專利名稱：：Cngh0010特異性的多核苷酸、多肽、抗體、組合物、方法和用途的制作方法
背景技術(shù)：
：A.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及CNGH0010多肽、其變體和片段、和對它們特異性地抗體和抗獨特型抗體，以及能編碼這樣的CNGH0010多肽、變體、片段、抗體的核酸，互補的核酸，載體，宿主細(xì)胞，和制備和使用它們的方法，包括診斷和治療制劑、施用和裝置。B.背景和相關(guān)技術(shù)牛皮癬是一種遺傳性的、多因子的、慢性炎性皮膚病，在美國人口中的流行率為2.6％。該病的特征在于顯著的角質(zhì)細(xì)胞過度增殖(hyperproliferation)，這導(dǎo)致了臨床上觀察到的快速的表皮代謝和增厚的、鱗狀的紅斑。該病的其它突出的組織病理學(xué)特征是真皮和表皮中的細(xì)胞因子生產(chǎn)、成纖維細(xì)胞活化、血管擴張和白細(xì)胞浸潤的改變。由活化的真皮中細(xì)胞和免疫細(xì)胞生產(chǎn)細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)異常似乎在介導(dǎo)與牛皮癬有關(guān)的炎性事件中起重要作用。為此，以前已經(jīng)在牛皮癬中描述了許多基因和/或蛋白表達(dá)的變化，且還已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些這樣的基因和/或蛋白與其它炎性疾病有關(guān)。它們包括促炎細(xì)胞因子例如IL-1和TNFα、粘附分子例如細(xì)胞間粘附分子1(ICAM1)和血管粘附分子1(VCAM1)、趨化因子和防衛(wèi)素。近來，已經(jīng)將基因表達(dá)微陣列技術(shù)用于以更綜合的規(guī)模描繪正常相對于和牛皮癬病變的皮膚的基因表達(dá)模式特征，且已經(jīng)提供了對牛皮癬的發(fā)病機理的新見解。cDNA微陣列技術(shù)能提供在一個雜交測定中同時測量數(shù)千個基因的表達(dá)水平的形式。它也是自動化的、高通量的形式。更重要的是，微陣列技術(shù)可以用于發(fā)現(xiàn)新基因、定量和分析基因表達(dá)和確定未知功能的基因的功能性。完成了人基因組的測序后，現(xiàn)在迅速地實現(xiàn)了新基因的鑒別和克隆。但是，對這些基因是否編碼新蛋白的理解和對這些新蛋白的功能的進(jìn)一步鑒別，并未進(jìn)展得如此迅速。該障礙已經(jīng)成為將高通量cDNA微陣列技術(shù)用于設(shè)計周到的實驗裝置中、以發(fā)現(xiàn)新的蛋白編碼基因或具有新功能的基因的一個主要原因，所述的基因可以隨后成為多種人疾病的潛在治療靶。因此，需要提供新的多肽、多核苷酸、抗體或其片段和它們的與疾病和狀況有關(guān)的應(yīng)用，以及對已知多肽、多核苷酸、抗體或其片段的改進(jìn)。發(fā)明概述本發(fā)明涉及分離的具有SEQIDNO3、5、7、9和11中的一個所示序列的CNGH0010多肽，其變體(例如基于下表2所述的差別外顯子剪接的那些)和片段。本發(fā)明的另一個方面是分離的包含SEQIDNO2、4、6、8和10中的一個所示的序列的多核苷酸，其變體(例如，基于下表2所述的差別外顯子剪接的那些)和片段和互補序列。本發(fā)明的另一個方面是分離的多核苷酸，其包含編碼SEQIDNO3、5、7、9和11中的一個所示的氨基酸序列的多核苷酸，其變體(例如，基于下表2所述的差別外顯子剪接的那些)和片段和互補序列。本發(fā)明也涉及分離的多肽、其變體或片段，所述多肽與SEQIDNO3、5、7、9和11的氨基酸序列中的任一個具有至少70％、優(yōu)選75％、80％、90％、95％、99％或100％的氨基酸序列同一性；分離的多核苷酸、其變體、互補序列或片段，所述多核苷酸與SEQIDNO2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一個具有至少70％、優(yōu)選75％、80％、90％、95％、99％或100％的核酸序列同一性；和分離的多核苷酸和其變體、互補序列或片段，所述多核苷酸與能編碼SEQIDNO3、5、7、9和11的氨基酸序列中的任一個的多核苷酸具有至少70％、優(yōu)選75％、80％、90％、95％、99％或100％的核酸序列同一性。本發(fā)明也提供了分離的核酸分子，其能雜交(a)能編碼多肽的核酸分子、其變體和片段，所述的多肽與SEQIDNO3、5、7、9和11中的一個的氨基酸序列具有至少70％的氨基酸序列同一性，或(b)核酸分子、其變體和片段和互補核酸，所述核酸分子與SEQIDNO2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一個具有至少70％的序列同一性。本發(fā)明還提供了包含能編碼多肽的核酸分子的重組載體，含有這樣的核酸和/或重組載體的宿主細(xì)胞，以及制備和/或使用這樣的核酸、載體和/或宿主細(xì)胞的方法。在另一個方面，本發(fā)明涉及抗體和抗體片段，其能結(jié)合(a)多肽或變體，所述多肽與SEQIDNO3、5、7、9和11中的一個的氨基酸序列的全部或部分具有至少70％的氨基酸序列同一性，或(b)由多核苷酸編碼的多肽或變體，所述的多核苷酸與SEQIDNO2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一個的全部或部分具有至少70％的核酸同一性。另外，本發(fā)明包含抗體組合物、制劑、裝置和轉(zhuǎn)基因的小鼠和植物。本發(fā)明也提供了用于生產(chǎn)和表征人、靈長類動物、嚙齒動物、哺乳動物、嵌合的、單鏈的、人源化的和/或CDR-移植的抗-CNGH0010抗體、免疫球蛋白、其切割產(chǎn)物和其它特定部分和變體的方法。本發(fā)明還提供了抗本發(fā)明的至少一種CNGH0010抗體的至少一種CNGH0010抗獨特型抗體?？梢詫⒛芫幋aCNGH0010多肽或其片段的核酸序列可操作地連接到能編碼異源氨基酸序列的核酸序列上，以形成融合蛋白。另一個實施方案是mimetibody，其包含至少一個融合到至少一部分免疫球蛋白區(qū)域上的CNGH0010多肽的片段。優(yōu)選的mimetidoby包含至少一個CH3區(qū)域，后者直接連接至少一個CH2區(qū)域，后者直接連接至少一個鉸鏈區(qū)或其片段，后者任選地直接連接至少一部分V區(qū)域，后者直接連接任選的連接序列，后者直接連接至少一個CNGH0010多肽片段，后者還任選地直接連接至少一個可變抗體序列的至少一部分。在其它優(yōu)選的實施方案中，免疫球蛋白是IgG1或IgG4。本發(fā)明的另一方面提供了包含CNGH0010多核苷酸的重組表達(dá)載體。在另一個實施方案中，本發(fā)明提供了分離的含有這樣的載體和/或CNGH0010多核苷酸的宿主細(xì)胞，例如哺乳動物的和非哺乳動物細(xì)胞。本發(fā)明也提供了生產(chǎn)CNGH0010多肽的方法，它通過在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)本發(fā)明的含有能編碼CNGH0010多肽的重組表達(dá)載體的宿主細(xì)胞來實現(xiàn)，從而生產(chǎn)該多肽。本發(fā)明也提供了至少一種在宿主細(xì)胞中表達(dá)CNGH0010多肽、抗-CNGH0010抗體或CNGH0010抗獨特型抗體的方法，其包括，在能以可檢測的和/或可回收的量表達(dá)至少一種這樣的CNGH0010多肽、抗-CNGH0010抗體或CNGH0010抗獨特型抗體的條件下，培養(yǎng)本文所述的宿主細(xì)胞。在另一方面，本發(fā)明提供了包含與異源氨基酸序列融合的多肽的融合蛋白，所述多肽與SEQIDNO3、5、7、9和11中的一個氨基酸序列具有至少70％、優(yōu)選75％、80％、90％、95％、99％或100％的氨基酸序列同一性。本發(fā)明也提供了至少一種組合物，其包含(a)如本文所述的分離的CNGH0010多核苷酸、多肽、多肽激動劑或拮抗劑、抗體和/或抗獨特型抗體；和(b)合適的載體或稀釋劑。根據(jù)已知的載體或稀釋劑，載體或稀釋劑可以任選地是藥學(xué)上可接受的。該組合物還可以任選地包含至少一種其它的化合物、蛋白或組分。本發(fā)明也涉及治療和/或診斷CNGH0010相關(guān)疾病的方法，所述疾病例如但不限于，牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺氣腫、哮喘、糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎、炎性腸疾病(包括Crohn氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)、不同類型的皮炎(包括過敏性皮炎、接觸性皮炎)、光化性角化病、傷口愈合、瘢痕形成、各種腎病、各種呼吸疾病、各種生殖器病例如子宮內(nèi)膜異位、黑素瘤、鱗狀細(xì)胞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、Grave氏病和其它炎性疾病和過度增殖病。在優(yōu)選的實施方案中，CNGH0010相關(guān)病是上皮相關(guān)病或狀況，從而該疾病或狀況會影響上皮細(xì)胞和有關(guān)細(xì)胞，所述疾病或狀況包括但不限于，牛皮癬、炎性腸疾病(包括Crohn氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)、不同類型的皮炎(過敏性皮炎、接觸性皮炎)、光化性角化病、傷口愈合、瘢痕形成、不同的腎病、不同的呼吸疾病、不同的生殖器病例如子宮內(nèi)膜異位、黑素瘤、鱗狀細(xì)胞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、肺氣腫、Grave氏病、糖尿病、天皰瘡、大皰性類天皰瘡，皰疹、線性IgA病、藥疹、大皰性表皮松解、口炎、口瘡性潰瘍、消化性潰瘍、胃息肉病、慢性阻塞性肺病、支氣管擴張、囊性纖維化、腎囊性病、膀胱炎和其它炎性疾病和過度增殖病。該方法使用(1)分離的多肽、其變體、衍生物和片段，所述多肽包含至少一個選自SEQIDNO3、5、7、9和11的序列，(2)分離的多核苷酸、其變體、衍生物和片段和互補序列，所述多核苷酸包含至少一個SEQIDNO2、4、6、8和10的序列，(3)分離的由多核苷酸編碼的多肽、其變體和片段，所述的多核苷酸包含至少一個SEQIDNO2、4、6、8和10的序列，和(4)這種多肽和核苷酸的激動劑和拮抗劑，來診斷和/或治療炎性和過度增殖病和狀況。本發(fā)明也提供了使用CNGH0010激動劑或拮抗劑、抗-CNGH0010抗體和/或CNGH0010抗獨特型抗體治療和/或診斷CNGH0010相關(guān)疾病的方法。本發(fā)明還提供了本文所述的任何發(fā)明。附圖簡述圖1顯示了CNGH0010基因的基因組結(jié)構(gòu)，外顯子由垂直線表示，且轉(zhuǎn)錄起始位點由彎曲箭標(biāo)表示。圖2顯示了使用來自A431細(xì)胞的RNA，通過RT-PCR確定的相對轉(zhuǎn)錄物水平。圖3顯示了在由CNGH0010轉(zhuǎn)錄物編碼的氨基酸的表達(dá)數(shù)據(jù)和分析的基礎(chǔ)上預(yù)測的蛋白結(jié)構(gòu)域。圖4顯示了在還原的和非還原的樣品中的HEK293細(xì)胞中表達(dá)的CNGH0010.2的SDS-PAGE分析。發(fā)明描述如本文所使用的，“CNGH0010多肽或蛋白”或“本發(fā)明的多肽或蛋白”包含分離的多肽、其變體、衍生物和片段，所述多肽包含至少一個選自SEQIDNO3、5、7、9和11的序列?！癈NGH0010核酸、多核苷酸或基因”或“本發(fā)明的核酸、多核苷酸或基因”指分離的多核苷酸、其變體、衍生物和片段和互補序列，所述多核苷酸包含至少一個SEQIDNO2、4、6、8和10的序列。通過使用RACE、RT-PCR和RNA印跡技術(shù)，已經(jīng)在上皮細(xì)胞類型中鑒別出了能編碼這些變體的CNGH0010蛋白和核酸的剪接變體。鑒別出了基因組CNGH0010DNA序列(SEQIDNO1)的外顯子和非翻譯區(qū)(表1)。如表2所示，CNGH0010基因具有多個可能的變體，其原因是不同的轉(zhuǎn)錄起始和終止位點，即可變剪接。主要變體是標(biāo)記的CNGH0010.1、CNGH0010.2、CNGH0010.3、CNGH0010.4和CNGH0010.5(分別由SEQIDNO2、4、6、8和10(核酸)和3、5、7、9和11(氨基酸)表示)。