專利名稱：原始干細(xì)胞亞群分離，誘導(dǎo)分化及其治療心血管疾病的制備工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及首次利用5-氮胞雜苷誘導(dǎo)骨髓原始干細(xì)胞亞群向心肌細(xì)胞分化，利用血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF-B誘導(dǎo)原始干細(xì)胞亞群向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化，并應(yīng)用于體內(nèi)治療急性心肌梗塞。從骨髓中分離、培養(yǎng)的原始干細(xì)胞亞群是一類亞全能干細(xì)胞，具有分化為心血管組織的潛能。體外經(jīng)誘導(dǎo)的原始干細(xì)胞亞群表達(dá)肌凝蛋白重鏈和肌鈣蛋白I，表達(dá)VIII因子相關(guān)抗原和CD31。在體內(nèi)標(biāo)記的原始干細(xì)胞亞群表達(dá)陽性的肌凝蛋白重鏈和VIII因子相關(guān)抗原，分化為心肌和血管內(nèi)皮細(xì)胞。對(duì)急性心肌梗死患者PCI術(shù)后自體原始干細(xì)胞亞群行冠脈內(nèi)注射，比較對(duì)照組檢測(cè)表明患者心功能及預(yù)后明顯改善。這就為心血管再生醫(yī)學(xué)提供理想種子細(xì)胞，為治療心血管疾病，特別是治療急性心肌梗塞提供了新方法。
目前，我國(guó)已經(jīng)進(jìn)入老齡化社會(huì)，心血管疾病的發(fā)病率、致死率呈逐年上升趨勢(shì)，心血管疾病成為人類三大死亡原因之一?，F(xiàn)在臨床上對(duì)其進(jìn)行治療的藥物、介入和手術(shù)等常用方法較難糾正已經(jīng)壞死和衰老的心血管組織，而心血管組織自身修復(fù)能力有限的。替代治療為另一種治療策略，分為器官移植和細(xì)胞移植。由于器官來源不足、免疫排斥、費(fèi)用高昂，嚴(yán)重限制了器官移植的應(yīng)用。干細(xì)胞具有自我更新和多分化能力，為細(xì)胞移植的理想細(xì)胞，其中，骨髓原始干細(xì)胞亞群由于其易獲得、擴(kuò)增等諸多優(yōu)點(diǎn)，成為首選種子細(xì)胞。本發(fā)明在國(guó)際上首次將骨髓原始干細(xì)胞亞群分別在體外和體內(nèi)誘導(dǎo)分化為心肌和血管內(nèi)皮細(xì)胞，并建立了原始干細(xì)胞亞群分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)的有效方法，為用于細(xì)胞移植以治療心血管疾病，特別是急性心肌梗塞提供了新的途徑。
本發(fā)明的目的是通過下述方法實(shí)現(xiàn)的一.骨髓原始干細(xì)胞亞群的分離和培養(yǎng)
取胎兒骨髓，用Ficoll-Paque(1.077g/ml)分離液分離出單個(gè)核細(xì)胞，離心取白環(huán)及白環(huán)上下細(xì)胞，將離心后的細(xì)胞打散并以1×107個(gè)/ml細(xì)胞接種在塑料培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。用含有胎牛血清、抗壞血酸的擴(kuò)增培養(yǎng)液在含5％的CO2，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。3天后胰酶消化傳代擴(kuò)增。
二.原始干細(xì)胞亞群的免疫表型和細(xì)胞周期測(cè)定用間接免疫熒光法(FITC熒光標(biāo)記抗體)檢細(xì)胞的表型。流式細(xì)胞儀測(cè)定原始干細(xì)胞亞群的周期。結(jié)果顯示，CD29、CD44、CD105、CD166、Flk-1為陽性，內(nèi)皮細(xì)胞表型vWF、CD31和造血細(xì)胞表型CDlla、CD34、CD45均為陰性，HLA-DR亦陰性，見

圖1A。通過流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期，約95.61％細(xì)胞處在G0/G1期，而處在G2-M期和S期的細(xì)胞分別為1.65％和2.74％，見圖1B。
