專利名稱：蓮藕查爾酮合酶的基因序列及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蓮藕幼葉cDNA中查爾酮合酶(Chalcone synthase，CHS)的基因序列，更具體涉及一種蓮藕查爾酮合酶基因家族的7個(gè)成員外顯子2的部分序列及其氨基酸序列，本發(fā)明還涉及一種用途。
背景技術(shù)：
蓮藕是一種重要的水生經(jīng)濟(jì)作物，不僅可以食用，而且也是重要的觀賞花卉和中草藥，對(duì)它的研究已經(jīng)引起人們的廣泛重視。就蓮藕遺傳學(xué)研究來(lái)看，傳統(tǒng)的研究主要是從形態(tài)方面進(jìn)行的研究，近期的研究主要是運(yùn)用分子生物學(xué)的方法對(duì)其進(jìn)行分子方面的研究。
花色是決定花的觀賞價(jià)值的一個(gè)重要因素，長(zhǎng)期以來(lái)，人們一直通過人工育種的方法來(lái)獲得各種花卉的花色突變品種。隨著植物基因工程的蓬勃發(fā)展，花卉基因工程研究也隨之異軍突起?，F(xiàn)在主要是用反義RNA技術(shù)、共抑制法(co-suppression)或直接導(dǎo)入一個(gè)(或幾個(gè))新的目的基因等幾種方法，根據(jù)人類的需要特異改變花卉的色、香、形及其保鮮的基因工程研究。查爾酮合酶是植物體內(nèi)花色素苷等類黃酮化合物生物合成途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶，有關(guān)該酶特性及其基因表達(dá)調(diào)控在發(fā)育過程中已有一些研究，大多集中在矮牽牛、金魚草等模式植物，對(duì)蓮等具有較高觀賞價(jià)值的花卉研究較少。蓮用途廣泛，形態(tài)美觀，具有特有的清香，是重要的觀賞植物，為中國(guó)十大名花之一，蓮也是研究花發(fā)育、花色素苷合成及花色素苷基因表達(dá)調(diào)控的理想材料；此外，從蓮葉中提取的花青素，對(duì)人體具有重要的醫(yī)療保健作用，采用基因工程的方法提高蓮葉中花青素的含量，將對(duì)蓮藕的綜合利用乃至蓮藕產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要的意義。
在花色形成中起最主要作用的是花色素，它包括花青素、花葵素、翠雀素等，桔黃色、紅色、紫色、藍(lán)色等花色的形成都與花色素有關(guān)。花色素在花瓣中的增高或降低都會(huì)改變花的顏色?；ㄉ厥穷慄S酮生化合成的產(chǎn)物，所以花色的形成與植物中的類黃酮這一類重要的次級(jí)代謝產(chǎn)物有關(guān)。它的基本結(jié)構(gòu)為一個(gè)三碳環(huán)連接兩個(gè)芳香環(huán)。類黃酮可以在植物的不同部位合成，除了與花色形成有關(guān)外，還具有其它多種功能，如抗紫外輻射能力、抗植物病原體侵染能力以及參與豆科植物根瘤的形成等。
查爾酮合酶(Chalcone synthase，CHS)是類黃酮物質(zhì)合成途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶，它催化丙二酰輔酶A(malony CoA)的三個(gè)乙酸基與對(duì)羥基苯丙烯酰輔酶A(coumaryc CoA)的一個(gè)乙酸基的縮合，生成柚配基查爾酮(naringeninechalcone)。柚配基查爾酮經(jīng)過異構(gòu)后能導(dǎo)致黃酮、異黃酮和花色素苷的合成。這些化合物為自然界提供了色彩，并且參與了多種生理過程，包括防紫外輻射、抗病、生長(zhǎng)素的運(yùn)輸、花粉的育性等。在大多數(shù)植物中，CHS只在花中特異性表達(dá)，并且受不同發(fā)育階段的調(diào)控。在特殊情況下，如紫外線照射或植物病原體侵染時(shí)，它也能在葉、莖等組織中被誘導(dǎo)表達(dá)。
CHS基因是一個(gè)較大的多基因家族，其家族成員有查爾酮合酶基因，1，2-二苯乙烯合酶基因及參與雄蕊發(fā)育的基因。CHS基因的編碼區(qū)比較保守，長(zhǎng)約1.2kb，科間的氨基酸同源性一般在70％-90％。CHS的基因結(jié)構(gòu)也非常保守，據(jù)報(bào)道，除金魚草的一個(gè)CHS基因AM-CHS含有兩個(gè)內(nèi)含子外，其余的都只有1個(gè)內(nèi)含子，而且內(nèi)含子的位置固定，但長(zhǎng)度不等。CHS基因的外顯子1較短，只編碼約60個(gè)氨基酸；外顯子2編碼約340個(gè)氨基酸，在長(zhǎng)度和序列上比前者更保守，且易于排序，能提供較多的進(jìn)化信息。王金玲等以19個(gè)科的83個(gè)CHS序列來(lái)研究CHS exon2的進(jìn)化規(guī)律，并認(rèn)為可只用CHS exon2進(jìn)行科以下分類等級(jí)的研究。楊俊波等也以石筆木CHS exon2的部分序列代替該基因進(jìn)行分子系統(tǒng)學(xué)研究。
在矮牽牛中，CHS組成了一個(gè)有8-10個(gè)成員的多基因家族，且位于2個(gè)不同的染色體上。在該植物正常發(fā)育過程中，只有CHS-A和CHS-J在花組織(花冠和花藥)里特異表達(dá)，其中CHS-A的表達(dá)量最大，它轉(zhuǎn)錄的mRNA占總CHSmRNA的90％。在幼苗中，CHS-A，CHS-J，以及CHS-B，CHS-G都可以被紫外線誘導(dǎo)表達(dá)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供了一種蓮藕查爾酮合酶的基因序列，該基因?yàn)榻鉀Q植物花色基因工程育種和提高荷葉中黃酮類及花青素的含量提供了一條技術(shù)途徑。通過基因工程改變花色的手段相對(duì)傳統(tǒng)的育種方法不僅更方便快捷，而且適用范疇更廣。轉(zhuǎn)基因蓮藕的培育成功將為進(jìn)一步進(jìn)行其它名貴花卉的改造提供了理論和實(shí)踐的基礎(chǔ)。同時(shí)，所得到的轉(zhuǎn)基因蓮藕也為研究花色的形成及花的發(fā)育提供了一個(gè)極好的模式系統(tǒng)。
本發(fā)明中所指的轉(zhuǎn)化是指農(nóng)桿菌導(dǎo)入法，土壤農(nóng)桿菌是植物基因工程中對(duì)雙子葉植物進(jìn)行轉(zhuǎn)化最常用的一種細(xì)菌，它可以侵染植物傷口并將自身基因組的一部分插入到植物染色體中。這種方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的技術(shù)。土壤農(nóng)桿菌可以從商業(yè)途徑中得到。具體的是把克隆到的查爾酮合酶基因，正向插入到可以進(jìn)行植物轉(zhuǎn)化的中間載體中，如含有花椰菜葉病毒CAMV35S啟動(dòng)子的真核表達(dá)載體，且將這一中間載體轉(zhuǎn)移給土壤農(nóng)桿菌，用轉(zhuǎn)化后的土壤農(nóng)桿菌侵染帶有傷口的蓮藕葉片，通過這一過程，外源插入的查爾酮合酶基因就進(jìn)入了蓮藕染色體，通過選擇性篩選出帶有外源基因的細(xì)胞在無(wú)菌條件下培養(yǎng)長(zhǎng)成愈傷組織，并進(jìn)一步分化出芽和根，成為轉(zhuǎn)基因植物。
本發(fā)明涉及一種蓮藕的CHS的基因序列在花卉植物的花色基因工程育種中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及一種蓮藕的CHS的基因序列在增加荷葉中黃酮類及花青素含量的基因工程育種中的應(yīng)用。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。
本發(fā)明提出的方法有如下步驟1.總RNA提取用一種新的CTAB-LiCl法(專利申請(qǐng)?zhí)?00410060812.1)提取總RNA，于-65℃--70℃保存。
2.cDNA第一鏈的合成取3μl RNA，用MMLV-RTase于42℃反應(yīng)2小時(shí)后，于-15℃--20℃保存。
3.CHS基因的擴(kuò)增以合成的cDNA第一鏈為模板，用一對(duì)簡(jiǎn)并引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
