(dá)載體，Yep24(來自美國典型培養(yǎng)物保藏中心，其含有Ura3基因作為選擇性標(biāo)記)中，用本領(lǐng)域公知的方法將該構(gòu)建體轉(zhuǎn)化到生產(chǎn)酵母菌株，INVSCI(來自Invitrogen，缺Ura3)中。挑選含有最終質(zhì)粒，pEET-1的轉(zhuǎn)化體，將其用于發(fā)酵來生產(chǎn)作為大量分泌產(chǎn)品的融合復(fù)合多肽。將該轉(zhuǎn)化體在8L加有60ng/l酵母提取物的YPD培養(yǎng)基中30℃下培養(yǎng)，直到OD650超過50。如同Thim，L.等，F(xiàn)EBSLett318345-52，1993的描述。通過離心、Amicon過濾濃縮清除發(fā)酵液，調(diào)節(jié)pH到1.7，傳導(dǎo)性到4.5mS，加載到快速S-瓊脂糖柱中洗脫，如Thim，L.FEBSLett318345-52，1993所述。在對EGF進(jìn)行的初級鼠肝細(xì)胞增生試驗(yàn)中，通過檢測中和等分的活性來檢測最終餾分的融合蛋白，如Calnan，D等，Gut47622-27，2000所述。用SDS-PAGE證實(shí)峰餾分的活性，于是含有大量融合蛋白的餾分具有等于或約20kDMW的帶，剪切該帶，接著將另一等分與腸激酶(Stratagene)一起溫浴，如Gaillard，I.等，Biochemistry356150，1996的描述，同時不改變未剪切的帶。進(jìn)一步地，用無內(nèi)毒素的設(shè)備和VydacC4反向HPLC柱色譜法如Thim，L.，F(xiàn)EBSLett318345-52，1993的描述來純化收集的餾分，在乙腈和TFA中進(jìn)行如上所述的RP-HPLC，將未糖基化的融合蛋白與糖基化的分開，同時將凝聚的和不需要的內(nèi)毒素與目標(biāo)產(chǎn)物分離。用鱟阿米巴樣細(xì)胞檢測法(AssociatesofCapeCod，Inc，WoodsHole，MA)來測定最終收集材料中的內(nèi)毒素，其少于純化蛋白中的LEU/MG。如上所述用SDS-PAGE分析法檢測峰餾分，收集，用20mM磷酸鈉緩沖液(pH6.8)超濾。通過過濾將純化材料濃縮到合適濃度用于治療性給藥，如約8mg蛋白/ml，溶于1％羧甲基纖維素(用于口服給藥)或溶于40mg/ml甘露糖(用于無菌過濾和腸胃外藥物的凍干保藏)中?？诜苿┰?20℃下貯藏，凍干材料在4℃下保持穩(wěn)定。最終的制劑通過質(zhì)量調(diào)控檢測法檢測，例如，在12％凝膠的還原性SDS-PAGE中具有超過95％的純度，在非還原性SDS-PAGE中具有小于5％的低聚體，在Edman降解中表現(xiàn)出超過99％的期望N末端序列，每毫克蛋白具有小于1EU的內(nèi)毒素，在用等摩爾濃度的EGF生物檢測法進(jìn)行檢測時，每摩爾融合蛋白的生物學(xué)活性有20％是單體EGF組分的活性。同樣，當(dāng)用等摩爾濃度的上皮細(xì)胞遷移測試進(jìn)行體外測試時，該純化的融合復(fù)合物有20％是TFF2組分的生物活性(POULSOM，R.，BaillieresClinGastroenterol10113-34，1996)。需治療的急性腸胃疾病病人服用口服劑型的融合復(fù)合物的量為50mg/每天，皮下注射在新鮮的無菌水中制備的制劑的量為2mg/kg/天。本發(fā)明通過參考其特定的具體實(shí)施方案而得到了描述，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠理解在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的情況下可以進(jìn)行改變或進(jìn)行等效替換。另外，為了適應(yīng)本發(fā)明的具體情況、材料、物質(zhì)組合、工藝、加工步驟及目標(biāo)、精神和范圍，可以作許多改進(jìn)，所有的這些改進(jìn)都包含在本發(fā)明所附權(quán)利要求的范圍之內(nèi)。參考文獻(xiàn)Ansel，H.C.，Allen，L，Popovich，N.G.(編)(1999)PharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems，第7版，LippencottWilliamsandWilkinsPublishers.Bashkin，J.K.，Sampath，U.，F(xiàn)rolova，E.(1995)Ribozymemimicsascatalyticantisensereagents.Appl.Biochem.Biotechnol.5443-56.Beigelman，L.，Karpeisky，A.，Matulic-Adamic，J.，Haeberli，P.，Sweedler，D.，Usman，N.(1995)Synthesisof2′-modifiednucleotidesandtheirincorporationintohammerheadribozymes.NucleicAcidsRes.234434-42.Deutscher，M.P.，Simon，M.I.，Abelson，J.N.(編)(1990)GuidetoProteinPurificationMethodsinEnzymology(MethodsinEnzymologySeries，第182卷)，AcademicPress.Gaudilliere，B.，Shi，Y.，Bonni，A.