專利名稱：玉米超氧化物歧化酶提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種生物酶的制取方法，尤其涉及的是超氧化物歧化酶(SOD)的制取方法。
背景技術(shù)：
超氧化物歧化酶，又簡稱SOD，是一種重要的氧自由基的清除劑，具有很強的抗過氧自由基能力，它廣泛應(yīng)用于保健品、藥物和化妝品中。目前的SOD從動物血液中提取的，其提取方法不僅步驟繁瑣，而且要消耗大量化工原料，產(chǎn)生大量廢氣污染空氣，同時其廢液中含有的氯仿、丙酮、磷酸等都是常效的有機物質(zhì)，無法回收，其排放、滲入地下將直接造成地下水的酸化、堿化污染，而且血液原料中攜帶病原微生物，國家在法規(guī)條例也加以嚴格地限制。血液提取SOD分子量大，難以透過細胞膜，還容易被胃蛋白或胰蛋白水解，應(yīng)用中存在活性較弱的缺陷，通常只能在0-4℃溫度環(huán)境下存活，否則失活。現(xiàn)有技術(shù)中雖也公開有以玉米為原料提取SOD的方法，但其方法各異，也存在化工原料消耗量大的弊病。中國專利CN99112607、名稱為“玉米超氧化物歧化酶(SOD)復(fù)合酶大規(guī)模制造方法”，其方法是利用玉米，經(jīng)發(fā)芽、加磷酸鹽、打漿、加纖維素酶、打漿、加氯化鈣、過渡、加爐化酶、硅藻土過濾、離心、超濾、加維生素C、維生素E、山梨酸鉀、冷凍、融解離心一系列過程制取超氧化物歧化酶，該技術(shù)方案同樣存在工藝復(fù)雜、工業(yè)原料用量大的技術(shù)弊病，仍存在難以大規(guī)模生產(chǎn)的技術(shù)缺陷。

發(fā)明內(nèi)容
為改變現(xiàn)有仍單純依賴血液為原料提取超氧化物起化酶提取途徑的技術(shù)現(xiàn)狀，而現(xiàn)有以玉米為原料提取超氧化物起化酶又存在產(chǎn)生大量污染廢物的技術(shù)缺陷，本發(fā)明專利申請?zhí)峁┝艘环N以玉米為原料提取超氧化物歧化酶的提取方法的技術(shù)方案，本技術(shù)方案的主要技術(shù)內(nèi)容是①玉米籽粒消毒、發(fā)芽調(diào)整室溫、水溫、PH值、濕度、氧氣供給量、光照、培養(yǎng)基等至適合玉米籽粒出芽的一個良好的基礎(chǔ)及環(huán)境；②打漿、壓汁按發(fā)芽籽粒重量加入一倍重量比的無雜質(zhì)PH值為6-7的去離子水，打漿，然后壓榨取漿汁，沉淀、濾去其粗渣；③沉淀后離心去渣；向壓取的漿汁中加入其體積百分比15％的緩沖劑，攪拌，使細渣和淀粉靜置沉淀，取其上清液經(jīng)離心后，提取清液送入超濾；④濾液超濾將清液進行超濾，其清液送入提取塔；⑤提取活性峰清液加入促進劑，促使其加速沉淀，送入提取塔，經(jīng)若干級擴散后，回收沉淀物；⑥、濃縮升華凍干將沉淀物濃縮，將濃縮后的提取物裝入凍干盤中冷凍；其第③步中的緩沖劑為占去離子水體積量35％的檸檬酸溶液和占稀釋水體積量35％的檸檬酸鈉溶液混合制成；其第⑤步中的促進劑為丙酮和95％乙醇分別按體積百分比85％∶15％加入以上清液中。
本發(fā)明專利申請?zhí)峁┑囊杂衩诪樵咸崛〕趸锲缁傅恼滋崛》椒ǎ湓蟻碓簇S富，提取方法簡單，更適于大工業(yè)生產(chǎn)，而且本方法提取的SOD其分子量僅為血液SOD分子量的1/2，克服了血液SOD分子量大、不易透過細胞膜并容易被胃蛋白、胰蛋白水解的缺陷。該方法所提取的SOD不僅是SOD酵素酶的一種，同時它還存在谷光苷肽、過氧化氫酶、過氧化物酶，它是一種多酶種的復(fù)合酶，能夠較長地保持SOD的活性，能抵制胃蛋白、胰蛋白酶的水解。由于它產(chǎn)自植物糖線型細胞，所以它含有VE、VB、VC等多種維生素及銅、鐵、鋅、錳、硒等多種微量元素，而這些元素及維生素又都是人體內(nèi)不可缺少的物質(zhì)及營養(yǎng)。它的產(chǎn)成品呈乳白色，少帶有粉色。經(jīng)檢測認定，玉米SOD在清除人體內(nèi)自由基方面，是目前最完全、最徹底的一種酵素酶，是無可替代的。該酶族屬于偏酸性蛋白酶族，活性穩(wěn)定，有耐熱性，能夠在15-25℃的溫度環(huán)境下保持其活性，尤其在PH7.6～9<p>

