專利名稱：含有多種生物活性物質(zhì)制劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有多種生物活性物質(zhì)制劑的制備方法，更具體地說，本發(fā)明涉及通過采用與傳統(tǒng)工藝截然不同的創(chuàng)新方法，從鹿茸和鹿血中提取多種生物活性物質(zhì)，并將其廣泛應(yīng)用于健康、保健、美容、營養(yǎng)產(chǎn)品中的工藝及方法。
發(fā)明技術(shù)背景鹿茸和鹿血作為中國中醫(yī)藥中著名的傳統(tǒng)原料，已經(jīng)廣泛應(yīng)用有千年歷史，其卓著的功效使其作為中國傳統(tǒng)醫(yī)藥的滋補(bǔ)圣藥得到廣泛使用而歷久不衰。
現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)技術(shù)對(duì)鹿茸成份進(jìn)行深入研究后發(fā)現(xiàn)，鹿茸發(fā)揮卓著滋補(bǔ)功效的主要成分是鹿茸中含有的多種生長因子以及其他生物活性物質(zhì)和含量豐富的氨基酸和微量元素。鹿茸中含有多種人體新陳代謝所必需的多種生長因子，如神經(jīng)生長因子(NGF)，成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)，上皮細(xì)胞生長因子(EGF)等，同時(shí)還含有多種雄性激素、雌性激素、前列腺素、神經(jīng)髓鞘磷脂、氨基酸等其他生物活性物質(zhì)。
傳統(tǒng)的鹿茸加工方式是將新鮮收割的鹿茸在開水中蒸煮，然后再烘干或曬干后，以干燥的形式存放或運(yùn)輸。在作為藥材使用時(shí)多用酒精浸泡提取，或與其他藥材一起高溫煎煮，這種形式的加工方法，由于高溫而使各種生物活性物質(zhì)滅活，最終只能殘余微量生長因子或生物活性物質(zhì)，大幅度減低了鹿茸本應(yīng)該擁有的更好作用。
鹿血和鹿茸一樣，含有多種生物活性物質(zhì)，傳統(tǒng)制備方式是直接浸泡制備藥酒，由于寄生蟲或微生物等的污染，這種服用方式既不衛(wèi)生也不安全。
鹿茸和鹿血均含有豐富的生物活性物質(zhì)，這些生物活性物質(zhì)大多數(shù)是人體代謝所必須，而又是隨著年齡增長而分泌減少的生長因子，但目前的加工技術(shù)和方法不能將這兩種珍貴的藥材發(fā)揮應(yīng)有的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問題是根據(jù)鹿茸、鹿血的組成特征，應(yīng)用現(xiàn)代新技術(shù)設(shè)計(jì)出能最大保存其中生物活性物質(zhì)，程序簡(jiǎn)單、安全有效的方法，從鹿茸和鹿血中制備含有多種生物活性物質(zhì)的制劑，并將這種制劑廣泛應(yīng)用于健康、保健、美容、營養(yǎng)等產(chǎn)品。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所提出的技術(shù)方案，其特征是，在鹿茸粉碎、浸泡、沉淀、濃縮過程中全部采用低溫方式，避免高溫對(duì)生物活性物質(zhì)的損害，并通過雙層切面交錯(cuò)超濾分離技術(shù)提取多數(shù)生物活性物質(zhì)，并通過冷凍干燥方式制備冷凍干燥粉未狀物。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問題所提出的技術(shù)方案，其特征是，以帶有抗凝溶液或經(jīng)抗凝處理的容器收集鹿血，通過冷凍離心方式，沉淀大部份紅細(xì)胞及血紅蛋白，采用緩沖液稀釋血漿成份，用低分子量的超濾膜，并應(yīng)用雙層切面交錯(cuò)超濾裝置對(duì)血漿成份進(jìn)行分離和濃縮，提取多數(shù)生物活性物質(zhì)，并通過冷凍干燥方式將濃縮物直接制備冷凍干燥粉狀物質(zhì)。
根據(jù)分析鹿茸和鹿血中生物活性成分，發(fā)現(xiàn)其主要活性成份是以7,000-60,000分子量的活性多肽形式存在，而其他生物活性物質(zhì)分子量通常小于80,000，因此，設(shè)計(jì)分離提取其中生物活性物質(zhì)方案時(shí)可以此作為重要依據(jù)。
