專利名稱：水稻葉夾角相關基因及其編碼蛋白與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及水稻葉夾角相關基因及其編碼蛋白與應用，特別涉及水稻葉夾角相關基因及其編碼蛋白與該基因在控制水稻葉夾角中的應用。
背景技術：
水稻的形態(tài)建成是一個復雜的發(fā)育過程，并最終決定著水稻的株型。而水稻的株型是與產(chǎn)量和抗病性等密切相關的重要農(nóng)藝性狀，其構(gòu)成因素除包括有效分蘗數(shù)目、分蘗角度、穗部形態(tài)和株高外，同時也包括水稻葉片與水稻主莖的角度，即葉夾角的大小等因素。合理的株型可以使一定的水稻群體最大限度地提高單產(chǎn)。
目前，水稻中與形態(tài)建成相關的一些基因陸續(xù)被克隆出來。如我國學者李家洋實驗室克隆的MOC1基因直接影響水稻的分蘗數(shù)目(Li X，Qian Q，F(xiàn)u Z，et al.，Nature422，618-621)。有關分蘗角度的研究，目前日本科學家Takashi等人正在圖位克隆兩個具有極端分蘗角度的突變體即松散平臥生長的突變體1a和緊湊直立生長的突變體er的相關基因。但在葉夾角的研究方面，至今為止，尚沒有葉夾角受到影響的突變體被分離鑒定出來或著相關基因的克隆、功能鑒定的相關報道。
水稻的基因組學和生物信息學的工作為人們研究水稻中感興趣的基因提供了可能。至今為止，北京華大基因研究中心已經(jīng)采用Shotgun方法對水稻90％以上的序列進行了測序(Science296，79-92)。我國上海南方基因研究中心對水稻4號染色體進行了精確測序(Feng Q，Zhang Y，Hao P，et al.，Nature420，259)。日本對水稻的1號染色體也進行了精確測序(Sasaki T，Matsumpto T，Yamamoto K，etal.，Nature400，259)。其他各條染色體測序工作都在進行中，將于近期內(nèi)完成。同時，日本在2003年克隆了28,000個水稻的cDNA克隆，并對其相關的生物信息學進行了分析(Wyrwitcz et al.，Science303，168)。
反義RNA技術是一個已經(jīng)發(fā)展比較成熟的研究基因功能的技術。它是將基因以反向的方式插入到啟動子的下游，使表達的mRNA與內(nèi)源的該基因的mRNA反向互補，從而可以與內(nèi)源mRNA相結(jié)合，進而可以阻遏內(nèi)源基因翻譯成蛋白質(zhì)的過程。當我們對某一個感興趣的基因進行功能鑒定時，采用反義RNA技術可以使我們了解在該基因的表達被抑制的情況下，植物的生長發(fā)育等過程是否受到影響，從而可以推斷此基因參與了怎樣的生長發(fā)育過程。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種水稻葉夾角相關蛋白及其編碼基因。
本發(fā)明所提供的水稻葉夾角相關蛋白，名稱為OsLJB1，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQ ID №2；2)將序列表中SEQ ID №2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一至十個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且與水稻葉夾角相關的蛋白質(zhì)。
序列表中的SEQ ID №2由320個氨基酸殘基組成。
上述水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因也屬于本發(fā)明的保護范圍。
上述水稻葉夾角相關蛋白編碼基因的cDNA序列，可具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID №1的DNA序列；2)與序列表中SEQ ID №1限定的DNA序列具有95％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；3)在高嚴謹條件下可與序列表中的序列1限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
其中，所述高嚴謹條件為雜交后用含0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液在65℃下洗膜。
序列表中的SEQ ID №1由963個堿基組成，其編碼序列為自5’端第1到第963位堿基。
含有本發(fā)明基因的表達載體及細胞系均屬于本發(fā)明的保護范圍，如pUNANTILJB和含有pUNANTILJB的大腸桿菌。
