專利名稱：一種細(xì)胞因子基因型檢測(cè)芯片及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因分析檢測(cè)產(chǎn)品，具體地說是基因檢測(cè)芯片，更具體的說是適用于檢測(cè)腫瘤壞死因子(TNF)、白介素6(IL-6)基因型的基因檢測(cè)芯片。本發(fā)明還涉及檢測(cè)TNF和IL-6基因型的方法。
背景技術(shù)：
本世紀(jì)80年代以來，隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，對(duì)TNF、IL-6研究不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)其具有多種生物學(xué)活性，除對(duì)免疫細(xì)胞有活化、促增殖和分化等作用外，對(duì)某些非腫瘤細(xì)胞和大多數(shù)腫瘤細(xì)胞具有誘導(dǎo)凋亡(Apoptosis)的作用。當(dāng)機(jī)體處于炎癥如病毒、細(xì)菌、寄生蟲感染，或創(chuàng)傷等病理狀態(tài)時(shí)，這些作用對(duì)清除受損細(xì)胞、維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境平衡，起著重要的作用。而TNF和IL-6基因型不同，腫瘤壞死因子、白介素6等細(xì)胞因子的分泌量明顯不同，這對(duì)醫(yī)學(xué)研究和新藥開發(fā)、評(píng)價(jià)以及個(gè)體化治療等具有重要意義(Anesth Analg 2003；97944-949)。因此對(duì)檢測(cè)TNF和IL-6基因型方法的研究備受關(guān)注。但目前測(cè)定TNF和IL-6基因型的方法主要采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)、手工或自動(dòng)測(cè)序、序列特異性引物PCR等方法，不僅操作繁瑣，檢測(cè)周期長(zhǎng)，而且影響檢測(cè)結(jié)果的因素多，不易控制，難以滿足實(shí)際應(yīng)用的要求，使藥物研究單位和臨床至今還無法廣泛開展有關(guān)TNF和IL-6基因型的檢測(cè)。
基因芯片是近幾年在高科技領(lǐng)域內(nèi)出現(xiàn)的最具時(shí)代特征的重大科技進(jìn)展之一。它是將能反映樣本中大量基因信息的基因探針(寡核苷酸探針、cDNA克隆、PCR產(chǎn)物等)，有序固定在固相支持物(如醛基、氨基、巰基、羧基等活性基團(tuán)修飾的載玻片或硅片、尼龍膜、硝酸纖維素膜)上形成陣列，通過與實(shí)際樣本(或擴(kuò)增產(chǎn)物)進(jìn)行雜交反應(yīng)，只需一次實(shí)驗(yàn)，就可高通量獲得所有待檢基因的信息。這種平行檢測(cè)、高信息通量的特點(diǎn)使其在基因表達(dá)、基因多態(tài)性檢測(cè)等方面的應(yīng)用受到廣泛重視。用基因芯片檢測(cè)TNF和IL-6基因型，發(fā)揮基因芯片檢測(cè)操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確的特點(diǎn)，對(duì)于藥物研究單位和臨床的相關(guān)應(yīng)用具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于檢測(cè)腫瘤壞死因子(TNF)、白介素6(IL-6)基因型的基因檢測(cè)芯片。
本發(fā)明提供一種用基因檢測(cè)芯片檢測(cè)腫瘤壞死因子(TNF)、白介素6(IL-6)基因型的檢測(cè)方法本發(fā)明提供的基因芯片，包括固相支持物和有序固定在所述固相支持物上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包含以下序列或其互補(bǔ)序列中的包括TNF-α/-308(G/A)，TNF-α/-238(G/A)，IL-6/-597(G/A)，IL-6/-572(G/C)，IL-6/-174(G/C)突變位點(diǎn)在內(nèi)的14-20個(gè)連續(xù)核苷酸TNF-α/-308GataggttttgaggggcatgGggacggggttcagcctcca(SEQ ID NO1)TNF-α/-308AataggttttgaggggcatgAggacggggttcagcctcca(SEQ ID NO2)TNF-α/-238GcagaagacccccctcggaatcGgagcagggaggatggggagt(SEQ ID NO3)TNF-α/-238AcagaagacccccctcggaatcAgagcagggaggatggggagt(SEQ ID NO4)IL-6/-597GaactgcacgaaatttgaggGtggccaggcagttctacaac(SEQ ID NO5)IL-6/-597AaactgcacgaaatttgaggAtggccaggcagttctacaac(SEQ ID NO6)IL-6/-572GccaggcagttctacaacagccGctcacagggagagccagaac(SEQ ID NO7)IL-6/-572CccaggcagttctacaacagccCctcacagggagagccagaac(SEQ ID NO8)IL-6/-174GcttttccccctagttgtgtcttgcGatgctaaaggacgtcacatt(SEQ ID NO9)IL-6/-174CcttttccccctagttgtgtcttgcCatgctaaaggacgtcacatt(SEQ ID NO10)為了增強(qiáng)檢測(cè)信號(hào)的強(qiáng)度，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確率，所述TNF-α/-308(G/A)，TNF-α/-238(G/A)，IL-6/-597(G/A)，IL-6/-572(G/C)，IL-6/-174(G/C)突變位點(diǎn)序列中大寫字母表示的堿基最好位于所述探針的中部。
所述探針還可以在其5′端包含一段氨基修飾的16聚的聚脫氧胸苷酸(聚dT)。
所述固相支持物可采用各種基因芯片領(lǐng)域的常用材料，如但不限于尼龍膜，經(jīng)活性基團(tuán)修飾的玻片或硅片、未修飾的玻片、塑料片等。
上述修飾的玻片或硅片的活性基團(tuán)如但不限于醛基、氨基、異硫氰酸基等，優(yōu)選醛基修飾的玻片或硅片。
本發(fā)明基因芯片的制備可按照生物芯片的常規(guī)制造方法進(jìn)行。例如，如果固相支持物采用的是修飾玻片或硅片，探針的5′端含有氨基修飾的聚dT串，可將寡核苷酸探針配制成溶液，然后用點(diǎn)樣儀將其點(diǎn)在修飾玻片或硅片，排列成預(yù)定的序列或陣列，然后通過放置過夜來固定，就可得到本發(fā)明的基因芯片。如果寡核苷酸探針不含氨基修飾，則其制備方法也可參照王申五主編的《基因診斷技術(shù)-非放射性操作手冊(cè)》；J.L.Derisi，V.R.Iyer，P.O.Brown.Exploring themetablic and genetic control of gene expression on a genomic scale.Science，1997，278680和馬立人，蔣中華主編.生物芯片.北京化學(xué)工業(yè)出版社，2000，1-130。
本發(fā)明還提供了一種非以診斷為目的檢測(cè)TNF-α和IL-6基因型的方法，包括以下步驟(1)制備染色體DNA；(2)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法擴(kuò)增TNF和IL-6基因中包含TNF-α/-308(G/A)，TNF-α/-238(G/A)，IL-6/-597(G/A)，IL-6/-572(G/C)，IL-6/-174(G/C)等的基因片段；(3)標(biāo)記上述擴(kuò)增產(chǎn)物；(4)將上述標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物與基因芯片雜交；(5)檢測(cè)基因芯片的雜交信號(hào)。
制備用于PCR擴(kuò)增的染色體DNA的方法有很多，可以從全血中制備、也可以從發(fā)根中制備，還可以從口腔粘膜的脫落物中制備。具體方法可參閱文獻(xiàn)(丁振諾，蘇明權(quán)主編.《臨床PCR基因診斷技術(shù)》，世界圖書出版公司.1998年第一版)。
用PCR方法擴(kuò)增染色體基因特定片段的方法已經(jīng)是本領(lǐng)域公知技術(shù)。其中的關(guān)鍵在于引物設(shè)計(jì)，有關(guān)引物設(shè)計(jì)的方法、軟件均可以從商業(yè)途徑獲得。本發(fā)明涉及的TNF和IL-6基因的擴(kuò)增引物和體系可根據(jù)以上方法及有關(guān)文獻(xiàn)(KB穆里斯，F(xiàn).費(fèi)里，R.吉布斯等主編《PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)》，科學(xué)出版社)方法由使用者獨(dú)立完成。
