專利名稱：用復(fù)合酶分步定向酶解魚(yú)皮膠原蛋白制取活性肽的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用復(fù)合酶分步定向酶解魚(yú)皮膠原蛋白制取降血壓活性肽的方法。
背景技術(shù)：
目前已有人以大豆、乳酪蛋白、沙丁魚(yú)肉、金槍魚(yú)肉等為原料，采用胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、Alcalase堿性蛋白酶等水解制取了具有降血壓作用的活性肽。所制得的產(chǎn)品主要作為一種氨基酸營(yíng)養(yǎng)功能食品。國(guó)內(nèi)許多人正在以不同的原料為對(duì)象開(kāi)發(fā)研制具有降血壓功能的活性肽，目前存在的主要問(wèn)題是所用的原料價(jià)格高，而且酶解效果不佳，活性肽的活力低，得率低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種用復(fù)合酶分步定向酶解魚(yú)皮膠原蛋白制取活性肽的方法，它能克服現(xiàn)有技術(shù)的上述缺點(diǎn)。
一種用復(fù)合酶分步定向酶解魚(yú)皮膠原蛋白制取活性肽的方法，其特征是將魚(yú)皮膠原蛋白放入磷酸緩沖溶液中，配制成濃度為0.04-0.06kg/l的溶液，在40-50℃下，按3000-5000U/g底物的比例加入菠蘿蛋白酶，恒溫下攪拌，酶解時(shí)間3-5小時(shí)，然后在95-110℃下滅酶4-6分鐘，冷卻到50-60℃；用堿調(diào)pH至7.0-8.0，按5000-7000U/g底物的比例加入Alcalase堿性蛋白酶，在50-60℃的恒溫下，攪拌酶解1-3小時(shí)，在95-110℃℃下滅酶4-6分鐘，冷卻至常溫，凍干。
本發(fā)明利用廢棄物魚(yú)皮膠原蛋白以復(fù)合酶分步定向水解生產(chǎn)降血壓活性肽，所得產(chǎn)品價(jià)格極低，且活力高，得率高，易于得到分子量分布更合理的活性肽，以對(duì)ACE的抑制率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，能客觀簡(jiǎn)便地測(cè)定水解液的體外降血壓效果。
具體實(shí)施例方式
將魚(yú)皮膠原蛋白在水浴中用0.02M、pH為4.5的磷酸緩沖液溶解，得到濃度為0.05kg/l的溶液，將此溶液預(yù)熱到45℃后，按4000U/g底物比例加入菠蘿蛋白酶，攪拌，在45℃恒溫下酶解4h；在100℃下滅酶5min，冷卻至55℃，用NaOH調(diào)pH至7.5，按6000U/g底物的比例加入Alcalase 2.4L蛋白酶，攪拌，55℃恒溫下酶解2h，100℃滅酶5min，冷卻至常溫，凍干，即得到具有降血壓活性蛋白質(zhì)酶解產(chǎn)物，該產(chǎn)物經(jīng)過(guò)分離純化即得到降血壓活性肽。
本發(fā)明采用堿性蛋白酶對(duì)魚(yú)皮膠原蛋白(包括鯽魚(yú)、鳙魚(yú)、羅非魚(yú)及鱸魚(yú)等魚(yú)皮膠原蛋白)進(jìn)行酶解。由于單一酶系往往水解效果不佳，因此采用復(fù)合酶解的方式。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)在不同酶解過(guò)程中時(shí)間、溫度、pH、底物濃度及酶用量等因素與降血壓活性肽的得率、活性、化學(xué)組成以及分子量分布等的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
本發(fā)明以水解物對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)的抑制率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，從六種蛋白酶中篩選到了具有最佳水解效果的兩種酶，又采用正交試驗(yàn)確定了該兩種酶的最佳水解條件，然后進(jìn)行復(fù)合水解試驗(yàn)，最后確定了分步定向水解膠原蛋白的方法。
權(quán)利要求
1.一種用復(fù)合酶分步定向酶解魚(yú)皮膠原蛋白制取活性肽的方法，其特征是將魚(yú)皮膠原蛋白放入磷酸緩沖溶液中，配制成濃度為0.04-0.06kg/l的溶液，在40-50℃下，按3000-5000U/g底物的比例加入菠蘿蛋白酶，恒溫下攪拌，酶解時(shí)間3-5小時(shí)，然后在95-110℃下滅酶4-6分鐘，冷卻到50-60℃；用堿調(diào)pH至7.0-8.0，按5000-7000U/g底物的比例加入Alcalase堿性蛋白酶，在50-60℃的恒溫下，攪拌酶解1-3小時(shí)，在95-110℃下滅酶4-6分鐘，冷卻至常溫，凍干。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的魚(yú)皮膠原蛋白為鯽魚(yú)、鳙魚(yú)、羅非魚(yú)及鱸魚(yú)魚(yú)皮膠原蛋白。
全文摘要
一種用復(fù)合酶分步定向酶解魚(yú)皮膠原蛋白制取活性肽的方法，其特征是將魚(yú)皮膠原蛋白放入磷酸緩沖溶液中，配制成濃度為0.04－0.06kg/l的溶液，在40－50℃下，按3000－5000U/g底物的比例加入菠蘿蛋白酶，恒溫下攪拌，酶解時(shí)間3－5小時(shí)，然后在95－110℃下滅酶4－6分鐘，冷卻到50－60℃；用堿調(diào)pH至7.0－8.0，按5000－7000U/g底物的比例加入Alcalase堿性蛋白酶，在50－60℃的恒溫下，攪拌酶解1－3小時(shí)，在95－110℃℃下滅酶4－6分鐘，冷卻至常溫，凍干。本發(fā)明利用廢棄物魚(yú)皮膠原蛋白以復(fù)合酶分步定向水解生產(chǎn)降血壓活性肽，所得產(chǎn)品價(jià)格極低，且活力高，得率高，易于得到分子量分布更合理的活性肽。
文檔編號(hào)C12P21/00GK1560270SQ20041002369
公開(kāi)日2005年1月5日 申請(qǐng)日期2004年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月12日
發(fā)明者曾名 , 曾名湧, 陳勝軍, 李八方, 劉尊英, 董士遠(yuǎn) 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)