此外，鹿茸的粉碎物和鹿血都屬于粘滯度較高的液體，采用通常的分子篩式超濾裝置進(jìn)行分離，很容易阻塞超濾膜孔，導(dǎo)致分離效率降低，因此采用國際上最新分離技術(shù)—切面交錯(cuò)流體超濾分離技術(shù)，才能取得比較良好的效果。
另外，為保存生物活性物質(zhì)采用的浸泡液、稀釋液PH值既不能過低＜5，又不能過高＞9，因?yàn)樗嵝曰驂A性溶液都可能破壞生物活性物質(zhì)。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，從鹿茸制備含有多種生物活性物質(zhì)的方法是在低溫環(huán)境下將新鮮鹿茸冷凍干燥，并在低溫環(huán)境下粉碎，一般在2℃～8℃環(huán)境下進(jìn)行粉碎，最好是在4℃～6℃環(huán)境下。在將鹿茸粉碎成細(xì)粉后(20目～200目，最好40目～60目)，用無菌緩沖液或無菌去離子水或無菌蒸鎦水浸泡，浸泡液的PH值為5～9，最好6.5～7.5。浸泡鹿茸粉碎物的次數(shù)從1次～5次，最好是2次～3次，每次浸泡時(shí)間一般12～36小時(shí)，最好是20～25小時(shí)，浸泡液體積最好是鹿茸粉碎物的1倍～9倍，最好是3～5倍，浸泡后采用過濾方法或其他方法收集浸泡液，數(shù)次收集的浸泡液合併。浸泡液用冷凍高速離心機(jī)離心，轉(zhuǎn)速一般2000～25000轉(zhuǎn)/分，最好14000～18000轉(zhuǎn)/分，沉淀浸泡液中雜質(zhì)，收集離心上清液，用超濾裝置進(jìn)行分離和濃縮，用于分離的超濾膜一般采用分子量40,000～120,000的超濾膜，任何無毒、醫(yī)藥等級(jí)的超濾膜均可以應(yīng)用。分離超濾膜的分子量最好是90,000～100,000?？梢圆捎萌魏畏厢t(yī)療等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的超濾分離設(shè)備或裝置，最好采用切面交錯(cuò)流體超濾(TFF)設(shè)備或裝置，因?yàn)榍忻娼诲e(cuò)流體設(shè)計(jì)可以大幅度減少超濾膜網(wǎng)孔阻塞，提高分離效率，在分離后采用低分子量的超濾膜濃縮，一般采用分子量4000～10,000，最好采用分子量5000～6000超微濾膜，濃縮物直接放入冷凍干燥裝置冷凍干燥成粉狀物。
本發(fā)明的技術(shù)特征是，從鹿血中制備含有多種生物活性物質(zhì)的方法是，用帶有抗凝液或經(jīng)抗凝處理的容器，將收集的經(jīng)抗凝處理的鹿血放入冷凍離心機(jī)中進(jìn)行離心，離心速度1500～5000轉(zhuǎn)/分，最好2500～3000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間15～45分鐘，最好是20～30分鐘，收集離心上清液，即血漿成分，加1～5倍量PH值6～8的緩沖液至血漿成分以稀釋，稀釋后的混合液采用分子量40,000～90,000的超微濾膜進(jìn)行分離，最好是50,000～80,000分子量超微濾膜，可以采用任何醫(yī)用等級(jí)的超微濾膜裝置，最好采用切面交錯(cuò)流體(TFF)裝置或設(shè)備，分離后的分離液用低分子量超微濾膜濃縮，濾膜分子量4000～7000，濃縮至原血漿容量1/2-3/4。濃縮物直接放入冷凍干燥裝置內(nèi)冷凍干燥成粉狀物。
采用上述工藝和方法制備的含有多種生長因子和生物活性物質(zhì)的制劑內(nèi)含有豐富的神經(jīng)生長因子、細(xì)胞生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、表皮細(xì)胞生長因子、多種氨基酸、神經(jīng)髓鞘磷脂、前列腺素、雄雌性激素、膽堿多糖，而且制劑中的神經(jīng)生長因子(NGF)還天然結(jié)合有神經(jīng)節(jié)苷脂，能協(xié)同神經(jīng)生長因子發(fā)揮更大作用。
上述的多種生長因子是一類多肽類生物活性物質(zhì)，具有很強(qiáng)的生物活性，對(duì)人體發(fā)揮細(xì)胞生長分化、調(diào)控、修復(fù)作用。