本發(fā)明的其它變體由外顯子的不同組合所包括，如在基因組序列和RT-PCR產(chǎn)物的分析中所看到的。這在表2中得到了證實，如通過可以加入編碼序列或從中刪除的外顯子所顯示的。存在于A431細(xì)胞中的CNGH0010轉(zhuǎn)錄物的RT-PCR分析表明，CNGH0010.1轉(zhuǎn)錄物關(guān)于有或沒有至少外顯子11和20存在是異質(zhì)的，而CNGH0010.2轉(zhuǎn)錄物關(guān)于外顯子9具有異質(zhì)性。同樣，CNGH0010.4轉(zhuǎn)錄物關(guān)于有或沒有外顯子9、10、11和12存在是異質(zhì)的。CNGH0010分子與細(xì)胞外基質(zhì)分子(膠原)和細(xì)胞因子(脂聯(lián)素(adiponectin))的相似性表明，它們可以參與調(diào)節(jié)細(xì)胞-細(xì)胞或細(xì)胞-基質(zhì)相互作用，或者結(jié)合或影響細(xì)胞因子與受體的結(jié)合。二種類型的活性最終都會影響細(xì)胞和組織的增殖、遷移和分化狀態(tài)。因此，本發(fā)明的蛋白和多核苷酸代表著使用單克隆抗體、合成多肽、小分子藥物或其它天然的或合成的藥物的治療性干擾的理想靶。因此，本發(fā)明提供了鑒別為CNGH0010蛋白和基因的新的氨基酸和核酸序列。該序列包含分離的多肽，其包含具有SEQIDNO3、5、7、9和11中的一個所示的序列的多肽或其變體；分離的多核苷酸，其包含具有SEQIDNO2、4、6、8和10中的一個所示的序列的多核苷酸或互補序列；分離的多核苷酸，其包含能編碼SEQIDNO3、5、7、9和11中的一個所示的氨基酸序列的多核苷酸或互補序列；分離的多肽，其包含與SEQIDNO3、5、7、9和11的氨基酸序列中的任一個具有至少70％的氨基酸序列同一性的多肽或其變體；分離的多核苷酸，其互補序列或變體，所述多核苷酸與SEQIDNO2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一個具有至少70％的核酸序列同一性；分離的多核苷酸、其互補序列或變體，所述多核苷酸與能編碼SEQIDNO3、5、7、9和11的氨基酸序列中的任一個的多核苷酸具有至少70％的核酸序列同一性；和分離的核酸分子或互補核酸，所述核酸分子能雜交能編碼多肽的核酸分子，所述的多肽與SEQIDNO3、5、7、9和11中的一個氨基酸序列具有至少70％的氨基酸序列同一性，能雜交與SEQIDNO2、4、6、8和10的多核苷酸序列中的任一個具有至少70％的序列同一性的核酸分子；和這些多肽和多核苷酸序列的片段。如本文所使用的，“同一性”如本領(lǐng)域已知的，是2個或更多個多肽序列或2個或更多個多核苷酸序列之間的關(guān)系，如通過對比序列所確定的。在本領(lǐng)域中，“同一性”也指多肽或多核苷酸序列之間的序列相關(guān)性程度，如通過這些序列鏈直接的匹配所確定的。通過已知的方法，可以容易地計算出“同一性”和“相似性”，所述方法包括但不限于描述于以下文獻(xiàn)中的那些(ComputationalMolecularBiology，Lesk，A.M.，編，OxfordUniversityPress，NewYork，1988；BiocomputingInformaticsandGenomeProjects，Smith，D.W.，編，AcademicPress，NewYork，1993；ComputerAnalysisofSequenceData，PartI，Griffin，A.M.，和Griffin，H.G.，編，HumanaPress，NewJersey，1994；SequenceAnalysisinMolecularBiology，vonHeinje，G.，AcademicPress，1987；和SequenceAnalysisPrimer，Gribskov，M.和Devereux，J.，編，MStocktonPress，NewYork，1991；和Carillo，H.，和Lipman，D.，SiamJ.AppliedMath.，481073(1988)。另外，使用VectorNTISuite8.0(Informax，F(xiàn)rederick，MD)的AlignX組件的默認(rèn)設(shè)置進(jìn)行的氨基酸和核苷酸序列比對，可以得到百分比同一性的值。優(yōu)選的確定同一性的方法設(shè)計用于產(chǎn)生測試的序列之間的最大匹配。確定同一性和相似性的方法被編寫成了公眾可以得到的計算機程序。優(yōu)選的確定2個序列之間的同一性和相似性的計算機程序方法包括但不限于GCG程序包(Devereux，J.，等，NucleicAcidsResearch12(1)387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA(Atschul，S.F.等，J.Molec.Biol.215403-410(1990)。BLASTX程序可以公開地從NCBI和其它來源得到(BLASTManual，Altschul，S.，等，NCBINLMNIHBethesda，Md.20894Altschul，S.，等，J.Mol.Biol.215403-410(1990)。也可以使用眾所周知的SmithWaterman算法來確定同一性。優(yōu)選的多肽序列對比參數(shù)包括下面的(1)算法Needleman和Wunsch，J.MolBiol.48443-453(1970)；對比矩陣來自Hentikoff和Hentikoff，Proc.Natl.Acad.Sci，USA.8910915-10919(1992)的BLOSSUM62；缺口罰分(GapPenalty)12缺口長度罰分(GapLengthPenalty)4可以作為來自GeneticsComputerGroup，MadisonWis的“缺口(gap)”程序，公開地得到使用這些參數(shù)的有用程序。前述參數(shù)是進(jìn)行多肽對比的默認(rèn)參數(shù)(對末端缺口沒有罰分)。優(yōu)選的進(jìn)行多核苷酸對比的參數(shù)包括下面的(1)算法Needleman和Wunsch，J.MolBiol.48443-453(1970)對比矩陣匹配＝+10，錯配＝0缺口罰分50缺口長度罰分3可獲自來自GeneticsComputerGroup，MadisonWis的“缺口”程序。這些是進(jìn)行核酸對比的默認(rèn)參數(shù)。作為實例，本發(fā)明的多核苷酸序列可以等同于SEQIDNO2的序列，這是100％相同的，或者它可以與參照序列相比包含最多特定整數(shù)個核苷酸改變。這種改變選自至少一個核苷酸缺失、取代(包括轉(zhuǎn)換和顛換)或插入，且其中所述改變可以發(fā)生在參照核苷酸序列的5′或3′末端位置、或那些末端位置之間的任意處，個別地散布在參照序列的核苷酸之中，或在參照序列內(nèi)的一個或多個鄰接組中。通過用SEQIDNO2中的核苷酸總數(shù)乘以各百分比同一性的數(shù)字百分?jǐn)?shù)(除以100)，并從SEQIDNO2中的核苷酸總數(shù)減去所得的積，來確定核苷酸改變的數(shù)目，或n.sub.n.ltorsim.x.sub.n-(x.sub.n.y)，其中n.sub.n是核苷酸改變的數(shù)目，x.sub.n是SEQIDNO2中的核苷酸總數(shù)，且y是例如，在70％時是0.70，在80％時是0.80，在85％時是0.85，在90％時是0.90，在95％時是0.95，等，且其中x.sub.n和y的任意非整數(shù)積都在從x.sub.n減去之前四舍五入到最近的整數(shù)。改變能編碼SEQIDNO3的多肽的多核苷酸序列，可以在該編碼序列中生成無義的、錯義的或移碼突變，并由此在這種改變后改變由多核苷酸編碼的多肽。類似地，本發(fā)明的多肽序列可以等同于SEQIDNO3的參照序列，這是100％相同的，或者它可以與參照序列相比包含最多特定整數(shù)個氨基酸改變，從而同一性百分比小于100％。這種改變選自至少一個氨基酸缺失、取代(包括保守的和非保守的取代)或插入，且其中改變可以發(fā)生在參照多肽序列的氨基或羧基末端位置、或那些末端位置之間的任意處，個別地散布在參照序列的氨基酸之中，或在參照序列內(nèi)的一個或多個鄰接組中。通過用SEQIDNO3中的氨基酸總數(shù)乘以各百分比同一性的數(shù)字百分?jǐn)?shù)(除以100)，然后從SEQIDNO3中的氨基酸總數(shù)減去所得的積，來確定特定％同一性的氨基酸改變的數(shù)目，或n.sub.a.ltorsim.x.sub.a-(x.sub.a.y)，其中n.sub.a是氨基酸改變的數(shù)目，x.sub.a是SEQIDNO3中的氨基酸總數(shù)，且y是例如，在70％時是0.70，在80％時是0.80，在85％時是0.85，等，且其中x.sub.a和y的任意非整數(shù)積都在從x.sub.a減去之前四舍五入到最近的整數(shù)。如本文所使用的，“片段”是變體多肽，其氨基酸序列完全與本發(fā)明的任意多肽的任意氨基酸序列的部分(但不是全部)相同，或變體多核苷酸，其核酸序列完全與本發(fā)明的任意多核苷酸的任意核酸序列的部分(但不是全部)相同。片段可以包括，例如，截短多肽，其具有如SEQIDNO3、5、7、9或11氨基酸序列或其變體所示的氨基酸序列的一部分，例如包含異源氨基-和/或羧基-末端氨基酸序列的連續(xù)系列的殘基。也包括由宿主細(xì)胞或在宿主細(xì)胞中生產(chǎn)的本發(fā)明的多肽的降解形式。其它示例性片段的特征在于結(jié)構(gòu)或功能屬性，例如該片段包含α-螺旋或能形成α-螺旋的區(qū)域，β-折疊或能形成β-折疊的區(qū)域，轉(zhuǎn)角或能形成轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)的區(qū)域，卷曲或能形成卷曲的區(qū)域，親水區(qū)域，疏水區(qū)域，α-兩親區(qū)域，β-兩親區(qū)域，柔性區(qū)域，表面形成區(qū)域，底物結(jié)合區(qū)域，細(xì)胞外區(qū)域和高抗原指數(shù)區(qū)域。其它示例性的片段包括分離的多肽和變體，所述多肽包含的氨基酸序列具有至少15、20、30、40、50或100個來自SEQIDNO3、5、7、9或11所述的氨基酸序列的鄰接氨基酸，或分離的多肽和變體，所述多肽包含的氨基酸序列具有至少15、20、30、40、50或100個從SEQIDNO3、5、7、9或11所述的氨基酸序列截短或刪除的鄰接氨基酸。片段也包括分離的具有類似大小和特征的多核苷酸。本發(fā)明的多肽和衍生物可以用作試劑來抑制CNGH0010多肽與其配體的結(jié)合，和減少或阻斷后續(xù)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。多肽和多肽構(gòu)建體可以用作免疫原或用于生產(chǎn)、選擇和表征人、靈長類動物、嚙齒動物、哺乳動物、嵌合的、單鏈的、人源化的和/或CDR-移植的抗-CNGH0010抗體、免疫球蛋白、其切割產(chǎn)物和其它特定部分和變體的結(jié)合配偶體。另外，通過本領(lǐng)域眾所周知的和本文所述的方法，可以確定抗體氨基酸序列和編碼核酸分子，所述核酸分子包含至少一種能編碼至少一種抗-CNGH0010抗體或抗獨特型抗體的多核苷酸。至少一種如本文所述的人CNGH0010多肽序列是抗原性的，且提供了生產(chǎn)抗-CNGH0010抗體的方法。本文所述的多肽包含一類新的CNGH0010抗原，其含有用于診斷和治療CNGH0010抗體的關(guān)鍵表位?；诒景l(fā)明的人CNGH0010多肽序列的氨基酸序列，可以如本文所述合成該多肽。可以將CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗體整合進(jìn)施用治療上或預(yù)防上有效量的方法或組合物中，以調(diào)節(jié)或治療細(xì)胞、組織、器官、動物或患者中的至少一種CNGH0010-相關(guān)狀況，和/或，在有關(guān)狀況之前、之后或過程中，如本領(lǐng)域已知的和/或本文所述的?？梢詫NGH0010多肽或抗-CNGH0010抗體整合進(jìn)用于診斷細(xì)胞、組織、器官、動物或患者中的至少一種CNGH0010-相關(guān)狀況的方法或組合物中，和/或，在有關(guān)狀況之前、之后或過程中，如本領(lǐng)域已知的和/或本文所述的。