4.PCR產(chǎn)物的回收和克隆目的條帶回收并轉(zhuǎn)化培養(yǎng)后，挑選白色菌落。
5.克隆的鑒定和測(cè)序提取質(zhì)粒作模板進(jìn)行PCR，鑒定陽(yáng)性克隆，并送公司測(cè)序。
6.序列的分析利用在線軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)資源，調(diào)整一定的參數(shù)，對(duì)序列進(jìn)行分析。
CHS基因在植株中的應(yīng)用1.土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化2.植物轉(zhuǎn)化3.轉(zhuǎn)基因植物的檢測(cè)NTP II檢測(cè)，Northern檢測(cè)，基因組Southern檢測(cè)。
本發(fā)明所述基因的核苷酸序列為SEQ ID NO1、SEQ ID NO2、SEQ IDNO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO5、SEQ ID NO6、SEQ ID NO7，而其相對(duì)應(yīng)的氨基酸序列為SEQ ID NO8、SEQ ID NO9、SEQ ID NO10、SEQ IDNO11、SEQ ID NO12、SEQ ID NO13、SEQ ID NO14。測(cè)序結(jié)果表明，其核苷酸長(zhǎng)度為844bp-936bp，編碼278-284個(gè)氨基酸，而且7個(gè)核苷酸序列及其氨基酸序列都有明顯的差異。利用BLASTN和BLASTX程序，在GenBank中進(jìn)行同源搜索，結(jié)果表明SEQ ID NO1、SEQ ID NO2、SEQ ID NO3、SEQID NO4、SEQ ID NO5、SEQ ID NO6、SEQ ID NO7都與GenBank中其它物種的CHS有極高的同源性，其核苷酸序列的相似性為80％-86％，而其氨基酸序列的相似性更高達(dá)85％-95％。
CHS有較多的保守位點(diǎn)，如它的4個(gè)活性位點(diǎn)Cys164、Phe215、His303和Asn336，這4個(gè)氨基酸殘基在至今發(fā)現(xiàn)的所有CHS和類CHS的酶中均相同；還有組成底物對(duì)羥基苯丙烯酰輔酶A的結(jié)合口袋的5個(gè)氨基酸殘基Ser133、Glu192、Thr194、Thr197和Ser338；除此之外，組成環(huán)化反應(yīng)的回袋的7個(gè)氨基酸殘基Thr132、Met137、Phe215、Ile254、Gly256、Phe265和Pro375都是保守位點(diǎn)。本發(fā)明中，以SEQ ID NO1為例，其長(zhǎng)度為859bp，編碼278個(gè)氨基酸，第835-837位為終止密碼子UGA。結(jié)果表明，SEQ ID NO8的4個(gè)活性位點(diǎn)、組成底物結(jié)合口袋的5個(gè)氨基酸殘基、組成環(huán)化反應(yīng)的7個(gè)氨基酸殘基(但Pro375除外)都是保守而沒有變異的，而且SEQID NO8的前8個(gè)氨基酸殘基PSLDARQD是CHS exon2的5’端保守區(qū)域，這也正是設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物的依據(jù)。
本發(fā)明中的“基因”是指將編碼構(gòu)成的蛋白質(zhì)或多肽的氨基酸的核苷酸序列。這些序列可以是DNA形式或者RNA形式，DNA形式包括CDNA，基因組DNA，或人工化學(xué)合成的DNA。DNA可以是單鏈的或者是雙鏈的。
本發(fā)明中的“載體”是指將前面指出的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中的DNA。多種表達(dá)載體可以從商業(yè)途徑獲得，常用的載體包括質(zhì)粒，噬菌體，病毒等。
本發(fā)明中的“植物細(xì)胞”是指植物的各種半成熟胚，或愈傷組織，或懸浮細(xì)胞，或原生質(zhì)體。這些植物細(xì)胞在適當(dāng)?shù)臈l件下均能再生成植物。
本發(fā)明中的“轉(zhuǎn)基因植物”是指含有導(dǎo)入的基因并能夠穩(wěn)定或瞬時(shí)地表達(dá)所導(dǎo)入的基因并產(chǎn)生具有特定的生物學(xué)性狀的植物。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果通過克隆該基因家族及制備該基因的蛋白，用于研究花發(fā)育、花色素苷合成及花色素苷基因的表達(dá)調(diào)控；根據(jù)CHS exon2的進(jìn)化規(guī)律，可用CHS exon2的部分序列代替該基因，進(jìn)行科以下分類等級(jí)的分子系統(tǒng)學(xué)研究；蓮葉花青素，對(duì)人體具有重要的醫(yī)療保健作用，采用基因工程的方法提高蓮葉中花青素的含量，將提高蓮的綜合利用，發(fā)展蓮藕產(chǎn)業(yè)。


圖1為用1.2％瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)以cDNA的第一鏈為模板，簡(jiǎn)并性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物，用AlphalmagerTM2200成像系統(tǒng)拍照所記錄的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。表明在該基因在中國(guó)蓮幼葉中大量轉(zhuǎn)錄。
圖2為用Clustal w程序?qū)EQ ID NO8與黑核桃木、山茶花、紅杜鵑的CHS氨基酸序列進(jìn)行配比。用星號(hào)標(biāo)記相同的氨基酸，圓點(diǎn)標(biāo)記氨基酸的保守替換，橫線表示引進(jìn)缺口(gaps)以優(yōu)化配比。表明SEQ ID NO8與這幾個(gè)物種的氨基酸序列有較高的同源性。
圖3為以SEQ ID NO1為例，分析其核苷酸序列的特征。大方框表示5’端保守區(qū)，小方框表示活性位點(diǎn)，下劃線表示環(huán)化反應(yīng)回袋，圓形表示底物結(jié)合口袋，星號(hào)表示終止密碼。表明SEQ ID NO1長(zhǎng)度為859bp，編碼278個(gè)氨基酸，第835-837位為終止密碼子UGA。它的4個(gè)活性位點(diǎn)、組成底物結(jié)合口袋的5個(gè)氨基酸殘基、組成環(huán)化反應(yīng)的7個(gè)氨基酸殘基(但Pro375除外)都是保守而沒有變異的，而且前8個(gè)氨基酸殘基PSLDARQD是CHS exon2的5’端保守區(qū)域，這也正是設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物的依據(jù)。
具體實(shí)施例方式1.總RNA提取剪取蓮藕尚未展開的幼嫩小葉，針對(duì)蓮中的次生代謝產(chǎn)物如多糖、酚類化合物等較多的特點(diǎn)，采用一種新的CTAB-LiCl法(專利申請(qǐng)?zhí)?00410060812.1)提取總RNA，-70℃保存。
2.cDNA第一鏈的合成反轉(zhuǎn)錄體系為25μl，先將3μl RNA與3μl Oligo(dT)引物(2.5mM)于70℃變性5min，迅速放入0℃5min，再加入5×RT緩沖液，1.25μl dNTP(10mM)，1μl MMLV-RTase(200uμl-1)，然后用RNase-Free H2O加至25μl。反應(yīng)條件為42℃，2小時(shí)，于-20℃保存。
3.CHS基因的擴(kuò)增以合成的cDNA第一鏈為模板，用一對(duì)簡(jiǎn)并引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列為P15’CCK TCH YTG GAY GCN MGR CAR GAC 3’P25’GG BCC RAA NCC RAA NAR MAC ACC 3’PCR反應(yīng)體系為25μl，引物各25pmol，dNTP各2.5mmol，10×PCR反應(yīng)緩沖液2.5μl，Taqase 0.2μl(5uμl-1)；反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性3min；接著94℃變性40秒，57℃退火1min，72℃延伸1min，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。