多種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，這類生物活性物質(zhì)可以幫助人體恢復(fù)和修復(fù)各種損傷的組織和器官功能，促進(jìn)細(xì)胞生長，促進(jìn)新陳代謝，可用于治療神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病、腦外傷、貧血、糖尿病。還可以幫助人體強(qiáng)壯機(jī)體，延緩衰老。
這類生物活性物質(zhì)可以廣泛應(yīng)用于各類健康、保健、營養(yǎng)、營養(yǎng)產(chǎn)品中，作為添加劑與上述產(chǎn)品聯(lián)合應(yīng)用，以發(fā)揮生物活性物質(zhì)的強(qiáng)大功效。
本發(fā)明與已有技術(shù)相比，能從鹿茸和鹿血中制備含有多種生物活性物質(zhì)和多種生長因子的制劑，采用本發(fā)明的方法和工藝，不但能避免損害鹿茸和鹿血的生物活性物質(zhì)，而且采用的是最新技術(shù)，工藝簡(jiǎn)單，效率高，生產(chǎn)制備的產(chǎn)品純度高，不含其他雜質(zhì)，能廣泛推廣和應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明實(shí)施例1鹿茸提取物冷凍干燥粉制備將新鮮的鹿茸提取物冷凍干燥后，在低溫下進(jìn)行粉碎，將粉碎的鹿茸漿加入到相當(dāng)于鹿茸漿5倍體積的無菌蒸鎦水浸泡36小時(shí)，用過濾的方式收集過濾液并低溫保存(4℃冰箱中保存)，濾渣部份再次用相當(dāng)于濾渣部份2倍量的無菌蒸鎦水浸泡，再次用過濾的方式收集過濾液，兩次過濾液合并，用高速離心方法沉淀雜質(zhì)，離心速度為16000轉(zhuǎn)/分，在4℃低溫環(huán)境下冷凍離心，收集離心上清液，采用分子量5000的超微濾膜，在交錯(cuò)切面超微過濾設(shè)備上濃縮至過濾液體積10％，濃縮物直接放在冷凍干燥機(jī)上冷凍干燥成粉未。
實(shí)施例2鹿血提取物冷凍干燥粉制備用帶抗凝液或經(jīng)抗凝液處理過的注射器從活鹿大靜脈抽取300ml鹿血，收集多份鹿血，加入放置有液體抗凝液的容器內(nèi)，收集的鹿血直接用冷凍離心機(jī)進(jìn)行離心，離心速度3000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間15分鐘，以沉淀紅細(xì)胞及血紅蛋白，收集離心機(jī)上清液，即血漿部份，將收集的鹿血血漿部份放入交錯(cuò)切面超濾分離設(shè)備的容器內(nèi)，加入相當(dāng)于血漿容量2倍量的緩沖液，用分子量為5000的超微濾膜濾器，采用交替切面超濾濃縮方式進(jìn)行濃縮，當(dāng)濃縮物濃縮至原來血漿容積的一半量時(shí)，停止?jié)饪s過程，將濃縮物直接送到冷凍干燥機(jī)進(jìn)行冷凍干燥，得到冷凍干燥粉。
實(shí)施例3對(duì)比測(cè)試制劑中總氮含量用實(shí)施例1中提取的鹿茸提取物冷凍干燥粉測(cè)定總含氮量為15％，用市售鹿茸粉采用傳統(tǒng)加熱浸泡法制備制劑測(cè)定總氮含量為6％，本發(fā)明制備方法制劑中含氮量增加1倍以上。經(jīng)活性測(cè)定，活性比傳統(tǒng)加熱浸泡法提高4.5倍以上。
實(shí)施例4神經(jīng)生長因子(NGF)測(cè)定用實(shí)例1中提取的制劑進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)用280mm的紫外控測(cè)儀，該制劑經(jīng)電泳分析，得到三條帶，經(jīng)對(duì)比分別為PH9.15，9.45和9.64，分子量為14500的神經(jīng)生長因子。
實(shí)施例5用鹿茸和鹿血提取物冷凍干燥粉制備口服制劑取用本發(fā)明實(shí)施例1制備的鹿茸提取物冷凍干燥粉300mg，取用本發(fā)明實(shí)例2制備的鹿血提取物冷凍干燥粉200mg，直接灌裝膠囊，每天空腹服一顆。