三.原始干細(xì)胞亞群體外分化為心肌細(xì)胞和免疫熒光檢測(cè)將第一代原始干細(xì)胞亞群接種貼壁后，加入5-氮胞雜苷(5-aza，5-azacytidine，Sigma公司)24小時(shí)后洗去，換用培養(yǎng)基，每3天換液。4周后固定，以紅色熒光PE或綠色熒光FITC標(biāo)記的抗體行免疫熒光檢測(cè)。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)經(jīng)5-aza誘導(dǎo)后，部分原始干細(xì)胞亞群更加細(xì)長(zhǎng)，逐漸相連呈肌管狀，但未見自發(fā)性跳動(dòng)。免疫熒光檢測(cè)結(jié)果提示，誘導(dǎo)后的原始干細(xì)胞亞群表達(dá)心肌細(xì)胞特異性蛋白心肌凝蛋白重鏈和肌鈣蛋白I，已分化為心肌細(xì)胞，見圖2A。
四.原始干細(xì)胞亞群體外分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞和免疫熒光檢測(cè)用fibronectin鋪底，將第一代原始干細(xì)胞亞群接種于24孔板中，加入擴(kuò)增培養(yǎng)液。貼壁后，換用誘導(dǎo)培養(yǎng)液(不含血清和EGF，但含10ng/ml的VEGF-B)，每3天換液。2周后固定，行免疫熒光檢測(cè)。經(jīng)VEGF-B誘導(dǎo)后，部分原始干細(xì)胞亞群逐漸聚集，逐漸變得扁平。經(jīng)抗vWF和CD31的免疫熒光檢測(cè)，分化的細(xì)胞為陽性，提示已分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，見圖2B。
五.心肌損傷模型的建立、原始干細(xì)胞亞群的注入和體內(nèi)分化檢測(cè)選用4只免疫功能嚴(yán)重缺陷的NOD/SCID小鼠(購(gòu)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所)，腹腔注射異丙腎上腺素(20mg/kg)一次，制成心肌損傷模型。標(biāo)記原始干細(xì)胞亞群方法為，嘧啶的類似物溴化脫氧尿嘧啶(BrdU，Sigma公司)或熒光PKH26(Sigma公司)。2只小鼠的原始干細(xì)胞亞群的標(biāo)記為BrdU；另2只小鼠給其原始干細(xì)胞亞群進(jìn)行PKH26熒光染色。取原始干細(xì)胞亞群經(jīng)尾靜脈緩慢注入。1月后，斷頸處死，取出心臟，PKH26熒光標(biāo)記的小鼠心臟，冰凍切片查熒光可檢測(cè)到PKH26陽性的細(xì)胞，見圖3；BrdU標(biāo)記的小鼠心臟，石蠟切片經(jīng)免疫熒光檢測(cè)，可見BrdU標(biāo)記陽性的細(xì)胞心肌凝蛋白重鏈表達(dá)陽性，提示在體內(nèi)已分化為心肌細(xì)胞，并可見和原心肌細(xì)胞排列一致，端端相連，見圖4A；可見BrdU標(biāo)記陽性的細(xì)胞也表達(dá)vWF，提示在體內(nèi)已分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，見圖4B。
六.骨髓原始干細(xì)胞亞群誘導(dǎo)分化為心血管組織的應(yīng)用例作(一)骨髓原始干細(xì)胞亞群治療急性心肌梗塞的實(shí)驗(yàn)研究1.原始干細(xì)胞亞群的分離、培養(yǎng)和標(biāo)記選用20-30kg雄性家豬，心梗制作成功后存活者按心梗次序隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組。在無菌條件下抽取髂骨骨髓，分離出原始干細(xì)胞亞群體外培養(yǎng)。注射前2天，在培養(yǎng)液中加入BrdU標(biāo)記；部分豬，在注射前，給具原始干細(xì)胞亞群進(jìn)行PKH26熒光染色。用間接免疫熒光法檢測(cè)，CD105、CD44、CD29為陽性，內(nèi)皮細(xì)胞表型vWF、CD31和造血細(xì)胞表型CD34、CD45均為陰性。流式細(xì)胞周期結(jié)果顯示，約92.00％細(xì)胞處在G0/G1期，而處在G2-M期和S期的細(xì)胞分別為4.74％和3.25％。