可以將CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗體整合進(jìn)用于診斷或治療細(xì)胞、組織、器官或動物中的CNGH0010-相關(guān)狀況的方法中，包括使細(xì)胞、組織、器官或動物接觸或給其施用組合物，其包含有效量的至少一種本發(fā)明的分離的CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗體組合物。該方法還可以任選地包含使用有效量的0.001-50mg/kg的多肽或抗體。該方法還可以任選地包含，通過選自下述的至少一種模式施用多肽或抗體，用多肽或抗體治療CNGH0010-相關(guān)狀況腸胃外的、皮下的、肌內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、關(guān)節(jié)內(nèi)的、支氣管內(nèi)的、腹內(nèi)的、囊內(nèi)的、軟骨內(nèi)的、腔內(nèi)的、體腔內(nèi)的、小腦內(nèi)的、腦室內(nèi)的、結(jié)腸內(nèi)的、頸內(nèi)的、胃內(nèi)的、肝內(nèi)的、心肌內(nèi)的、骨內(nèi)的、骨盆內(nèi)的、心包內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、胸膜內(nèi)的、前列腺內(nèi)的、肺內(nèi)的、直腸內(nèi)的、腎內(nèi)的、視網(wǎng)膜內(nèi)的、脊柱內(nèi)的、滑膜內(nèi)的、胸內(nèi)的、子宮內(nèi)的、膀胱內(nèi)的、快速灌注的、陰道的、直腸的、口腔的、舌下的、鼻內(nèi)的和經(jīng)皮的。本發(fā)明提供了來自CNGH0010的受體結(jié)合區(qū)的新的蛋白和多肽，其可以用于生產(chǎn)抗-CNGH0010抗體和其片段。首先，下面討論了鑒別、分離和生成新多肽的方法。然后，描述了抗體的生產(chǎn)、應(yīng)用、制劑和治療性治療。無論是否特別說明，本文引用的所有出版物都整體引作參考，因為它們說明了本發(fā)明時代的技術(shù)狀況和/或提供了本發(fā)明的描述和實施。出版物是指任意的科學(xué)或?qū)＠霭嫖铮蚩梢砸匀我饨橘|(zhì)形式得到的任意其它信息，包括所有記錄的、電子的或打印的形式。下面的文獻(xiàn)在本文整體引作參考Ausubel，等，編，CurrentProtocolsinMolecularBiology，JohnWiley&Sons，Inc.，NY，NY(1987-2001)；Sambrook，等，MolecularCloningALaboratoryManual，第2版，ColdSpringHarbor，NY(1989)；Harlow和Lane，Antibodies，aLaboratoryManual，ColdSpringHarbor，NY(1989)；Colligan，等，編，CurrentProtocolsinImmunology，JohnWiley&Sons，Inc.，NY(1994-2001)；Colligan等，CurrentProtocolsinProteinScience，JohnWiley&Sons，NY，NY，(1997-2001)。本發(fā)明的人CNGH0010多肽包括SEQIDNO3、5、7、9和11的那些和它們的變體，包括但不限于可變剪接變體，且可以包含一個或多個由天然突變或人工操作造成的氨基酸取代、缺失或添加，如本文所指出的。這種突變或取代可以包括突變蛋白，它的突變足以顯著地改變多肽的性質(zhì)，而不改變多肽抑制人CNGH0010與其配體的結(jié)合的生物學(xué)活性。本發(fā)明包括具有除了SEQIDNO3、5、7、9和11的那些以外的氨基酸序列的CNGH0010多肽和它們的變體。當(dāng)然，技術(shù)人員要制備的氨基酸取代的數(shù)目取決于許多因素，包括上述的那些。一般而言，任何特定的CNGH0010多肽、片段或變體的氨基酸取代、插入或缺失的數(shù)目不會超過1-5，或其中的任意范圍或值，如本文所指出的。通過本領(lǐng)域已知的方法，例如定位誘變或丙氨酸-掃描誘變(例如，Ausubel，同上，第8，15章；Cunnngham和Wells，Science2441081-1085(1989))，可以鑒別出對于功能所必需的本發(fā)明的CNGH0010多肽的氨基酸。后一種方法會在分子的每個殘基處導(dǎo)入單個丙氨酸突變。然后，測試得到的突變分子的生物學(xué)活性，例如，但不限于，至少一種CNGH0010中和活性。CNGH0010多肽的合成使用標(biāo)準(zhǔn)Boc或FMOC化學(xué)，可以合成具有上面闡明和描述的氨基酸序列的多肽?？梢栽瓨拥?、交聯(lián)地或與載體分子綴合地注射得到的多肽。為了促進(jìn)與載體的綴合，可以形成N-末端N-乙?；?半胱氨酸或C-末端酰胺，且可以酰胺化C-末端氨基酸?？梢詫⒃S多連接基團插入多肽和載體分子之間，以利于抗原多肽正確的構(gòu)象折疊和呈遞。預(yù)期由源自細(xì)菌、酵母、昆蟲或哺乳動物的細(xì)胞系也可以制備出本發(fā)明的CNGH0010多肽?？梢詫芫幋a新多肽的核酸的重組表達(dá)盒導(dǎo)入至少一種宿主細(xì)胞中?？梢允褂煤蠧NGH0010核酸序列和必需的啟動子元件的載體來表達(dá)CNGH0010多肽。可以包含能編碼與信號肽綴合的CNGH0010多肽的核酸序列，以促進(jìn)所需多肽的分泌和純化。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員熟知許多可得到的用于表達(dá)能編碼本發(fā)明的多肽的核酸的表達(dá)系統(tǒng)。也可以使用無細(xì)胞的翻譯系統(tǒng)，以使用源自本發(fā)明的DNA構(gòu)建體的RNA生產(chǎn)這種多肽。核酸分子通過克隆，例如通過RT-PCR擴增RNA樣品，可以得到能編碼本發(fā)明的人CNGH0010多肽的核酸序列。因此，通過DNA合成，或從被認(rèn)為具有CNGH0010mRNA的組織制備出的任意cDNA文庫，或從基因組DNA文庫，可以得到能編碼CNGH0010多肽的DNA。通過PCR擴增或通過傳統(tǒng)的DNA雜交和表達(dá)克隆的方法，可以克隆核酸序列。使用本文提供的信息(本文所述的或本領(lǐng)域已知的方法)，例如能編碼SEQIDNO3、5、7、9和11中的至少一種的至少70-100％鄰接氨基酸的核苷酸序列或其特定片段、變體或共有序列、或包含這些序列中的至少一種的載體，可以得到本發(fā)明的能編碼至少一種CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗體的核酸分子。本發(fā)明的核酸分子可以是RNA形式，例如mRNA、hnRNA或任何其它形式，或是DNA形式，包括但不限于，通過克隆得到的或合成地生產(chǎn)的cDNA和基因組DNA，或其任意組合。DNA可以是三鏈的、雙鏈的或單鏈的，或其任意組合。至少一條DNA或RNA鏈的任意部分可以是編碼鏈，也稱作有義鏈，或它可以是非編碼鏈，也稱作反義鏈。如本文所指出的，本發(fā)明的包含能編碼CNGH0010多肽或抗-CNGH0010抗體的核酸的核酸分子可以包括但不限于，自身能編碼多肽或抗體片段的氨基酸序列的那些；完整多肽或抗體或其一部分的編碼序列；多肽或抗體的編碼序列，片段或部分，以及其它序列，例如至少一種信號前導(dǎo)序列或融合肽的編碼序列，有或沒有前述的其它編碼序列，例如至少一種內(nèi)含子，以及其它非編碼序列，包括但不限于，非編碼的5′和3′序列，例如在轉(zhuǎn)錄、mRNA加工中起作用的轉(zhuǎn)錄的、非翻譯的序列，包括剪接和多腺苷酸化信號(例如，mRNA的核糖體結(jié)合和穩(wěn)定)；和能編碼其它氨基酸的其它編碼序列，例如能提供其它功能性的那些。因而，可以使能編碼多肽或抗體的序列與標(biāo)記序列融合，例如能編碼有利于融合抗體的純化的肽的序列，所述的融合抗體包含抗體片段或其部分。核酸的構(gòu)建和多肽的表達(dá)和純化如本領(lǐng)域眾所周知的，使用(a)重組方法、(b)合成技術(shù)、(c)純化技術(shù)或其組合，可以制備出本發(fā)明的分離的核酸。核酸可以方便地包含除了本發(fā)明的多核苷酸以外的序列。例如，可以將包含一個或多個內(nèi)切核酸酶限制位點的多克隆位點插入核酸中，以輔助多核苷酸的分離。同樣，可以插入可翻譯的序列，以輔助分離本發(fā)明的翻譯的多核苷酸。例如，六組氨酸標(biāo)記序列能提供純化本發(fā)明的蛋白的方便方法。本發(fā)明的核酸(不包括編碼序列)任選地是用于克隆和/或表達(dá)本發(fā)明的多核苷酸的載體、連接物或接頭?？梢詫⑵渌蛄刑砑拥竭@種克隆和/或表達(dá)序列中，以最優(yōu)化它們在克隆和/或表達(dá)中的功能，以輔助分離多核苷酸，或改善多核苷酸向細(xì)胞中的導(dǎo)入。本領(lǐng)域熟知克隆載體、表達(dá)載體、連接物和接頭的用途(見，例如，Ausubel，同上；或Sambrook，同上)?？梢允褂帽姸嗟谋磉_(dá)系統(tǒng)來生產(chǎn)本發(fā)明的多肽。這種系統(tǒng)包括染色體-、附加型-和病毒-衍生的載體，例如源自下述的載體細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體、轉(zhuǎn)座子、酵母附加體、插入元件、酵母染色體元件、桿狀病毒、乳多空病毒(例如SV40)、痘苗病毒、腺病毒、禽痘病毒、假狂犬病病毒、細(xì)小核糖核酸病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒和源自它們的組合的載體(例如粘粒和噬菌粒)。表達(dá)系統(tǒng)構(gòu)建體可以含有能調(diào)節(jié)或造成表達(dá)的控制區(qū)。通常，適用于維持或繁殖多核苷酸和/或在宿主中表達(dá)多肽的系統(tǒng)或載體可以用于表達(dá)。通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員熟知的眾多技術(shù)中的任一種，例如，Sambrook等在上面所述的那些，可以將合適的DNA序列插入表達(dá)系統(tǒng)中。在真核表達(dá)系統(tǒng)中，通過包含適當(dāng)?shù)姆置谛盘?，例如信號肽或前?dǎo)序列，可以將本發(fā)明的多肽分泌到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的腔內(nèi)或細(xì)胞外環(huán)境中。通過眾所周知的方法，包括硫酸銨或乙醇沉淀、酸提取、高效液相色譜、陰離子或陽離子交換色譜、磷酸纖維素色譜、疏水相互作用色譜、親和色譜、羥磷灰石色譜和凝集素色譜，可以從重組細(xì)胞培養(yǎng)物中回收和純化本發(fā)明的多肽。當(dāng)?shù)鞍自诜蛛x和/或純化過程中變性時，可以采用眾所周知的重新折疊蛋白的技術(shù)，來再生活性構(gòu)象。在一個得到本發(fā)明的編碼CNGH0010多肽的核酸的其他方法中，使用基于本發(fā)明的多核苷酸序列的探針，例如本文所述的那些，可以篩選cDNA或基因組文庫。探針可以用于與基因組DNA或cDNA序列雜交，以分離相同或不同生物中的同源基因。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠明白，可以在測定中采用各種雜交嚴(yán)格性程度；且雜交或洗滌介質(zhì)可以是嚴(yán)格的。由于雜交條件變得更嚴(yán)格，所以在要形成雙鏈體的探針和靶之間必須存在更大程度的互補性。通過溫度、離子強度、pH和部分地變性的溶劑(例如甲酰胺)的存在中的一種或多種，可以控制嚴(yán)格性的程度。例如，通過例如控制甲酰胺的濃度在0％-50％的范圍內(nèi)，改變反應(yīng)溶液的極性，可以方便地改變雜交的嚴(yán)格性?？蓹z測的結(jié)合所需的互補性程度(序列同一性)隨雜交介質(zhì)和/或洗滌介質(zhì)的嚴(yán)格性而變。互補性程度最佳地為100％或80-100％或其中的任何范圍或值。但是，應(yīng)當(dāng)明白，通過降低雜交和/或洗滌介質(zhì)的嚴(yán)格性，可以補償探針和引物中的微小序列變化。嚴(yán)格雜交條件的一個實例包括在溶液中在42℃溫育過夜，所述的溶液包含50％甲酰胺，5XSSC(150mMNaCl，15mM檸檬酸三鈉)，50mM磷酸鈉(pH7.6)，5XDenhardt氏溶液，10％硫酸葡聚糖和20μf/ml變性的、剪切的鮭精DNA；隨后在約65℃、在0.1XSSC中洗滌濾器。