專利名稱：?jiǎn)伟费趸富钚詼y(cè)定方法及單胺氧化酶診斷試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及酶法測(cè)定單胺氧化酶活性的方法，以及應(yīng)用該方法配制而成的單胺氧化酶診斷試劑盒，屬于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)中，測(cè)定單胺氧化酶(MAO)活性的方法主要有熒光法、免疫抑制法和化學(xué)分光光度法。熒光法是以β-苯乙胺作為底物來(lái)檢測(cè)單胺氧化酶，其依據(jù)是β-苯乙胺在10～100mg時(shí)反應(yīng)速度最大，高于芐胺和5-羥色胺的反應(yīng)速度。免疫學(xué)方法則利用單胺氧化酶抗體與單胺氧化酶發(fā)生反應(yīng)，測(cè)定反應(yīng)后形成的單胺氧化酶同工酶，目前應(yīng)用較多的單克隆抗體有MAO-A3C9、MAO-A4F10、MAO-A7B10、MAO-A7E10和MAO-B1C2等。
相對(duì)而言，化學(xué)分光光度法應(yīng)有更為普遍?？梢杂脝伟费趸复呋奉愥尫懦龅倪^(guò)氧化氫(H2O2)去氧化10-N-甲基氨基甲?；?3，7-二甲氨基-10-氫-吩噻嗪(MCDP)等發(fā)色劑進(jìn)行測(cè)定，也可以應(yīng)用芐胺(Benzylamine)、對(duì)苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺(butylamine)、戊基胺(amylamine)、β-苯乙基胺(b-phenylethylamine)、酪胺(tyramine，又稱“3-對(duì)羥基苯乙胺”，3-parahdroxyphenylethylamine)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine)等作為反應(yīng)底物來(lái)測(cè)定單胺氧化酶的活性。其中，應(yīng)用苯甲胺類型底物測(cè)得的單胺氧化酶的活性比其它底物高，而用丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺作底物測(cè)得的活性約為3-對(duì)羥基苯乙胺作底物的30％。目前，單胺氧化酶測(cè)定多用芐胺和對(duì)苯甲胺-β-偶氮萘酚作為底物。芐胺法的原理是芐胺在單胺氧化酶的作用下生成芐醛，然后在強(qiáng)堿性氫氧化鈉的條件下與二硝基苯肼反應(yīng)，生成醛苯腙，這在生化儀上測(cè)定較困難；對(duì)苯甲胺-β-偶氮萘酚方法則需要用環(huán)乙烷提取，限制了該方法的實(shí)用性，且不能應(yīng)用全自動(dòng)生化儀分析。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種可以克服現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn)的測(cè)定單胺氧化酶活性的方法，以及應(yīng)用該方法配制而成的單胺氧化酶診斷試劑盒。采用該試劑盒中的試劑，能夠利用紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行單胺氧化酶活性測(cè)定，而且測(cè)定速度快、準(zhǔn)確度高，為在醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域切實(shí)推廣單胺氧化酶活性測(cè)定方法及其診斷試劑盒提供技術(shù)支撐。
為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的之一，一種測(cè)定單胺氧化酶活性的方法，采用以下步驟進(jìn)行首先，將需要測(cè)定的樣品與含有胺類化合物、過(guò)氧化物酶和還原型色原體組合的試劑混勻，使之發(fā)生以下反應(yīng)，
然后，將反應(yīng)混合物置于紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀下，檢測(cè)主波長(zhǎng)400～600nm的吸光度的上升速度，進(jìn)而測(cè)算出樣品中單胺氧化酶的活性大小。
上述測(cè)定單胺氧化酶活性的方法中，所述胺類化合物優(yōu)選以下物質(zhì)之一，芐胺、對(duì)苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺、酪胺、5-羥色胺或者這七種物質(zhì)的衍生物。
上述測(cè)定單胺氧化酶活性的方法中，所述“還原型色原體組合”是由還原型色原體A與另外一種組分B構(gòu)成。具體為還原型色原體A為“3-甲基-2-苯噻唑酮腙”(英文簡(jiǎn)稱MBTH，全稱是3-methyl-2-benzothiazolinone-hydrszone)或者“4-氨基抗砒呍”(英文全稱是4-aminoantipyrine)；