2.急性心肌梗塞(acute myocardial infarction，AMI)模型的制作和細(xì)胞注入
氯氨酮麻醉后，送入心導(dǎo)管室，建立耳緣靜脈通道，給予咪達(dá)唑侖維持麻醉，心電和血氧飽和度監(jiān)護(hù)，無菌條件下穿刺右股動(dòng)脈，置入動(dòng)脈鞘管，送入2.0mm×20mm的球囊至前降支中遠(yuǎn)1/3處，充氣阻斷冠脈1小時(shí)，可見胸前導(dǎo)聯(lián)ST段抬高。期間輸注利多卡因直至再灌注時(shí)。拔除導(dǎo)管，壓迫止血，送返動(dòng)物房。8-10天后，消化貼壁的原始干細(xì)胞亞群，經(jīng)100目濾網(wǎng)過濾后，將10MSC重懸于肝素化的生理鹽水中，重返導(dǎo)管室，送入球囊至原阻斷血流處，充氣阻斷冠脈數(shù)分鐘，避免返流，注入原始干細(xì)胞亞群至遠(yuǎn)端，未見ST段抬高和嚴(yán)重的心率失常。對(duì)照組注射生理鹽水。
3.心肌核素顯像檢查4周后，核素心肌斷層顯像檢測(cè)相對(duì)心梗面積、心肌灌注評(píng)分和左室射血分?jǐn)?shù)，從圖5可見，治療組和對(duì)照組相比，心肌灌注評(píng)分(30.0±5.3對(duì)41.8±8.8，p＜0.01)和相對(duì)心梗面積[(28.6±4.7)％對(duì)(33.5±3.4)％，p＜0.05]顯著降低，射血數(shù)[(44.1±4.3)％對(duì)(39.0±5.2)％，p＜0.05]顯著增加。
4.經(jīng)導(dǎo)管的壓力檢測(cè)在心梗前、注入原始干細(xì)胞亞群前、處死前三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，經(jīng)導(dǎo)管檢測(cè)左室收縮壓(left ventricular systolic pressure，LVSP)、左室舒張末壓(leftend-diastolic pressure，LVEDP)、壓力升高最大速率(peak rate of pressurerise，+dP/dt)和壓力下降最大速率(peak rate of pressure fall，-dP/dt)。研究結(jié)果見表1，和對(duì)照組相比，LVSP(87.1±8.7mmHg對(duì)78.0±4.4mmHg，p＜0.05)、+dP/dt(1818.1±116.7mmHg/s對(duì)1610.6±114.5mmHg/s，p＜0.01)和-dP/dt(1800.9±88.5mmHg/s對(duì)1618.4±65.7mmHg/s，p＜0.01)顯著增加，LVEDP(9.4±1.7mmHg對(duì)12.6±2.8mmHg，p＜0.05)顯著降低，心功能得以改善。
5.心肌組織學(xué)和免疫熒光檢測(cè)取心梗周圍組織，部分送查PKH26熒光，大部分在10％中性甲醛固定，石蠟包埋，切片后行HE染色和免疫熒光檢測(cè)。HE染色可見，治療組比對(duì)照組，纖維組織減少，血管密度增加[(6.0±1.3)根/0.2mm2對(duì)(4.5±0.9)根/0.2mm2，p＜0.05]，未見脂肪和骨骼組織沉積、未見腫瘤組織。圖6中可見，檢測(cè)PKH26和BrdU的標(biāo)記率，PKH26約為99％(圖6A)，BrdU約為80％(圖6C)。實(shí)驗(yàn)組PKH26熒光檢測(cè)示，可見在心肌組織內(nèi)有橙紅色熒光(圖6B)。免疫熒光檢測(cè)顯示，在心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮和平滑肌細(xì)胞中可見BrdU陽性細(xì)胞，提示MSC已植入并植活。如圖7所顯示，BrdU陽性細(xì)胞已分化為心肌細(xì)胞(圖7A)，并和原心肌細(xì)胞有縫隙連接形成(圖7B)，BrdU陽性細(xì)胞也可分化為血管內(nèi)皮(圖7C)和平滑肌細(xì)胞(圖7D)。