擴增RNA或DNA的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，且可以在本文所述的教導(dǎo)和引導(dǎo)的基礎(chǔ)上，根據(jù)本發(fā)明使用，無需過度的實驗。已知的DNA或RNA擴增的方法包括但不限于，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和有關(guān)的擴增方法(見，例如，Mullis等的美國專利號4,683,195、4,683,202、4,800,159、4,965,188；Tabor等的4,795,699和4,921,794；Innis的5,142,033；Wilson等的5,122,464；Innis的5,091,310；Gyllensten等的5,066,584；Gelfand等的4,889,818；Silver等的4,994,370；Biswas的4,766,067；Ringold的4,656,134)和RNA介導(dǎo)的擴增，其使用靶序列的反義RNA作為雙鏈DNA合成的模板(Malek等的美國專利號5,130,238，其商品名NASBA)，它們的完整內(nèi)容在這里引作參考(見，例如，Ausubel，同上；或Sambrook，同上)。例如，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)可以用于擴增本發(fā)明的多核苷酸序列和直接來自基因組DNA或cDNA文庫的有關(guān)基因。也可以使用PCR和其它體外擴增方法，例如，來克隆能編碼要表達(dá)的蛋白的核酸序列，制備用作檢測在樣品中存在目標(biāo)mRNA、核酸測序或其它目的的探針的核酸。足以指導(dǎo)技術(shù)人員進(jìn)行體外擴增方法的技術(shù)的實例，見Berger，同上，Sambrook，同上，和Ausubel，同上，以及Mullis等，美國專利號4,683,202(1987)；和Innis等，PCRProtocolsAGuidetoMethodsandApplications，Eds.，AcademicPressInc.，SanDiego，CA(1990)。商業(yè)上可得到的基因組PCR擴增試劑盒是本領(lǐng)域已知的。見，例如，Advantage-GC基因組PCR試劑盒(Clontech)。另外，例如，T4基因32蛋白(BoehringerMannheim)可以用于提高長PCR產(chǎn)物的得率。通過已知方法(見，例如，Ausubel，等，同上)直接化學(xué)合成，也可以制備出本發(fā)明的分離的核酸?；瘜W(xué)合成通常會生成單鏈寡核苷酸，其可以通過與互補序列雜交、或通過使用該單鏈作為模板的DNA聚合酶的聚合，而轉(zhuǎn)變成雙鏈DNA。本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠認(rèn)識到，盡管DNA的化學(xué)合成可以限于約100或更多個堿基的序列，但通過連接較短序列，也可以得到較長序列。多核苷酸選擇性地雜交所述的多核苷酸如上所述，本發(fā)明提供了分離的核酸，其能在選擇性的雜交條件下雜交本文所述的多核苷酸。因而，該實施方案的多核苷酸可以用于分離、檢測和/或定量包含這種多核苷酸的核酸。例如，本發(fā)明的多核苷酸可以用于鑒別、分離或擴增保藏的文庫中的部分或全長克隆。在一些實施方案中，多核苷酸是基因組序列或從人或哺乳動物的核酸文庫的cDNA分離出的或與其互補的cDNA序列。優(yōu)選地，cDNA文庫包含至少80％全長序列，優(yōu)選地，至少85％或90％全長序列，和更優(yōu)選地，至少95％全長序列?？梢詷?biāo)準(zhǔn)化cDNA文庫，以提高稀有序列的表現(xiàn)度(representation)。對于與互補序列相比具有較低的序列同一性的序列，可以一般地、但非排它地采用較低或中等嚴(yán)格性的雜交條件。對于更高同一性的序列，可以任選地采用中等和較高嚴(yán)格性的條件。較低嚴(yán)格性的條件允許具有約70％序列同一性的序列的選擇性雜交，且可以用于鑒別直向同源的或共生同源的序列。任選地，本發(fā)明的多核苷酸會編碼至少由本文所述的多核苷酸編碼的蛋白或抗體的至少一部分。本發(fā)明的多核苷酸包括可以用于選擇性地雜交能編碼本發(fā)明的蛋白或抗體的多核苷酸的核酸序列。見，例如，Ausubel，同上；Colligan，同上，每篇都在這里完整地引作參考。CNGH0010多肽和多核苷酸的用途本發(fā)明的多核苷酸和多肽也用于測定介質(zhì)中能通過影響CNGH0010類似物蛋白與細(xì)胞結(jié)合配偶體(例如CNGH0010受體)的結(jié)合來調(diào)節(jié)CNGH0010蛋白功能的物質(zhì)的存在。調(diào)節(jié)劑的實例包括多肽或小有機分子。本發(fā)明的多肽也用于鑒別藥物開發(fā)的前導(dǎo)化合物。通過許多方法，例如NMR和X-射線晶體學(xué)，可以容易地確定本文所述多肽的結(jié)構(gòu)。對比在序列上相似、但是它們在靶分子中引起的生物學(xué)活性不同的多肽的結(jié)構(gòu)，可以提供關(guān)于靶的結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系的信息。檢查結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系得到的信息，可以用于設(shè)計修飾的多肽或其它小分子或前導(dǎo)化合物，可以測試它們的與靶分子有關(guān)的預(yù)測的性質(zhì)。使用與本文所述類似的測定，可以評價前導(dǎo)化合物的活性。也可以從共結(jié)晶研究得到關(guān)于結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系的信息。在這些研究中，具有所需活性的多肽與靶分子一起結(jié)晶，并確定了復(fù)合物的X-射線結(jié)構(gòu)。然后，可以對比該結(jié)構(gòu)與天然狀態(tài)的靶分子的結(jié)構(gòu)，且由這種對比得到的信息可以用于設(shè)計預(yù)期具有所需活性的化合物。本發(fā)明也預(yù)期鑒別能結(jié)合本發(fā)明的多肽、由此影響CNGH0010-信號傳導(dǎo)途徑的新化合物的方法。使用常規(guī)方法，例如共免疫沉淀、交聯(lián)和通過梯度或色譜柱的共純化，可以鑒別出蛋白-蛋白相互作用。也可以采用能同時鑒別出編碼與分子相互作用的蛋白的基因的方法。這些方法包括用標(biāo)記的分子來探測表達(dá)文庫。另外，x-射線晶體學(xué)研究可以用作評價與物質(zhì)和分子的相互作用的方式。能夠明白，在上述的方法中可以使用融合蛋白和重組蛋白?？梢詫⑦m用于本發(fā)明的評價能影響或調(diào)節(jié)CNGH0010信號傳導(dǎo)途徑的物質(zhì)和化合物的方法的試劑包裝進(jìn)方便的試劑盒中，從而將必需的材料包裝進(jìn)合適的容器中。該試劑盒也可以包含用于實現(xiàn)本發(fā)明的方法的合適支持體。成熟的CNGH0010或它的類似物可以用于調(diào)節(jié)(即，提高或降低)真核細(xì)胞活性和/或數(shù)目，例如增殖和活化。而且，成熟的CNGH0010或它的類似物可以用于調(diào)節(jié)細(xì)胞分化和遷移。由于可以分泌出CNGH0010，所以成熟的CNGH0010或它的類似物也可以用于治療多種免疫-介導(dǎo)的依賴于細(xì)胞增殖、分化和遷移的炎性疾病，所述疾病例如但不限于，牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺氣腫、哮喘、糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎、炎性腸疾病(包括Crohn氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)、不同類型的皮炎(包括過敏性皮炎、接觸性皮炎)、光化性角化病、傷口愈合、瘢痕形成、各種腎病、各種呼吸疾病、各種生殖器病例如子宮內(nèi)膜異位、黑素瘤、鱗狀細(xì)胞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、Grave氏病和其它炎性疾病和過度增殖病。另外，成熟的CNGH0010或它的類似物可以用于增強對傳染病的免疫反應(yīng)?？梢詥为毜鼗蚺c作為佐劑的抗原組合地使用成熟的CNGH0010或它的類似物，以治療或預(yù)防多種傳染病、過度增殖病和炎性疾病。治療性使用本發(fā)明的多肽的施用方式可以是能將試劑送遞給宿主的任何合適的途徑，例如腸胃外的、皮下的、肌內(nèi)的、靜脈內(nèi)的、關(guān)節(jié)內(nèi)的、支氣管內(nèi)的、腹內(nèi)的、囊內(nèi)的、軟骨內(nèi)的、腔內(nèi)的、體腔內(nèi)的、小腦內(nèi)的、腦室內(nèi)的、結(jié)腸內(nèi)的、頸內(nèi)的、胃內(nèi)的、肝內(nèi)的、心肌內(nèi)的、骨內(nèi)的、骨盆內(nèi)的、心包內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、胸膜內(nèi)的、前列腺內(nèi)的、肺內(nèi)的、直腸內(nèi)的、腎內(nèi)的、視網(wǎng)膜內(nèi)的、脊柱內(nèi)的、滑膜內(nèi)的、胸內(nèi)的、子宮內(nèi)的、膀胱內(nèi)的、病灶內(nèi)的(intralesional)、快速灌注的、陰道的、直腸的、口腔的、舌下的、鼻內(nèi)的或經(jīng)皮的?？梢詫⒈景l(fā)明的多肽制備成藥物組合物，其在藥學(xué)上可接受的載體中含有有效量的作為活性成分的結(jié)合劑。含有結(jié)合劑的水性懸浮液或溶液、優(yōu)選地在生理pH緩沖的、備于注射的形式，是優(yōu)選的。用于腸胃外施用的組合物一般包含本發(fā)明的結(jié)合劑的溶液或其溶解在藥學(xué)上可接受的載體(優(yōu)選水性載體)中的混合物?？梢圆捎枚喾N水性載體，例如，0.4％鹽水，0.3％甘氨酸等。這些溶液是無菌的，且通常沒有顆粒物。通過常規(guī)的、眾所周知的滅菌技術(shù)(例如，過濾)，可以對這些溶液進(jìn)行滅菌。如近似的生理條件所需的，組合物可以含有藥學(xué)上可接受的輔助物質(zhì)，例如pH調(diào)節(jié)劑和緩沖劑等。本發(fā)明的多肽在這種藥物制劑中的濃度可以有很大的變化，即從低于約0.5重量％、通常在或至少為約1重量％至高達(dá)15或20重量％，且主要根據(jù)選擇的特定施用方式，基于流體體積、粘度等進(jìn)行選擇。因而，可以將用于肌內(nèi)注射的本發(fā)明的藥物組合物制成含有1mL無菌緩沖水和約1ng至約100mg、例如約50ng至約30mg或更多、或優(yōu)選地約5mg至約25mg本發(fā)明的多肽。類似地，可以將用于靜脈內(nèi)輸注的本發(fā)明的藥物組合物制成含有約250ml無菌的林格溶液和約1mg至約30mg、優(yōu)選5mg至約25mg本發(fā)明的多肽。用于制備可腸胃外地施用的組合物的實際方法是眾所周知的，或?qū)Ρ绢I(lǐng)域的技術(shù)人員而言顯而易見的，且更詳細(xì)地描述在例如，Remington，theScienceandPracticeofPharmacy，第19版，MackPublishingCompany，Easton，Pa(1995)。當(dāng)在藥物制劑中時，本發(fā)明的多肽可以以單位劑量形式存在。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以容易地確定適當(dāng)?shù)闹委熒嫌行У膭┝俊Ｈ绻枰?，可以在適當(dāng)?shù)臅r間間隔(醫(yī)生在治療過程中選擇為是適當(dāng)?shù)?重復(fù)確定的劑量?？梢詢龈杀景l(fā)明的多肽來進(jìn)行儲存，并在使用前在合適的載體中重配。已經(jīng)顯示該技術(shù)對于常規(guī)的蛋白制劑是有效的，且可以使用本領(lǐng)域已知的凍干和重配技術(shù)。如果要表達(dá)本發(fā)明的多肽以用于篩選測定中，則通常優(yōu)選地在細(xì)胞表面生產(chǎn)多肽。在這種情況下，可以在用于篩選測定前收獲細(xì)胞。如果多肽分泌到培養(yǎng)基中，則可以回收培養(yǎng)基，以回收和純化多肽。如果細(xì)胞內(nèi)地生產(chǎn)，則必須在回收多肽之前首先裂解細(xì)胞。