另外一種組分B為以下15種物質(zhì)之一①石碳酸(phenol)，②N-乙基N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺(N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-m-anisidine，簡(jiǎn)稱ESPAS)，③N，N-雙乙基-m-甲苯胺(N，N-Diethyl-m-toluidine)，④2，4-雙氯石碳酸(2，4-Dichloriphenol)，⑤2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸(2，4，6-Tribromo-3-hydroxy-benzenesulfonic acid，簡(jiǎn)稱TBHB)，⑥3，5-雙氯石碳酸磺酸(3，5-Dichlorophenolsulfonic acid)，⑦3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸(3，5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonicacid，簡(jiǎn)稱DHBS)，⑧N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽(N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine sodium，簡(jiǎn)稱TOOS)，⑨仨溴羥基苯甲酸(Tribromohydroxybenzoic acid)，⑩雙甲基苯胺(Dimethylaniline，簡(jiǎn)稱DMA)，(11)N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺(簡(jiǎn)稱EHSPT，全稱為N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine)，(12)2，2′-聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽(2，2′-azino-bis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)，簡(jiǎn)稱ABTS)，(13)2，2′-連氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)，英文名稱為2，2′-azino-bis-(3-ethylbenztbiozoline-6-sulfonic acid)，(14)4-羥基-3-甲氧基苯甲酸(Vanillic acid(4-hydroxy-3-methoxybenzoicacid)，簡(jiǎn)稱HMB)，(15)3-甲基-乙基-羥基苯胺(3-methyl-ethyl-hydroxyaniline，簡(jiǎn)稱MEHA)。
測(cè)定過(guò)程中，被測(cè)樣品與試劑的使用比例按體積控制在1∶10～1∶500，反應(yīng)溫度控制在20℃～50℃，反應(yīng)時(shí)間控制在2～30分鐘，檢測(cè)時(shí)設(shè)定副波長(zhǎng)在500～700nm以上。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明另外一個(gè)目的——單胺氧化酶診斷試劑盒，可以是由以下成分組成的單劑緩沖液 40～200mmol/l，胺類化合物 0.5～20mmol/l，過(guò)氧化物酶 5000～50000U/l，還原型色原體組合 0.1～20mmol/l，穩(wěn)定劑/試劑總體積10～80％。
其中“還原型色原體組合”的含義如前所述，兩種組分A和B的濃度均為0.1～20mmol/l。
也可以將以上單劑中的各種成分進(jìn)行組合配制成雙劑，以利于消除內(nèi)、外源污染，比如 其中，還原型色原體組合(一)可以是3-甲基-2-苯噻唑酮腙或者4-氨基抗砒呍；還原型色原體組合(二)可以是前述15種物質(zhì)之一。
雙劑的配方不僅僅限于上述配方，還原型色原體組合(一)和(二)可以互換位置，而且，試劑I中的成分——過(guò)氧化物酶可以放在試劑II，試劑II中的成分——胺類化合物也可以放在試劑I，如此可以形成多種配方，不一一列舉。
還可以將試劑配成如下三試劑，不但更有利于消除內(nèi)、外源污染，還有利于試劑更穩(wěn)定。比如 與雙劑類似，三劑中還原型色原體組合(一)可以是3-甲基-2-苯噻唑酮腙或者4-氨基抗砒呍，組合(二)可以是前述15種物質(zhì)之一。
三劑的配方也不僅僅限于上述配方，還原型色原體組合(一)和(二)可以分開(kāi)來(lái)放在試劑I、II或III的任何位置，試劑II中的成分——過(guò)氧化物酶，可以放在試劑I或試劑III中，試劑III中的成分——胺類化合物，也可以放在試劑I或者試劑II當(dāng)中，如此可以形成多種配方，不再一一列舉。