對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記可以通過采用5′端帶標(biāo)記基團(tuán)的引物進(jìn)行擴(kuò)增的方法，也可通過在擴(kuò)增過程中摻入帶標(biāo)記基團(tuán)的單核苷酸的方法加以實(shí)現(xiàn)，所述標(biāo)記基團(tuán)包括但不限于地高辛分子(DIG)、生物素分子(Bio)、熒光素及其衍生物分子(FITC等)、其他熒光分子(如Cy3、Cy5等)、堿性磷酸酶(AP)、辣根過氧化物酶(HRP)等。這些標(biāo)記及其標(biāo)記方法以及各標(biāo)記物的檢測(cè)方法都已是本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)技術(shù)，也可以參照王申五主編的《基因診斷技術(shù)-非放射性操作手冊(cè)》；J.薩姆布魯克，E.F.弗里奇，T.曼尼阿蒂斯主編，《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》，科學(xué)出版社，1995年；馬立人，蔣中華主編，《生物芯片》，北京化學(xué)工業(yè)出版社，2000，1-130。
擴(kuò)增產(chǎn)物的變性可采用常規(guī)變性方法如加熱至94～98℃，并保溫2～10min，然后迅速置冰上。
取適量變性的擴(kuò)增產(chǎn)物加入雜交緩沖液中與基因芯片雜交。與基因芯片雜交時(shí)，可以先將基因芯片與預(yù)雜交緩沖液進(jìn)行預(yù)雜交。
本發(fā)明擴(kuò)增產(chǎn)物與基因芯片之間的固相雜交按照本領(lǐng)域的經(jīng)典方法進(jìn)行，本領(lǐng)域一般人員依據(jù)經(jīng)驗(yàn)容易確定有關(guān)緩沖液、探針和樣品濃度、預(yù)雜交溫度、雜交溫度以及時(shí)間等的最適條件?；蛘咭部蓞⒄胀跎晡逯骶幍摹痘蛟\斷技術(shù)-非放射性操作手冊(cè)》；J.薩姆布魯克，E.F.弗里奇，T.曼尼阿蒂斯主編，《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》，科學(xué)出版社，1995年。
然后根據(jù)標(biāo)記信號(hào)在基因芯片上的位置、強(qiáng)度等信息獲取待測(cè)信息。本發(fā)明所述檢測(cè)基因芯片雜交信號(hào)的方法是基于與抗生物素抗體或親合素或鏈親合素或抗地高辛抗體或抗熒光素抗體復(fù)合在一起的堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶催化的四氮唑藍(lán)(NBT)和5-溴-4-氯-3-吲哚酚-磷酸-4-甲苯胺鹽(BCIP)或四甲基聯(lián)苯胺(TMB)的顯色反應(yīng)。具體方法可參照王申五主編的《基因診斷技術(shù)-非放射性操作手冊(cè)》。若擴(kuò)增產(chǎn)物用熒光基團(tuán)標(biāo)記，也可以直接用熒光檢測(cè)設(shè)備(如激光共聚焦掃描儀Scanarray3000等)獲取待測(cè)信息。
本發(fā)明還提供一種用于檢測(cè)TNF和IL-6基因型的試劑盒，該試劑盒包含本發(fā)明所說的基因芯片和使用說明書，使用說明書包含非以診斷為目的檢測(cè)TNF-α和IL-6基因型的方法及上述現(xiàn)有技術(shù)的相關(guān)內(nèi)容。
本發(fā)明提供的基因芯片及其試劑盒，可用于檢測(cè)TNF和IL-6基因型，這對(duì)于藥物研究單位和臨床有針對(duì)性的治療等相關(guān)應(yīng)用提供了一種簡(jiǎn)便易行的解決方案。


圖1本發(fā)明基因芯片上的一種點(diǎn)樣列陣；圖2用本發(fā)明基因芯片檢測(cè)TNF和IL-6基因型所得結(jié)果的照片。
具體實(shí)施方式
以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的更詳細(xì)的說明，而不是對(duì)本發(fā)明范圍的限定。
實(shí)施例1基因芯片的制備(1)購(gòu)置醛基修飾的載玻片(產(chǎn)品編號(hào)BSM03011，上海百傲科技有限公司)。人工合成(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)以下探針，用水溶解成(100pmol/ul)濃度，然后用2×點(diǎn)樣buffer(產(chǎn)品編號(hào)BST02010，上海百傲科技有限公司)等比混合。接著，用Affymetrix公司的GMS417點(diǎn)樣儀按說明書所述方法點(diǎn)制如圖1的陣列。然后室溫放置過夜。
