專利名稱：油田水質(zhì)硫酸鹽還原菌的定量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及油田水系統(tǒng)中常規(guī)污水、含聚污水、地面工藝的水處理過程中硫酸鹽還原菌(SRB)的培養(yǎng)及計(jì)數(shù)。
背景技術(shù)：
目前，油田系統(tǒng)內(nèi)SRB菌的計(jì)數(shù)主要執(zhí)行中國(guó)石油天然氣行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，“油田注入水細(xì)菌分析方法——絕跡稀釋法”(部頒標(biāo)準(zhǔn))、SY-TO532-93。上述的這種方法存在的問題是檢測(cè)需要14天的時(shí)間，由于檢測(cè)周期較長(zhǎng)，不能有效的和即時(shí)的指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐，在實(shí)際操作過程中有些嚴(yán)格的厭氧SRB菌無法生存，導(dǎo)致SRB菌的記數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確，不能真實(shí)的反映生產(chǎn)實(shí)際情況，同時(shí)檢測(cè)費(fèi)用較高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有的油田水質(zhì)SRB菌檢測(cè)中，檢測(cè)周期長(zhǎng)、不能真實(shí)全面的反應(yīng)水中的SRB菌的數(shù)量、不能即時(shí)的指導(dǎo)生產(chǎn)、檢測(cè)費(fèi)用較高的問題，提供一種油田水質(zhì)硫酸鹽還原菌的定量檢測(cè)方法，本發(fā)明具有記數(shù)準(zhǔn)確、縮短計(jì)數(shù)時(shí)間、真實(shí)的反映生產(chǎn)實(shí)際情況、降低檢測(cè)費(fèi)用的特點(diǎn)。本發(fā)明的方法是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)的1、取樣將油田的水樣注入到經(jīng)滅菌的含有高純氮?dú)獾膮捬豕苤校?、以下的步驟在超凈工作臺(tái)下完成，紫外線滅菌20～40min，向滅菌的硫酸鹽還原菌的培養(yǎng)基中加入1mL的質(zhì)量百分濃度比為6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液(終濃度為6‰)備用；3、“厭氧MPN法”，選擇水樣的稀釋倍數(shù)通常大于經(jīng)驗(yàn)值的二到三個(gè)數(shù)量級(jí)，用倍比稀釋法(MPN)稀釋，取水樣1mL注入用于倍比稀釋的厭氧管中，最終水樣被稀釋十倍，依次從該管中用一次性注射器取樣1mL注入下一個(gè)用于倍比稀釋的厭氧管中，直到選擇稀釋的倍數(shù)；4、選用三管至五管平行法，選用在同一個(gè)稀釋梯度下選擇做三至五個(gè)平行樣，吸取1mL注入備用的培養(yǎng)基中；5、將MPN的培養(yǎng)基放到搖床上，在38℃、180轉(zhuǎn)/min條件下?lián)u動(dòng)；6、結(jié)果觀察第四天和第七天分別計(jì)數(shù)。本發(fā)明的方法其結(jié)果表明，三管平行法記錄的結(jié)果在水樣低濃度的情況下，最大相差一個(gè)數(shù)量級(jí)，在高濃度的情況下，相差小于兩個(gè)數(shù)量級(jí)。而五管平行法記錄的結(jié)果置信度大于95％。五管平行法四天記錄的結(jié)果與七天記錄的結(jié)果只在系數(shù)上有差別，而在數(shù)量級(jí)上無差別。在第七天已經(jīng)穩(wěn)定生長(zhǎng)，以后無變化。本發(fā)明的方法具有記數(shù)更加準(zhǔn)確，有效的縮短了計(jì)數(shù)時(shí)間，四天可以實(shí)現(xiàn)初步計(jì)數(shù)，七天可以達(dá)到準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，真實(shí)的反應(yīng)了生產(chǎn)實(shí)際情況、降低了檢測(cè)費(fèi)用的優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式的方法是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)的1、取樣將油田的水樣注入到經(jīng)滅菌的含有高純氮?dú)獾膮捬豕苤校?