專利名稱：β－內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物、檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物、β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒以及β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
β-內(nèi)酰胺酶是水解β-內(nèi)酰胺類抗菌劑的分子內(nèi)β-內(nèi)酰胺環(huán)的一群酶，根據(jù)酶蛋白的氨基酸序列的同源性分為A類、B類、C類及D類。超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)是分解的底物(β-內(nèi)酰胺類抗菌劑)的范圍比以往的A類β-內(nèi)酰胺酶更廣的酶。這些β-內(nèi)酰胺酶使β-內(nèi)酰胺類抗菌劑的抗菌力失活，其中尤以ESBL作為院內(nèi)感染的病原體而被視為問題。即使對(duì)顯示β-內(nèi)酰胺類抗菌劑耐性的細(xì)菌投以β-內(nèi)酰胺類抗菌劑，不僅得不到治療效果，甚至還成為使新的耐性菌蔓延的原因。因此，在確定正確的治療方案方面，必須迅速且正確地檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶。
現(xiàn)在使用的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法大致分為4種1)產(chǎn)色頭孢菌素法、2)酸法、3)碘法、及4)UV法，此外還可以舉出比較最低抑菌濃度(MIC)的培養(yǎng)法。作為以往市售的主要的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)產(chǎn)品，可以列舉出利用產(chǎn)色頭孢菌素法判別β-內(nèi)酰胺酶的有無的檢測(cè)產(chǎn)品、利用酸法檢測(cè)A類及C類β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)產(chǎn)品、以及利用培養(yǎng)法檢測(cè)B類β-內(nèi)酰胺酶或ESBL的檢測(cè)產(chǎn)品等。
產(chǎn)色頭孢菌素法是使用頭孢菌素的方法，當(dāng)β-內(nèi)酰胺環(huán)被β-內(nèi)酰胺酶開環(huán)時(shí)頭孢菌素就會(huì)變色，因?yàn)樵噭┍旧碜兩?，所以其特征是檢測(cè)靈敏度高，但是以往市售的利用產(chǎn)色頭孢菌素法的產(chǎn)品，作為檢測(cè)底物使用頭孢硝噻吩(3-[2，4-二硝基苯乙烯基]-7-(2-噻嗯基乙酰胺基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸、日本專利申請(qǐng)?zhí)亻_昭48-50787號(hào)公報(bào))。該產(chǎn)品能夠用30分鐘左右的短的檢測(cè)時(shí)間進(jìn)行判別，但還不能與所有類別的β-內(nèi)酰胺酶反應(yīng)來判別其類別。并且，在利用產(chǎn)色頭孢菌素法的產(chǎn)品中，以聯(lián)用頭孢硝噻吩與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為特征的檢測(cè)產(chǎn)品迄今為止未被所知。
另外，在國(guó)際公開第02/24707號(hào)小冊(cè)子中，公開了可以利用產(chǎn)色頭孢菌素法檢測(cè)ESBL的新型化合物。但是，在該國(guó)際公開小冊(cè)子中，并沒有公開關(guān)于與特定的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的聯(lián)用，也沒有啟示能夠檢測(cè)ESBL以外的其它類別的β-內(nèi)酰胺酶的可能性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供可以迅速地判別β-內(nèi)酰胺酶的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物、β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒及β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法。
本發(fā)明者們發(fā)現(xiàn)了通過聯(lián)用特定的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑、特別是作為β-內(nèi)酰胺酶抑制劑組合特定的2種或3種，可以解決上述課題。
即，本發(fā)明提供在產(chǎn)色頭孢菌素法中使用的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物，該β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑。
本發(fā)明還提供β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，其包含選自由以下的(a)～(e)構(gòu)成的群的1組或1組以上檢測(cè)試劑組合物(a)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與乙二胺四乙酸的組合；
(b)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為克拉維酸與乙二胺四乙酸的組合；(c)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與克拉維酸的組合；(d)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與乙二胺四乙酸的組合；(e)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與克拉維酸與乙二胺四乙酸的組合。