擴增上述水稻葉夾角相關蛋白編碼基因中任一片段的引物對也在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
本發(fā)明的水稻葉夾角相關蛋白編碼基因可用于控制水稻葉夾角的大小。
在實際應用中，可將上述水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因的反義表達載體轉(zhuǎn)化水稻，得到葉夾角增大的水稻。
用于構(gòu)建上述水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因的反義表達載體的出發(fā)載體可為Ti類質(zhì)粒載體和病毒載體，優(yōu)選為Ti類質(zhì)粒載體。
所述轉(zhuǎn)化方法可為農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化法、基因槍介導轉(zhuǎn)化法或花粉管通道法，優(yōu)選為農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化法。
上述重組表達載體均可按照常規(guī)方法構(gòu)建。
本發(fā)明的水稻葉夾角相關蛋白及其編碼基因通過控制水稻的葉枕近軸面和遠軸面的生長，從而控制水稻葉夾角的大小。這是迄今為止發(fā)現(xiàn)的第一個參與水稻葉夾角調(diào)控過程的蛋白和基因。該基因的反義轉(zhuǎn)基因植株株系的葉夾角在T0代、T1代及T2代在營養(yǎng)生長后期和生殖生長期，顯著大于對照。而這一時期的葉夾角的大小對于水稻的灌漿期能源物質(zhì)的供給有重要的影響，并且直接決定著水稻的產(chǎn)量。本發(fā)明為培育葉夾角增大或減小的水稻以及提高水稻的產(chǎn)量和抗病性提供了一條重要的途徑。


圖1為OsLJB1的RT-PCR產(chǎn)物電泳圖譜圖2為OsLJB1基因反義表達載體的物理圖譜圖3為轉(zhuǎn)反義基因植株T2代與野生型中花10號的生殖生長期的表型4為Southern雜交結(jié)果具體實施方式
實施例1、OsLJB1的篩選及克隆通過對10K cDNA芯片(Lan et al.2004，Plant Mol Biol，54471-487)EST數(shù)據(jù)庫進行生物信息學分析，從中篩選到編碼一個C-x8-C-x5-C-x3-H類型的鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子基因。該基因的基因組中序列全長約為2.5kb，其cDNA中最大編碼框(ORF)全長963個堿基，編碼一320個氨基酸的蛋白。
根據(jù)生物信息學提供的序列資料設計以下引物5’端引物ATGA GTC GGC GGC AGG AGA TT(其中劃線序列為EcoRI位點)；3’端引物TAA AAG TTA AAT AGC AAC CCA ACA(其中劃線序列為XhoI位點)通過RT-PCR擴增得到OsLJB1的cDNA序列，具體參照Plant RT-PCR Kit 2.01(TaKaRa，Japan)的用戶手冊進行。
取1-2μg水稻幼苗總RNA(大約1-2μl)，和Kit的各種反轉(zhuǎn)錄試劑混合(MgCl24μl；10×RNA PCR Buffer 2μl；RNase Inhibitor 0.5μl；RNase free Water 8.5μl；dNTP Mixture 2μl；Reverse Transcriptase 1μl；Oligo dT-Adaptor 1μl)?；靹蚝?，42℃ 30min；99℃ 5min；5℃ 5min，完成反轉(zhuǎn)錄反應。
吸取2μl反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，作為模板進行PCR反應94℃ 2min后進入擴增程序94℃ 1min、62℃ 1min、72℃ 1min，30個循環(huán)后，72℃ 7min。
PCR產(chǎn)物經(jīng)常規(guī)瓊脂糖電泳分離，得到長約1kb的DNA帶(圖1)。回收該片段并克隆于T-easy載體(Promega)之上得到重組載體T-easy-OsLJB1，測序，得到如序列表中序列1所示的OsLJB1的cDNA序列，其編碼具有序列表中序列2的氨基酸殘基序列的蛋白質(zhì)。
實施例2、培育葉夾角增大的水稻