本發(fā)明測(cè)定單胺氧化酶活性的診斷試劑盒的成分當(dāng)中，所述“胺類化合物”優(yōu)選以下物質(zhì)之一芐胺、對(duì)苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺、酪胺、5-羥色胺或者這七種物質(zhì)的衍生物，但選擇范圍不受這些列舉所限制。
配制診斷試劑盒時(shí)，選擇緩沖液的基本要求是PH值在6.0～11.0范圍之內(nèi)，可以是“三羥甲基氨基甲烷～鹽酸(Tris-HCl)緩沖液”、“三乙醇胺(Triethanolamine)緩沖液”、“2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2-Amino-2-methyl-1-propanol)緩沖液”、“咪唑～鹽酸(Imidazole-HCl)緩沖液”、“雙甘氨肽(Glycylglycine)緩沖液”、“檸檬酸～檸檬酸鈉緩沖液”、“巴比妥鈉～鹽酸緩沖液”、“碳酸鈉～碳酸氫鈉緩沖液”、“硼酸～硼砂緩沖液”、“甘氨酸～氫氧化鈉緩沖液”、“硼砂～氫氧化鈉緩沖液”、“磷酸(Phosphate)緩沖液”或者“磷酸鹽(Phosphate-Sodium Chloride，PBS)緩沖液”中的至少一種，但緩沖液的選擇范圍并不受這些列舉所限制。
此外，為減少各試劑成分之間的交叉影響、保持試劑的穩(wěn)定性，以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存，以上單劑、雙劑的試劑I/試劑II、三劑的試劑I/試劑II/試劑III當(dāng)中通常加入穩(wěn)定劑，其用量約占所在試劑總體積的10～80％(或者濃度在10～50mmol/l范圍之內(nèi))。
用作穩(wěn)定劑的物質(zhì)可以是乙二醇、丙二醇、甘油、硫酸銨、硫基乙醇、葡萄糖、腺苷二磷酸、牛血清白蛋白、碳酸鹽、膽酸鹽、葡聚糖、乙二胺四乙酸、黃素腺嘌呤二核苷酸、黃素單核苷酸、谷氨酸鹽、還原型谷胱甘肽、乳糖、甘露醇、丁二酸鹽或者氯化鈉中的至少一種。
研究表明，從測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無(wú)論是單劑、雙劑還是三劑，如下配方成分關(guān)系的診斷試劑盒較為理想，也是本發(fā)明的優(yōu)選方案緩沖液 80～120mmol/l，胺類化合物 1～5mmol/l，過(guò)氧化物酶 10000～20000U/l，還原型色原體組合 0.5～4mmol/l，穩(wěn)定劑/試劑總體積20～50％。
本發(fā)明應(yīng)用芐胺、對(duì)苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺、酪胺等胺類化合物，與單胺氧化酶作用產(chǎn)生過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫再與過(guò)氧化物酶發(fā)生酶偶聯(lián)反應(yīng)，將無(wú)色的還原型色原體(Chromogen)組合系統(tǒng)氧化成有顏色的醌亞胺色原(Quioneimine)或者吲嗒胺色原(Indamine)染料。由于不同染料在400～600nm范圍內(nèi)的吸收波長(zhǎng)不同，染料含量與吸光度之間有很好的定量對(duì)應(yīng)關(guān)系，因此，測(cè)量反應(yīng)期間的吸光度變化，便能很好地反映出被測(cè)樣品中單胺氧化酶的活性大小。
本發(fā)明技術(shù)方案的突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步主要表現(xiàn)在(1)本發(fā)明完全利用酶學(xué)方法，酶解反應(yīng)具有特異性高的特點(diǎn)，通過(guò)將無(wú)色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原或者吲嗒胺色原染料，定量反映出被測(cè)樣品中單胺氧化酶的活性，測(cè)試結(jié)果準(zhǔn)確；(2)參與酶偶聯(lián)反應(yīng)的成分都是外加的，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染，測(cè)試過(guò)程精確度高；(3)該方法簡(jiǎn)便、易操作，可快速得到檢測(cè)結(jié)果，而且反應(yīng)是在緩沖液條件下進(jìn)行，不會(huì)污染環(huán)境；(4)該方法在普通紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀上便可快速檢測(cè)，不需要特殊或額外儀器，測(cè)試成本低廉，便于行業(yè)內(nèi)推廣應(yīng)用；(5)應(yīng)用本發(fā)明提供的測(cè)定方法可以制成液態(tài)試劑、干粉試劑、干試劑等多種形式的試劑，用于測(cè)定各種樣品中單胺氧化酶的活性大?。?6)本發(fā)明提供的液態(tài)單胺氧化酶活性診斷試劑盒，穩(wěn)定性好，存在于其中的各種酶的三維空間結(jié)構(gòu)保持完整，很好地保證了應(yīng)用測(cè)試效果。配成雙劑或者三劑以后，能夠進(jìn)一步降低各種成分之間的交叉影響，檢測(cè)結(jié)果更加可信，試劑更為穩(wěn)定，可以長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案作進(jìn)一步說(shuō)明。這些例子僅是一些應(yīng)用范例，不能理解為對(duì)本發(fā)明權(quán)利要求保護(hù)范圍的一種限制。