本發(fā)明還提供β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，其包含選自由以下的(f)、(g)、(h)及(i)構(gòu)成的群的1組或1組以上(f)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南；(g)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為克拉維酸；(h)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南；(i)檢測(cè)試劑組合物，其包含β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與克拉維酸的組合。
本發(fā)明還提供β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法，其包括將含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液與上述β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物接觸的步驟。
本發(fā)明還提供β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法，其包括將含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液與上述β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物接觸的步驟，該組合物固定在β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒的試樣固定部分。
本發(fā)明還提供β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法，其包括將含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液與β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物接觸的步驟，該組合物固定在上述β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒的試樣固定部分。


圖1是本發(fā)明的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒的一例的概略立體圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明是基于產(chǎn)色頭孢菌素法的發(fā)明。
作為可以在本發(fā)明中使用的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物，可以列舉在日本專利申請(qǐng)?zhí)亻_昭48-50787號(hào)公報(bào)中公開的下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受鹽、或在國(guó)際公開第02/24707號(hào)小冊(cè)子中公開的下述通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物。另外，這些說明書的內(nèi)容全部包含在本說明書中。
(通式(1)中，R是甲酰胺基或者是由式RuCH2CONH、RuOCH2CONH、RuCONH、RuCH(NH2)CONH或RuC(＝NOH)CONH(式中、Ru是噻嗯基、苯基或萘基)表示的基團(tuán)；Ar是2-位、4-位或2，4-位被氰基或硝基取代的苯基；以及X1是-S-或-SO-。) (通式(2)中，R1和R2可以相同或不同，各表示氫原子、硝基或氰基；R3表示C1～C6的烷基，其也可以是羧基取代烷基；R4表示氫原子或氨基；以及X2表示-S-或-SO-，但是，R1與R2不會(huì)同時(shí)為氫原子。)。
作為通式(1)表示的化合物，β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物優(yōu)選3-[2，4-二硝基苯乙烯基]-7-(2-噻嗯基乙酰胺基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸或其生理上可接受的鹽。
作為通式(2)表示的化合物，優(yōu)選式中X2為-S-的化合物；式中R3為甲基、也可以為羧基取代甲基、或?yàn)楸霍然〈谋幕衔?；式中R4為氨基的化合物；或式中X為-S-，R3為甲基、也可以為羧基取代甲基、或?yàn)楸霍然〈谋?，R4為氨基的化合物。
其中，優(yōu)選以下的化合物或其羧酸鹽衍生物7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(2，6-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；
7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(4-氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(2-氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)-2-(噻唑-4-基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸-1-氧化物；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2，6-二氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2-氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2，6-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2-硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；
7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-4-(4-氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-4-(2-氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-羧基甲氧基亞氨基-2-(噻唑-4-基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸，或7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸-1-氧化物。