1、OsLJB1的反向表達質(zhì)粒的構(gòu)建提取玉米幼苗DNA待玉米植株長至5-6片真葉，剪取真葉一段，約0.2g，置于液氮中研磨；然后加入800μl新配制的提取緩沖液(0.1M Tris-HCl(pH8.0)；50mM EDTA(pH8.0)；0.5M NaCl；1％ SDS；1％β-巰基乙醇)，劇烈振蕩使其全部懸??；65℃水浴溫育30min，每5min顛倒混勻一次；然后加入250μl預冷的5M乙酸鉀，立即顛倒混勻，冰上5min；加入等量酚/氯仿，抽提一次，12000rpm離心5min；收集上清加入0.6倍體積的異丙醇沉淀DNA，室溫放置40min；12000rpm(4℃)離心15min，棄去上清；沉淀用70％、100％乙醇各洗一次；干燥后，溶于20μl含100μg/ml RNase的ddH2O中。取2uL稀釋到100ul，從中取出2uL作模板，進行PCR擴增。PCR引物序列如下5’端引物GGA AGC TTC TGC AGT GCA GCG TGA CCCGG(其中劃線序列為HindIII位點)，3’端引物CGG GAT CCA AGT AAC ACC AAA CAACAG GG(其中劃線序列為BamHI位點)。反應體系為50μL，PCR反應程序為94℃3min后進入擴增程序94℃ 1min、60℃ 2min、72℃ 1min，32個循環(huán)后，72℃ 10min。擴增得到的全長為2003bp的玉米泛素啟動子序列。Hind III和BamH I雙酶切PCR產(chǎn)物，得到帶有粘性末端的玉米泛素啟動子片段，備用。
用Sac I和EcoR I將Noster終止序列從pBI221質(zhì)粒切下，連接到pUC19的SacI和EcoR I位點之間，得到pUC19-Noster。Hind III和BamH I雙酶切pUC19-Noster回收大片段，與帶有粘性末端的玉米泛素啟動子片段連接，得到pUN19。
然后利用EcoR I部分酶切和Hind III完全酶切pUN19，從pUN19切下包含玉米泛素啟動子和Noster的長約2.3kb的片段，連接于質(zhì)粒pCAMBIA1301(Center forthe Application of Molecular Biology to International Agriclture，www.cambia.org)的EcoR I和Hind III位點之間，得到質(zhì)粒pUN1301。
在OsLJB1基因閱讀框兩端設計引物，5′端引物為GGG GTA CCA TGA GTC GGC GGCAGG AGA TT(其中劃線序列為KpnI位點)，3′端引物為CGA GCT CC TAA AAG TTA AATAGC AAC CCA ACA(其中劃線序列為SacI位點)，通過PCR(其反應程序同實施例1)以構(gòu)建好的克隆載體T-easy-OsLJB1為模板擴增到963bp的片段，利用KpnI和SaI酶對該片段和質(zhì)粒pUN1301分別進行雙酶切，回收OsLJB1和質(zhì)粒pUN1301的大片段，并按照摩爾比31(片段質(zhì)粒)的比例連接，連接反應體系為20μlT4DNA連接酶 2μl10×緩沖液 2μlPCR回收產(chǎn)物12μl質(zhì)?；厥债a(chǎn)物 4μl
連接反應12h，轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細胞，經(jīng)篩選獲得陽性菌株，將該重組質(zhì)粒命名為pUNANTILJB(其物理圖譜如圖2所示)。該重組質(zhì)粒采用來自玉米的Ubiquitin啟動子啟動OsLJB1基因以反向方式表達，從而可以抑制內(nèi)源基因的表達。
參照電激儀(EasyJecT Plus電激儀，英國EquiBio有限公司)操作指南，將質(zhì)粒pUNANTILJB通過電激法轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌EHA105中，經(jīng)篩選獲得陽性克隆。
2、pUNANTILJB對水稻的轉(zhuǎn)化及陽性苗GUS染色參照Hiei等(Plant Mol Biol.，1997，35205-218)的方法轉(zhuǎn)化水稻將攜帶質(zhì)粒pUNANTILJB的農(nóng)桿菌EHA105擴接種到20ml含Km(卡那霉素)50mg/L的YEB液體培養(yǎng)基中28℃搖菌培養(yǎng)至對數(shù)生長晚期；再從中取0.5ml轉(zhuǎn)接至50ml同樣的YEB培養(yǎng)基中，同樣條件下培養(yǎng)至OD600為0.5左右。將培養(yǎng)好的根癌農(nóng)桿菌4000g離心10分鐘后，沉淀用等體積的MS培養(yǎng)基重懸。按照常規(guī)方法侵染水稻中花10號的愈傷組織，經(jīng)共培養(yǎng)感染、抗性培養(yǎng)基篩選及分化培養(yǎng)基上分化得到潮霉素抗性的陽性苗。