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的多核苷酸作為診斷劑的用途。檢測特征在于與功能障礙有關(guān)的SEQIDNO2多核苷酸的基因的突變形式，會提供一種診斷工具，其可以增加或定義疾病或?qū)膊〉囊赘行缘脑\斷，所述疾病源自該基因的表達(dá)不足、超表達(dá)或改變的表達(dá)。可以通過多種技術(shù)，在DNA水平檢測攜帶基因突變的個體?？梢詮氖茉囌叩募?xì)胞得到用于診斷的核酸，例如從血液、尿、唾液、組織活組織檢查或尸體解剖材料?；蚪MDNA可以直接用于檢測，或可以在分析之前使用PCR或其它擴增技術(shù)進(jìn)行酶促擴增。也可以以類似的方式使用RNA或cDNA。通過擴增產(chǎn)物與正?；蛐拖啾鹊拇笮∽兓?，可以檢測缺失和插入。通過使擴增的DNA與標(biāo)記的CNGH0010核苷酸序列的雜交，可以鑒別出點突變。通過RNA酶消化或通過解鏈溫度的差異，可以將正確匹配的序列與錯配的雙鏈體區(qū)別開。通過DNA片段在凝膠中的電泳遷移率的變化(有或沒有變性劑)，或通過直接的DNA測序(例如，Myers等，Science(1985)2301242)，也可以檢測出DNA序列差異。通過核酸酶保護(hù)實驗，例如RNA酶和S1保護(hù)或化學(xué)切割方法(見Cotton等，ProcNatlAcadSciUSA(1985)854397-4401)，也可以揭示在特定位置的序列變化。在另一個實施方案中，可以構(gòu)建包含CNGH0010核苷酸序列或其片段的寡核苷酸探針陣列，以有效地篩選例如基因突變。陣列技術(shù)方法是眾所周知的，且具有一般的實用性，并可以用于解決分子遺傳學(xué)中的許多問題，包括基因表達(dá)、遺傳連鎖和遺傳變異性(見例如M.Chee等，Science，Vol274，pp610-613(1996))。通過用所述方法檢測CNGH0010基因中的突變，診斷測定會提供診斷或確定對相關(guān)疾病的易感性的方法。另外，通過包含確定來自受試者的樣品的異常降低或提高的多肽或mRNA水平的方法，可以診斷這樣的疾病。使用任意的本領(lǐng)域眾所周知的多核苷酸定量方法，例如，核酸擴增(例如，PCR、RT-PCR)、RNA酶保護(hù)、RNA印跡和其它雜交方法，可以在RNA水平測量降低或提高的表達(dá)?？梢杂糜诖_定源自宿主的樣品中的蛋白(例如本發(fā)明的多肽)水平的測定技術(shù)，是本領(lǐng)域的技術(shù)人員眾所周知的。這種測定方法包括放射免疫測定、競爭性結(jié)合實驗、蛋白印跡分析和ELISA測定。因而，在另一個方面，本發(fā)明涉及診斷試劑盒，其包含(a)本發(fā)明的多核苷酸，優(yōu)選地，核苷酸SEQIDNO2、4、6、8和10的序列之一，和變體，與SEQIDNO2、4、6、8和10具有至少70％同一性的多核苷酸，或其變體或片段；(b)與(a)互補的核苷酸序列；(c)本發(fā)明的多肽，優(yōu)選地，SEQIDNO3、5、7、9和11的多肽之一，和變體，與SEQIDNO3、5、7、9和11具有至少70％同一性的多肽，和其變體或片段；或(d)抗本發(fā)明的多肽、其變體和片段的抗體，優(yōu)選地，抗SEQIDNO3、5、7、9和11多肽之一和變體的抗體。能夠明白，在任一種這樣的試劑盒中，來自上面的組分(a)、(b)、(c)或(d)可以包含實質(zhì)組分。這種試劑盒可以用于診斷疾病或?qū)膊〉囊赘行裕黾膊±绲幌抻?，牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺氣腫、哮喘、糖尿病、自身免疫性甲狀腺炎、炎性腸疾病(包括Crohn氏病和潰瘍性結(jié)腸炎)、各種類型的皮炎(包括過敏性皮炎、接觸性皮炎)、光化性角化病、傷口愈合、瘢痕形成、各種腎病、各種呼吸疾病、各種生殖器病例如子宮內(nèi)膜異位、黑素瘤、鱗狀細(xì)胞癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、腎細(xì)胞癌、Grave氏病和其它炎性疾病和過度增殖病。本發(fā)明的核苷酸序列對于染色體鑒定也是有價值的。每個基因組序列特異性地靶向或可以雜交單獨的人染色體上的特定位置。根據(jù)本發(fā)明對染色體的相關(guān)序列的作圖可以用于將那些序列和基因相關(guān)疾病和狀況相關(guān)聯(lián)。一旦已經(jīng)將序列作圖到精確的染色體位置，就可以將該序列在染色體上的物理位置與遺傳學(xué)圖數(shù)據(jù)相關(guān)聯(lián)。這種數(shù)據(jù)見，例如，V.McKusick，MendelianInheritanceinMan(可以從JohnsHopkinsUniversityWelchMedicalLibrary在線得到)。然后，可以通過連鎖分析(即，物理上臨近基因的共同遺傳(coinheritance))，鑒定出已經(jīng)被作圖到相同染色體區(qū)域的基因和疾病之間的關(guān)系。也可以確定受影響的和未受影響的個體之間的cDNA或基因組序列的差異。如果在一些或全部受影響的個體中觀察到突變，但是在任何正常的個體中沒有觀察到，則該突變可能是該疾病的病原體。本發(fā)明的多核苷酸、多肽和多肽的抗體也可以用于構(gòu)建篩選方法，以檢測添加的化合物對mRNA和多肽在細(xì)胞中的生產(chǎn)的影響。例如，可以通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法，使用單克隆抗體和多克隆抗體構(gòu)建ELISA測定，以測量分泌的或細(xì)胞結(jié)合的多肽水平。這可以用于發(fā)現(xiàn)來自合適操作的細(xì)胞或組織的能抑制或增強多肽生產(chǎn)的試劑(也分別稱作拮抗劑或激動劑)。通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)受體結(jié)合技術(shù)，可以將多肽用于鑒別膜結(jié)合的或可溶的受體，如果有的話。這包括但不限于配體結(jié)合和交聯(lián)測定，其中多肽是用放射性同位素(例如，125I)標(biāo)記的、化學(xué)修飾的(例如，生物素化的)或與適用于檢測或純化的肽序列融合的，并與推定受體的來源(細(xì)胞、細(xì)胞膜、細(xì)胞上清液、組織提取物、體液)一起溫育。其它方法包括生物物理技術(shù)，例如表面等離子體共振和光譜學(xué)。這些篩選方法也可以用于鑒別多肽的激動劑和拮抗劑，其能與多肽與其受體的結(jié)合相競爭，如果有的話。本領(lǐng)域熟知進(jìn)行這些測定的標(biāo)準(zhǔn)方法。潛在多肽拮抗劑的實例包括抗體，或者在有些情況下，包括寡核苷酸或蛋白，它們與該多肽的配體、底物、受體、酶等密切相關(guān)。例如，配體、底物、受體、酶等的片段；或小分子可以結(jié)合本發(fā)明的多肽，但是可能不引起反應(yīng)，即針對多肽的活性。因而，在另一個方面，本發(fā)明涉及篩選試劑盒，其用于鑒別本發(fā)明多肽的激動劑、拮抗劑、配體、受體、底物、酶等；或能降低或提高這種多肽的生產(chǎn)的化合物，其包含(a)本發(fā)明的多肽；(b)能表達(dá)本發(fā)明的多肽的重組細(xì)胞；(c)能表達(dá)本發(fā)明的多肽的細(xì)胞膜；或(d)抗本發(fā)明的多肽的抗體，該多肽優(yōu)選地是SEQIDNO3、5、7、9和11之一或剪接變體。能夠明白，在任一種這樣的試劑盒中，組分(a)、(b)、(c)或(d)可以包含實質(zhì)組分。技術(shù)人員能夠容易地明白，本發(fā)明的多肽也可以用于基于結(jié)構(gòu)設(shè)計該多肽的激動劑、拮抗劑或抑制劑的方法中，所述方法通過下述步驟實現(xiàn)(a)首先確定該多肽的三維結(jié)構(gòu)；(b)推論可能的激動劑、拮抗劑或抑制劑反應(yīng)或結(jié)合位點的三維結(jié)構(gòu)；(c)合成預(yù)測會與推測的結(jié)合或反應(yīng)位點發(fā)生結(jié)合或反應(yīng)的候選化合物；和(d)測試候選化合物是否確實是激動劑、拮抗劑或抑制劑。還能夠明白，這一般是相互作用的過程。在經(jīng)常稱作如上所述的“基因療法”的治療模態(tài)中，也可以在受試者中內(nèi)源地生產(chǎn)治療用的多肽。因而，例如，可以用多核苷酸(例如DNA或RNA)工程化來自受試者的細(xì)胞，以離體(exvivo)編碼多肽，和例如，通過使用逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體。然后，將細(xì)胞導(dǎo)入受試者中。抗-CNGH0010抗體本發(fā)明的抗體能結(jié)合至少一種特定的表位，所述表位對本發(fā)明的CNGH0010蛋白、亞基、片段、部分或其任意組合是特異性的。表位可以包含抗體結(jié)合區(qū)域，所述區(qū)域包含SEQIDNO3、5、7、9和11氨基酸序列的至少一部分或它的變體(例如，下面所述的剪接變體)，該表位優(yōu)選地包含該序列的至少1-5個氨基酸?？贵w可以包含或源自任何哺乳動物，例如，但不限于，人、小鼠、兔子、大鼠、嚙齒動物、靈長類動物或其任意組合等。如本文所述的，抗-CNGH0010抗體具有至少一種活性，例如，但不限于中和CNGH0010-依賴性的受體磷酸化、受體內(nèi)在化、細(xì)胞粘附、遷移和侵入，和信號傳導(dǎo)分子的誘導(dǎo)或細(xì)胞標(biāo)記的適應(yīng)。因而，可以根據(jù)已知的方法，篩選抗-CNGH0010抗體的對應(yīng)活性，例如但不限于人CNGH0010的至少一種生物學(xué)活性?？贵w可以用于測量或影響細(xì)胞、組織、器官或動物(包括哺乳動物和人)，以診斷、監(jiān)控、調(diào)節(jié)、治療、緩解、幫助預(yù)防至少一種CNGH0010-相關(guān)疾病或狀況的發(fā)病率或減輕其癥狀，所述疾病或狀況選自但不限于，至少一種免疫障礙或疾病，心血管障礙或疾病，傳染性的、惡性的和/或神經(jīng)學(xué)的障礙或疾病，或其它已知的或特定的CNGH0010-相關(guān)狀況?？?CNGH0010抗體的定義和表征如本文所使用的，“抗-CNGH0010抗體”、“抗-CNGH0010抗體部分”或“抗-CNGH0010抗體片段”和/或“抗-CNGH0010抗體變體”等包括含有分子的任何蛋白或多肽，所述的分子包含免疫球蛋白分子的至少一部分，例如但不限于，重鏈或輕鏈的至少一個互補性決定區(qū)(CDR)或其配體結(jié)合部分、重鏈或輕鏈可變區(qū)、重鏈或輕鏈恒定區(qū)、構(gòu)架區(qū)或其任意部分，或源自本發(fā)明的CNGH0010蛋白或多肽的CNGH0010受體或結(jié)合蛋白的至少一部分，其可以整合進(jìn)本發(fā)明的抗體中。這種抗體還任選地影響特定的配體，例如但不限于，其中這種抗體能體外地、原位地和/或體內(nèi)地調(diào)節(jié)、降低、提高、拮抗、激動、減輕、緩解、阻斷、抑制、消除和/或干擾至少一種CNGH0010活性或結(jié)合，或CNGH0010配體活性或結(jié)合。作為一個非限制性的實例，本發(fā)明的合適的抗-CNGH0010抗體、特定的部分或變體可以結(jié)合至少一種本發(fā)明的CNGH0010蛋白或多肽、或其特定部分、變體或結(jié)構(gòu)域。合適的抗-CNGH0010抗體、特定部分或變體也可以任選地影響至少一種CNGH0010活性或功能，例如但不限于，RNA、DNA或蛋白合成，CNGH0010釋放，CNGH0010受體信號傳導(dǎo)，CNGH0010活性，CNGH0010生產(chǎn)和/或合成。術(shù)語“抗體”還意在包括抗體、其消化片段、特定部分和變體，包括抗體模擬物或能模仿抗體或其特定片段或部分的結(jié)構(gòu)和/或功能的抗體部分，包括單鏈抗體和其片段。功能片段包括能結(jié)合哺乳動物CNGH0010的抗原-結(jié)合片段。例如，本發(fā)明包括能結(jié)合CNGH0010或其部分的抗體片段，包括但不限于，F(xiàn)ab(例如，通過木瓜蛋白酶消化)、Fab′(例如，通過胃蛋白酶消化和部分還原)和F(ab′)2(例如，通過胃蛋白酶消化)、facb(例如，通過纖溶酶消化)、pFc′(例如，通過胃蛋白酶或纖溶酶消化)、Fd(例如，通過胃蛋白酶消化，部分還原和再聚集)、Fv或scFv(例如，通過分子生物學(xué)技術(shù))片段(見，例如，Colligan，Immunology，同上)。