4.PCR產(chǎn)物的回收和克隆用DNA回收試劑盒將目的條帶回收、純化后，克隆到pGEM-T載體上，轉(zhuǎn)化Escherichia coli DH-5α的感受態(tài)細(xì)胞，在選擇培養(yǎng)基(氨卡青霉素/X-Gal/IPTG)上培養(yǎng)后，挑選白色菌落。
5.克隆的鑒定和測(cè)序用堿裂解法提取質(zhì)粒，以質(zhì)粒作模板進(jìn)行PCR，鑒定陽(yáng)性克隆，并將菌液送到上海博亞生物技術(shù)公司用3370 DNA自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序。
6.序列分析根據(jù)測(cè)序結(jié)果，其核苷酸長(zhǎng)度為844bp-936bp，編碼278-284個(gè)氨基酸，而且7個(gè)核苷酸序列及其氨基酸序列都有明顯的差異。利用BLASTN和BLASTX程序，在GenBank中進(jìn)行同源搜索，結(jié)果表明SEQ ID NO1、SEQ ID NO2、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO5、SEQ ID NO6、SEQ ID NO7都與GenBank中其它物種的CHS有極高的同源性，其核苷酸序列的相似性為80％-86％，而其對(duì)應(yīng)的氨基酸序列SEQ ID NO8、SEQ ID NO9、SEQ ID NO10、SEQ ID NO11、SEQ ID NO12、SEQ ID NO13、SEQ ID NO14的相似性更高達(dá)85％-95％。
CHS基因在植株中的應(yīng)用1.土壤農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化CHS基因克隆到植物中間載體pE3的Ban HI和Xho I位點(diǎn)之間，將含有中間載體的DH-5α與帶有pRK2013的大腸桿菌(可以從商業(yè)途徑中獲得)以及土壤農(nóng)桿菌LBA4404共培養(yǎng)，篩選具有利福平抗性及壯觀霉素抗性的農(nóng)桿菌。
2.植物轉(zhuǎn)化把蓮藕無(wú)菌葉片切成lcm左右的葉盤，葉盤在農(nóng)桿菌中浸泡5-10h，以保證農(nóng)桿菌的感染。然后在加了濾紙的MS培養(yǎng)基上與土壤農(nóng)桿菌共培養(yǎng)2d，然后轉(zhuǎn)到含有生長(zhǎng)素(BA 2mg/l，IAA 0.1mg/l)的培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)愈傷組織，抗生素篩選(卡那霉素100mg/l，羧芐青霉素500mg/l)，兩周繼一代，待芽分化后，換成不加激素，但抗生素相同的MS培養(yǎng)基。
3.轉(zhuǎn)基因植物的檢測(cè)a.NPT II檢測(cè)取50mg葉片加入50μl抽提緩沖液，研磨后離心，取上清液20μl，加入20μl反應(yīng)緩沖液，5μl ATP溶液，30℃保溫30min后點(diǎn)樣于whatmanP81離子交換濾紙上，然后用蛋白 酶K溶液37℃洗4min，65℃洗45min，80℃洗4min，，最后室溫下蒸餾水沖洗，待濾紙干后，壓上X光片，放射自顯影過夜。
b.基因組Southern檢測(cè)植物基因組DNA采用CTAB法提取，10μg基因組DNA經(jīng)EcoRI酶切完全后，進(jìn)行Southern雜交，為避免植物中CHS基因的干擾，并能證明目的基因是否導(dǎo)入植物基因組內(nèi)，探針采用α-32P-dATP隨機(jī)標(biāo)記的CaMV35S啟動(dòng)子DNA片段。
c.Northern檢測(cè)選擇處于相似發(fā)育階段的花蕾(2-3cm)的花瓣，用新的CTAB-LiCl法提取總的RNA，取10μg RNA進(jìn)行甲酰胺變性瓊脂糖凝膠電泳，探針采用α-32P-dATP隨機(jī)標(biāo)記的CHS基因片段。
通過以上過程可以得到轉(zhuǎn)基因植株，從而能改變蓮藕的花色，并增加蓮葉中的黃酮類及花青素含量。
SEQ ID NO1、SEQ ID NO2、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO5、SEQ ID NO6、SEQ ID NO7及相對(duì)應(yīng)氨基酸的長(zhǎng)度及其相似率(請(qǐng)見表1)，表明SEQ ID NO1、SEQ ID NO2、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO5、SEQ ID NO6、SEQ ID NO7長(zhǎng)度為844bp-936bp，編碼278-284個(gè)氨基酸。
表1基因名稱核苷酸長(zhǎng)度(bp) 氨基酸長(zhǎng)度 核苷酸相似氨基酸相(aa) 率(％)似率(％)SEQ ID NO18592878397SEQ ID NO29363128290SEQ ID NO38592878291SEQ ID NO48592878389SEQ ID NO58592858391SEQ ID NO68582868386SEQ ID NO78442828391表2為利用BLASTN和BLASTX程序，搜索GenBank中Eukaryotic[ORGN]的[nr]數(shù)據(jù)庫(kù)(其它參數(shù)都為默認(rèn)值)。表明SEQ ID NO1、SEQ ID NO2、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO5、SEQ ID NO6、SEQ ID NO7都與GenBank中其它物種的CHS有極高的同源性，其核苷酸序列的相似性為
80％-86％，而其相對(duì)應(yīng)氨基酸序列的相似性更高達(dá)85％-95％。
表2物種 基因名稱(檢索號(hào)) 得分 E值氨基酸比 一致率相似性 間隙GapsSpeciesGene name(accesion ScoreE value較Identity Positivesnumbers) Amino (％) (％)acid黑核桃 Juglans JSPCHS1 529 e-149 265/277 9597 0nigra×Juglans (CAA64452.1)regia JSPCHS2 529 e-149 265/277 9597 0(CAA64366.1)山茶花 Camellia(BAA05640.1) 528 e-149 264/278 9496 0sinensis(black tea)紅杜鵑 (BAB88858.1) 527 e-149 262/278 9497 0Rhododendron simsii歐 洲 葡 萄 Vitis (BAB84111.1) 524 e-148 260/277 9397 0vinifera銀 木 麻 黃 CASGL-CHS1 523 e-148 260/278 9396 0Casuarina glauca (CAA10641.1)金絲桃 Hypericum (AAG30295.1) 522 e-147 257/278 9297 0androsaemum矮牽牛 Petunia×SYPJCN 298 3e-98 152/203 7483 0hybrida(CAA27718.1)SYPJCA 298 3e-98 152/203 7483 0(CAA32731.1)啤酒花 Humulus (CAC19808.1) 300 e-131 147/178 8286 0lupulus(Europeanhop)蕃茄 Lycopersicon CHS2-LYCES 297 e-130 146/178 8287 0esculentum(tomato) (CAA38981.1)白芥 Sinapis alba CHS1-SINAL 294 e-130 145/179 8186 1/179(CAA34460.1)歐洲油菜 Brassia CHSA1293 e-129 145/179 8186 1/179napus(rape)(AAC31911.1)CHSB2292 e-129 144/179 8086 1/179(AAC31914.1)旱 菜 Rorippa (AAG43348.1) 292 e-129 146/179 8186 1/179amphibia