、以下操作在超凈工作臺(tái)下完成，紫外線滅菌20～40min，向滅菌的硫酸鹽還原菌的培養(yǎng)基中加入1mL的質(zhì)量百分濃度比為6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液(終濃度為6‰)備用；3、“厭氧MPN法”，選擇水樣的稀釋倍數(shù)通常大于經(jīng)驗(yàn)值的二至三個(gè)數(shù)量級(jí)，用倍比稀釋法(MPN)稀釋，取水樣1mL注入用于倍比稀釋的厭氧管中，最終水樣被稀釋十倍，依次從該管中用一次性注射器取樣1mL注入下一個(gè)用于倍比稀釋的厭氧管中，直到選擇稀釋的倍數(shù)；4、選用三管至五管平行法，選用在同一個(gè)稀釋梯度下做三至五個(gè)平行樣，吸取1mL注入備用的硫酸鹽還原菌的培養(yǎng)基中；5、將MPN的培養(yǎng)基放到搖床上，在38℃、180轉(zhuǎn)/min條件下?lián)u動(dòng)；6、結(jié)果觀察第四天和第七天分別計(jì)數(shù)。
具體實(shí)施例方式
二本實(shí)施方式的硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基的制備方法如下一、首先由下列成分按重量份數(shù)制備培養(yǎng)基，K2HPO40.2～0.8、NH4CI0.5～1.5、Na2SO45～15、CaCI2·2H2O0.01～0.6、MgSO4·7H2O1.5～4、酵母膏4～8、質(zhì)量百分濃度比為60％的乳酸鈉溶液5～15、葡萄糖0.5～1.5、維生素C1～5、蒸餾水1000～2000，將上述成分混合均勻，然后調(diào)pH值＝7.8，制成培養(yǎng)基，再加入培養(yǎng)基總重量0.2％的指示劑刃天青溶液；二、將上述培養(yǎng)基用滅菌鍋煮沸后，向鍋內(nèi)加入培養(yǎng)基總重量0.2～0.8％的L-半光胺酸鹽，蓋上鍋蓋，從鍋蓋的中間孔中插入醫(yī)用針頭，通入高純氮?dú)怛?qū)氧20～30min，指示劑的顏色由紫色逐漸消失后，將另一個(gè)醫(yī)用針頭插入到厭氧管中，通入高純氮?dú)?，將厭氧管中的含氧空氣吹走，?0mL的醫(yī)用注射器從滅菌鍋中吸8mL培養(yǎng)基注入到厭氧管中，將密封后的厭氧管在121℃條件下滅菌15～30min即可。其它方法和步驟與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施例方式
三本實(shí)施方式的質(zhì)量百分濃度比為6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液的制備方法如下首先制備無氧水，在滅菌鍋中加入一升去離子水煮沸后，加入L-半光胺酸鹽0.2～0.8g，蓋上滅菌鍋的蓋，從鍋蓋的中間孔中插入醫(yī)用針頭，向滅菌鍋內(nèi)通入高純氮?dú)怛?qū)氧10～30min。配制10mL的6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液，將稱量好的FeSO4·(NH4)2SO4放入?yún)捬豕苤校瑢⒘硪粋€(gè)醫(yī)用針頭插入?yún)捬豕苤?，通入高純氮?dú)猓瑢捬豕苤械暮蹩諝獯底?，?0mL的醫(yī)用注射器從滅菌鍋中吸10mL水注入?yún)捬豕苤?，將密封后的厭氧管?21℃條件下滅菌15～30min即可。其它方法和步驟與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施例方式
四本實(shí)施方式的硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基由下列成分按重量份數(shù)制備而成K2HPO40.25、NH4CI0.6、Na2SO46、CaCI2·2H2O0.02、MgSO4·7H2O1.6、酵母膏4.5、質(zhì)量百分濃度比為60％的乳酸鈉溶液6、葡萄糖0.6、維生素C1.5、蒸餾水1050。