(二)自體骨髓間質(zhì)干細(xì)胞移植修復(fù)梗死心肌的臨床研究為研究急性心肌梗死患者自體骨髓原始干細(xì)胞亞群冠脈內(nèi)注射治療的安全性以及對(duì)心功能的改善作用，我們選取10例急性心肌梗死患者作為實(shí)驗(yàn)組(細(xì)胞治療組，cell therapy group，CT組)；選取10例PCI術(shù)后拒絕行細(xì)胞治療的急性心肌梗死患者作為對(duì)照組(標(biāo)準(zhǔn)治療組，standard therapy group，ST組)。
1.骨髓原始干細(xì)胞亞群分離、培養(yǎng)及鑒定在無菌狀態(tài)下穿刺CT組患者髂后上棘，抽取骨髓分離原始干細(xì)胞亞群培養(yǎng)，擴(kuò)增10-14天后當(dāng)細(xì)胞總量達(dá)107時(shí)胰酶消化，移植術(shù)前1小時(shí)重懸于生理鹽水備用。培養(yǎng)后骨髓原始干細(xì)胞亞群移植前均取樣進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)、細(xì)胞周期及流式細(xì)胞儀鑒定。24小時(shí)可見有貼壁細(xì)胞，呈圓形；72小時(shí)大多數(shù)貼壁細(xì)胞有胞漿突起，呈短棒狀；一周后呈梭形，胞漿豐富，核大，核仁明顯。細(xì)胞免疫表型和細(xì)胞周期造血細(xì)胞表型CD34、CD45和內(nèi)皮細(xì)胞表型vWF、CD31均為陰性，CD29、CD44、CD105、Flk-1為陽性。細(xì)胞周期結(jié)果顯示，約86.54％細(xì)胞處在G0/G1期，而處在G2-M期和S期的細(xì)胞分別為1.56％和11.90％。
2.冠脈內(nèi)注射移植手術(shù)常規(guī)術(shù)前準(zhǔn)備同PCI術(shù)，PCI術(shù)后10~14天，選用合適大小的OTW球囊仔細(xì)定位與靶血管支架內(nèi)近端，以2atm壓力充盈球囊，于指引導(dǎo)管內(nèi)注入造影劑證實(shí)球囊遠(yuǎn)端無造影劑通過后，重新以2atm壓力充盈球囊并退出導(dǎo)絲，于球囊中心腔高壓注入骨髓間質(zhì)干細(xì)胞懸液5ml(細(xì)胞數(shù)量2～7×107/ml)，并以0.2ml肝素生理鹽水沖洗中心腔，球囊充盈持續(xù)2分鐘后球囊撤壓，間隔2分鐘后重復(fù)上述操作。根據(jù)患者的耐受程度決定注射次數(shù)及細(xì)胞量。注射結(jié)束后復(fù)查冠脈造影證實(shí)靶血管通暢無損傷后終止手術(shù)。術(shù)后患者進(jìn)入CCU病房監(jiān)護(hù)，移植術(shù)后24小時(shí)白細(xì)胞計(jì)數(shù)、C-反應(yīng)蛋白及肌鈣蛋白I較術(shù)前比較沒有顯著差異(P＞0.05)，移植后無心功能惡化，未出現(xiàn)發(fā)熱及白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高。隨訪期間細(xì)胞治療組無心悸暈厥發(fā)生，隨訪動(dòng)態(tài)心電圖未發(fā)現(xiàn)惡性心律失常。
3.隨訪所有20例患者于PCI術(shù)后1周及術(shù)后3月進(jìn)行臨床隨訪，包括心電圖、24小時(shí)動(dòng)態(tài)心動(dòng)圖，心臟超聲心動(dòng)圖以及18氟-脫氧葡萄糖(18F-FDG)核素心肌斷層顯像。兩組患者LVEDV、LVESV及代謝缺損均有不同程度下降，但CT組3月隨訪較基線下降有顯著性差異(P＜0.05)，表明3月隨訪CT組較ST組改善明顯(P＜0.05)，提示細(xì)胞治療組存活心肌增加，梗死面積縮小，左室重構(gòu)減輕，見表2。研究表明急性心肌梗死患者自體骨髓原始干細(xì)胞亞群冠脈內(nèi)注射安全有效，可以改善患者心功能及預(yù)后，骨髓來源的心肌細(xì)胞生成及血管新生可能為其機(jī)制。