特別優(yōu)選以下的化合物或其羧酸鹽衍生物7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(4-氰基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；或7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(4-硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸。
進(jìn)一步特別優(yōu)選以下的化合物7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸；或
7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-羧基甲氧基亞氨基乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸。
作為可以在本發(fā)明中使用的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，只要是具有β-內(nèi)酰胺酶抑制活性的化合物就沒有特別的限定。作為可以優(yōu)選使用的抑制劑，可以列舉選自由克拉維酸或起到與其同等作用的化合物、氨曲南、氯唑西林、可以與鋅離子螯合的螯合劑、舒巴坦、他唑巴坦、噻嗯霉素及卡蘆莫南構(gòu)成的群的至少1種。作為可以與鋅離子螯合的螯合劑，可以列舉乙二胺四乙酸(EDTA)、環(huán)己二胺四乙酸及巰基化合物等。作為巰基化合物，可以使用例如在日本專利申請(qǐng)?zhí)亻_2000-224998號(hào)公報(bào)及日本專利申請(qǐng)?zhí)亻_2001-299388號(hào)公報(bào)中公開的化合物。具體可以列舉巰基乙酸、巰基丙酸、特別是2-巰基丙酸，及這些酸的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋇鹽或季銨鹽；以及巰基乙醇等有機(jī)硫醇化合物等的含硫化合物。作為可以與鋅離子螯合的螯合劑，特別優(yōu)選EDTA。
特別優(yōu)選β-內(nèi)酰胺酶抑制劑選自由克拉維酸，氨曲南，氨曲南與乙二胺四乙酸的組合，克拉維酸與乙二胺四乙酸的組合，氨曲南與克拉維酸的組合，以及氨曲南與克拉維酸與乙二胺四乙酸的組合構(gòu)成的群。
作為本發(fā)明中可以優(yōu)選使用的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的組合，可以列舉以下的組合β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為上述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，且β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為至少1種選自由克拉維酸、氨曲南、乙二胺四乙酸及氯唑西林構(gòu)成的群的檢測(cè)試劑組合物；以及β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為上述通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，且β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為至少1種選自由克拉維酸、氨曲南、乙二胺四乙酸及氯唑西林構(gòu)成的群的檢測(cè)試劑組合物。
另外，還優(yōu)選檢測(cè)試劑組合物，其包含上述(c)組以及選自由以下(f)～(i)構(gòu)成的群的1組或1組以上(f)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南；(g)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為克拉維酸；(h)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南；(i)檢測(cè)試劑組合物，其包含β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與克拉維酸的組合。
本發(fā)明的檢測(cè)試劑組合物，優(yōu)選在以質(zhì)量比1∶10～100∶1的范圍使用β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑，更優(yōu)選在1∶1～50∶1的范圍使用，進(jìn)一步優(yōu)選在1∶1～1∶10的范圍使用。
本發(fā)明的檢測(cè)試劑組合物，可以將β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑溶解在水、磷酸鹽緩沖液、二甲亞砜以及這些的混合物等的溶劑中使用。其中，特別優(yōu)選二甲亞砜與磷酸鹽緩沖液的混合物。混合比沒有特別的限定。具體地講，溶解于溶劑中時(shí)，優(yōu)選使β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物的濃度成為0.025mg/mL～62.5mg/mL、更優(yōu)選為1.25mg/mL～12.5mg/mL，優(yōu)選使β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的濃度成為0.0125mg/mL～12.5mg/mL、更優(yōu)選為1.25mg/mL～12.5mg/mL，從而配制含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物的溶液。
本發(fā)明的檢測(cè)試劑組合物，優(yōu)選調(diào)節(jié)成pH6.0～8.0來使用。特別是作為β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物使用上述通式(1)表示的化合物時(shí)，優(yōu)選調(diào)節(jié)成pH5.5～8.5左右。作為β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物使用上述通式(2)表示的化合物時(shí)，優(yōu)選調(diào)節(jié)成pH6.0～8.0左右。
