專利名稱：休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法。
背景技術(shù)：
松材線蟲病(又稱松樹萎蔫病)是松樹上的一種毀滅性病害。該線蟲主要通過松墨天牛補(bǔ)充營養(yǎng)時的傷口進(jìn)入木質(zhì)部，寄生在樹脂道中，在大量繁殖的時候移動，并遍布全株，導(dǎo)致樹脂道薄壁細(xì)胞和上皮細(xì)胞的破壞和死亡，造成植株失水，蒸騰作用降低，樹脂分泌急劇減少和停止，松樹針葉從灰綠色變成黃褐色或紅褐色，最后整株枯死。寄主植物感染松材線蟲病后40天即可死亡，從植株發(fā)病到整片松林毀滅只需3-5年的時間，由于松材線蟲致病力強(qiáng)，傳播快，寄主死亡速度快，且常常猝不及防，一旦發(fā)生，除砍伐病樹外，目前尚無根治的辦法，不但給國民經(jīng)濟(jì)造成巨大的損失，還破壞了自然景觀及生態(tài)環(huán)境，更重要的是對我國約8.5億畝(5710萬公頃)針葉樹木資源及黃山、張家界、廬山等著名風(fēng)景名勝區(qū)、世界自然文化遺產(chǎn)和重點生態(tài)區(qū)的構(gòu)成嚴(yán)重的威脅。
目前，松材線蟲病只在日本、美國、加拿大、墨西哥、韓國、朝鮮、葡萄牙、香港、臺灣等國家和地區(qū)有發(fā)生。我國自1882年在南京中山陵首次發(fā)現(xiàn)松材線蟲病以來，目前已擴(kuò)散至山東、江蘇、浙江、安徽、廣東等省的局部地區(qū)，直接經(jīng)濟(jì)損失25億元，間接損失2500億元。
我國加入WTO后，國際貿(mào)易越來越頻繁，隨貨物進(jìn)出境的木質(zhì)包裝材料越來越多，這為松材線蟲出入我國提供了機(jī)會。為了防止松材線蟲隨木質(zhì)包裝傳入傳出國境，自1999年以來，我國各出入境檢驗檢疫機(jī)構(gòu)加強(qiáng)了對進(jìn)出境木質(zhì)包裝的檢疫工作，全國各森林植物檢疫站也加強(qiáng)了對疫區(qū)調(diào)運(yùn)貨物木質(zhì)包裝的檢驗檢疫工作，但在檢疫中發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)行的檢疫方法由于需時長，少則4-5天(線蟲含量多的材料)，多則10天以上(線蟲含量少的材料)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足口岸及國內(nèi)森林植物快速檢驗檢疫的需要，其原因是1、從木質(zhì)包裝材料中直接分離出來的大多為分散型三齡幼蟲，而目前主要依據(jù)松材線蟲成蟲的形態(tài)特征進(jìn)行鑒定，要將分散型三齡幼蟲或持久型四齡幼蟲培養(yǎng)為成蟲，需要一定的時間；2、進(jìn)境木質(zhì)包裝材料的存放時間、感染程度、含水量、檢疫處理等情況的不同，在進(jìn)境檢疫過程中，經(jīng)常出現(xiàn)分離的松材線蟲很少的情況，有的只有幾條，要將這為數(shù)不多的休眠狀態(tài)的幼蟲轉(zhuǎn)變?yōu)楣╄b定的成蟲，根據(jù)現(xiàn)有的方法與技術(shù)需要更長的時間(10天以上)，給港口、碼頭、檢查站、貨主、檢測機(jī)構(gòu)帶來許多麻煩，如要等到檢疫結(jié)果出來后再通關(guān)放行，則造成積船壓港，直接影響對外及國內(nèi)貿(mào)易；如不等檢疫結(jié)果出來采取先通關(guān)后檢疫的方式，則有可能造成漏檢或疫情擴(kuò)散；如在檢疫中將可疑線蟲不作進(jìn)一步深入檢驗，就判為一般有害生物，則有可能造成松材線蟲的入侵，如將可疑對象判為松材線蟲，則有可能引起貿(mào)易糾紛，影響國與國之間的關(guān)系及對內(nèi)對外貿(mào)易。于是，目前口岸及森林植物檢疫機(jī)構(gòu)迫切需要解決松材線蟲的快速檢測問題。
根據(jù)松材線蟲的生活史，松材線蟲可分為1齡幼蟲、2齡幼蟲、3齡幼蟲、4齡幼蟲、成蟲；或1齡幼蟲、2齡幼蟲、分散型3齡幼蟲、持久型4齡幼蟲、成蟲。分散型3齡幼蟲在一定的條件下可不經(jīng)過持久型4齡幼蟲階段而直接轉(zhuǎn)為繁殖型4齡幼蟲，再轉(zhuǎn)變?yōu)槌上x。松材線蟲在最適宜的環(huán)境條件下，繁殖一代僅需4天的時間，而存在于木包裝材料中的松材線蟲大多為休眠狀態(tài)的3齡幼蟲，只要能破除松材線蟲幼蟲休眠期并提供最適宜的生長條件，就可在非常短的時間內(nèi)的得到供鑒定用的成蟲，實現(xiàn)對木包裝松材線蟲的快速檢測。于是，破除松材線蟲幼蟲休眠期是實現(xiàn)快速檢疫的關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種能使休眠松材線蟲幼蟲迅速成長為成蟲，便于檢測的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法。
