專利名稱：硫磺菌淺層發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥用高等真菌-硫磺菌(Leatiporus sulphureus)菌絲體的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
據(jù)《中國藥物真菌》(劉波著)報(bào)道，硫磺菌Leatiporus sulphureus子實(shí)體所產(chǎn)生的齒孔酸(Eburicoic acid)可以合成甾體藥物(類固醇化合物)。這種甾體藥物對機(jī)體可以起著重要的調(diào)節(jié)作用。上述硫磺菌的菌種在農(nóng)業(yè)部菌種保存中心、中國科學(xué)院微生物研究所均有保藏樣品。關(guān)于硫磺菌的深層發(fā)酵技術(shù)，即其菌絲體及其浸提液的生產(chǎn)方法，參見海城市農(nóng)業(yè)生物工程中心98年3月19日申請的中國專利98113850.0的專利文獻(xiàn)《一種藥物用硫磺色干酪菌絲體及其浸提液的生產(chǎn)方法》。
中國專利ZL98113850.0提供了一種硫磺菌菌絲體的生產(chǎn)方法，即深層發(fā)酵的方法。這是一種液體發(fā)酵技術(shù)，在工業(yè)生產(chǎn)中要使用發(fā)酵罐來進(jìn)行，涉及的設(shè)備較多，技術(shù)要求高，操作難度大。這種技術(shù)比較適合規(guī)模較大的制藥企業(yè)應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種所需設(shè)備簡單，較易操作，原料價(jià)格低廉，特別適于中小企業(yè)生產(chǎn)的硫磺菌淺層發(fā)酵方法，該技術(shù)屬固體發(fā)酵技術(shù)。
硫磺菌淺層發(fā)酵方法，其特征是選用固體物料配制培養(yǎng)基，滅菌后接入液體菌種，在適宜條件下靜止培養(yǎng)菌絲體，具體方法步驟如下1、取硫磺菌斜面菌種，接入馬鈴薯綜合培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的成分按重量百分比計(jì)，由20％馬鈴薯浸汁，葡萄糖2％，磷酸二氫鉀0.3％，硫酸鎂0.15％，維生素B1 5-10ppm組成；在18-28℃下?lián)u瓶培養(yǎng)4-7天，如需種量大，可轉(zhuǎn)接二次搖瓶培養(yǎng)，接種量5-20％；2、配制固體發(fā)酵培養(yǎng)基，固體發(fā)酵培養(yǎng)基有三種可任選其一，均按重量比A用水洗選無霉變無雜質(zhì)谷粒煮熟，撈出后加石膏粉1-2％拌勻，滅菌，備用；B取玉米粉、玉米穗軸粉各50％，外加麥麩、石膏粉各2-5％，混勻后加水至40-50％(對干料基含水量)，滅菌，備用；C按重量份取玉米粉8份，麥麩2份，蔗糖、石膏粉各0.1份，混勻后加水7份，滅菌，備用；3、將步驟1中搖瓶培養(yǎng)的液體菌種接入步驟2中三種培養(yǎng)基的任一種培養(yǎng)基，接種量為5-20％，淺盤鋪料厚度10-15公分，在18-28℃、相對濕度50-70％的無菌環(huán)境中通風(fēng)暗培養(yǎng)3-5周，可得發(fā)酵產(chǎn)物硫磺菌。
發(fā)酵產(chǎn)物可用于提取有效成分，亦可低溫干燥后粉碎，得菌絲體和培養(yǎng)基混合物，用于功能食品或功能飼料。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是與深層發(fā)酵相比，此法所需設(shè)備簡單，較易操作，原料價(jià)格低廉，特別適于鄉(xiāng)鎮(zhèn)企業(yè)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1取硫磺菌斜面菌種，接入馬鈴薯綜合培養(yǎng)基(不加瓊脂)，在25℃下?lián)u瓶培養(yǎng)7天。選無霉變無雜質(zhì)小麥煮熟，撈出后加1.5％(重量比)石膏粉拌勻，滅菌。將液體菌種接入麥粒培養(yǎng)基，接種量為5％，淺盤鋪料厚度15公分，在18℃、相對濕度70％的無菌環(huán)境中通風(fēng)暗培養(yǎng)20天，麥粒表面長滿淡黃色菌絲。
實(shí)施例2取硫磺菌斜面菌種，接入馬鈴薯綜合培養(yǎng)基(不加瓊脂)，在25℃下?lián)u瓶培養(yǎng)7天。選無霉變無雜質(zhì)小米煮熟，撈出后加2％(重量比)石膏粉拌勻，滅菌。將液體菌種接入小米培養(yǎng)基，接種量為5％，淺盤鋪料厚度15公分，在18℃、相對濕度70％的無菌環(huán)境中通風(fēng)暗培養(yǎng)25天，小米表面長滿淡黃色菌絲。