如本領(lǐng)域已知的和/或如本文所述的，可以通過酶促切割、合成或重組技術(shù)，來生產(chǎn)這樣的片段。使用已經(jīng)將一個或多個終止密碼子導(dǎo)入自然終止位點上游的抗體基因，可以生產(chǎn)多種截短形式的抗體。例如，可以將能編碼F(ab′)2重鏈部分的組合基因設(shè)計成包含能編碼重鏈的CH1結(jié)構(gòu)域和/或鉸鏈區(qū)的DNA序列?？梢酝ㄟ^常規(guī)技術(shù)，將抗體的各部分化學(xué)地連接到一起，或可以使用基因工程技術(shù)，來制備成鄰接的蛋白。如本文所使用的，術(shù)語“人抗體”指抗體，其中基本上蛋白的每部分(例如，CDR、構(gòu)架、CL、CH結(jié)構(gòu)域(例如，CH1、CH2、CH3)、鉸鏈、(VL、VH))基本上在人中都是非免疫原性的，僅僅具有最小的序列變化或變異。類似地，指定為靈長類動物(猴、狒狒、黑猩猩等)、嚙齒動物(小鼠、大鼠、兔子、豚鼠、倉鼠等)和其它哺乳動物的抗體指出了這樣的種、亞屬、屬、亞科、科特異性的抗體。而且，本發(fā)明的嵌合抗體可以包括上述的任意組合。與未修飾的抗體相比，這種變化或變異能任選地和優(yōu)選地保留或減少在人或其它物種中的免疫原性。因而，人抗體不同于嵌合的或人源化的抗體。應(yīng)當(dāng)指出，能表達(dá)功能上重排的人免疫球蛋白(例如，重鏈和/或輕鏈)基因的非人的動物或原核的或真核的細(xì)胞，可以生產(chǎn)人抗體。而且，當(dāng)人抗體是單鏈抗體時，它可以包含在天然人抗體中不存在的接頭肽。例如，F(xiàn)v可以包含接頭肽，例如2至約8個甘氨酸或其它氨基酸殘基，其連接重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。認(rèn)為這種接頭肽是人源的。本發(fā)明的分離的抗體包含任何如本文所述分離的或制備的抗體。優(yōu)選地，人抗體或抗原-結(jié)合片段能結(jié)合人CNGH0010，并由此部分地或基本上中和該蛋白的至少一種生物活性。能部分地或優(yōu)選地基本上中和至少一種CNGH0010蛋白或片段的至少一種生物活性的抗體或其特定部分或變體可以結(jié)合該蛋白或片段，并由此抑制通過CNGH0010與CNGH0010受體的結(jié)合或通過其它CNGH0010-依賴性的或介導(dǎo)的機理介導(dǎo)的的活性。如本文所使用的，術(shù)語“中和抗體”指該抗體根據(jù)測定可以抑制CNGH0010-依賴性的活性約20-120％，優(yōu)選至少約10、20、30、40、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100％或更多。如本文所述的和/或如本領(lǐng)域已知的，優(yōu)選地通過至少一種合適的CNGH0010蛋白或受體測定，來評價抗-CNGH0010抗體抑制CNGH0010-依賴性的活性的能力。本發(fā)明的人抗體可以是任意種類(IgG、IgA、IgM、IgE、IgD等)或同種型，且可以包含κ或λ輕鏈。在一個實施方案中，人抗體包含IgG重鏈或特定片段，例如，至少一種同種型，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。通過使用包含至少一種如本文所述的和/或如本領(lǐng)域已知的人輕鏈(例如，IgG、IgA和IgM(例如，γ1、γ2、γ3、γ4))轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因小鼠或其它轉(zhuǎn)基因的非人哺乳動物，可以制備出這種類型的抗體。在另一個實施方案中，抗-人CNGH0010人抗體包含IgG1重鏈和IgG1輕鏈。至少一種本發(fā)明的抗體能結(jié)合對如本文所述的至少一種CNGH0010蛋白、亞基、片段、部分或其任意組合特異性的至少一個特定表位。該至少一個表位可以包含至少一個抗體結(jié)合區(qū)，所述抗體結(jié)合區(qū)包含至少一部分與來自如本文所述的人CNGH0010的受體結(jié)合區(qū)的肽序列相對應(yīng)的蛋白序列，該表位優(yōu)選地由蛋白的至少一個胞外的、可溶的、親水的、外部的或胞質(zhì)的部分組成。通常，本發(fā)明的人抗體或抗原-結(jié)合片段會包含抗原-結(jié)合區(qū)，所述抗原結(jié)合區(qū)包含至少一個人互補性決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3)或至少一個重鏈可變區(qū)的變體和至少一個人互補性決定區(qū)(CDR1、CDR2和CDR3)或至少一個輕鏈可變區(qū)的變體。也可以使用雙特異性的、異種異性的、異種綴合的或類似的抗體，它們是單克隆的、優(yōu)選地人或人源化的抗體，其具有對至少2種不同抗原的結(jié)合特異性。在這種情況下，一種結(jié)合特異性是針對至少一種本發(fā)明的CNGH0010蛋白的，另一種是針對任意的其它抗原的。制備雙特異性的抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。傳統(tǒng)地，雙特異性的抗體的重組生產(chǎn)是基于2個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的共表達(dá)的，其中2個重鏈具有不同的特異性(Milstein和Cuello，Nature305537(1983))。由于免疫球蛋白重鏈和輕鏈的隨機分配，所以這些雜交瘤(四體瘤(quadromas))會生產(chǎn)10種不同的抗體分子的潛在混合物，其中僅僅一種具有正確的雙特異性結(jié)構(gòu)。正確分子的純化一般是通過親和色譜步驟完成的，這相當(dāng)繁瑣，且產(chǎn)物得率較低。類似的方法公開在，例如，WO93/08829，美國專利號6210668、6193967、6132992、6106833、6060285、6037453、6010902、5989530、5959084、5959083、5932448、5833985、5821333、5807706、5643759、5601819、5582996、5496549和4676980，WO91/00360，WO92/00373，EP03089，Traunecker等，EMBOJ.103655(1991)，和Suresh等，MethodsinEnzymology121210(1986)，每篇都在這里完整地引作參考。在本發(fā)明的方法和組合物中使用的抗-CNGH0010抗體可以任選地由與CNGH0010的高親和力的結(jié)合來表征，和任選地且優(yōu)選地具有低毒性。具體地，本發(fā)明的抗體、特定的片段或變體可以用于本發(fā)明中，其中單獨的組分，例如可變區(qū)、恒定區(qū)和構(gòu)架，個別地和/或共同地、任選地和優(yōu)選地具有低免疫原性。可以用于本發(fā)明的抗體任選地特征在于它們以可測量的癥狀減輕和低的和/或可接受的毒性較長時間治療患者的能力。低的或可接受的免疫原性和/或高親和力、以及其它合適的性質(zhì)，可以有助于實現(xiàn)的治療結(jié)果。“低免疫原性”在本文中定義為，使治療的患者的明顯HAHA、HACA或HAMA反應(yīng)升高小于約75％或優(yōu)選地小于約50％，和/或使治療的患者的低滴度升高(小于約300，優(yōu)選地，小于約100，用雙抗原酶免疫測定進(jìn)行測量)(Elliott等，Lancet3441125-1127(1994)，其在這里完整地引作參考)?？?CNGH0010抗體的應(yīng)用可以包含，將有效量的包含至少一種抗-CNGH0010抗體的組合物或藥物組合物施用給需要這種調(diào)節(jié)、治療、緩解、預(yù)防或減輕癥狀、影響或機理的細(xì)胞、組織、器官、動物或患者。有效量可以包含每單次(例如，快速灌注)、多次或連續(xù)施用約0.001-500mg/kg的量，或每單次、多次或連續(xù)施用達(dá)到0.01-5000μg/ml的血清濃度，或其中的任意有效范圍或值，如使用如本文所述的或相關(guān)領(lǐng)域已知的方法實現(xiàn)和確定的。如技術(shù)人員能明白的，本發(fā)明包括至少一種本發(fā)明的生物活性的抗體。生物活性的抗體具有天然的(非合成的)、內(nèi)源性的或有關(guān)的和已知的抗體的至少20％、30％或40％、和優(yōu)選地至少50％、60％或70％、和最優(yōu)選地至少80％、90％或95％-100％的特異性活性。測定和定量測量酶活性和底物特異性的方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員眾所周知的。在另一個方面，本發(fā)明涉及如本文所述的人抗體和抗原-結(jié)合片段，其通過有機部分的共價附著而修飾。這種修飾可以生成具有提高的藥物代謝動力學(xué)性質(zhì)(例如，提高的體內(nèi)血清半衰期)的抗體或抗原-結(jié)合片段。有機部分可以是線性的或分支的親水聚合物基團、脂肪酸基團或脂肪酸酯基團?？梢允褂弥惙肿樱鐔为毜幕蚬矁r結(jié)合到親水聚合物的二硬脂?；字Ｒ掖及凡糠帧Ｔ诰唧w的實施方案中，親水的聚合物基團可以具有約800至約120,000道爾頓的分子量，且可以是聚鏈烷二醇(例如，聚乙二醇(PEG)，聚丙二醇(PPG))、糖聚合物、氨基酸聚合物或聚乙烯基吡咯烷酮，且脂肪酸或脂肪酸酯基團可以包含約8至約40個碳原子。本發(fā)明的修飾的抗體和抗原-結(jié)合片段可以包含一個或多個有機部分，它們直接或間接地共價結(jié)合抗體。結(jié)合到本發(fā)明的抗體或抗原-結(jié)合片段上的每個有機部分可以獨立地是親水聚合物基團、脂肪酸基團或脂肪酸酯基團。如本文所使用的，術(shù)語“脂肪酸”包括單羧酸和二羧酸。作為本文使用的術(shù)語，“親水聚合物基團”指比辛烷更易溶于水的有機聚合物。例如，聚賴氨酸比辛烷更易溶于水。因而，本發(fā)明包括通過聚賴氨酸的共價附著而修飾的抗體。適用于修飾本發(fā)明的抗體的親水聚合物可以是線性的或分支的，且包括，例如，聚鏈烷二醇(例如，PEG、單甲氧基-聚乙二醇(mPEG)、PPG等)、糖(例如，葡聚糖、纖維素、寡糖、多糖等)、親水氨基酸的聚合物(例如，聚賴氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸等)、聚環(huán)氧鏈烷(polyalkaneoxide)(例如，聚環(huán)氧乙烷、聚環(huán)氧丙烷等)和聚乙烯基吡咯烷酮。優(yōu)選地，能修飾本發(fā)明的抗體的親水聚合物作為單獨的分子實體具有約800至約150,000道爾頓的分子量。例如，可以使用PEG5000和PEG20,000，其中下標(biāo)是以道爾頓計的聚合物的平均分子量。親水聚合物基團可以被1至約6個烷基、脂肪酸或脂肪酸酯基團取代。可以使用合適的方法，制備出被脂肪酸或脂肪酸酯基團取代的親水聚合物。例如，可以使包含胺基的聚合物偶聯(lián)到脂肪酸或脂肪酸酯的羧基上，且可以使脂肪酸或脂肪酸酯的活化的羧基(例如，用N，N-羰基二咪唑活化的)偶聯(lián)到聚合物的羥基上。適于修飾本發(fā)明抗體的脂肪酸和脂肪酸酯可以是飽和的或者可以含有一個或多個不飽和單位。適于修飾本發(fā)明抗體的脂肪酸包括，例如，正十二烷酸(C12，月桂酸)、正十四烷酸(C14，肉豆蔻酸)、正十八烷酸(C18，硬脂酸)、正二十烷酸(C20，花生酸)、正二十二烷酸(C22，山崳酸)、正三十烷酸(C30)、正四十烷酸(C40)、順式-Δ9-十八烷酸(C18，油酸)、全順式-Δ5，8，11，14-二十烷四烯酸(eicosatetraenoate)(C20，花生四烯酸)、辛二酸、十四烷二酸、十八烷二酸、二十二烷二酸等等。適宜的脂肪酸酯包括含有線性或分支低級烷基的二羧酸的單酯。低級烷基可以含有1到約12、優(yōu)選1到約6個碳原子。使用適宜的方法，如通過與一種或多種修飾試劑反應(yīng)可以制備經(jīng)修飾的人抗體和抗原結(jié)合片段。文中所用“修飾試劑”指含有活化基團的適宜的有機基團(例如，親水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)?！盎罨鶊F”是化學(xué)部分或者官能團，其在適宜的條件下可以與第二種化學(xué)基團反應(yīng)，從而在修飾試劑和該第二種化學(xué)基團之間形成共價鍵。例如，胺反應(yīng)性活化基團包括親電基團，如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、鹵(氯、溴、氟、碘)、N-羥基琥珀酰亞胺基酯(NHS)，等等。