4、濾液超濾在超濾裝置中經(jīng)微分篩分液，其分液后經(jīng)超濾，其超濾清液再送提取塔；5、提取活性峰液向清液中加入促進劑，其促進劑為丙酮和95％乙醇分別按體積百分比85％∶15％加入以上清液中，送入提取塔，該提取塔設(shè)為四級，擴散去液，回收沉淀物，并將沉淀物送入濃縮罐濃縮。各級提取后放出的清液中所含的丙酮、乙醇均可回收再利用。
6、濃縮升華凍干將沉淀物送入濃縮罐進行濃縮處理，濃縮后的半流體裝入凍干盤中升華、凍干，得到SOD粗品。
第6步之后的各步驟是為了要制取醫(yī)療用SOD精品，所要進行的工藝步驟是7、將濃縮后的SOD粗品用去離子水稀釋，用水浴和透析將透析液送入離心機離心除液，回收其沉淀物，將沉淀物再濃縮凍干，即得到精品SOD，其凍干包裝與SOD粗品是一致的。
權(quán)利要求
1.一種玉米超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于其提取方法為①玉米籽粒消毒、發(fā)芽調(diào)整室溫、水溫、PH值、濕度、氧氣供給量、光照、培養(yǎng)基等至適合玉米籽粒出芽的一個良好的基礎(chǔ)及環(huán)境；②打漿、壓汁按發(fā)芽籽粒重量加入一倍重量比的無雜質(zhì)PH值為6-7的去離子水，打漿，然后壓榨取漿汁，沉淀、濾去其粗渣；③沉淀后離心去渣向壓取的漿汁中加入其體積百分比15％的緩沖劑，攪拌，使細渣和淀粉靜置沉淀，取其上清液經(jīng)離心后，提取清液送入超濾④濾液超濾將清液進行超濾，其清液送入提取塔；⑤提取活性峰液清液加入促進劑，促使其加速沉淀，送入提取塔，經(jīng)若干級擴散后，回收沉淀物；⑥、濃縮升華凍干；將沉淀物濃縮，將濃縮后的提取物裝入凍干盤升華、凍干；其第③步中的緩沖劑為占去離子水體積量65％的檸檬酸溶液和占去離子水體積量35％的檸檬酸鈉溶液混合制成；其第⑤步中的促進劑為丙酮和95％乙醇分別按體積百分比85％∶15％加入以上清液中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的第②步用去離子水的PH值為6-6.5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于其第④步其清液先經(jīng)微分篩分液，再進行超濾。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于為得到精品SOD，第⑥步后將濃縮后的SOD粗品用去離子水稀釋，用水浴和透析將透析液送入離心機離心除液，回收其沉淀物，將沉淀物再濃縮凍干、包裝。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是以玉米為原料來提取超氧化物歧化酶的一種新型提取方法，該方法提取的超氧化物歧化酶是一種多酶種的復(fù)合酶，不僅易于透過細胞膜，而且能抵制胃、胰等多蛋白酶水解作用，其活性穩(wěn)定，具有耐熱性。其提取方法包括玉米籽粒消毒、發(fā)芽、打漿、壓汁、沉淀離心去渣、濾液超濾、提取活性峰、濃縮升華凍干包裝。用本方法提取的SOD其活性高，蛋白含量少，溫度適應(yīng)性廣。
文檔編號C12N9/02GK1626654SQ200310119109
公開日2005年6月15日 申請日期2003年12月11日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月11日
發(fā)明者張明 申請人:張明