實(shí)施例3取硫磺菌斜面菌種，接入馬鈴薯綜合培養(yǎng)基(不加瓊脂)，在25℃下?lián)u瓶培養(yǎng)7天。選無霉變無雜質(zhì)高粱煮熟，撈出后加2％(重量比)石膏粉拌勻，滅菌。將液體菌種接入高粱培養(yǎng)基，接種量為5％，淺盤鋪料厚度15公分，在18℃、相對濕度70％的無菌環(huán)境中通風(fēng)暗培養(yǎng)30天，高粱表面長滿淡黃色菌絲。
實(shí)施例4取硫磺菌斜面菌種，接入馬鈴薯綜合培養(yǎng)基(不加瓊脂)，在25℃下?lián)u瓶培養(yǎng)7天。選無霉變無雜質(zhì)玉米煮熟，撈出后加1％(重量比)石膏粉拌勻，滅菌。將液體菌種接入玉米培養(yǎng)基，接種量為5％，淺盤鋪料厚度20公分，在25℃、相對濕度70％的無菌環(huán)境中通風(fēng)暗培養(yǎng)40天，玉米表面長滿淡黃色菌絲。
實(shí)施例5取硫磺菌斜面菌種，接入馬鈴薯綜合培養(yǎng)基(不加瓊脂)，在18℃下?lián)u瓶培養(yǎng)7天。取玉米粉8份，麥麩2份，蔗糖、石膏粉各0.1份，混勻后加水7份，滅菌。將液體菌種接入該培養(yǎng)基，接種量為20％，淺盤鋪料厚度10公分，在28℃、相對濕度50％的無菌環(huán)境中通風(fēng)暗培養(yǎng)40天，培養(yǎng)基長滿淡黃色菌絲。
實(shí)施例6取硫磺菌斜面菌種，接入馬鈴薯綜合培養(yǎng)基(不加瓊脂)，在28℃下?lián)u瓶培養(yǎng)4天。取玉米粉、玉米穗軸粉各半，加麥麩5％、石膏粉2％(重量比)，混勻后加水至50％(含水量)，滅菌。將液體菌種接入該培養(yǎng)基，接種量為10％，淺盤鋪料厚度10公分，在25℃、相對濕度60％的無菌環(huán)境中通風(fēng)暗培養(yǎng)35天，培養(yǎng)基長滿淡黃色菌絲。
權(quán)利要求
1.硫磺菌淺層發(fā)酵方法，其特征是選用固體物料配制培養(yǎng)基，滅菌后接入液體菌種，在適宜條件下靜止培養(yǎng)菌絲體，具體發(fā)酵步驟如下1)取硫磺菌斜面菌種，接入馬鈴薯綜合培養(yǎng)基，培養(yǎng)基的成分按重量百分比計(jì)由20％馬鈴薯浸汁，葡萄糖2％，磷酸二氫鉀0.3％，硫酸鎂0.15％，維生素B1 5-10ppm組成；在18-28℃下?lián)u瓶培養(yǎng)4-7天，可轉(zhuǎn)接二次搖瓶培養(yǎng)，接種量5-20％；2)固體發(fā)酵培養(yǎng)基，固體發(fā)酵培養(yǎng)基有三種可任選其一，均按重量比A用水洗選無霉變無雜質(zhì)谷粒煮熟，撈出后加石膏粉1-2％拌勻，滅菌，備用；B取玉米粉、玉米穗軸粉各50％，外加麥麩、石膏粉各2-5％，混勻后加水至40-50％，滅菌，備用；C取重量份的玉米粉8份，麥麩2份，蔗糖、石膏粉各0.1份，混勻后加水7份，滅菌，備用；3)將步驟1中搖瓶培養(yǎng)的液體菌種接入步驟2中三種培養(yǎng)基的任一種培養(yǎng)基，接種量為5-20％，淺盤鋪料厚度10-15公分，在18-28℃、相對濕度50-70％的無菌環(huán)境中通風(fēng)暗培養(yǎng)3-5周，可得發(fā)酵產(chǎn)物硫磺菌。
全文摘要
本發(fā)明公開了硫磺菌菌絲體淺層發(fā)酵方法。其特征在于將液體菌種接入固體發(fā)酵培養(yǎng)基，置于淺盤內(nèi)靜止發(fā)酵。將硫磺菌斜面菌種接入馬鈴薯綜合培養(yǎng)基，在18－28℃下?lián)u瓶培養(yǎng)4－7天，選無霉變無雜質(zhì)谷粒，煮熟，撈出后加石膏粉1－2％拌勻，滅菌，接種量為5－20％，在淺盤內(nèi)鋪料厚度為10－20公分，在18－28℃、相對濕度50－70％的無菌環(huán)境中通風(fēng)暗培養(yǎng)20－40天。本發(fā)明與深層發(fā)酵方法相比，此法所需設(shè)備簡單，較易操作，原料價(jià)格低廉，特別適于中小企業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號C12N1/14GK1546643SQ200310105279
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月4日
發(fā)明者卜宗式, 李洋, 白景弘 申請人:李洋, 李 洋