與硫醇反應(yīng)的活化基團包括，例如，馬來酰亞胺、碘代乙?；⒈?acrylolyl)、吡啶基二硫化物、5-硫醇-2-硝基苯甲酸硫醇(TNB-硫醇)、等等。醛官能團可以偶聯(lián)至含有胺-或者酰肼-的分子，且疊氮基可以與三價磷基團反應(yīng)形成氨基磷酸酯或者phosphorimide連接。向分子中導(dǎo)入活化基團的適宜方法是本領(lǐng)域公知的(見，例如，Hermanson，G.T.，BioconjugateTechiniques，AcademicPressSanDiego，CA(1996))。活化基團可以直接結(jié)合有機基團(例如，親水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)或者通過接頭部分，例如，二價C1-C12基團結(jié)合有機基團，在所述二價C1-C12基團中，一個或多個碳原子可以被雜原子，如氧、氮或者硫代替。適宜的接頭部分包括，例如，四甘醇、-(CH2)3-、-NH-(CH2)6-NH-、-(CH2)2-NH-和-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-。含有接頭部分的修飾試劑可以通過如下方法制備，例如，在1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(EDC)存在下將單-Boc-烷基二胺(例如，單-Boc-乙二胺，單-Boc-二氨基己烷)與脂肪酸反應(yīng)，從而在游離胺和脂肪酸羧基之間形成酰胺鍵。Boc保護(hù)基可以從產(chǎn)物除去，這可以通過用三氟乙酸(TFA)處理實現(xiàn)，以暴露可以偶聯(lián)如所述的另一羧基的伯胺，或者可以與馬來酐反應(yīng)并環(huán)化所得產(chǎn)物以產(chǎn)生脂肪酸的活化的馬來酰亞胺基(maleimido)衍生物(見，例如，Thompson，等人，WO92/16221，將其完整教導(dǎo)并入本文作為參考)。通過將人抗體或者抗原結(jié)合片段與修飾試劑反應(yīng)可以產(chǎn)生本發(fā)明的修飾抗體。例如，通過使用胺-反應(yīng)性修飾試劑，例如PEG的NHS酯，可以以非位點特異的方式將有機部分結(jié)合到抗體。經(jīng)修飾的人抗體或者抗原結(jié)合片段還可以通過還原抗體或者抗原結(jié)合片段的二硫鍵(例如，鏈內(nèi)二硫鍵)來制備。然后所還原的抗體或者抗原結(jié)合片段可以與硫醇反應(yīng)性修飾試劑反應(yīng)以產(chǎn)生本發(fā)明的修飾抗體。使用適宜的方法，如反向蛋白水解(Fisch等人，BioconjugateChem.，3147-153(1992)；Werlen等人，BioconjugateChem.，5411-417(1994)；Kumaran等人，ProteinSci.6(10)2233-2241(1997)；Itoh等人，Bioorg.Chem.，24(1)59-68(1996)；Capellas等人，Biotechnol.Bioeng.，56(4)456-463(1997))，和Hermanson，G.T.，BioconjugateTechniques，AcademicPressSanDiego，CA(1996)中描述的方法可以制備含有結(jié)合本發(fā)明抗體的特定位點的有機部分的經(jīng)修飾的人抗體和抗原結(jié)合片段。單克隆抗體的生成通過傳統(tǒng)的免疫法和雜交瘤技術(shù)，可以生產(chǎn)出本發(fā)明的單克隆抗體。用包含本發(fā)明的多肽的人CNGH0010抗原性組合物免疫小鼠后，從免疫的動物回收脾細(xì)胞或來自淋巴結(jié)組織的淋巴細(xì)胞，并通過與骨髓瘤細(xì)胞融合或通過Epstein-Barr(EB)-病毒轉(zhuǎn)化，使其無限增殖化。通過篩選能表達(dá)需要的抗體的克隆，得到了單克隆抗體。盡管經(jīng)常使用小鼠作為實驗?zāi)Ｐ停A(yù)期可以根據(jù)本發(fā)明的方法操作任意的哺乳動物受試者，包括人受試者或能生產(chǎn)抗體的細(xì)胞，以用作生產(chǎn)哺乳動物(包括人)和雜交細(xì)胞系的基礎(chǔ)。從能表達(dá)抗體的B細(xì)胞直接克隆抗體分子的重組DNA的技術(shù)，也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。通過熒光激活細(xì)胞分選儀，可以分離出這種B細(xì)胞。盡管常規(guī)地生產(chǎn)小鼠單克隆抗體，但是本發(fā)明不限于此。對于治療性應(yīng)用，人或人源化的抗體是所需的。通過使用人雜交瘤或通過生成人源化的抗體，可以得到這種抗體。通過將非人抗體的特定片段替代為人抗體基因的對應(yīng)片段，可以開發(fā)出人源化的抗體。該方法能保留親本抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)的大部分或全部CDR區(qū)域，并在很大程度上將構(gòu)架區(qū)替代為人序列[EP專利號184187；EP專利號171496；EP專利號173494和WO專利號86/01533]。在它們的基因組中含有能編碼人抗體的基因或基因片段的轉(zhuǎn)基因小鼠中，也可以生成人單克隆抗體[美國專利號6,162,963；WO專利號93/12227；美國專利號5,877,5397；美國專利號5,874,299；美國專利號5,814,318；美國專利號5,789,650；美國專利號5,770,429；美國專利號5,661,016；美國專利號5,625,126；美國專利號5,569,825；美國專利號5,545,806；和WO專利號91/10741]。使用噬菌體展示、核糖體展示或有關(guān)的篩選或選擇技術(shù)，也可以從體外或體內(nèi)地生成的重組抗體文庫得到人單克隆抗體。A.Knappik和其它人[65]公開了生成抗體文庫(主要是人源的)的方法的實例[美國專利號6,291,158；美國專利號6,291,159；美國專利號6,291,160和美國專利號6,291,161]。B.Krebs和其它人[66]公開了從這樣的文庫選擇特定抗原靶的人抗體的方法的實例[美國專利號5,955,341；美國專利號5,759,817；美國專利號5,658,727；美國專利號6,235,469；美國專利號5,969,108；美國專利號5,886,793]。關(guān)于生成抗-CNGH0010抗體的方法的詳細(xì)描述如本領(lǐng)域中眾所周知的，通過細(xì)胞系、混合細(xì)胞系、無限增殖化細(xì)胞或者無限增殖化細(xì)胞的克隆群體可以任選產(chǎn)生至少一種本發(fā)明的抗-CNGH0010抗體。見，例如，Ausubel，等人編著，CurrentProtocolsinMolecularBiology，JohnWiley&Sons，Inc.，NY，NY(1987-2001)；Sambrook，等人，MolecularCloningALaboratoryManual，第二版，ColdSpringHarbor，NY(1989)；Harlow和Lane，antibodies，aLaboratoryManual，ColdSpringHarbor，NY(1989)；Colligan，等人編著，CurrentProtocolsinImmunology，JohnWiley&Sons，Inc.，NY(1994-2001)；Colligan等人，CurrentProtocolsinProteinScience，JohnWiley&Sons，NY，NY，(1997-2001)，將它們各自完整并入本文作為參考。針對如本文所述的適宜的免疫原性抗原，例如如本文所述的分離的和/或CNGH0010蛋白、其變體或部分(包括合成分子，例如合成多肽)，可以產(chǎn)生對人CNGH0010蛋白(如本文所述的)、其變體或片段特異性的人抗體?？梢灶愃频禺a(chǎn)生其他特異或者通常的哺乳動物抗體。使用任意適宜的技術(shù)可以進(jìn)行免疫原性抗原的制備和單克隆抗體的產(chǎn)生。在一種方法中，通過將適宜的無限增殖化細(xì)胞系，例如，骨髓瘤細(xì)胞系，如，但不限于，Sp2/0、Sp2/0-AG14、NS0、NS1、NS2、AE-1、L.5、＞243、P3X63Ag8.653、Sp2SA3、Sp2MAI、Sp2SS1、Sp2SA5、U937、MLA144、ACTIV、MOLT4、DA-1、JURKAT、WEHI、K-562、COS、RAJI、NIH3T3、HL-60、MLA144、NAMAIWA、NEURO2A等等，或者異種骨髓瘤(heteromylomas)、其融合產(chǎn)物，或者從中衍生的任意細(xì)胞或者融合細(xì)胞，或者本領(lǐng)域中公知的任意其他適宜的細(xì)胞系(例如，www.atcc.org、www.lifetech.com等)與抗體產(chǎn)生性細(xì)胞融合來產(chǎn)生雜交瘤，所述抗體產(chǎn)生性細(xì)胞例如，但不限于，分離或克隆的脾臟、外周血、淋巴、扁桃體、或者其他免疫細(xì)胞或者含有B細(xì)胞的細(xì)胞，或者任意其他細(xì)胞，它們將重鏈或輕鏈恒定或可變或構(gòu)架或者CDR序列表達(dá)為內(nèi)源或異源的核酸、重組或內(nèi)源的、病毒、細(xì)菌、藻類、原核生物、兩棲動物、昆蟲、爬行動物、魚、哺乳動物、嚙齒類、馬、綿羊、山羊、羊、靈長類、真核生物、基因組DNA、cDNA、rDNA、線粒體DNA或者RNA、葉綠體DNA或者RNA、hnRNA、mRNA、tRNA、單鏈、雙鏈或者三鏈、雜交的等等或者它們的任意組合。見，例如，Ausubel，如前，和Colligan，Immunology，如前，第二章，將它們完整并入本文作為參考。還可以從用目的抗原免疫的人或者其他適宜動物的外周血或者優(yōu)選地，脾臟或者淋巴結(jié)得到產(chǎn)生抗體的細(xì)胞。任意其他適宜的宿主細(xì)胞也可用于表達(dá)編碼本發(fā)明的抗體、其特異片段或者變體的異源或者內(nèi)源核酸。融合細(xì)胞(雜交瘤)或者重組細(xì)胞可以用選擇培養(yǎng)條件或者其他適宜的公知方法分離，并且通過有限稀釋或者細(xì)胞分選，或者其他公知的方法克隆。通過適宜的測定法(例如，ELISA)可以選擇產(chǎn)生具有所希望的特異性的抗體的細(xì)胞?？梢允褂糜糜诋a(chǎn)生或分離具有所需特異性的抗體的其他適宜方法，其包括但不限于，從多肽或者蛋白展示文庫選擇重組抗體的方法(例如，但不限于，噬菌體、核糖體、寡核苷酸、RNA、cDNA等展示文庫；例如，可以從CambridgeantibodyTechnologies，Cambridgeshire，英國；MorphoSys，Martinsreid/Planegg，DE；Biovation，Aberdeen，Scotland，英國；BioInvent，Lund，瑞典；DyaxCorp.，Enzon，Affymax/Biosite；Xoma，Berkeley，CA；Ixsys得到。見例如，EP368,684，PCT/GB91/01134；PCT/GB92/01755；PCT/GB92/002240；PCT/GB92/00883；PCT/GB93/00605；US08/350260(5/12/94)；PCT/GB94/01422；PCT/GB94/02662；PCT/GB97/01835；(CAT/MRC)；WO90/14443；WO90/14424；WO90/14430；PCT/US94/1234；WO92/18619；WO96/07754；(Scripps)；WO96/13583，WO97/08320(MorphoSys)；WO95/16027(BioInvent)；WO88/06630；WO90/3809(Dyax)；US4,704,692(Enzon)；PCT/US91/02989(Affymax)；WO89/06283；EP371998；EP550400；(Xoma)；EP229046；PCT/US91/07149(Ixsys)；或者隨機產(chǎn)生的肽或者蛋白-US5723323，5763192，5814476，5817483，5824514，5976862，WO86/05803，EP590689(Ixsys，現(xiàn)在為AppliedMolecularEvolution(AME)，每一篇都完整并入本文作為參考)或者那些依賴于轉(zhuǎn)基因動物的免疫的(例如，SCID小鼠，Nguyen等人，Microbiol.Immunol.41901-907(1997)；Sandhu等人，Crit.Rev.Biotechnol.1695-118(1996)；Eren等人，Immunol.93154-161(1998)，每一篇及相關(guān)專利和申請都完整并入作為參考)，所述方法能夠產(chǎn)生人抗體譜，如本領(lǐng)域中公知和/或本文所描述的。