實(shí)施例一(單劑)按以下成分和用量配制單胺氧化酶活性診斷試劑盒雙甘氨肽緩沖液80mmol/l，丁基胺1mmol/l，過(guò)氧化物酶10000U/l，4-氨基抗砒呍 2mmol/l，石碳酸10mmol/l，乙二醇50％(占試劑總體積)。
在全自動(dòng)生化分析儀(日立-7080)上設(shè)定溫度37℃、反應(yīng)時(shí)間10分鐘、測(cè)試主波長(zhǎng)495～505nm、測(cè)試副波長(zhǎng)600nm以上，被測(cè)單胺氧化酶樣品與試劑的體積比例為1∶25，反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)(吸光度上升，下同)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測(cè)時(shí)間2分鐘。
加入樣品和配成的單劑，兩者在分析儀內(nèi)部自動(dòng)混勻，檢測(cè)、記錄495～505nm吸光度的上升情況。根據(jù)速率法、終點(diǎn)法等方法，對(duì)照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)算出樣品中單胺氧化酶的活性大小。對(duì)同一批樣品多次重復(fù)以上過(guò)程，測(cè)試結(jié)果重復(fù)性好、精確度高。
實(shí)施例二(雙劑)按以下成分和用量配制單胺氧化酶活性診斷試劑盒試劑I——咪唑～鹽酸緩沖液100mmol/l，過(guò)氧化物酶 15000U/l，4-氨基抗砒呍1mmol/l，甘油50％(占試劑I總體積)；試劑II——
咪唑～鹽酸緩沖液 100mmol/l，β-苯乙基胺 3mmol/l，2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸1mmol/l，乙二醇20mmol/l。
在全自動(dòng)生化分析儀(日立-7080)上設(shè)定溫度30℃、反應(yīng)時(shí)間15分鐘、測(cè)試主波長(zhǎng)546nm、測(cè)試副波長(zhǎng)600nm以上，被測(cè)單胺氧化酶樣品與試劑I和試劑II的總體積之比為1∶25，試劑I與試劑II的用量之比為4∶1，反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測(cè)時(shí)間2分鐘。
先加入樣品和試劑I，5分鐘之后加入試劑II，三者在分析儀內(nèi)部自動(dòng)混勻，檢測(cè)、記錄546nm吸光度的上升情況。根據(jù)速率法、終點(diǎn)法等方法，對(duì)照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)算出樣品中單胺氧化酶的活性大小。對(duì)同一批樣品多次重復(fù)以上過(guò)程，測(cè)試結(jié)果重復(fù)性好、精確度高。
實(shí)施例三(三劑)按以下成分和用量配制單胺氧化酶活性診斷試劑盒試劑I——三乙醇胺緩沖液 120mmol/l，3-甲基-2-苯噻唑酮腙2mmol/l，丙二醇 20mmol/l；試劑II——三乙醇胺緩沖液 120mmol/l，過(guò)氧化物酶 20000U/l，丙二醇 50％(占試劑II總體積)；試劑III——三乙醇胺緩沖液 120mmol/l，酪胺 5mmol/l，雙甲基苯胺 2mmol/l，
乙二醇50％(試劑III總體積)。
在全自動(dòng)生化分析儀(日立-7080)上設(shè)定溫度25℃、反應(yīng)時(shí)間20分鐘、測(cè)試主波長(zhǎng)578nm、測(cè)試副波長(zhǎng)700nm以上，被測(cè)樣品與試劑I、試劑II和試劑III的總體積之比為1∶25，試劑I、試劑II和試劑III的用量為8∶1∶1，反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測(cè)時(shí)間2分鐘。
先加入樣品和試劑I、試劑II，5分鐘之后加入試劑III，它們?cè)诜治鰞x內(nèi)部自動(dòng)混勻，檢測(cè)、記錄578nm吸光度的上升情況。根據(jù)速率法、終點(diǎn)法等方法，對(duì)照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)算出樣品中單胺氧化酶的活性大小。對(duì)同一批樣品多次重復(fù)以上過(guò)程，測(cè)試結(jié)果重復(fù)性好、精確度高。