具體實(shí)施例方式
五本實(shí)施方式的硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基由下列成分按重量份數(shù)制備而成K2HPO40.75、NH4CI1.45、Na2SO414、CaCI2·2H2O0.55、MgSO4·7H2O3.5、酵母膏7.5、質(zhì)量百分濃度比為60％的乳酸鈉溶液14、葡萄糖1.4、維生素C4.5、蒸餾水1950。
具體實(shí)施例方式
六本實(shí)施方式的硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基由下列成分按重量份數(shù)制備而成K2HPO40.5、NH4CI1、Na2SO410、CaCI2·2H2O0.1、MgSO4·7H2O2.5、酵母膏6、質(zhì)量百分濃度比為60％的乳酸鈉溶液10、葡萄糖1、維生素C3、蒸餾水1000。
權(quán)利要求
1.油田水質(zhì)硫酸鹽還原菌的定量檢測(cè)方法，該方法是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)的(1)、取樣將油田的水樣注入到經(jīng)滅菌的通有高純氮?dú)獾膮捬豕苤校?2)、以下操作在超凈工作臺(tái)下完成，紫外線滅菌20～40min，其特征是向滅菌的硫酸鹽還原菌的培養(yǎng)基中加入1mL的質(zhì)量百分濃度比為6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液備用；(3)、“厭氧MPN法”首先選擇水樣的稀釋倍數(shù)，通常大于經(jīng)驗(yàn)值的二到三個(gè)數(shù)量級(jí)，用倍比稀釋法稀釋，取水樣1mL注入含9mL無氧水的厭氧管中，最終水樣被稀釋十倍，依次從該管中用一次性注射器取樣1mL注入下一個(gè)用于倍比稀釋的厭氧管中，直到選擇稀釋的倍數(shù)；(4)、選用三管至五管平行法，選用在同一個(gè)稀釋梯度下做三個(gè)至五個(gè)平行樣，吸取1mL注入備用的培養(yǎng)基中；(5)、將MPN的培養(yǎng)基放到搖床上，在38℃、180轉(zhuǎn)/min條件下?lián)u動(dòng)；(6)、結(jié)果觀察第四天和第七天分別計(jì)數(shù)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油田水質(zhì)硫酸鹽還原菌的定量檢測(cè)方法，其特征在于硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基的制備方法如下一、首先由下列成分按重量份數(shù)制備培養(yǎng)基，K2HPO40.2～0.8、NH4CI0.5～1.5、Na2SO45～15、CaCI2·2H2O0.01～0.6、MgSO4·7H2O1.5～4、酵母膏4～8、質(zhì)量百分濃度比為60％的乳酸鈉溶液5～15、葡萄糖∶0.5～1.5、維生素C1～5、蒸餾水1000～2000，將上述成分混合均勻，然后調(diào)pH值＝7.8，制成培養(yǎng)基，再加入培養(yǎng)基總重量0.2％的指示劑刃天青溶液；二、將上述培養(yǎng)基用滅菌鍋煮沸后，向鍋內(nèi)加入培養(yǎng)基總重量0.2～0.8％的L-半光胺酸鹽，蓋上鍋蓋，從鍋蓋的中間孔中插入醫(yī)用針頭，通入高純氮?dú)怛?qū)氧20～30min，指示劑的顏色由紫色逐漸消失后，將另一個(gè)醫(yī)用針頭插入到厭氧管中，通入高純氮?dú)?，將厭氧管中的含氧空氣吹走，?0mL的醫(yī)用注射器從滅菌鍋中吸8mL培養(yǎng)基注入到厭氧管中，將密封后的厭氧管在121℃條件下滅菌15～30min即可。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的油田水質(zhì)硫酸鹽還原菌的定量檢測(cè)方法，其特征在于質(zhì)量百分濃度比為6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液的制備方法如下首先制備無氧水，在滅菌鍋中加入一升去離子水煮沸后，加入L-半光胺酸鹽0.2～0.8g，蓋上滅菌鍋的蓋，從鍋蓋的中間孔中插入醫(yī)用針頭，向滅菌鍋內(nèi)通入高純氮?dú)怛?qū)氧10～30min。