本發(fā)明的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法是1、將木包裝或木材劈成小塊；2、將所需檢測的劈碎材料用紗布包好，放入盛有培養(yǎng)溶液的容器中；3、將盛有劈碎材料的容器置于20-41℃條件下分離培養(yǎng)；4、培養(yǎng)液用100目和500目網(wǎng)篩過濾，100目的可套在500目網(wǎng)篩上面；5、用洗瓶輕輕沖洗500目網(wǎng)篩收集線蟲；6、沖洗液用生物顯微鏡鏡檢，并記錄觀察結(jié)果。
所述的培養(yǎng)溶液是以雙氧水為基液，并加以營養(yǎng)液、赤霉素、硝酸鉀、鹽酸克倫特羅四者中的一種或多種組合，其中營養(yǎng)液為去氫樅酸和長葉稀的混和物，所用的雙氧水的濃度為1×10-7-9×10-3，赤霉素濃度為1-1000ppm，長葉稀濃度為1.67×10-8-5×10-2，去氫樅酸濃度為1.67×10-8-5×10-2，鹽酸克倫特羅濃度為1ppt-1000ppb，硝酸鉀濃度為1.1×10-5-2.2×10-2。
本發(fā)明的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法主要特點是能使休眠狀態(tài)的松材線蟲幼蟲快速轉(zhuǎn)變供鑒定用的成蟲，它比常規(guī)方法能平均提前3-4天檢出休眠松材線蟲。由于在培氧液中添加了雙氧水和適于松材線蟲生長的物質(zhì)，可以極大地提高松材線蟲的檢出率。該方法操作方便、成本低、重復(fù)性好，數(shù)據(jù)可靠，適用于國內(nèi)外進(jìn)出境檢驗檢疫機(jī)構(gòu)、森林植物檢疫機(jī)構(gòu)或個人、集體對木質(zhì)包裝、木材松材線蟲的檢驗檢疫。
具體實施例方式
實施例1一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法是1、將木包裝或木材劈成0.5×15cm小塊；2、所需檢測的劈碎材料用兩層紗布包好，放入盛有培養(yǎng)溶液的容器中；3、把盛有劈碎材料的容器置于25-30℃環(huán)境下分離培養(yǎng)；4、培養(yǎng)液用100目的網(wǎng)篩套在500目網(wǎng)篩上面過濾；5、用洗瓶輕輕沖洗500目網(wǎng)篩上收集的線蟲；6、沖洗液用生物顯微鏡鏡檢，并記錄觀察結(jié)果。所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3的雙氧水、1-1000ppm赤霉素、1.67×10-8-5×10-2去氫樅酸、1.67×10-8-5×10-2長葉稀。
實施例2一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法與實施例1相同，但所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1-1000ppm赤霉素。
實施例3一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法與實施例1相同，但所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1ppt-1000ppb鹽酸克倫特羅、1.67×10-8-5×10-2去氫樅酸、1.67×10-8-5×10-2長葉稀。
實施例4一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法與實施例1相同，但所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1ppt-1000ppb鹽酸克倫特羅。
實施例5一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法與實施例1相同，但所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1.1×10-5-2.2×10-2硝酸鉀、1.67×10-8-5×10-2去氫樅酸、1.67×10-8-5×10-2長葉稀。
實施例6一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法與實施例1相同，但所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1.1×10-5-2.2×10-2硝酸鉀。
實施例7一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法與實施例1相同，但所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1.67×10-8-5×10-2去氫樅酸、1.67×10-7-5×10-2長葉稀。
實施例8一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法與實施例1相同，但所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1-1000ppm赤霉素、1.1×10-5-2.2×10-2硝酸鉀。