其中各探針序列為TNF-α/-308GNH2-5’-tttttttttttttttt-cccgtccCcatgcc-3’ (14聚)(SEQ ID NO11)TNF-α/-308ANH2-5’-tttttttttttttttt-cccgtccTcatgccc-3’ (15聚)(SEQ ID NO12)TNF-α/-238GNH2-5’-tttttttttttttttt-cctgctcCgattccga-3 (16聚)SEQ ID NO13)TNF-α/-238ANH2-5’-tttttttttttttttt-ccctgctcTgattccga-3 (17聚)(SEQ ID NO14)IL-6/-597GNH2-5’-tttttttttttttttt-aaatttgaggGtggccag-3’ (18聚)(SEQ ID NO15)IL-6/-597ANH2-5’-tttttttttttttttt-aatttgaggAtggccagg-3’ (18聚)(SEQ ID NO16)IL-6/-572GNH2-5’-tttttttttttttttt-caacagccGctcacagg-3’(17聚)(SEQ ID NO17)IL-6/-572CNH2-5’-tttttttttttttttt-caacagccCctcacagg-3’(17聚)(SEQ ID NO18)IL-6/-174GNH2-5’-ttttttttttttttaa-tgtgtcttgcGatgctaaag-3’(20聚)(SEQ ID NO19)IL-6/-174CNH2-5’-ttttttttttttttaa-tgtgtcttgcCatgctaaag-3’(20聚)(SEQ ID NO20)實(shí)施例2染色體DNA的制備取待檢者全血500μl，用一次性無菌注射針頭抽取，收集于含50ul的2％EDTA溶液的無菌1.5ml離心管中，將管蓋蓋上，上下顛倒數(shù)次，使混勻。取無菌的1.5ml離心管，向其中加入混勻的待檢全血100μl和純水300μl，充分混勻，室溫靜置8分鐘；將離心管置離心機(jī)中，6000g離心1分鐘；取出離心管，傾去上清液，離心管底部可見少量白色沉淀；向離心管中加入抽提液(產(chǎn)品編號(hào)BST01010，上海百傲科技有限公司)60μl，充分振蕩使沉淀溶解；沸水浴中15分鐘；取出離心管，置離心機(jī)中，12,000g離心15分鐘。離心后上清液可直接用于PCR擴(kuò)增。
實(shí)施例3用PCR方法擴(kuò)增HLA-B基因片段委托上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成以下引物TNF上游引物 Biotin-5’-tccctccaaccccgttttct-3’TNF下游引物 5’-catctggaggaagcggtagtgg-3’IL-6上游引物5’-cacactccacctggagacgcc-3’IL-6下游引物5’-Biotin-agcgggtggggctgattgga 3’然后用水溶解并稀釋至10pmol/μl。將購(gòu)置的Taq酶(產(chǎn)品編號(hào)Lot，CE1101-1，TaKaRa)、10×緩沖液(產(chǎn)品編號(hào)Lot，A2401-2，TaKaRa)、dNTP(產(chǎn)品編號(hào)D0056，上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)、純水以及實(shí)施例2獲得的PCR擴(kuò)增模板按以下配方配制PCR擴(kuò)增體系
用PCR擴(kuò)增儀Tc-25/H(杭州大和熱磁電子有限公司)按以下程序擴(kuò)增94℃，5min，然后按94℃25sec，56℃25sec，72℃25sec做40個(gè)循環(huán)，最后72℃5min。
實(shí)施例4PCR產(chǎn)物與基因芯片的雜交采用上海百傲科技有限公司的芯片雜交試劑盒與芯片顯色試劑盒進(jìn)行此雜交試驗(yàn)。所述芯片雜交試劑盒(產(chǎn)品編號(hào)BST05010，上海百傲科技有限公司)包含預(yù)雜交液，雜交緩沖液，洗液1，反應(yīng)艙。所述芯片顯色試劑盒(產(chǎn)品編號(hào)BST06010，上海百傲科技有限公司)包含抗體液，洗液2，洗液3，顯色液。
(1)將實(shí)施例1的基因芯片用預(yù)雜交液預(yù)雜交5min，然后除去預(yù)雜交液。芯片的預(yù)雜交溫度為39℃。
(2)將實(shí)施例3獲得的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物混合后先98℃變性5min，然后取10μl加至190μl雜交緩沖液中混勻，與預(yù)雜交完畢的基因芯片進(jìn)行30分鐘雜交反應(yīng)，雜交溫度為39℃。
(3)將雜交完畢的基因芯片用已預(yù)熱至雜交溫度的洗液1洗兩次，每次10分鐘；(4)然后用洗液2室溫洗2分鐘；(5)將基因芯片與抗體液室溫反應(yīng)20分鐘；(6)然后將基因芯片用洗液2室溫洗5分鐘，再重復(fù)此步驟一次；再用洗液3室溫洗2分鐘。