SEQUENCE LISTING<110>武漢大學(xué)<120>蓮藕查爾酮合酶的基因序列及其用途<130>蓮藕查爾酮合酶的基因序列及其用途<160>7<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>859<212>DNA<213>Nelumbo nucifera<400>1ccttctttgg atgccaggca ggacatggtg gtggttgagg tgccaaaact gggcaaggag 60gctgcgacga aggccattaa ggaatgggga cagcccaagt ccaagatcac ccaccttgtc120ttctgcacca ccagtggcgt cgacatgccc ggggctgact accagctcac caagctcctc180ggccttcgcc cctccgtcaa gagactcatg atgtaccaac aaggatgctt cgccggaggc240acggtccttc gcctggccaa ggaccttgca gagaacaaca gaggcgcccg tgtccttgtc300gtctgctcag agctcactgc tgttaccttc cgtggcccaa gtgacactca cctcgacagt360cttgtaggcc aggcactctt tggggatgga gcagccgcag ttattgtggg tgtagacccg420gtgcctggtg tagaaaagcc tttgtttgag ttggtgtcgg cagcccagac aattctccca480gacagccatg gcgccattga cgggcacctg agagaggttg gacttacctt ccacctgctc540aaggatgtgc ccgggctcat ctcaaagaac attgagaaga gcctggtgga ggcattccag600cctctgggca tctccgactg gaactcactt ttctggatcg ctcaccctgg tggtccagcc660atcctagacc aagtggaaga aaagctggcc cttaagcccg agaagctgcg cgccacacga720cacatcctga gtgagtatgg aaacatgtca agtgcttgtg ttctgttcat attggatgag780atgcggaaga agtcgattgt ggatggcctc aagaccactg gagaagggct cgagtgagtg840ttctcttcgg ctttgcacc 859<210>2<211>936<212>DNA<213>Nelumbo nucifera<400>2gggccaaatc caaataacac accccattcg agcccttctc cagtggtctt gaggccgtcc 60tcaatcgact tcttccgcat ctcatccaat atgaacagaa cacaagcact tgacatgttt120ccatactcgc tcaggatgtg tcgtgtggcg cttagcttct cgggcttaag ggccagcttt180tcttccactt ggtctaggat ggctggacca ccagggtggg cgatccagaa aattgagttc240cagtcggaga tgcccagagg ctggaatgcc tccaccaggc tcttctcgat gttctttgag300atgagcccgg gcacatcctt gagcaggtgg aaggtaagtc caacctctct caggtgcccg360tcaatggcgc catggctgtc tgggagaatt gtctgggctg ccgacaccaa ctcaaacaaa420ggcttttcta caccaggcac cgggtctgca cccacaataa ctgcggctgc tccatcccca480aagagtgcct ggcctacaag actgtcgagg tgagtgtcac ttgggccgcg gaaggtaaca540gcagtgagct ctgagcagac gacaaggaca cgggcgcctc tgttgttctc tgcaaggtcc600ttggccaggc gaaggactgt gcctccggcg aagcatcctt gttggtacat catgaatctc660
ttgacggagg ggcgaaggcc gaggagcttg gtgagctggt agtcagcacc cggcatgtct720acaccacagg tgggtacaga agaccaggtg cgtgatcttc gatttgggct gaccccattc780ctatatgggc ctttgcacgc agcctctctt gccgagcttt ggcacttcaa ccaccaccat840gttccttgct agcgatccag agaacggaat tcccgcggtc aatggcggcc gggagcatgc900gacgtcgggc ccatcgccta tagtgagtcg tattac 936<210>3<211>859<212>DNA<213>Nelumbo nucifera<400>3ccgtcactgg atgcacggta ggacatggtg gtggttgagg tgccaaaact gggcaaggag 60gccgcgacga aggccattaa ggaatgggga cagcccaagt ccaagatcac ccaccttgtc120ttctgcacca ccagtggcgt cgacatgccc ggggctgact accagctcac caagctcctc180ggccttcgcc cctccgtcaa gagactcatg atgtaccaac aaggatgctt cgccggaggc240acggtccttc gcctggccaa ggaccttgca gagaacaaca gaggcgcccg tgtccttgtc300gtctgctcag agctcactgc tgttaccttc cgtggcccaa gtgacactca cctcgacagt360cttgtaggcc aggcactctt tggggatgga gcagccgcag ttattgtggg tgcagacccg420gtgcctggtg tagaaaagcc tttgtttgag ttggtgtcgg cagcccagac aattctccca480gacagccatg gcgccattga cgggcacctg agagaggttg gacttacctt ccacctgctc540aaggatgtgc ccgggctcat ctcaaagaac attgagaaga gcctggtgga ggcattccag600cctctgggca tctccgactg gaactcaatt ttctggatcg cccaccctgg tggtccagcc660atcctagacc aagtggaaga aaagctggcc cttaagcccg agaagctaag cgccacacga720cacatcctga gcgagtatgg aaacatgtca agtgcttgtg tgctgttcat attggatgag780atgcggaaga agtcgattga ggatggcctc aagaccactg gtagaaggct cgagtgagtg840tgctcttcgg attcggccc 859<210>4<211>859<212>DNA<213>Nelumbo nucifera<400>4ccttctttgg atgcgcgaca ggacatggtg gtggttgaag tgcccaagct cggaaaagaa 60gctgcgtcaa aggccataaa ggaatggggt cagcccaaat cgaaaatcac gcacctggtc120ttctgtacca tctctggcgt cgacatgccc