煉苗同時，取潮霉素抗性的陽性苗的幼根切段2-3毫米進行GUS染色鑒定。GUS染色液組成為100mmol/L磷酸鹽pH7.0，0.1％Triton X-100，10mmol/L EDTA，0.5mmol/L鐵氰化鉀，X-Gluc 1mg/mL)。37℃溫育2小時，觀察藍色反應，結(jié)果約30％的轉(zhuǎn)基因株出現(xiàn)藍色反應，說明外源基因已經(jīng)表達。
待小苗長至10厘米左右時，打開容器封口膜，煉苗2-3天，然后將小苗移入陽光溫室，收種，得到T1種子。
為了進一步消除在溫室中可能存在的不良環(huán)境影響，同時確定該轉(zhuǎn)基因性狀的穩(wěn)定遺傳性，將以后得到T2種子在室外網(wǎng)室種植，結(jié)果如圖3所示，表明轉(zhuǎn)反義OsLJB1基因的植株表現(xiàn)出明顯的葉夾角改變，葉夾角變大。圖3中，上左為對照，野生型中花10號；上右為轉(zhuǎn)反義基因植株T2代。下圖為轉(zhuǎn)基因植株與野生型的葉枕比較。
3、Southern雜交水稻DNA的提取等到T2代植株在溫室長至5-6片真葉，剪取轉(zhuǎn)基因水稻真葉一段，約0.2g，置于液氮中盡量研磨；然后加入800μl新配制的提取緩沖液(0.1MTris-HCl(pH8.0)；50mM EDTA(pH8.0)；0.5M NaCl；1％SDS；1％β-巰基乙醇)，劇烈振蕩使其全部懸??；65℃水浴溫育30min，每5min顛倒混勻一次；然后加入250μl預冷的5M乙酸鉀，立即顛倒混勻，冰上5min；加入等量酚/氯仿，抽提一次，12000rpm離心5min；收集上清加入0.6倍體積的異丙醇沉淀DNA，室溫放置40min；12000rpm(4℃)離心15min，棄去上清；沉淀用70％、100％乙醇各洗一次；干燥后，溶于20μl含100μg/ml RNase的ddH2O中。
取30μg的水稻總DNA用適量的限制性內(nèi)切酶(1μg/5U)采用EcoR I、BamH I、Hind III分別酶切18h。取少量的酶切產(chǎn)物檢查酶切效果，將酶切徹底的DNA在0.7％的瓊脂糖凝膠上電泳4-5小時。電泳完畢后，將凝膠在1.5M NaCl和0.5M NaOH變性45min，切去凝膠的多余部分，通過毛細作用將DNA轉(zhuǎn)移至尼龍膜上，轉(zhuǎn)移緩沖液為20×SSC。尼龍膜晾干后于80℃烘烤0.5-2hr，真空保存。
雜交探針合成用[32P]d-CTP為標記物，PCR擴增法標記探針片段，PCR引物為5’端引物ATG AGT CGG CGG CAG GAG ATT；3’端引物TCC CAA ATG GTT GAC CTGAA。模板為水稻總DNA。反應體系為50μl，PCR反應程序為94℃ 2min后進入擴增程序94℃ 1min、60℃ 1min、72℃ 1min，32個循環(huán)后，72℃ 7min。擴增得到的全長的cDNA OsLJB序列，自起始密碼子到終止密碼子總長963堿基。標記好的探針經(jīng)過PCR產(chǎn)物回收試劑盒純化。將回收的PCR產(chǎn)物熱變性10min，冰浴迅速冷卻，即可用于雜交反應的DNA探針。
雜交前，將尼龍膜在5×SSC中浸透后，轉(zhuǎn)入預雜交液中，65℃下預雜交1-2hr，在預雜交結(jié)束后，加入32P標記的DNA探針，65℃下雜交16-20hr。雜交結(jié)束后，分別在高鹽洗膜緩沖液(2×SSC和0.5％SDS，室溫5min)和低鹽洗膜緩沖液(0.1×SSC和0.5％SDS，65℃ 30min)下，各洗兩次。晾干后，用X—光膠片進行放射自顯影。-70℃曝光1-4天后，按常規(guī)方法洗片，結(jié)果如圖4所示，表明三種內(nèi)切酶產(chǎn)物都表現(xiàn)出明顯的一條雜交帶，說明該基因在基因組中為單拷貝。圖4中，自左至右三個泳道分別為EcoRI、BamHI、Hind III酶切產(chǎn)物的雜交結(jié)果。
序列表<160>2<210>1<211>963<212>DNA<213>稻屬水稻(Oryza sativa var.Lansheng)<400>1atgagtcggc ggcaggagat ttgccgcaac ttccagcgcg gaagttgcaa gtacggagcg 60cagtgcaggt atttgcatgc ctcccctctc cagcaacagc agcagcagca gcagcaggcg120aagcctaacc cgtttggatt tggcaccgga agcaggcagc agcagcagcc gtcatttggc180tcacagttcc agcagcagca acagcagcag cagaagccca atccttttgg ttttggggta240caaggtgcca atgcccagtc