這樣配制的含有檢測(cè)試劑組合物的溶液中，還可以以不妨礙本發(fā)明效果的范圍的量添加聚乙烯吡咯烷酮、羥甲基纖維素、聚氯乙烯、甲基丙烯酸共聚物等的高分子等。通過添加這些高分子等，提高本發(fā)明的含有檢測(cè)試劑組合物的溶液的穩(wěn)定性，所以優(yōu)選。其中特別優(yōu)選甲基丙烯酸共聚物。
本發(fā)明中使用的樣品，可以例如使用棉棒等從患者的咽喉或鼻腔采樣。也可以使用尿、痰、膿等。樣品液可以溶解在水、磷酸鹽緩沖液、生理鹽水等的溶劑中來配制。樣品液優(yōu)選配制成該溶液中所含細(xì)菌的濃度成為104～1010CFU/mL。
在這樣配制的樣品液中，還可以以不妨礙本發(fā)明效果的范圍的量添加低聚糖、表面活性劑、糊精等。
本發(fā)明的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，只要是包含上述的檢測(cè)試劑組合物的試劑盒，其形態(tài)就沒有特別的限制，可以是圓盤形、圓盤與紙板聯(lián)用形、板形、條形等。作為可優(yōu)選使用的形態(tài)可以舉出板形。
另外，本發(fā)明的試劑盒，也可以根據(jù)需要包含由包含β-內(nèi)酰胺酶和本發(fā)明的檢測(cè)試劑組合物的溶液構(gòu)成的陽(yáng)性對(duì)照液，由包含β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物的溶液構(gòu)成的陰性對(duì)照液。
圖1表示本發(fā)明的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒的概略立體圖，但本發(fā)明并不特別限定于此。用圖1說明本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒，則本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒包含試樣容器1和基體3，其中，基體3收納在該試樣容器中、且具有多個(gè)試樣固定部分2。試樣固定部分2具有滴入所配試樣(樣品液和對(duì)照液)的開口部。另外，構(gòu)成本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒的試樣容器、基體及試樣固定部分，形成它們的材料沒有特別的限定。另外，它們的大小或形狀也沒有特別的限制。
本發(fā)明的試劑盒更優(yōu)選作為必要組分含有上述(c)組的檢測(cè)試劑組合物，還包含上述(a)、(b)、(d)或(e)組的任意1組或1組以上檢測(cè)試劑組合物。
并且，也優(yōu)選作為必要組分含有上述(d)組的檢測(cè)試劑組合物，還包含上述(a)、(b)、(c)或(e)組的任意1組或1組以上檢測(cè)試劑組合物的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒。
特別優(yōu)選含有全部上述(a)～(e)組檢測(cè)試劑組合物的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒。
另外，本發(fā)明的試劑盒也優(yōu)選包含1組或1組以上選自由上述(c)及(f)～(i)構(gòu)成的群的檢測(cè)試劑組合物。
另外，本發(fā)明的試劑盒更優(yōu)選作為必要組分含有上述(c)組的檢測(cè)試劑組合物，還含有上述(f)、(g)、(h)或(i)組的任意1組或1組以上檢測(cè)試劑組合物。
并且，還優(yōu)選作為必要組分含有上述(h)組的檢測(cè)試劑組合物，還含有上述(c)、(f)、(g)或(i)組的任意1組或1組以上檢測(cè)試劑組合物的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒。
特別優(yōu)選包含全部上述(c)及(f)～(i)組檢測(cè)試劑組合物的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒。
作為本發(fā)明的檢測(cè)試劑盒，在上述(a)～(i)組的本發(fā)明的檢測(cè)試劑組合物中，特別優(yōu)選作為β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物含有3-[2，4-二硝基苯乙烯基]-7-(2-噻嗯基乙酰胺基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸或7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸(以下稱為HMRZ化合物)的檢測(cè)試劑組合物。
利用這些本發(fā)明的試劑盒，可以一次性地迅速判別β-內(nèi)酰胺酶的A類、B類、C類、D類及ESBL。其結(jié)果，使用本發(fā)明的試劑盒就可以選擇適當(dāng)?shù)目咕鷦瑥亩梢缘玫礁叩闹委熜Ч?br> 本發(fā)明還涉及一種β-內(nèi)酰胺酶的檢測(cè)方法，其包括將含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液添加到含有前文所述的任意一種β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物的溶液中的步驟。
本發(fā)明的方法包括以下步驟在如上所述地配制的含由檢測(cè)試劑組合物的液體中添加含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液?？梢栽谝?guī)定的溫度下、例如在室溫下添加，經(jīng)過規(guī)定的時(shí)間、例如經(jīng)過30分鐘左右后，根據(jù)色調(diào)是否從黃色變化為紅色來進(jìn)行陽(yáng)性或陰性的判別。另外，也可以通過在特定波長(zhǎng)下測(cè)定色調(diào)變化來定量其活性。
通過使用本發(fā)明的方法，可以迅速地判別例如由產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶微生物引起的病患，如患有尿道感染和肺炎、由肺炎桿菌或大腸菌引起的院內(nèi)感染癥的患者的尿和痰中的β-內(nèi)酰胺酶。