配制10mL的6％的FeSO4·(NH4)2SO4溶液，將稱量好的FeSO4·(NH4)2SO4放入?yún)捬豕苤?，將另一個(gè)醫(yī)用針頭插入?yún)捬豕苤?，通入高純氮?dú)猓瑢捬豕苤械暮蹩諝獯底?，?0mL的醫(yī)用注射器從滅菌鍋中吸9mL水注入?yún)捬豕苤?，將密封后的厭氧管?21℃條件下滅菌15～30min即可。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的油田水質(zhì)硫酸鹽還原菌的定量檢測(cè)方法，其特征在于硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基由下列成分按重量份數(shù)制備而成K2HPO40.25、NH4CI0.6、Na2SO46、CaCI2·2H2O0.02、MgSO4·7H2O1.6、酵母膏4.5、質(zhì)量百分濃度比為60％的乳酸鈉溶液6、葡萄糖0.6、維生素C1.5、蒸餾水1050。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的油田水質(zhì)硫酸鹽還原菌的定量檢測(cè)方法，其特征在于硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基由下列成分按重量份數(shù)制備而成K2HPO40.75、NH4CI1.45、Na2SO414、CaCI2·2H2O0.55、MgSO4·7H2O3.5、酵母膏7.5、質(zhì)量百分濃度比為60％的乳酸鈉溶液14、葡萄糖1.4、維生素C4.5、蒸餾水1950。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的油田水質(zhì)硫酸鹽還原菌的定量檢測(cè)方法，其特征在于硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基由下列成分按重量份數(shù)制備而成K2HPO40.5、NH4CI1、Na2SO410、CaCI2·2H2O0.1、MgSO4·7H2O2.5、酵母膏6、質(zhì)量百分濃度比為60％的乳酸鈉溶液10、葡萄糖1、維生素C3、蒸餾水1000。
全文摘要
油田水質(zhì)硫酸鹽還原菌的定量檢測(cè)方法，它涉及油田水系統(tǒng)中常規(guī)污水、含聚污水、地面工藝的水處理過程中硫酸鹽還原菌(SRB)的培養(yǎng)及厭氧菌的計(jì)數(shù)。本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有的油田水質(zhì)SRB菌檢測(cè)中，檢測(cè)周期長(zhǎng)、不能全面真實(shí)的反映水中的SRB菌的數(shù)量、不能即時(shí)的指導(dǎo)生產(chǎn)、檢測(cè)費(fèi)用較高的問題。本發(fā)明選用在同一個(gè)稀釋梯度下做三至五個(gè)平行樣，吸取1mL注入備用的培養(yǎng)基中；將MPN的培養(yǎng)基放到搖床上，在38℃、180轉(zhuǎn)/min條件下?lián)u動(dòng)；結(jié)果觀察第四天和第七天分別計(jì)數(shù)。本發(fā)明的方法具有記數(shù)更加準(zhǔn)確，有效地縮短了計(jì)數(shù)時(shí)間，五管平行法四天可以實(shí)現(xiàn)初步計(jì)數(shù)，七天可以達(dá)到準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，真實(shí)的反應(yīng)了生產(chǎn)實(shí)際情況、降低了檢測(cè)費(fèi)用的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12Q1/06GK1696306SQ200510009980
公開日2005年11月16日 申請(qǐng)日期2005年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月16日
發(fā)明者馬放, 魏利, 陳忠喜 申請(qǐng)人:哈爾濱工業(yè)大學(xué)