(2002)RNAinterferencerevealsarequirementforMEF2Ainactivity-dependentneuronalsurvival.J.Biol.Chem.2002Sep13；[epubaheadofprint].Gennaro，A.(編)(2000)RemingtonTheScienceandPracticeofPharmacy，第20版，Lippincott，Williams，&Wilkins.Gorman，C.M.，Merlino，G.T.，Willingham，M.C.，Pastan，I.，Howard，B.H.(1982)TheRoussarcomaviruslongterminalrepeatisastrongpromoterwhenintroducedintavarietyofeu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。29.如權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一個組分分子選自魚的肽、蛋白質(zhì)、其類似物或活性片段。30.如權(quán)利要求9所述的方法，其中至少兩個組分分子選自肽、蛋白質(zhì)、其類似物或活性片段。31.如權(quán)利要求1所述的方法，其中肽或蛋白質(zhì)選自IGF-I、EGF、PDGF、ITF、KGF、乳鐵蛋白質(zhì)、溶菌酶、血纖蛋白原、α1-抗胰蛋白酶、促紅細(xì)胞生成素、hGH、tPA、干擾素α、干擾素β、干擾素γ、共有序列干擾素、胰島素、人絨毛膜促性腺素、白喉蛋白和抗嗜血因子。32.如權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一個組分分子是激素。33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述激素選自睪酮、雌激素和孕酮。34.如權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一個組分分子選自紫衫醇或其類似物或衍生物、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑和抗感染物。35.如權(quán)利要求1所述的方法，其中至少兩個組分分子選自乳鐵蛋白/乳鐵蛋白質(zhì)、乳鐵蛋白/溶菌酶、溶菌酶/溶菌酶、乳鐵蛋白/EGF、EGF/EFG、乳鐵蛋白/ITF、ITF/ITF、ITF/EFG、EGF/KGF、KGF/KGF、ITF/KGF、KGF/PDGF、PDGF/PDGF、α1-抗胰蛋白酶/MMP抑制劑、雌激素/孕酮、抗體/抗體、ITF/ITF及其類似物、變體或衍生物。36.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子的給藥在治療宿主中達(dá)到診斷、預(yù)防、治療、抗感染或滋養(yǎng)的生物效果。37.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子還含有至少一種其它多肽片段，其中該多肽在生產(chǎn)宿主中高度表達(dá)。38.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞外，而不是細(xì)胞表面體內(nèi)切割。39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中第一和第二組分分子都不是干擾素-β。40.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞表面體內(nèi)切割。41.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一組分分子不是抗體或抗體片段。42.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為由內(nèi)源治療宿主酶切割。43.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為由選自下列的內(nèi)源宿主酶切割凝血因子、ADAMTS4和5、Aggreganases1和2、凝血酶、纖溶酶、補(bǔ)體因子、gastricin、顆粒蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶、膜型基質(zhì)金屬蛋白酶、II型跨膜絲氨酸蛋白酶、ADAM、中性溶酶、組織型纖溶酶原激活物和胱冬酶。44.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為由治療宿主中的酶在細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割，且第一和第二組分分子的組合不是蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)和細(xì)胞毒性區(qū)的組合。45.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為由治療宿主中的酶在細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割，且該切割位點(diǎn)不是病毒病原體活化的切割位點(diǎn)。46.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為由治療宿主中的酶在細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割，且第二組分不是細(xì)胞毒性分子。