實施例9一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法與實施例1相同，但所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1ppt-1000ppb鹽酸克倫特羅、1.1×10-5-2.2×10-2硝酸鉀。
以下用實驗數(shù)據(jù)來加以說明常規(guī)處理與試驗處理試驗結(jié)果統(tǒng)計表






權(quán)利要求
1.一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于它包括以下步驟(1)將木包裝或木材劈成小塊；(2)所需檢測的劈碎材料用紗布包好，放入盛有培養(yǎng)溶液的容器中；(3)將盛有劈碎材料的容器置于20-41℃環(huán)境下分離培養(yǎng)；(4)將培養(yǎng)液用100目和500目網(wǎng)篩過濾，100目的網(wǎng)篩可套在500目網(wǎng)篩上面；(5)用洗瓶輕輕沖洗500目網(wǎng)篩上收集的線蟲；(6)沖洗液液用生物顯微鏡鏡檢，記錄觀察結(jié)果；所述的培養(yǎng)溶液是以雙氧水為基液，并加以營養(yǎng)液、赤霉素、硝酸鉀、鹽酸克倫特羅四者中的一種或多種組合，其中營養(yǎng)液為去氫樅酸和長葉稀的混和物；所用的雙氧水的濃度為1×10-7-9×10-3，赤霉素濃度為1-1000ppm，長葉稀濃度為1.67×10-8-5×10-2，去氫樅酸濃度為1.67×10-8-5×10-2，鹽酸克倫特羅濃度為1ppt-1000ppb，硝酸鉀濃度為1.1×10-5-2.2×10-2。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3的雙氧水、1-1000ppm赤霉素、1.67×10-8-5×10-2去氫樅酸、1.67×10-8-5×10-2長葉稀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1-1000ppm赤霉素。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1ppt-1000ppb鹽酸克倫特羅、1.67×10-8-5×10-2去氫樅酸、1.67×10-8-5×10-2長葉稀。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1ppt-1000ppb鹽酸克倫特羅。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1.1×10-5-2.2×10-2硝酸鉀、1.67×10-8-5×10-2去氫樅酸、1.67×10-8-5×10-2長葉稀。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1ppt-1000ppb鹽酸克倫特羅、1.1×10-5-2.2×10-2硝酸鉀。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1.67×10-8-5×10-2去氫樅酸、1.67×10-7-5×10-2長葉稀。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1-1000ppm赤霉素、1.1×10-5-2.2×10-2硝酸鉀。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法，其特征在于所用的培養(yǎng)溶液包括1×10-7-9×10-3雙氧水、1.1×10-5-2.2×10-2硝酸鉀。
全文摘要
一種休眠松材線蟲幼蟲快速檢疫方法是將木包裝或木材劈成小塊；劈碎材料用紗布包好，放入盛有培養(yǎng)溶液的容器中；容器置于20－41℃條件下分離培養(yǎng)；培養(yǎng)液用100目和500目網(wǎng)篩過濾；用洗瓶輕輕沖洗500目網(wǎng)篩收集線蟲；沖洗液用生物顯微鏡鏡檢。所述的培養(yǎng)溶液是以雙氧水為基液，并加以營養(yǎng)液、赤霉素、硝酸鉀、鹽酸克倫特羅四者中的一種或多種組合。本發(fā)明的方法是能使休眠狀態(tài)的松材線蟲幼蟲快速轉(zhuǎn)變供鑒定用的成蟲，它比常規(guī)方法能平均提前3－4天檢出休眠松材線蟲。該方法操作方便、成本低、重復(fù)性好，數(shù)據(jù)可靠，適用于國內(nèi)外進(jìn)出境檢驗檢疫機(jī)構(gòu)、森林植物檢疫機(jī)構(gòu)或個人、集體對木質(zhì)包裝、木材松材線蟲的檢驗檢疫。
文檔編號C12Q1/02GK1645135SQ20051001818
公開日2005年7月27日 申請日期2005年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2005年1月21日
發(fā)明者廖月華, 溫志海, 廖燕燕, 祝建新 申請人:江西出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫綜合技術(shù)中心