實(shí)施例四(雙劑優(yōu)選例)按以下成分和用量配制單胺氧化酶活性診斷試劑盒試劑I——Tris-HCl緩沖液100mmol/l，過(guò)氧化物酶20000U/l，4-氨基抗砒呍 1mmol/l，甘油 50％(占試劑I總體積)；試劑II——Tris-HCl緩沖液100mmol/l，芐胺 2mmol/l，雙甲基苯胺2mmol/l，甘油 50％(占試劑II總體積)。
在全自動(dòng)生化分析儀(日立-7080)上設(shè)定溫度30℃、反應(yīng)時(shí)間10分鐘、測(cè)試主波長(zhǎng)578nm、測(cè)試副波長(zhǎng)700nm以上，被測(cè)樣品與試劑I和試劑II的總體積之比為1∶25，試劑I與試劑II的用量之比為4∶1，反應(yīng)方向?yàn)檎磻?yīng)，延遲時(shí)間1分鐘，檢測(cè)時(shí)間2分鐘。
先加入樣品和試劑I，5分鐘之后加入試劑II，三者在分析儀內(nèi)部自動(dòng)混勻，發(fā)生以下原理性反應(yīng)
檢測(cè)、記錄578nm吸光度的上升情況。根據(jù)速率法、終點(diǎn)法等方法，對(duì)照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)算出樣品中單胺氧化酶的活性大小。對(duì)同一批樣品多次重復(fù)以上過(guò)程，測(cè)試結(jié)果重復(fù)性好、精確度高。
總之，實(shí)驗(yàn)證明采用本發(fā)明的測(cè)定方法，完全可以通過(guò)紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀器，測(cè)定出單胺氧化酶樣品的活性大小，測(cè)試靈敏度高、精確度好，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染。而且，本發(fā)明提供的單胺氧化酶活性診斷試劑盒，穩(wěn)定性好，長(zhǎng)時(shí)間存放之后仍然能夠準(zhǔn)確檢測(cè)各種類型樣品中單胺氧化酶的活性。
權(quán)利要求
1.一種測(cè)定單胺氧化酶活性的方法，包括以下步驟①將待測(cè)樣品與含有胺類化合物、過(guò)氧化物酶和還原型色原體組合的試劑混勻，使之發(fā)生以下反應(yīng)，②將反應(yīng)混合物置于紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀下，檢測(cè)主波長(zhǎng)400～600nm的吸光度的上升速度，測(cè)算出樣品中單胺氧化酶的活性大小。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定單胺氧化酶活性的方法，其特征在于所述胺類化合物是以下物質(zhì)之一，芐胺、對(duì)苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺、酪胺、5-羥色胺或者這七種物質(zhì)的衍生物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定單胺氧化酶活性的方法，其特征在于所述“還原型色原體組合”是由還原型色原體A與另外一種組分B構(gòu)成，還原型色原體A為“3-甲基-2-苯噻唑酮腙”或者“4-氨基抗砒呍”，另外一種組分B為以下15種物質(zhì)之一石碳酸，N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺，N，N-雙乙基-m-甲苯胺，2，4-雙氯石碳酸，2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸，3，5-雙氯石碳酸磺酸，3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸，N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽，仨溴羥基苯甲酸，雙甲基苯胺，N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺，2，2′-聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽，2，2′-連氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)，4-羥基-3-甲氧基苯甲酸，3-甲基-乙基-羥基苯胺。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的測(cè)定單胺氧化酶活性的方法，其特征在于待測(cè)樣品與試劑的使用比例按體積控制在1∶10～1∶500，反應(yīng)溫度控制在20℃～50℃，反應(yīng)時(shí)間控制在2～30分鐘，檢測(cè)時(shí)設(shè)定副波長(zhǎng)在500～700nm以上。