47.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子還含有引導(dǎo)序列以指導(dǎo)該嵌合分子在生產(chǎn)宿主中分泌，或指導(dǎo)該嵌合分子在生產(chǎn)宿主中儲存。48.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子含有靶分子以指導(dǎo)該嵌合分子到治療宿主的一部位發(fā)生作用。49.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子含有純化部分，該部分方便于該嵌合分子從生產(chǎn)宿主中產(chǎn)生后的體外純化。50.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述連接子含有兩切割位點(diǎn)和這兩個連接位點(diǎn)間的間隔子。51.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子是可食用產(chǎn)品的組分。52.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述可食用產(chǎn)品選自牛奶、植物、種子、微生物細(xì)胞及其衍生物和提取物。53.如權(quán)利要求51所述的方法，其中所述可食用產(chǎn)品是谷物。54.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子通過口服、腸胃外或通過吸入給藥。55.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子通過靜脈內(nèi)路徑、皮下路徑、腹腔內(nèi)路徑、心臟內(nèi)路徑或透皮路徑腸胃外給藥。56.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子不是核酸分子。57.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述嵌合分子還含有和第一組分分子但不和連接子連接的額外分子，其中該額外分子在生產(chǎn)宿主中高度表達(dá)。58.如權(quán)利要求1所述的方法，其中第一和第二組分分子中的至少一個是抗體或其活性片段，該抗體選自抗-IL8、抗-CD11a、抗-ICAM-3、抗-CD80、抗-CD2、抗-CD3、抗-補(bǔ)體C5，抗-TNFα、抗-CD4、抗-α4β7、抗-CD40L(配體)、抗-VLA4、抗-CD64、抗-IL5、抗-IL4、抗-IgE、抗-CD23、抗-CD147、抗-CD25、抗-β2整聯(lián)蛋白、抗-CD18、抗-TGFβ2、抗-因子VII、抗-IIbIIa受體、抗-PDGFβR、抗-F蛋白(來自RSV)、抗-gp120(來自HIV)、抗-HepB、抗-CMV、抗-CD14、抗-VEFG、抗-CA125(卵巢癌)、抗-17-LA(結(jié)腸細(xì)胞表面抗原)、抗-抗-獨(dú)特型GD3表位、抗-EGFR、抗-HER2/neu、抗-αVβ3整聯(lián)蛋白、抗-CD52、抗-CD33、抗-CD20、抗-CD22、抗-HLA和抗-HLADR或其活性片段。59.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述組合物還含有藥物學(xué)上可接受的載體或賦形劑。60.一種試劑盒，該試劑盒包含含有嵌合分子的組合物和套裝插件，該套裝插件包括向人或非人治療宿主給予組合物的說明書，其中所述該嵌合分子含有至少一個第一組分分子、至少一個連接子和至少一個第二組分分子；其中的連接子含有酶切位點(diǎn)且至少第一連接子與第一組分分子和第二組分分子可操作連接，從而在第一組分分子和第二組分分子間產(chǎn)生非天然發(fā)生的連接和切割位點(diǎn)；其中該切割位點(diǎn)構(gòu)建為由治療宿主酶體內(nèi)切割且在生產(chǎn)宿主中抵抗切割；其中，在切割位點(diǎn)切割嵌合分子后，至少一個組分分子被功能活化；以及其中第一和第二組分分子中至少有一個含有肽、蛋白和/或其活性片段。61.如權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的胃腸道中體內(nèi)切割。62.如權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為由腸激酶體內(nèi)切割。63.如權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞外，而不是細(xì)胞表面體內(nèi)切割。64.如權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞表面體內(nèi)切割。65.如權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主中由內(nèi)源宿主酶在細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割。66.如權(quán)利要求65所述的試劑盒，其中所述第一組分分子和第二組分分子的結(jié)合不是蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)和細(xì)胞毒性區(qū)的結(jié)合。67.如權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割，其中該切割位點(diǎn)不是病毒病原體激活切割位點(diǎn)。