實(shí)施例1.包含β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物的溶液的配制將以下的表1中所示的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物1.25mg和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑各1.25mg溶解在0.1mL二甲亞砜與0.9mL磷酸鹽緩沖液的混合溶劑中，配制包含β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物的溶液。
表1

表中，頭孢硝噻吩表示3-[2，4-二硝基苯乙烯基]-7-(2-噻嗯基乙酰胺基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸，HMRE化合物表示7-[2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-(1-羧基-1-甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]-3-(2，4-二硝基苯乙烯基)-3-頭孢環(huán)-4-羧酸，AZT表示氨曲南，EDTA表示乙二胺四乙酸，CVA表示克拉維酸。
2.板的制作將配制的含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物的溶液涂布在微孔板上，使每個(gè)孔的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物及β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的量各成為12.5μg。
3.含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液的配制作為不產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶的菌、產(chǎn)A類β-內(nèi)酰胺酶的菌、產(chǎn)B類β-內(nèi)酰胺酶的菌、產(chǎn)C類β-內(nèi)酰胺酶的菌及產(chǎn)ESBL菌，使用以下表2中記載的細(xì)菌，將其接種于磷酸鹽緩沖液，各配制108CFU/mL的樣品液。
表2

4.對(duì)β-內(nèi)酰胺酶的反應(yīng)性在前面配制的板上，微孔板的每個(gè)孔各接種50μL樣品液。通過觀察接種后經(jīng)過30分鐘之后的色調(diào)的變化，研究對(duì)β-內(nèi)酰胺酶的反應(yīng)性。
表3對(duì)β-內(nèi)酰胺酶的反應(yīng)性

+陽(yáng)性從黃色變成為紅色。
-陰性仍然是黃色，沒有變化。
±看到少許變色。
利用本發(fā)明，可以迅速且容易地、并且以高靈敏度檢測(cè)β-內(nèi)酰胺酶。而且，因?yàn)楸景l(fā)明聯(lián)用特定的檢測(cè)試劑組合物與特定的抑制劑，所以連β-內(nèi)酰胺酶的類別也可以判別，檢測(cè)誤差也小。特別是通過迅速的類別判別，可以選擇適當(dāng)?shù)目咕帲梢园l(fā)揮高的治療效果。
權(quán)利要求
1.一種β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物，在產(chǎn)色頭孢菌素法中使用，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物，其中，β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為下述通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，或?yàn)橄率鐾ㄊ?2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物 (通式(1)中，R是甲酰胺基或者是由式RuCH2CONH、RuOCH2CONH、RuCONH、RuCH(NH2)CONH或RuC(＝NOH)CONH(式中Ru是噻嗯基、苯基或萘基)表示的基團(tuán)，；Ar是2-位、4-位或2，4-位被氰基或硝基取代的苯基；以及X1是-S-或-SO-；) (通式(2)中，R1和R2可以相同或不同，各表示氫原子、硝基或氰基；R3表示C1～C6的烷基，其也可以是羧基取代烷基；R4表示氫原子或氨基；以及X2表示-S-或-SO-，但是，R1與R2不會(huì)同時(shí)為氫原子)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的檢測(cè)試劑組合物，其中，β-內(nèi)酰胺酶抑制劑是選自由克拉維酸或起到與其同樣作用的化合物、氨曲南、氯唑西林、可以與鋅離子螯合的螯合劑、舒巴坦、他唑巴坦、噻嗯霉素及卡蘆莫南構(gòu)成的群的至少1種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)試劑組合物，其中，β-內(nèi)酰胺酶抑制劑選自由克拉維酸，氨曲南，氨曲南與乙二胺四乙酸的組合，克拉維酸與乙二胺四乙酸的組合，氨曲南與克拉維酸的組合，以及氨曲南與克拉維酸與乙二胺四乙酸的組合構(gòu)成的群。
5.一種β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，其包含1組或1組以上選自由以下(a)～(e)構(gòu)成的群的檢測(cè)試劑組合物(a)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為權(quán)利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與乙二胺四乙酸的組合；(b)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為權(quán)利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為克拉維酸與乙二胺四乙酸的組合；(c)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為權(quán)利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與克拉維酸的組合；(d)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為權(quán)利要求2所述的通