acgtaatgct cctggtcctg cgaagccttt tcaaaataag300tgggtaaggg acccctcggc cccgacgaag caagcagagg cggtgcagcc accgcaagcg360caggctgccc acacctcctg tgaagaccct cagtcatgca gacaacaaat ttctgaggat420tttaagaacg aggctcctat ttggaagctt acttgttatg ctcatctcag aaatggccct480tgcgatatta agggagacat tagcttcgag gaactaagag ctaaagccta tgaggaagga540aagcaagggc attctctgca atcaatagtt gagggagaaa gaaatctaca aaacgcaaag600ttaatggagt ttactaatct gctcaatagt gcacgtccat cacaaactcc aagctttcct660actatgagtt ccttccctga agtgaaaaac gactcatcat tcggggcttc tcaaaccaat720ggaccacctg tgttcagtag tttcagtcaa attggagcag caactaatat tggaccaggg780ccaggaacca ccacaccagg aatgccagcc agtagtcctt ttggtcatcc aagctctgca840ccacttgctg cccctacttt tggcagttct caaatgaagt ttggagtttc gagcttttgt900tccatgattc catcccttct gggaattaat aactattgtg ttgggttgct atttaacttt960tag 963<210>2<211>320<212>PRT<213>稻屬水稻(Oryza sativa var.Lansheng)
<400>1Met Ser Arg Arg Gln Glu Ile Cys Arg Asn Phe Gln Arg Gly Ser Cys1 5 10 15Lys Tyr Gly Ala Gln Cys Arg Tyr Leu His Ala Ser Pro Leu Gln Gln20 25 30Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Ala Lys Pro Asn Pro Phe Gly Phe Gly35 40 45Thr Gly Ser Arg Gln Gln Gln Gln Pro Ser Phe Gly Ser Gln Phe Gln50 55 60Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Lys Pro Asn Pro Phe Gly Phe Gly Val65 70 75 80Gln Gly Ala Asn Ala Gln Ser Arg Asn Ala Pro Gly Pro Ala Lys Pro85 90 95Phe Gln Asn Lys Trp Val Arg Asp Pro Ser Ala Pro Thr Lys Gln Ala100 105 110Glu Ala Val Gln Pro Pro Gln Ala Gln Ala Ala His Thr Ser Cys Glu115 120 125Asp Pro Gln Ser Cys Arg Gln Gln Ile Ser Glu Asp Phe Lys Asn Glu130 135 140Ala Pro Ile Trp Lys Leu Thr Cys Tyr Ala His Leu Arg Asn Gly Pro145 150 155 160Cys Asp Ile Lys Gly Asp Ile Ser Phe Glu Glu Leu Arg Ala Lys Ala165 170 175Tyr Glu Glu Gly Lys Gln Gly His Ser Leu Gln Ser Ile Val Glu Gly180 185 190Glu Arg Asn Leu Gln Asn Ala Lys Leu Met Glu Phe Thr Asn Leu Leu195 200 205Asn Ser Ala Arg Pro Ser Gln Thr Pro Ser Phe Pro Thr Met Ser Ser210 215 220Phe Pro Glu Val Lys Asn Asp Ser Ser Phe Gly Ala Ser Gln Thr Asn225 230 235 240