68.如權(quán)利要求60所述的試劑盒，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割，該第二組分分子不是細(xì)胞毒性分子。69.一種嵌合分子，該嵌合分子具有結(jié)構(gòu)式A(xiBi)n，其中A代表第一組分分子，x代表連接子，B代表第二組分分子，i和n分別是正整數(shù)；其中該嵌合分子含有至少一個第一組分分子、至少一個連接子和至少一個第二組分分子；其中的連接子含有酶切位點(diǎn)且其中至少第一連接子與第一組分分子和第二組分分子可操作連接，從而在第一組分分子和第二組分分子間產(chǎn)生非天然發(fā)生的連接和切割位點(diǎn)；其中該切割位點(diǎn)構(gòu)建成在體內(nèi)由宿主酶切割且在生產(chǎn)宿主中抵抗切割；其中，在切割位點(diǎn)切割嵌合分子后，至少一個組分分子被功能活化，其中第一和第二組分分子中至少有一個含有肽、蛋白和/或其活性片段。70.如權(quán)利要求69所述的嵌合分子，其中所述結(jié)構(gòu)式選自(a)A(x1B1)；(b)A(x1B1)(x2B2)，其中x1和X2可以相同或不同，B1和B2可以相同或不同；(c)A(x1B1)(x2B2)(x3B3)，其中x1、x2和x3分別可以相同或不同，B1、B2和B3分別可以相同或不同；(d)A(x1B1)(x2B2)(x3B3)(x4B4)，其中x1、x2、x3和x4分別可以相同或不同，B1、B2、B3和B4分別可以相同或不同；和(e)A(x1B1)(x2B2)(x3B3)(x4B4)(x5B5)，其中x1、x2、x3、x4和x5分別可以相同或不同，B1、B2、B3、B4和B5分別可以相同或不同。71.如權(quán)利要求69所述的嵌合分子，其中所述嵌合分子是多蛋白。72.編碼如權(quán)利要求71所述嵌合分子的核酸分子。73.含有如權(quán)利要求72所述核酸分子的載體。74.含有如權(quán)利要求72所述核酸分子的宿主細(xì)胞。75.一種在生產(chǎn)宿主中制備給予治療宿主的嵌合分子的方法，該方法包括(a)制備編碼嵌合分子的核酸；(b)用該核酸轉(zhuǎn)化生產(chǎn)宿主；(c)使生產(chǎn)宿主生產(chǎn)該嵌合分子；(d)從生產(chǎn)宿主中回收該嵌合分子；和(e)調(diào)節(jié)收集的嵌合分子的質(zhì)量以使其滿足向治療宿主給藥所規(guī)定的要求；其中所述嵌合分子含有組分分子，包括第一組分分子、含有切割位點(diǎn)的連接子和第二組分分子；其中所述第一組分分子和第二組分分子中至少有一個含有肽、蛋白或其片段；其中所述連接子可操作地與第一和第二組分分子相連，從而產(chǎn)生非天然發(fā)生的連接和切割位點(diǎn)；其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為由治療宿主酶體內(nèi)切割。76.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述酶存在于治療宿主的胃腸道中。77.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述酶是在治療宿主的細(xì)胞外發(fā)生作用，而在細(xì)胞表面不發(fā)生作用的酶。78.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述酶是在治療宿主的細(xì)胞表面發(fā)生作用的酶。79.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述酶是在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)發(fā)生作用的酶。80.如權(quán)利要求79所述的方法，其中所述嵌合分子不是蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)和細(xì)胞毒性區(qū)的結(jié)合。81.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述酶是在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)發(fā)生作用的酶，所述的切割位點(diǎn)不是病毒病原體激活切割位點(diǎn)。82.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述酶是在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)發(fā)生作用的酶，所述的第二組分分子不是細(xì)胞毒性分子。83.如權(quán)利要求75所述的方法，其中所述生產(chǎn)宿主選自細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞、植物細(xì)胞、植物種子、昆蟲細(xì)胞、植物、真菌和動物。84.一種含有嵌合分子和藥物學(xué)上可接受的載體用于向治療宿主給藥的組合物，其中所述嵌合分子含有包括至少一個第一組分分子、至少一個連接子和至少一個第二組分分子的組分分子；其中的連接子含有酶切位點(diǎn)且至少第一連接子與第一組分分子和第二組分分子可操作連接，從而在第一組分分子和第二組分分子間產(chǎn)生非天然發(fā)生的連接和切割位點(diǎn)；其中該切割位點(diǎn)構(gòu)建為在體內(nèi)由治療宿主酶切割且在生產(chǎn)宿主中抵抗切割；其中，在切割位點(diǎn)切割嵌合分子后，至少一個組分分子被功能活化；以及其中第一和第二組分分子中至少有一個含有肽、蛋白和/或其活性片段。