圖1原始干細(xì)胞亞群的免疫表型和細(xì)胞周期 A免疫表型；B細(xì)胞周期圖2原始干細(xì)胞亞群體外分化為心血管組織A誘導(dǎo)為心肌細(xì)胞 al誘導(dǎo)前 a2四周后 a3抗心肌凝蛋白重鏈-FITCa4抗心肌肌鈣蛋白I-PE；B誘導(dǎo)為血管內(nèi)皮細(xì)胞 b1誘導(dǎo)前 b2二周后 b3抗vWF-FITC b4抗CD31-PE圖3心臟冰凍切片中PKH26熒光檢測(cè)圖4原始干細(xì)胞亞群體內(nèi)分化為心血管組織A a1抗心肌凝蛋白重鏈-FITC a2抗BrdU-PE a3 a1和a2的合并B b1抗vWF-FITC b2抗BrdU-PE b3 b1和b2的合圖5兩組的心肌核素檢查圖6原始干細(xì)胞亞群的PKH26熒光和BrdU標(biāo)記A原始干細(xì)胞亞群注射前的PKH26熒光標(biāo)記B心肌組織中PKH26熒光顯色C C1為培養(yǎng)的原始干細(xì)胞亞群經(jīng)BrdU標(biāo)記后的免疫熒光顯色 C2為培養(yǎng)的原始干細(xì)胞亞群的光鏡觀C3為C1和C2的合并7心肌組織的免疫熒光顯色A紅色為抗心肌凝蛋白重鏈的PE顯色，綠色為抗BrdU的FITC顯色B紅色為BrdU的PE顯色，綠色為抗連接蛋白43的FITC顯色C紅色為BrdU的PE顯色，綠色為抗vWF的FITC顯色D紅色為BrdU的PE顯色，綠色為抗平滑肌肌動(dòng)蛋白的FITC顯色圖8兩組間左室壓力檢測(cè)結(jié)果比較圖9兩組患者基線及3月隨訪超聲心動(dòng)圖、核素之間指標(biāo)比較本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)1.本發(fā)明報(bào)道了骨髓原始干細(xì)胞亞群的分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增過程，操作方法簡(jiǎn)單可行；2.本發(fā)明首次報(bào)道骨髓原始干細(xì)胞亞群在體內(nèi)和體外分別誘導(dǎo)分化為心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的過程，并證明了骨髓原始干細(xì)胞亞群胞分化為心血管組織的潛能；3.本發(fā)明確定了骨髓原始干細(xì)胞亞群誘導(dǎo)分化為心血管組織的檢測(cè)方法，顯示分化后的細(xì)胞形態(tài)及功能性證明，這就為干細(xì)胞及組織工程應(yīng)用研究提供了標(biāo)準(zhǔn)審核的基礎(chǔ)；4.本發(fā)明為治療心血管疾病，特別是急性心肌梗塞提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)和臨床研究依據(jù)，為細(xì)胞移植治療提供了新的途徑。
權(quán)利要求
1.一種分離，培養(yǎng)一類原始干細(xì)胞亞群的制備工藝，涉及一種原始干細(xì)胞亞群用于治療心血管損傷的方法。其特征在于細(xì)胞表型是CD29、CD44、CD105、Flk-1陽性，誘導(dǎo)原始干細(xì)胞亞群分化為心血管組織，涉及原始干細(xì)胞亞群的分離、培養(yǎng)，在體外經(jīng)誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)培養(yǎng)而分別表達(dá)心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性細(xì)胞表面標(biāo)志和相關(guān)抗原分子。在體內(nèi)標(biāo)記的原始干細(xì)胞亞群誘導(dǎo)后檢測(cè)出同樣的陽性結(jié)果，并分化成有功能性的心肌和血管內(nèi)皮細(xì)胞。對(duì)急性心肌梗死患者PCI術(shù)后自體原始干細(xì)胞亞群行冠脈內(nèi)注射，比較對(duì)照組檢測(cè)表明患者心功能及預(yù)后明顯改善。這就為心血管損傷，特別是治療急性心肌梗塞提供了新途徑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一類干細(xì)胞亞群的制備工藝，其特征在于從骨髓中分離出單個(gè)核細(xì)胞，用擴(kuò)增培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得了一類原始干細(xì)胞亞群。如擴(kuò)增培養(yǎng)液含有胎牛血清、抗壞血酸等。