ggggctgact accagctcac caagctcctc180ggccttcgcc cctccgtcaa gagactcatg atgtaccaac aaggatgctt agccggaggc240acggtccttc gcctggccaa ggaccttgca gagaacaaca gaggcgcccg tgtccttgtc300gtctgctcag agctcactgc tgttaccttc cgtggcccaa gtgacactca cctcgacagt360cttgtaggcc aggcactctt tggggatgga gcagccgcag ttattgtggg tgcagacccg420gtgcctggtg tagaaaagcc tttgtttgag ttggtgtcgg cagcccagac aattctccca480gacagccatg gcgccattga cgggcacctg agagaggttg gacttacctt ccacctgctc540aaggatgtgc ccgggctcat ctcaaagaac attgagaaga gcctggtgga ggcattccag600cctctgggca tctccgactg gaactcaatt ttctggatcg ctcaccctgg tggtccagcc660
ttcctagacc aagtggaaga aaagctggcc cttaagcccg agaagctgcg cgccacacga720cacatcctga gtgagtatgg aaacatgtca agtgcttgtg ttctgttcat attggatgag780atgcggacga cgtcgattga ggacgggctc agaccactgg agaagggctc gaatggggtg840ttctattcgg attcggacc 859<210>5<211>859<212>DNA<213>Nelumbo nucifera<400>5ccgtcattgg atgctcggca ggccatggtg gtggttgagg tgccaaaact gggcaaggag 60gctgccacga aggccattaa ggaatgggga cagcccaagt ccaagatcac ccaccttgtc120ttctgcacca ccagtggcgt cgacatgccc ggggctgact accagctcac caagctcctc180ggccttcgcc cctccgtcaa gagactcatg atgtaccaac aaggatgctt cgccggaggc240acagtccttc gcctggccaa ggaccttgca gagaacaaca gaggcgcccg tgtccttgtc300gtctgctcag agctcactgc tgttaccttc cgtggtccaa gtgataccca cctcgacagt360cttgtaggcc aggcactctt cggggatgga gcagccgcag ttattgtggg tgcagacccg420gtgcccggtg tagaaaagcc tttgtttgag ttggtgtcgg cagcccagac aattctccca480gacagccatg gcgccattga cgggcacctg agagaggttg gacttacctt ccacctgctc540aaggatgtgc ccgggctcat ctcaaagaac atcgagaaga gcctggtgga ggcattccag600cctctgggca tctccgactg gaactcaatt ttctggatcg cccaccctgg tggtccagcc660atcctagacc aagtggaaga aaagctggcc cttaagcccg agaagctaag cgccacacga720cacatcctga gcgagtatgg aaacatgtca agtgcttgtg tgctgttcat attggatgag780atgcggaaga agtcgattga ggatggcctc aagaccactg gagaaggctc gagtggggtg840ttttatttgg cttcggacc 859<210>6<211>858<212>DNA<213>Nelumbo nucifera<400>6ccgtctttgg atgctaggca ggacatggtg gtggttgagg tgccaaaact gggcaaggag 60gctgcgacga aggccattaa ggaatgggga cagccaagtc caagatcacc caccttgtct120tctgcaccat cagtggcgtc gacatgcccg gggctgacta ccagctcacc aagctcctcg180gccttcgccc ctccgtcaag agactcatga tgtaccaaca aggatgcttc gccggaggca240cggtccttcg cctggccaag gaccttgcag agaacaacag aggcgcccgt gtccttgtcg300tctgctcaga gctcactgct gtaccttccg tggcccaagt gacactcacc tcgacagtct360tgtaggccag gcactctttg gggatggagc agccgcagtt attgtgggtg caggcccggt420gcctggtgta gaaaagcctt tgtttgagtt ggtgtcggca gcccagacaa ttctcccaga480cagccatggc gccattgacg ggcacctgag agaggttgga cttaccttcc acctgctcaa540ggatgtgccc gggctcatct caaagaacat tgagaagagc ctggtggagg cattccagcc600tccgggcatc tccgactgga actcaatttt ctggatcgct caccctggtg gtccagccat660cctagaccaa gtggaagaaa agctggccct taagcccgag aagctgcgcg ccacacgaca720
catcctgagt gagtatggaa acatgtcaag tgcttgtgtt ctgttcatat tggatgagat780gcggaagaag tcgattgagg acgggctcaa gaccactgga gaagggctcg aatggggtgt840gctcttcgga ttcggacc 858<210>7<211>844<212>DNA<213>Nelumbo nucifera<400>7ggcaggacat ggtggtggtt gaggtgccaa aactgggcaa ggaggctgcg acgaaggcca 60ttaaggaatg gggacagccc aagtccaaga tcacccacct tgtcttctgc accaccagtg120gcgtcgacat gcccggggct gactaccagc tcaccaagct cctcggcctt cgcccctccg180tcaagagact catggtgtac caacaaggat gcttcgccgg aggcacagtc cttcgcctgg240ccaaggacct tgcagagaac aacagaggcg cccgtgtcct tgtcgtctgc tcagagctca300ctgctgttac cttccgtggt ccaagtgata cccacctcga cagtctagta ggccaggcac360tcttcgggga tggagcagcc gcagttattg tgggtgcaga cccggtgccc ggtgtagaaa420agcctttgtt tgagttggtg tcggcagccc agacaactct cccagacagc catggcgcca480ttgacgggca cctgagagag gttggactta ccttccacct gctcaaggat gtgcccgggc540tcatctcaaa gaacattgag aagagcctgg tggaggcatt ccagcctctg ggcatctccg600actggaactc aattttctgg atcgcccacc ctggtggtcc agccatccta gaccaagtgg660aagaaaagct ggcccttaag cccgagaagc tgcgcgccac acgacacatc ctgagtgagt720atggaaatat gtcaagtgct tgtgtgctgt tcatattgga tgagatgcgg aagaagtcga780ttgaggatgg cctcaagacc actggagaag ggctcgagtg gggtgtgcta tttggatttg840gacc 844