85.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為由治療宿主的胃腸道中的酶體內(nèi)切割。86.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述酶是腸激酶。87.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為由治療宿主的炎性組織中的酶體內(nèi)切割。88.如權(quán)利要求87所述的組合，其中所述炎性組織是發(fā)炎的腸或滑膜。89.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞外，而不在細(xì)胞表面體內(nèi)切割。90.如權(quán)利要求84所述組合物，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞表面體內(nèi)切割。91.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)由內(nèi)源治療宿主酶體內(nèi)切割。92.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割，其中所述第一和第二組分分子的所述結(jié)合不是蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)和細(xì)胞毒性區(qū)的結(jié)合。93.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述切割位點(diǎn)構(gòu)建為在治療宿主的細(xì)胞內(nèi)體內(nèi)切割，其中的第二組分分子不是細(xì)胞毒性分子。94.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述組合物被包裹。95.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中有一個組分分子與治療宿主的細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)合。96.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述嵌合分子含有兩個切割位點(diǎn)，其中一個構(gòu)建為表達(dá)后在生產(chǎn)宿主中體外切割，另一個構(gòu)建為在治療宿主中體內(nèi)切割。97.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述組合物配制成口服運(yùn)輸。98.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述組合物配制成腸胃外運(yùn)輸。99.如權(quán)利要求98所述的組合物，其中的腸胃外運(yùn)輸選自皮下、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、心室內(nèi)、顱內(nèi)、經(jīng)皮膚和透皮運(yùn)輸。100.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述組合物配制成鼻內(nèi)運(yùn)輸或吸入。101.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述嵌合分子是疫苗。102.如權(quán)利要求84所述的組合物，其中所述嵌合分子含有佐劑作為一個組分分子。103.如權(quán)利要求101所述的組合物，其中所述疫苗含有病原性有機(jī)物組分。104.如權(quán)利要求101所述的組合物，其中所述疫苗是癌癥疫苗，所述的組分分子是在癌細(xì)胞中過量表達(dá)的分子。105.嵌合分子在制備用于診斷、預(yù)防、治療疾病或癥狀，或用于提高需求對象營養(yǎng)的藥物中的應(yīng)用，其中所述嵌合分子含有至少一個第一組分分子、至少一個連接子和至少一個第二組分分子；其中的連接子含有酶切位點(diǎn)且至少第一連接子與第一組分分子和第二組分分子可操作連接，從而在第一組分分子和第二組分分子間產(chǎn)生非天然發(fā)生的連接和切割位點(diǎn)；其中該切割位點(diǎn)構(gòu)建為在體內(nèi)由治療宿主酶切割且在生產(chǎn)宿主中對切割不敏感；其中，在切割位點(diǎn)切割嵌合分子后，至少一個組分分子被功能活化；且其中第一和第二組分分子中至少有一個含有肽、蛋白和/或其活性片段。全文摘要本發(fā)明涉及含有以非天然發(fā)生形式連接在一起的組分分子的嵌合分子，其中的連接子含有至少一個酶切位點(diǎn)，該酶切位點(diǎn)構(gòu)建來由治療宿主中的酶切割。本發(fā)明還涉及含有該嵌合分子的組合物和試劑盒，在生產(chǎn)宿主中制備該嵌合分子的方法，使用本發(fā)明的嵌合分子來診斷、預(yù)防、治療和滋養(yǎng)有這種需要的宿主的方法。文檔編號C12P21/06GK101044154SQ03806956公開日2007年9月26日申請日期2003年2月14日優(yōu)先權(quán)日2002年2月14日發(fā)明者威廉·J·魯特申請人:威廉·J·魯特