5.一種單胺氧化酶診斷試劑盒，盒中試劑由以下成分組成緩沖液 40～200mmol/l，胺類化合物 0.5～20mmol/l，過(guò)氧化物酶 5000～50000U/l，還原型色原體組合0.1～20mmol/l，穩(wěn)定劑/試劑總體積 10～80％。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的單胺氧化酶診斷試劑盒，其特征在于所述胺類化合物是以下物質(zhì)之一，芐胺、對(duì)苯甲胺-β-偶氮萘酚、丁基胺、戊基胺、β-苯乙基胺、酪胺、5-羥色胺或者這七種物質(zhì)的衍生物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的單胺氧化酶診斷試劑盒，其特征在于所述“還原型色原體組合”是由還原型色原體A與另外一種組分B構(gòu)成，A和B的濃度均為0.1～20mmol/l；還原型色原體A為“3-甲基-2-苯噻唑酮腙”或者“4-氨基抗砒呍”；另外一種組分B為以下15種物質(zhì)之一石碳酸，N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺，N，N-雙乙基-m-甲苯胺，2，4-雙氯石碳酸，2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸，3，5-雙氯石碳酸磺酸，3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸，N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽，仨溴羥基苯甲酸，雙甲基苯胺，N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺，2，2′-聯(lián)氮-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽，2，2′-連氮基-雙(3-乙基苯并噻吡咯啉-6-磺酸)，4-羥基-3-甲氧基苯甲酸，3-甲基-乙基-羥基苯胺。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的單胺氧化酶診斷試劑盒，其特征在于所述緩沖液的PH范圍是6.0～11.0，優(yōu)選以下緩沖液中的一種，“三羥甲基氨基甲烷～鹽酸緩沖液”、“三乙醇胺緩沖液”、“2-氨基-2-甲基-1-丙醇緩沖液”、“咪唑～鹽酸緩沖液”、“雙甘氨肽緩沖液”、“檸檬酸～檸檬酸鈉緩沖液”、“巴比妥鈉～鹽酸緩沖液”、“碳酸鈉～碳酸氫鈉緩沖液”、“硼酸～硼砂緩沖液”、“甘氨酸～氫氧化鈉緩沖液”、“硼砂～氫氧化鈉緩沖液”、“磷酸緩沖液”或“磷酸鹽緩沖液”。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的單胺氧化酶診斷試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定劑為乙二醇、丙二醇、甘油、硫酸銨、硫基乙醇、葡萄糖、腺苷二磷酸、牛血清白蛋白、碳酸鹽、膽酸鹽、葡聚糖、乙二胺四乙酸、黃素腺嘌呤二核苷酸、黃素單核苷酸、谷氨酸鹽、還原型谷胱甘肽、乳糖、甘露醇、丁二酸鹽或者氯化鈉中的至少一種。
10.權(quán)利要求5～9中任意一種單胺氧化酶診斷試劑盒，其特征在于所述試劑配成單劑、雙劑或者三劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及單胺氧化酶活性的測(cè)定方法及其診斷試劑盒。利用芐胺、酪胺等胺類化合物，與單胺氧化酶作用產(chǎn)生過(guò)氧化氫，再與過(guò)氧化物酶發(fā)生酶偶聯(lián)反應(yīng)，將無(wú)色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原或者吲嗒胺色原染料，檢測(cè)反應(yīng)期間主波長(zhǎng)400～600nm吸光度的變化，定量反映出樣品中單胺氧化酶的活性大小。該方法特異性高，不受內(nèi)、外源物質(zhì)的污染，測(cè)試結(jié)果精確、準(zhǔn)確性好。將診斷試劑盒制成雙劑或三劑可減少各成分的交叉影響，保持試劑的穩(wěn)定性，便于長(zhǎng)期儲(chǔ)存。該方法在普通紫外/可見(jiàn)光分析儀或者半自動(dòng)/全自動(dòng)生化分析儀上便可快速檢測(cè)，不需要特殊或額外儀器，測(cè)試成本低廉，便于行業(yè)內(nèi)推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)C12Q1/28GK1789426SQ20041006619
公開(kāi)日2006年6月21日 申請(qǐng)日期2004年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月13日
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