這些技術(shù)包括，但不限于，核糖體展示(Hanes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，944937-4942(May1997)；Hanes等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，9514130-14135(Nov.1998))；單細(xì)胞抗體產(chǎn)生技術(shù)(例如，所選的淋巴細(xì)胞抗體方法(“SLAM”)(美國專利號5,627,052，Wen等人，J.Immunol.17887-892(1987)；Babcook等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA937843-7848(1996))；凝膠微滴和流式細(xì)胞術(shù)(Powell等人，Biotechnol.8333-337(1990)；單細(xì)胞系統(tǒng)，Cambridge，MA；Gray等人，J.Imm.Meth.182155-163(1995)；Kenny等人，Bio/Technol.13787-790(1995))；B細(xì)胞選擇(Steenbakkers等人，Molec.Biol.Reports19125-134(1994)；Jonak等人，ProgressBiotech，卷5，InVitroImmunizationinHybridomaTechnology，Borrebaeck，編著，ElsevierSciencePublishersB.V.，Amsterdam，荷蘭(1988))。用于工程化或人源化非人或者人抗體的方法也可以使用并且是本領(lǐng)域眾所周知的。通常，人源化或者工程化抗體具有來自非人來源的一個或多個氨基酸殘基，所述非人來源為例如，但不限于小鼠、大鼠、兔子、非人靈長類動物或者其他哺乳動物。這些人氨基酸殘基通常稱作“輸入”殘基，其通常來自已知人序列的“輸入”可變、恒定或者其他結(jié)構(gòu)域。公開了已知的人Ig序列，例如，在www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi；www.atcc.org/phage/hdb.html；www.sciquest.com/；www.abcam.com/；www.antibodyresource.com/onlinecomp.html；www.public.iastate.edu/～pedro/research_tools.html；www.mgen.uni-heidelberg.de/SD/IT/TT.html；www.whfreeman.com/imrnunology/CH05/kuby05.htm；www.library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.html；www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/；www.path.cam.ac.uk/～mrc7/mikeimages.html；www.antibodyresource.com/；mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html.www.immunologylink.com/；pathbox.wustl.edu/～hcenter/index.html；www.biotech.ufl.edu/-hcl/；www.pebio.com/pa/340913/340913.html；www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody/；www.m.ehime-u.ac.jp/～yasuhito/Elisa.html；www.biodesign.com/table.asp；www.icnet.uk/axp/facs/davies/links.html；www.biotech.ufl.edu/～fccl/protocol.html；www.isac-net.org/sites_geo.html；aximt1.imt.uni-marburg.de/～rek/AEPStart.html；baserv.uci.kun.nl/～jraats/links1.html；www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu/；www.mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/public/INTRO.html；www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html；imgt.cnusc.fr8104/；www.biochem.ucl.ac.uk/～martin/abs/index.html；antibody.bath.ac.uk/；abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html；www.unizh.ch/～honegger/AHOseminar/Slide01.htmlwww.cryst.bbk.ac.uk/～ubcg07s/；www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm；www.path.cam.ac.uk/～mrc7/humanisation/TAHHP.html；www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html；www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html；www.cryst.bioc.cam.ac.uk/～fmolina/Web-pages/Pept/spottech.html；www.jerini.de/fr_products.htm；www.patents.ibm.com/ibm.htmlKabat等人，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，U.S.Dept.Health(1983)，將它們完整并入本文作為參考。這些輸入的序列可以用于減小免疫原性或者減小、增強或者修飾結(jié)合、親和性、結(jié)合速率(on-rate)、解離速率(off-rate)、親合力、特異性、半衰期，或者本領(lǐng)域中公知的任何其他適宜的特征。通常保持部分或所有非人或者人CDR序列，而可變和恒定區(qū)的非人序列用人或者其他氨基酸替代。還可以任選地將抗體人源化且保持對抗原的高親和性和其他有利的生物學(xué)性質(zhì)。為了實現(xiàn)該目標(biāo)，任選通過使用親本和人源化序列的三維模型通過親本序列和多種概念上的人源化產(chǎn)物的分析方法制備人源化抗體。三維免疫球蛋白模型是通?？傻玫牟⑶沂潜绢I(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的。闡明和展示所選的候選免疫球蛋白序列的可能的三維構(gòu)象結(jié)構(gòu)的計算機程序是可以獲得的。檢查這些展示可以允許分析殘基在候選免疫球蛋白序列的功能作用中的可能角色，即，分析影響候選免疫球蛋白結(jié)合其抗原的能力的殘基。這樣，可以從共有和輸入序列選擇并組合FR殘基，從而實現(xiàn)所希望的抗體特征，如對靶抗原的增加的親和性。通常，CDR殘基直接和最充分地參與影響抗原結(jié)合。本發(fā)明抗體的人源化或者工程化可以使用任意公知方法進(jìn)行，所述方法為諸如但不限于下述的方法Winter(Jones等人，Nature321522(1986)；Riechmann等人，Nature332323(1988)；Verhoeyen等人，Science2391534(1988))，Sims等人，J.Immunol.1512296(1993)；Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196901(1987)，Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.894285(1992)；Presta等人，J.Immunol.1512623(1993)，美國專利號5723323、5976862、5824514、5817483、5814476、5763192、5723323、5766886、5714352、6204023、6180370、5693762、5530101、5585089、5225539；和4816567、PCT/US98/16280、US96/18978、US91/09630、US91/05939、US94/01234、GB89/01334、GB91/01134、GB92/01755；WO90/14443、WO90/14424、WO90/14430，和EP229246，將所述文獻(xiàn)每一篇，包括其中引用的參考文獻(xiàn)都完整并入本文作為參考。如文中描述和/或本領(lǐng)域中公知的，還可以任選地通過免疫能夠產(chǎn)生人抗體譜的轉(zhuǎn)基因動物(例如，小鼠、大鼠、倉鼠、非人靈長類動物，等等)產(chǎn)生抗-CNGH0010抗體。使用適宜的方法，如文中描述的方法，可以從這些動物分離產(chǎn)生人抗-CNGH0010抗體的細(xì)胞并將其無限增殖化。產(chǎn)生結(jié)合人抗原的人抗體譜的轉(zhuǎn)基因小鼠可以通過公知方法產(chǎn)生(例如，但不限于，授予Lonberg等人的美國專利號5,770,428、5,569,825、5,545,806、5,625,126、5,625,825、5,633,425、5,661,016和5,789,650；Jakobovits等人，WO98/50433，Jakobovits等人，WO98/24893，Lonberg等人，WO98/24884，Lonberg等人，WO97/13852，Lonberg等人，WO94/25585，Kucherlapate等人，WO96/34096，Kucherlapate等人，EP0463151B1，Kucherlapate等人，EP0710719A1，Surani等人，美國專利號5,545,807，Bruggemann等人，WO90/04036，Bruggemann等人，EP0438474B1，Lonberg等人，EP0814259A2，Lonberg等人，GB2272440A，Lonberg等人，Nature368856-859(1994)，Taylor等人，Int.Immunol.6(4)579-591(1994)，Green等人，NatureGenetics713-21(1994)，Mendez等人，NatureGenetics15146-156(1997)，Taylor等人，NucleicAcidsResearch20(23)6287-6295(1992)，Tuaillon等人，ProcNatlAcadSciUSA90(8)3720-3724(1993)，Lonberg等人，IntRevImmunol13(1)65-93(1995)和Fishwald等人，NatBiotechnol14(7)845-851(1996)，將它們每一篇都完整并入本文作為參考)。通常，這些小鼠含有至少一種轉(zhuǎn)基因，其含有來自功能上重排或者可以經(jīng)歷功能重排的至少一種人免疫球蛋白基因座的DNA?？梢云茐幕蛘呷笔Т祟愋∈笾袃?nèi)源免疫球蛋白基因座以消除該動物產(chǎn)生內(nèi)源基因編碼的抗體的能力。使用肽展示文庫可以方便地實現(xiàn)篩選特異結(jié)合類似蛋白或者片段的抗體。該方法包括對大量肽篩選具有所需的功能或者結(jié)構(gòu)的個體成員。肽展示文庫的抗體篩選是本領(lǐng)域中眾所周知的。所展示的肽序列可以長為3到5000個或更多個氨基酸，通常為5-100個氨基酸長，且通常為約8到25個氨基酸長。除了直接的化學(xué)合成方法以產(chǎn)生肽文庫外，已經(jīng)描述的幾種重組DNA方法。一種類型包括在噬菌體或者細(xì)胞表面上展示肽序列。每個噬菌體或者細(xì)胞都含有編碼具體展示的肽序列的核苷酸序列。此類方法在PCT專利發(fā)明者宋曉宇,黃沖,馬克穎,梁柏霖,M·納索申請人:森托科爾公司