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的心肌細(xì)胞誘導(dǎo)方法，其特征在于在體外和體內(nèi)分別利用5-氮胞雜苷誘導(dǎo)原始干細(xì)胞亞群向心肌細(xì)胞分化。經(jīng)免疫熒光檢測(cè)出誘導(dǎo)的細(xì)胞表面表達(dá)心肌細(xì)胞特異性的表面標(biāo)志分子和相關(guān)抗原，如體外經(jīng)誘導(dǎo)的原始干細(xì)胞亞群表達(dá)肌凝蛋白重鏈和肌鈣蛋白I；在體內(nèi)標(biāo)記的原始干細(xì)胞亞群表達(dá)陽性的肌凝蛋白重鏈，分化為有功能的心肌細(xì)胞。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血管內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)方法，其特征在于在體外和體內(nèi)分別利用血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF-B誘導(dǎo)原始干細(xì)胞亞群向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化。經(jīng)免疫熒光檢測(cè)誘導(dǎo)的細(xì)胞表面表達(dá)血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性的表面標(biāo)志分子和相關(guān)抗原，如體外經(jīng)誘導(dǎo)的原始干細(xì)胞亞群表達(dá)VIII因子相關(guān)抗原和CD31。在體內(nèi)標(biāo)記的原始干細(xì)胞亞群表達(dá)陽性的VIII因子相關(guān)抗原，分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用于心血管疾病的治療干細(xì)胞亞群的制備工藝，其特征在于對(duì)急性心肌梗死患者行自體原始干細(xì)胞亞群冠脈內(nèi)注射治療，和未使用原始干細(xì)胞亞群注射治療的對(duì)照組相比，可明顯改善患者心功能及預(yù)后。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于應(yīng)用于治療各種先天性或獲得性心血管疾病引起的心肌及血管缺損，特別是急性心肌梗塞干細(xì)胞亞群的制備工藝。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種分離、培養(yǎng)一類原始干細(xì)胞亞群的制備工藝，涉及一種原始干細(xì)胞亞群用于治療心血管損傷的方法。從骨髓中分離、培養(yǎng)的一類原始干細(xì)胞亞群，細(xì)胞表型是CD29、CD44、CD105、Flk－1陽性，誘導(dǎo)原始干細(xì)胞亞群分化為心血管組織，涉及原始干細(xì)胞亞群的分離、培養(yǎng)，在體外經(jīng)誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)培養(yǎng)而分別表達(dá)心肌細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的特異性細(xì)胞表面標(biāo)志和相關(guān)抗原分子。在體內(nèi)標(biāo)記的原始干細(xì)胞亞群誘導(dǎo)后檢測(cè)出同樣的陽性結(jié)果，并分化成有功能性的心肌和血管內(nèi)皮細(xì)胞。對(duì)急性心肌梗死患者PCI術(shù)后自體原始干細(xì)胞亞群行冠脈內(nèi)注射，比較對(duì)照組檢測(cè)表明患者心功能及預(yù)后明顯改善。這就為心血管損傷，特別是治療急性心肌梗塞提供了新途徑。
文檔編號(hào)C12N5/0789GK1712520SQ200410049670
公開日2005年12月28日 申請(qǐng)日期2004年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月24日
發(fā)明者趙春華 申請(qǐng)人:趙春華