Gly Pro Pro Val Phe Ser Ser Phe Ser Gln Ile Gly Ala Ala Thr Asn245 250 255Ile Gly Pro Gly Pro Gly Thr Thr Thr Pro Gly Met Pro Ala Ser Ser260 265 270Pro Phe Gly His Pro Ser Ser Ala Pro Leu Ala Ala Pro Thr Phe Gly275 280 285Ser Ser Gln Met Lys Phe Gly Val Ser Ser Phe Cys Ser Met Ile Pro290 295 300Ser Leu Leu Gly Ile Asn Asn Tyr Cys Val Gly Leu Leu Phe Asn Phe305 310 315 320
權利要求
1.水稻葉夾角相關蛋白，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQ ID №2；2)將序列表中SEQ ID №2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一至十個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且與水稻葉夾角相關的蛋白質(zhì)。
2.權利要求1所述的水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因。
3.根據(jù)權利要求2所述的基因，其特征在于所述水稻葉夾角相關蛋白編碼基因的cDNA序列，具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID №1的DNA序列；2)與序列表中SEQ ID №1限定的DNA序列具有95％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；3)在高嚴謹條件下可與序列表中的序列1限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
4.含有權利要求2或3所述的水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因的表達載體。
5.含有權利要求2或3所述的水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因的細胞系。
6.擴增權利要求2或3所述的水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因中任一片段的引物對。
7.權利要求2或3所述的水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因在控制水稻葉夾角大小中的應用。
8.根據(jù)權利要求7所述的應用，其特征在于將所述水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因的反義表達載體轉(zhuǎn)化水稻，得到葉夾角增大的水稻。
9.根據(jù)權利要求8所述的應用，其特征在于用于構(gòu)建所述水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因的反義表達載體的出發(fā)載體為Ti類質(zhì)粒載體和病毒載體。
10.根據(jù)權利要求8或9所述的應用，其特征在于所述轉(zhuǎn)化方法為農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化法、基因槍介導轉(zhuǎn)化法或花粉管通道法。
全文摘要
本發(fā)明公開了水稻葉夾角相關基因及其編碼蛋白與應用。本發(fā)明的水稻葉夾角相關蛋白，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQ ID №2；2)將序列表中SEQ ID №2的氨基酸殘基序列經(jīng)過一至十個氨基酸殘基的取代、缺失或添加且與水稻葉夾角相關的蛋白質(zhì)。該水稻葉夾角相關蛋白的編碼基因的反義轉(zhuǎn)基因植株株系的葉夾角在T0代、T1代及T2代在營養(yǎng)生長后期和生殖生長期，顯著大于對照。本發(fā)明為培育葉夾角增大或減小的水稻以及提高水稻的產(chǎn)量和抗病性提供了一條重要的途徑。
文檔編號C12N15/83GK1749396SQ20041007813
公開日2006年3月22日 申請日期2004年9月17日 優(yōu)先權日2004年9月17日
發(fā)明者種康, 王雷, 莊曉蕾, 薛勇彪, 許智宏 申請人:中國科學院植物研究所