實(shí)施例6用本發(fā)明實(shí)施例5制備的膠囊給10名糖尿病周圍神經(jīng)炎患者服用，病人年令52～64歲，均患有II型糖尿病并伴有周圍神經(jīng)炎，患者每天空腹時(shí)服一顆，連續(xù)服用12周，80％病人周圍神經(jīng)炎癥狀好轉(zhuǎn)，70％的病人自訴肌肉變有力，體力改善，睡眠狀態(tài)改善，90％的患者自訴性功能增強(qiáng)，性敏感性提高。
權(quán)利要求
1.一種含有多種生物活性物質(zhì)制劑的制備方法，更具體地說，是一種通過采用與傳統(tǒng)工藝截然不同的創(chuàng)新方法，從鹿茸和鹿血中提取多種生物活性物質(zhì)并保持其生物活性的工藝和方法，其特征是，在鹿茸和/或鹿血粉碎、浸泡、沉淀、濃縮過程中全部采用低溫方式，避免高溫對(duì)生物活性物質(zhì)的損害，并通過雙層切面交錯(cuò)超濾分離技術(shù)提取多種生物活性物質(zhì)，通過冷凍干燥方式制備冷凍干燥粉末狀物。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，從鹿茸制備含有多種生物活性物質(zhì)的方法是在低溫環(huán)境下將新鮮鹿茸冷凍干燥，并在低溫環(huán)境下粉碎，一般在2℃～8℃環(huán)境下進(jìn)行粉碎，最好是在4℃～6℃環(huán)境下。在將鹿茸粉碎成細(xì)粉后(20目～200目，最好40目～60目)，用無菌緩沖液或無菌去離子水或無菌蒸鎦水浸泡，浸泡液的PH值為5～9，最好6.5～7.5。浸泡鹿茸粉碎物的次數(shù)從1次～5次，最好是2次～3次，每次浸泡時(shí)間一般12～36小時(shí)，最好是20～25小時(shí)，浸泡液體積最好是鹿茸粉碎物的1倍～9倍，最好是3～5倍，浸泡后采用過濾方法或其他方法收集浸泡液，數(shù)次收集的浸泡液合併。浸泡液用冷凍高速離心機(jī)離心，轉(zhuǎn)速一般2000～25000轉(zhuǎn)/分，最好14000～18000轉(zhuǎn)/分，沉淀浸泡液中雜質(zhì)，收集離心上清液，用超濾裝置進(jìn)行分離和濃縮，用于分離的超濾膜一般采用分子量40,000～120,000的超濾膜，任何無毒、醫(yī)藥等級(jí)的超濾膜均可以應(yīng)用。分離超濾膜的分子量最好是90,000～100,000。可以采用任何符合醫(yī)療等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的超濾分離設(shè)備或裝置，最好采用切面交錯(cuò)流體超濾(TFF)設(shè)備或裝置，因?yàn)榍忻娼诲e(cuò)流體設(shè)計(jì)可以大幅度減少超濾膜網(wǎng)孔阻塞，提高分離效率，在分離后采用低分子量的超濾膜濃縮，一般采用分子量4000～10,000，最好采用分子量5000～6000超微濾膜，濃縮物直接放入冷凍干燥裝置冷凍干燥成粉狀物。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，以帶有抗凝溶液或經(jīng)抗凝處理的容器收集鹿血，通過冷凍離心方式，沉淀大部份紅細(xì)胞及血紅蛋白，用緩沖液稀釋血漿成份，采用低分子量的超濾膜，最好應(yīng)用雙層切面交錯(cuò)超濾裝置對(duì)血漿成份進(jìn)行分離和濃縮，提取多數(shù)生物活性物質(zhì)，并通過冷凍干燥方式將濃縮物直接制備成冷凍干燥粉狀物質(zhì)。
4.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，從鹿血中制備含有多種生物活性物質(zhì)的方法是，用帶有抗凝液或經(jīng)抗凝處理的容器，將收集的經(jīng)抗凝處理的鹿血放入冷凍離心機(jī)中進(jìn)行離心，離心速度1500～5000轉(zhuǎn)/分，最好2500～3000轉(zhuǎn)/分，離心時(shí)間15～45分鐘，最好是20～30分鐘，收集離心上清液，即血漿成分，加1～5倍量PH值6～8的緩沖液至血漿成分以稀釋，稀釋后的混合液采用分子量40,000～90,000的超微濾膜進(jìn)行分離，最好是50,000～80,000分子量超微濾膜，可以采用任何醫(yī)用等級(jí)的超微濾膜裝置，最好采用切面交錯(cuò)流體(TFF)裝置或設(shè)備，分離后的分離液用低分子量超微濾膜濃縮，濾膜分子量4000～7000，濃縮至原血漿容量1/2-3/4。濃縮物直接放入冷凍干燥裝置內(nèi)冷凍干燥成粉狀物。