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與乙二胺四乙酸的組合；(e)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為權(quán)利要求2所述的通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與克拉維酸與乙二胺四乙酸的組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，其作為必要組分含有權(quán)利要求5所述的(c)組的檢測(cè)試劑組合物，還包含權(quán)利要求5所述的(a)、(b)、(d)或(e)組的任意1組或1組以上檢測(cè)試劑組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，其作為必需組分含有權(quán)利要求5所述的(d)組的檢測(cè)試劑組合物，還包含權(quán)利要求5所述的(a)、(b)、(c)或(e)組的任意1組或1組以上檢測(cè)試劑組合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，其含有權(quán)利要求5所述的全部(a)～(e)組的檢測(cè)試劑組合物。
9.一種β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，其包含選自由以下(f)、(g)、(h)及(i)構(gòu)成的群的1組或1組以上(f)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為權(quán)利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南；(g)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為權(quán)利要求2所述的通式(1)表示的化合物或其生理上可接受的鹽，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為克拉維酸；(h)檢測(cè)試劑組合物，其含有β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為權(quán)利要求2所述的通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南；(i)檢測(cè)試劑組合物，其包含β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物為權(quán)利要求2所述的通式(2)表示的化合物或其羧酸鹽衍生物，和β-內(nèi)酰胺酶抑制劑為氨曲南與克拉維酸的組合。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，還包含權(quán)利要求5所述的(c)組的檢測(cè)試劑組合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，其作為必要組分含有權(quán)利要求9所述的(h)組的檢測(cè)試劑組合物，還包含權(quán)利要求9所述的(f)、(g)或(i)組的任意1組或1組以上。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒，其含有權(quán)利要求9所述的全部(f)～(i)組。
13.一種β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法，其包括將含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液與權(quán)利要求1～4的任意1項(xiàng)所述的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物接觸。
14.一種β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法，其包括將含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液與權(quán)利要求1～4的任意1項(xiàng)所述的β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物接觸，該檢測(cè)試劑組合物固定在β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑盒的試樣固定部分。
15.一種β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法，其包括將含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液與β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物接觸，該檢測(cè)試劑組合物固定在權(quán)利要求5～12的任意1項(xiàng)所述的β-內(nèi)酰胺酶試劑盒的試樣固定部分。
全文摘要
本發(fā)明提供一種β－內(nèi)酰胺酶檢測(cè)試劑組合物，其作為β－內(nèi)酰胺酶檢測(cè)底物含有3－[2，4－二硝基苯乙烯基]－7－(2－噻嗯基乙酰胺基)－3－頭孢環(huán)－4－羧酸或7－[2－(2－氨基噻唑－4－基)－2－(1－羧基－1－甲基乙氧基亞氨基)乙酰胺基]－3－(2，4－二硝基苯乙烯基)－3－頭孢環(huán)－4－羧酸，作為β－內(nèi)酰胺酶抑制劑含有選自由克拉維酸、氨曲南、乙二胺四乙酸及氯唑西林構(gòu)成的群的至少一種，該組合物可以迅速且容易地、以高靈敏度判別β－內(nèi)酰胺酶。本發(fā)明還提供包含該檢測(cè)試劑組合物的檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明還提供一種β－內(nèi)酰胺酶檢測(cè)方法，其包括將含有分析目標(biāo)物質(zhì)的樣品液與該組合物接觸。
文檔編號(hào)C12Q1/34GK1729299SQ20038010718
公開日2006年2月1日 申請(qǐng)日期2003年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2002年10月29日
發(fā)明者村田敦 申請(qǐng)人:昭和藥品化工株式會(huì)社