(7)在基因芯片上加顯色液200μl，39℃放置40分鐘。然后用水沖洗干凈，晾干。
實(shí)施例5基因芯片雜交信號(hào)的檢測(cè)將雜交并洗滌完畢的基因芯片置于Baio BE3.0生物芯片識(shí)讀儀(BSE01021，上海百傲科技有限公司)上掃描后得到如圖2所示的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果表明受檢者的TNF和IL-6基因型為TNF-α/-238 G/A，TNF-α/-308G，IL-6/-174C，IL-6/-572G，IL-6/-597G。檢測(cè)結(jié)果經(jīng)測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證完全符合。
序列表<110>濟(jì)南市中心醫(yī)院<120>一種細(xì)胞因子基因型檢測(cè)芯片及其用途<140>
<141>
<160>20<170>Patent In3.1<210>1<211>39<212>DNATNF-α/-308Gataggttttg aggggcatgg ggacggggtt cagcctcca 39<210>2<211>39<212>DNATNF-α/-308Aataggttttg aggggcatga ggacggggtt cagcctcca 39<210>3<211>42<212>DNATNF-α/-238Gcagaagaccc ccctcggaat cggagcaggg aggatgggga gt 42<210>4<211>42<212>DNATNF-α/-238Acagaagaccc ccctcggaat cagagcaggg aggatgggga gt 42<210>5<211>40<212>DNAIL-6/-597Gaactgcacga aatttgaggg tggccaggca gttctacaac 40<210>6<211>40<212>DNAIL-6/-597Aaactgcacga aatttgagga tggccaggca gttctacaac 40<210>7<211>42<212>DNAIL-6/-572Gccaggcagtt ctacaacagc cgctcacagg gagagccaga ac42<210>8<211>42<212>DNA
IL-6/-572Cccaggcagtt ctacaacagc ccctcacagg gagagccaga ac 42<210>9<211>45<212>DNAIL-6/-174Gcttttccccc tagttgtgtc ttgcgatgct aaaggacgtc acatt 45<210>10<211>45<212>DNAIL-6/-174Ccttttccccc tagttgtgtc ttgccatgct aaaggacgtc acatt 45<210>11<211>30<212>DNATNF-α/-308GNH2-5’-tttttttttt ttttttcccg tccccatgcc-3’<210>12<211>31<212>DNATNF-α/-308ANH2-5’-tttttttttt ttttttcccg tcctcatgcc c-3’<210>13<211>32<212>DNATNF-α/-238GNH2-5’-tttttttttt ttttttcctg ctccgattcc ga-3<210>14<211>33<212>DNATNF-α/-238ANH2-5’-tttttttttt ttttttccct gctctgattc cga-3<210>15<211>34<212>DNAIL-6/-597GNH2-5’-tttttttttt ttttttaaat ttgagggtgg ccag-3’<210>16<211>34<212>DNAIL-6/-597ANH2-5’-tttttttttt ttttttaatt tgaggatggc cagg-3’<210>17<211>33<212>DNAIL-6/-572GNH2-5’-tttttttttt ttttttcaac agccgctcac agg-3’<210>18<211>33<212>DNA
IL-6/-572CNH2-5’-tttttttttt ttttttcaac agcccctcac agg-3’<210>19<211>36<212>DNAIL-6′-174GNH2-5’-tttttttttt ttttaatgtg tcttgcgatg ctaaag-3’<210>20<211>36<212>DNAIL-6/-174CNH2-5’ -tttttttttt ttttaatgtg tcttgccatg ctaaag-3’