SEQUENCE LISTING<110>武漢大學(xué)<120>蓮藕查爾酮合酶的基因序列及其用途<130>蓮藕查爾酮合酶的基因序列及其用途<160>7<170>PatentIn version 3.1<210>8<211>278<212>PRT<213>Nelumbo nucifera<400>8Pro Ser Leu Asp Ala Arg Gln Asp Met Val Val Val Glu Val Pro Lys1 5 10 15Leu Gly Lys Glu Ala Ala Thr Lys Ala Ile Lys Glu Trp Gly Gln Pro20 25 30Lys Ser Lys Ile Thr His Leu Val Phe Cys Thr Thr Ser Gly Val Asp35 40 45Met Pro Gly Ala Asp Tyr Gln Leu Thr Lys Leu Leu Gly Leu Arg Pro50 55 60Ser Val Lys Arg Leu Met Met Tyr Gln Gln Gly Cys Phe Ala Gly Gly65 70 7580Thr Val Leu Arg Leu Ala Lys Asp Leu Ala Glu Asn Asn Arg Gly Ala85 90 95Arg Val Leu Val Val Cys Ser Glu Leu Thr Ala Val Thr Phe Arg Gly100 105 110Pro Ser Asp Thr His Leu Asp Ser Leu Val Gly Gln Ala Leu Phe Gly115120 125Asp Gly Ala Ala Ala Val Ile Val Gly Val Asp Pro Val Pro Gly Val130 135 140Glu Lys Pro Leu Phe Glu Leu Val Ser Ala Ala Gln Thr Ile Leu Pro145150 155 160Asp Ser His Gly Ala Ile Asp Gly His Leu Arg Glu Val Gly Leu Thr165170 175Phe His Leu Leu Lys Asp Val Pro Gly Leu Ile Ser Lys Asn Ile Glu180 185 190Lys Ser Leu Val Glu Ala Phe Gln Pro Leu Gly Ile Ser Asp Trp Asn195 200 205Ser Leu Phe Trp Ile Ala His Pro Gly Gly Pro Ala Ile Leu Asp Gln210 215 220Val Glu Glu Lys Leu Ala Leu Lys Pro Glu Lys Leu Arg Ala Thr Arg225 230235 240His Ile Leu Ser Glu Tyr Gly Asn Met Ser Ser Ala Cys Val Leu Phe245 250 255
Ile Leu Asp Glu Met Arg Lys Lys Ser Ile Val Asp Gly Leu Iys Thr260 265 270Thr Gly Glu Gly Leu Glu275<210>9<211>327<212>PRT<213>Nelumbo nucifera<400>9Gly Pro Asn Pro Asn Asn Thr Pro His Ser Ser Pro Ser Pro Val Val1 5 10 15Leu Arg Pro Ser Ser Ile Asp Phe Phe Arg Ile Ser Ser Asn Met Asn20 25 30Arg Thr Gln Ala Leu Asp Met Phe Pro Tyr Ser Leu Arg Met Cys Arg35 40 45Val Ala Leu Ser Phe Ser Gly Leu Arg Ala Ser Phe Ser Ser Thr Trp50 55 60Ser Arg Met Ala Gly Pro Pro Gly Trp Ala Ile Gln Lys Ile Glu Phe65 70 7580Gln Ser Glu Met Pro Arg Gly Trp Asn Ala Ser Thr Arg Leu Phe Ser85 90 95Met Phe Phe Glu Met Ser Pro Gly Thr Ser Leu Ser Arg Trp Lys Val100 105110Ser Pro Thr Ser Leu Arg Cys Pro Ser Met Ala Pro Trp Leu Ser Gly115 120 125Arg Ile Val Trp Ala Ala Asp Thr Asn Ser Asn Lys Gly Phe Ser Thr130 135 140Pro Gly Thr Gly Ser Ala Pro Thr Ile Thr Ala Ala Ala Pro Ser Pro145 150 155 160Lys Ser Ala Trp Pro Thr Arg Leu Ser Arg Val Ser Leu Gly Pro Arg165 170 175Lys Val Thr Ala Val Ser Ser Glu Gln Thr Thr Arg Thr Arg Ala Pro180 185190Leu Leu Phe Ser Ala Arg Ser Leu Ala Arg Arg Arg Thr Val Pro Pro195 200205Ala Lys His Pro Cys Trp Tyr Ile Met Asn Leu Leu Thr Glu Gly Arg210 215220Arg Pro Arg Ser Leu Val Ser Trp Ser Ala Pro Gly Met Ser Thr Pro225 230 235 240Gln Val Gly Thr Glu Asp Gln Val Arg Asp Leu Arg Phe Gly Leu Thr245 250 255Pro Phe Leu Tyr Gly Pro Leu His Ala Ala Ser Leu Ala Glu Leu Trp260265270
His Phe Asn His His His Val Pro Cys Arg Ser Arg Glu Arg Asn Ser275 280 285Arg Gly Gln Trp Arg Pro Gly Ala Cys Asp Val Gly Pro Ile Ala Tyr290 295 300Ser Glu Ser Tyr Tyr Ile Thr Ala Ser Leu His Val Leu Glu Asn Leu305 310 315320Ala Tyr Thr Ile Ala Cys Ser325<210>10<211>284<212>PRT<213>Nelumbo nucifera<400>10Pro Ser Leu Asp Ala Arg Asp Met Val Val Val Glu Val Pro Lys Leu1 5 1015Gly Lys Glu Ala Ala Thr Lys Ala Ile Lys Glu Trp Gly Gln Pro Lys20 25 30Ser Lys Ile Thr His Leu Val Phe Cys Thr Thr Ser Gly Val Asp Met35 4045Pro Gly Ala Asp Tyr Gln Leu Thr Lys Leu Leu Gly Leu Arg Pro Ser50 5560Val Lys Arg Leu Met Met Tyr Gln Gln Gly Cys Phe Ala Gly Gly Thr65 70 75 80Val Leu Arg Leu Ala Lys Asp