5.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，鹿茸和鹿血中生物活性成分，主要是以7000-60,000分子量的活性多肽形式存在，而其他生物活性物質(zhì)分子量通常小于80,000，在設(shè)計(jì)分離提取其中生物活性物質(zhì)方案時(shí)采用分子量80,000分子量的超濾膜作為過濾用濾膜，而采用分子量＜7000的超濾膜作為濃縮用濾膜。
6.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，鹿茸的粉碎物和鹿血都屬于粘滯度較高的液體，采用通常的分子篩式超濾裝置進(jìn)行分離，很容易阻塞超濾膜孔，導(dǎo)致分離效率降低，因此采用國際上最新分離技術(shù)—雙層切面交錯(cuò)流體超濾分離技術(shù)，能顯著提高分離效率，提高收獲率，是優(yōu)選方法。
7.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，為保存生物活性物質(zhì)的生物活性，采用的浸泡液、稀釋液的PH值都既不能過低＜5，又不能過高＞9，因?yàn)樗嵝曰驂A性溶液都可能破壞生物活性物質(zhì)的活性。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，采用上述工藝和方法制備的含有多種生長因子和生物活性物質(zhì)的制劑內(nèi)，含有豐富的神經(jīng)生長因子、細(xì)胞生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子、多種氨基酸、神經(jīng)髓鞘磷脂、前列腺素、雄雌性激素、膽堿多糖，而且制劑中的神經(jīng)生長因子(NGF)還天然結(jié)合有神經(jīng)節(jié)苷脂，能協(xié)同神經(jīng)生長因子發(fā)揮更大作用。上述的多種生長因子是一類多肽類生物活性物質(zhì)，具有很強(qiáng)的生物活性，對(duì)人體發(fā)揮細(xì)胞生長分化、調(diào)控、修復(fù)作用。這類生物活性物質(zhì)可以幫助人體恢復(fù)和修復(fù)各種損傷的組織和器官功能，促進(jìn)細(xì)胞生長，促進(jìn)新陳代謝，可用于治療神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病、腦外傷、貧血、糖尿病。還可以幫助人體強(qiáng)壯機(jī)體，延緩衰老。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，采用本發(fā)明方法制備的含有多種生物活性物質(zhì)的制劑，可以單獨(dú)制備口服制劑用于與人體健康相關(guān)的用途，這類生物活性物質(zhì)也可以廣泛應(yīng)用于各類健康、保健、營養(yǎng)、營養(yǎng)產(chǎn)品中，作為添加劑與上述產(chǎn)品聯(lián)合應(yīng)用，以發(fā)揮生物活性物質(zhì)的強(qiáng)大功效。
全文摘要
一種通過采用與傳統(tǒng)工藝截然不同方式從鹿茸和鹿血中提取多種生物活性物質(zhì)，并保持其生物活性的工藝和方法，其特征是，在鹿茸和/或鹿血粉碎、浸泡、沉淀、濃縮過程中全部采用低溫方式，避免高溫環(huán)境對(duì)生物活性物質(zhì)的損害，并采用雙層切面交錯(cuò)超濾分離方式分離、提取生物活性物質(zhì)，制備的生物活性物質(zhì)可以廣泛應(yīng)用于與健康相關(guān)的領(lǐng)域。
文檔編號(hào)A23L1/30GK1557341SQ20041001586
公開日2004年12月29日 申請(qǐng)日期2004年1月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月15日
發(fā)明者高春平 申請(qǐng)人:高春平