權(quán)利要求
1.一種用于檢測(cè)腫瘤壞死因子TNF-α、白介素IL-6基因型的基因芯片，包括固相支持物和固定在所述固相支持物上的寡核苷酸探針，其特征在于所述寡核苷酸探針包含以下序列或其互補(bǔ)序列中的包括TNF-α/-308(G/A)，TNF-α/-238(G/A)，IL-6/-597(G/A)，IL-6/-572(G/C)，IL-6/-174(G/C)突變位點(diǎn)在內(nèi)的14-20個(gè)連續(xù)核苷酸TNF-α/-308GataggttttgaggggcatgGggacggggttcagcctccaTNF-α/-308AataggttttgaggggcatgAggacggggttcagcctccaTNF-α/-238GcagaagacccccctcggaatcGgagcagggaggatggggagtTNF-α/-238AcagaagacccccctcggaatcAgagcagggaggatggggagtIL-6/-597GaactgcacgaaatttgaggGtggccaggcagttctacaacIL-6/-597AaactgcacgaaatttgaggAtggccaggcagttctacaacIL-6/-572GccaggcagttctacaacagccGctcacagggagagccagaacIL-6/-572CccaggcagttctacaacagccCctcacagggagagccagaacIL-6/-174GcttttccccctagttgtgtcttgcGatgctaaaggacgtcacattIL-6/-174CcttttccccctagttgtgtcttgcCatgctaaaggacgtcacatt。
2.如權(quán)利要求1所述的基因芯片，其特征在于所述TNF-α/-308(G/A)、TNF-α/-238(G/A)、IL-6/-597(G/A)、IL-6/-572(G/C)和IL-6/-174(G/C)突變位點(diǎn)序列中大寫字母表示的堿基位于所述探針的中部。
3.如權(quán)利要求1所述的基因芯片，其特征在于所述探針的5′端還包含一段氨基修飾的16聚的聚脫氧胸苷酸。
4.如權(quán)利要求1所述的基因芯片，其特征在于所述固相支持物是醛基修飾的玻片或硅片。
5.一種非以診斷為目的檢測(cè)腫瘤壞死因子TNF-α和白介素IL-6基因型的方法，包括以下步驟(1)制備染色體DNA；(2)用聚合酶鏈反應(yīng)方法擴(kuò)增TNF-α和IL-6基因中包含TNF-α/-308(G/A)，TNF-α/-238(G/A)，IL-6/-597(G/A)，IL-6/-572(G/C)，IL-6/-174(G/C)的基因片段；(3)標(biāo)記上述擴(kuò)增產(chǎn)物；(4)將上述標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物與基因芯片雜交；(5)檢測(cè)基因芯片的雜交信號(hào)。
6.如權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于步驟(5)中檢測(cè)雜交信號(hào)的方法選自堿性磷酸酶催化的四氮唑藍(lán)顯色反應(yīng)，辣根過氧化物酶催化的5-溴-4-氯-3-吲哚酚-磷酸-4-甲苯胺鹽顯色反應(yīng)或辣根過氧化物酶催化的四甲基聯(lián)苯胺顯色反應(yīng)。
7.一種用于檢測(cè)腫瘤壞死因子TNF-α和白介素IL-6基因型的試劑盒，該試劑盒包含權(quán)利要求1所述的基因芯片和包含權(quán)利要求5所述方法的使用說明書。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于檢測(cè)TNF和IL－6基因型的基因芯片，包含該基因芯片的試劑盒和使用該芯片或試劑盒檢測(cè)TNF和IL－6基因型的方法。本發(fā)明的產(chǎn)品和方法可用于檢測(cè)上述基因的基因型，為預(yù)測(cè)與上述基因有關(guān)的疾病發(fā)生危險(xiǎn)提供必要信息，同時(shí)也為相關(guān)藥物的開發(fā)和評(píng)價(jià)提供必要手段。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK1661086SQ200410036479
公開日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2004年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月10日
發(fā)明者汪運(yùn)山, 賈堂宏, 朱濱, 孫悅, 張雨 申請(qǐng)人:濟(jì)南市中心醫(yī)院, 上海百傲科技有限公司