Leu Ala Glu Asn Asn Arg Gly Ala Arg85 9095Val Leu Val Val Cys Ser Glu Leu Thr Ala Val Thr Phe Arg Gly Pro100 105 110Ser Asp Thr His Leu Asp Ser Leu Val Gly Gln Ala Leu Phe Gly Asp115120125Gly Ala Ala Ala Val Ile Val Gly Ala Asp Pro Val Pro Gly Val Glu130 135 140Lys Pro Leu Phe Glu Leu Val Ser Ala Ala Gln Thr Ile Leu Pro Asp145 150 155 160Ser His Gly Ala Ile Asp Gly His Leu Arg Glu Val Gly Leu Thr Phe165 170 175His Leu Leu Lys Asp Val Pro Gly Leu Ile Ser Lys Asn Ile Glu Lys180185 190Ser Leu Val Glu Ala Phe Gln Pro Leu Gly Ile Ser Asp Trp Asn Ser195 200 205Ile Phe Trp Ile Ala His Pro Gly Gly Pro Ala Ile Leu Asp Gln Val210 215 220Glu Glu Lys Leu Ala Leu Lys Pro Glu Lys Leu Ser Ala Thr Arg His225 230 235 240
Ile Leu Ser Glu Tyr Gly Asn Met Ser Ser Ala Cys Val Leu Phe Ile245 250 255Leu Asp Glu Met Arg Lys Lys Ser Ile Glu Asp Gly Leu Lys Thr Thr260 265270Gly Arg Arg Leu Glu Val Cys Ser Ser Asp Ser Ala275 280<210>11<211>286<212>PRT<213>Nelumbo nucifera<400>11Pro Ser Leu Asp Ala Arg Gln Asp Met Val Val Val Glu Val Pro Lys1 5 10 15Leu Gly Lys Glu Ala Ala Ser Lys Ala Ile Lys Glu Trp Gly Gln Pro20 25 30Lys Ser Lys Ile Thr His Leu Val Phe Cys Thr Ile Ser Gly Val Asp35 40 45Met Pro Gly Ala Asp Tyr Gln Leu Thr Lys Leu Leu Gly Leu Arg Pro50 55 60Ser Val Lys Arg Leu Met Met Tyr Gln Gln Gly Cys Leu Ala Gly Gly65 70 75 80Thr Val Leu Arg Leu Ala Lys Asp Leu Ala Glu Asn Asn Arg Gly Ala85 90 95Arg Val Leu Val Val Cys Ser Glu Leu Thr Ala Val Thr Phe Arg Gly100 105 110Pro Ser Asp Thr His Leu Asp Ser Leu Val Gly Gln Ala Leu Phe Gly115120 125Asp Gly Ala Ala Ala Val Ile Val Gly Ala Asp Pro Val Pro Gly Val130135 140Glu Lys Pro Leu Phe Glu Leu Val Ser Ala Ala Gln Thr Ile Leu Pro145 150 155 160Asp Ser His Gly Ala Ile Asp Gly His Leu Arg Glu Val Gly Leu Thr165 170 175Phe His Leu Leu Lys Asp Val Pro Gly Leu Ile Ser Lys Asn Ile Glu180 185 190Lys Ser Leu Val Glu Ala Phe Gln Pro Leu Gly Ile Ser Asp Trp Asn195 200 205Ser Ile Phe Trp Ile Ala His Pro Gly Gly Pro Ala Phe Leu Asp Gln210 215 220Val Glu Glu Lys Leu Ala Leu Lys Pro Glu Lys Leu Arg Ala Thr Arg225 230 235 240His Ile Leu Ser Glu Tyr Gly Asn Met Ser Ser Ala Cys Val Leu Phe245 250 255
Ile Leu Asp Glu Met Arg Thr Thr Ser Ile Glu Asp Gly Leu Arg Pro260 265270Leu Glu Lys Gly Ser Asn Gly Val Phe Tyr Ser Asp Ser Asp275 280 285<210>12<211>286<212>PRT<213>Nelumbo nucifera<400>12Pro Ser Leu Asp Ala Arg Gln Ala Met Val Val Val Glu Val Pro Lys1 5 10 15Leu Gly Lys Glu Ala Ala Thr Lys Ala Ile Lys Glu Trp Gly Gln Pro20 25 30Lys Ser Lys Ile Thr His Leu Val Phe Cys Thr Thr Ser Gly Val Asp35 40 45Met Pro Gly Ala Asp Tyr Gln Leu Thr Lys Leu Leu Gly Leu Arg Pro50 55 60Ser Val Lys Arg Leu Met Met Tyr Gln Gln Gly Cys Phe Ala Gly Gly65 70 75 80Thr Val Leu Arg Leu Ala Lys Asp Leu Ala Glu Asn Asn Arg Gly Ala85 90 95Arg Val Leu Val Val Cys Ser Glu Leu Thr Ala Val Thr Phe Arg Gly100 105110Pro Ser Asp Thr His Leu Asp Ser Leu Val Gly Gln Ala Leu Phe Gly115 120125Asp Gly Ala Ala Ala Val Ile Val Gly Ala Asp Pro Val Pro Gly Val130 135 140Glu Lys Pro Leu Phe Glu Leu Val Ser Ala Ala Gln Thr Ile Leu Pro145 150 155 160Asp Ser His Gly Ala Ile Asp Gly His Leu Arg Glu Val Gly Leu Thr165 170 175Phe His Leu Leu Lys Asp Val Pro Gly Leu Ile Ser Lys Asn Ile Glu180 185 190Lys Ser Leu Val Glu Ala Phe Gln Pro Leu Gly Ile Ser Asp Trp Asn195 200205Ser Ile Phe Trp Ile Ala His Pro Gly Gly Pro Ala Ile Leu Asp Gln210 215 220Val Glu Glu Lys Leu Ala Leu Lys Pro Glu Lys Leu Ser Ala Thr Arg225 230235240His Ile Leu Ser Glu Tyr Gly Asn Met Ser Ser Ala Cys Val Leu Phe245250255Ile Leu Asp Glu Met Arg Lys Lys Ser Ile Glu Asp Gly Leu Lys Thr260265 270
Thr Gly Glu Gly Ser Ser Gly Val Phe Tyr Leu Ala Ser Asp275 280285<210>13<211>277<212>PRT<213>Nelumbo nucifera<400>13Pro Ser Leu Asp Ala Arg Gln Asp Met Val Val Val Glu Val Pro Lys1 5 10 15Leu Gly Lys Glu Ala Ala Thr Lys Ala Ile Lys Glu Trp Gly Gln Pro2025 30Ser Pro Arg Ser Pro Thr Leu Ser Ser Ala Pro Ser Val Ala Ser Thr35 4045Cys Pro Gly Leu Thr Thr Ser Ser Pro Ser Ser Ser Ala Phe Ala Pro50 55 60Pro Ser Arg Asp Ser Cys Thr Asn Lys Asp Ala Ser Pro Glu Ala Arg65 70 75 80Ser Phe Ala Trp Pro Arg Thr Leu Gln Arg Thr Thr Glu Ala Pro Val85 90 95Ser Leu Ser Ser Ala Gln Ser Ser Leu Leu Tyr Leu Pro Trp Pro Lys100 105 110His Ser Pro Arg Gln Ser Cys Arg Pro Gly Thr Leu Trp Gly Trp Ser115 120 125Ser Arg Ser Tyr Cys Gly Cys Arg Pro Gly Ala Trp Cys Arg Lys Ala130 135 140Phe Val Val Gly Val Gly Ser Pro Asp Asn Ser Pro Arg Gln Pro Trp145 150 155 160Arg His Arg Ala Pro Glu Arg Gly Trp Thr Tyr Leu Pro Pro Ala Gln165 170 175Gly Cys Ala Arg Ala His Leu Lys Glu His Glu Glu Pro Gly Gly Gly180 185190Ile Pro Ala Ser Gly His Leu Arg Leu Glu Leu Asn Phe Leu Asp Arg195 200205Ser Pro Trp Trp Ser Ser His Pro Arg Pro Ser Gly Arg Lys Ala Gly2l0 215 220Pro Ala Arg Glu Ala Ala Arg His Thr Thr His Pro Glu Val Trp Lys225 230 235 240His Val Lys Cys Leu Cys Ser Val His Ile Gly Asp Ala Glu Glu Val245 250 255Asp Gly Arg Ala Gln Asp His Trp Arg Arg Ala Arg Met Gly Cys Ala260 265270Leu Arg Ile Arg Thr275
<210>14<211>275<212>PRT<213>Nelumbo nucifera<400>14Gly Arg Thr Trp Trp Trp Leu Arg Cys Gln Asn Trp Ala Arg Arg Leu1 5 10 15Arg Arg Arg Pro Leu Arg Asn Gly Asp Ser Pro Ser Pro Arg Ser Pro20 25 30Thr Leu Ser Ser Ala Pro Pro Val Ala Ser Thr Cys Pro Gly Leu Thr35 40 45Thr Ser Ser Pro Ser Ser Ser Ala Phe Ala Pro Pro Ser Arg Asp Ser50 55 60Trp Cys Thr Asn Lys Asp Ala Ser Pro Glu Ala Gln Ser Phe Ala Trp65 70 75 80Pro Arg Thr Leu Gln Arg Thr Thr Glu Ala Pro Val Ser Leu Ser Ser85 90 95Ala Gln Ser Ser Leu Leu Leu Pro Ser Val Val Gln Val Ile Pro Thr100 105 110Ser Thr Val Ala Arg His Ser Ser Gly Met Glu Gln Pro Gln Leu Leu115120 125Trp Val Gln Thr Arg Cys Pro Val Lys Ser Leu Cys Leu Ser Trp Cys130 135 140Arg Gln Pro Arg Gln Leu Ser Gln Thr Ala Met Ala Pro Leu Thr Gly145150 155 160Thr Glu Arg Leu Asp Leu Pro Ser Thr Cys Ser Arg Met Cys Pro Gly165 170 175Ser Ser Gln Arg Thr Leu Arg Arg Ala Trp Trp Arg His Ser Ser Leu180 185190Trp Ala Ser Pro Thr Gly Thr Gln Phe Ser Gly Ser Pro Thr Leu Val195 200 205Val Gln Pro Ser Thr Lys Trp Lys Lys Ser Trp Pro Leu Ser Pro Arg210 215 220Ser Cys Ala Pro His Asp Thr Ser Val Ser Met Glu Ile Cys Gln Val225 230 235 240Leu Val Cys Cys Ser Tyr Trp Met Arg Cys Gly Arg Ser Arg Leu Arg245 250 255Met Ala Ser Arg Pro Leu Glu Lys Gly Ser Ser Gly Val Cys Tyr Leu260 265 270Asp Leu Asp27權(quán)利要求
1.一種分離的蓮藕查爾酮合酶基因序列，其具有與SEQ ID NO1、SEQ IDNO2、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO5、SEQ ID NO6、SEQ ID NO7所示核苷酸序列至少80％同源性的序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種分離的蓮藕查爾酮合酶氨基酸序列，其具有與SEQ ID NO8、SEQ ID NO9、SEQ ID NO10、SEQ ID NO11、SEQ ID NO12、SEQ ID NO13、SEQ ID NO14所示氨基酸序列至少85％同源性的序列。
3.一種分離的蓮藕查爾酮合酶基因序列在花卉植物的花色基因工程育種中的應(yīng)用。
4.一種分離的蓮藕查爾酮合酶基因序列在增加蓮中黃酮類及花青素含量的基因工程育種中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蓮藕查爾酮合酶的基因序列及用途，蓮藕幼葉cDNA中CHS基因家族的7個(gè)成員外顯子2的部分序列，長(zhǎng)度在844bp－936bp，編碼278－284個(gè)氨基酸，而且7個(gè)核苷酸序列及其氨基酸序列都有明顯的差異。與GenBank中其它物種的CHS進(jìn)行比較，其核苷酸序列相似性至少80％，氨基酸序列相似至少85％。該基因家族的七個(gè)成員在花發(fā)育、花色素苷合成及花色素苷基因的表達(dá)調(diào)控，分子系統(tǒng)學(xué)研究，以及提高蓮葉中對(duì)人體具有重要的醫(yī)療保健作用的花青素含量的中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12N9/00GK1603412SQ20041006100
公開日2005年4月6日 申請(qǐng)日期2004年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月27日
發(fā)明者王曼玲, 朱虹玲, 陳朝明, 胡中立, 周明全, 宋運(yùn)淳 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)