專(zhuān)利名稱(chēng)：一種中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體p1d3及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水產(chǎn)養(yǎng)殖生物病毒的抗體，具體涉及一種能中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體。
背景技術(shù)：
對(duì)蝦養(yǎng)殖是我國(guó)海水養(yǎng)殖的支柱產(chǎn)業(yè)，自1993年全國(guó)養(yǎng)殖對(duì)蝦因感染對(duì)蝦白斑綜合癥病毒，而發(fā)生大規(guī)模暴發(fā)性流行病以來(lái)，對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)遭受了毀滅性的打擊，同樣的情況也幾乎同時(shí)出現(xiàn)在世界上其他對(duì)蝦養(yǎng)殖國(guó)家和地區(qū)。盡管目前已對(duì)對(duì)蝦白斑綜合癥疾病的病原、病理、感染途徑、流行特點(diǎn)等方面的相關(guān)研究較為深入，但在對(duì)蝦白斑綜合癥的防治上，至今尚缺乏有效的措施。中和抗體是研究病毒與宿主細(xì)胞相互作用機(jī)理最有用的工具，也是探尋有效防治病毒性疾病方法的關(guān)鍵。因?yàn)椴《靖腥炯?xì)胞必需首先通過(guò)病毒表面的識(shí)別蛋白與宿主細(xì)胞表面特定受體結(jié)合，因此如果某單克隆抗體能與病毒的識(shí)別蛋白特異結(jié)合，就會(huì)抑制病毒與宿主細(xì)胞的結(jié)合，阻止病毒的感染，該抗體就是中和抗體。由于對(duì)蝦細(xì)胞系尚未成功建立，因此無(wú)法應(yīng)用傳統(tǒng)的細(xì)胞空斑的方法篩選中和病毒的單克隆抗體。
噬菌體抗體展示技術(shù)是近年來(lái)出現(xiàn)的一種基因工程抗體表達(dá)篩選的新技術(shù)，它是將抗體片段基因通過(guò)與噬菌體的外殼蛋白基因融合，而將抗體表達(dá)于噬菌體顆粒的表面。由于表達(dá)的抗體具有生物活性并可與其相應(yīng)的抗原相識(shí)別，因此可根據(jù)抗原抗體結(jié)合的特異性進(jìn)行篩選、富集克隆帶有目的抗體的噬菌體。該技術(shù)將噬菌體表面表達(dá)的抗體的基因型與表現(xiàn)型聯(lián)系在一起，把抗原抗體結(jié)合的特異性同噬菌體的可擴(kuò)增性聯(lián)系起來(lái)，成為一種高效的篩選體系。該技術(shù)不僅可以利用抗原抗體結(jié)合的特異性進(jìn)行淘選，利用“吸附——洗脫——擴(kuò)增”的重復(fù)過(guò)程，將含有特異性抗體的噬菌體從表達(dá)有各種各樣外源蛋白的噬菌體庫(kù)中篩選出來(lái)，并使該特異的噬菌體得到上千倍乃至更高倍數(shù)的富集，過(guò)程簡(jiǎn)單而快速，效率高，而且可以對(duì)所篩選陽(yáng)性克隆的基因進(jìn)行序列鑒定。目前噬菌體展示技術(shù)已廣泛地應(yīng)用于抗體的制備。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是，提供一種能中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3，本發(fā)明的另一目的是提供該單鏈抗體P1D3的制備方法。本發(fā)明的單鏈抗體P1D3是由天然抗體重鏈和輕鏈的可變區(qū)通過(guò)一段可彎曲的短肽連接，通過(guò)將該單鏈抗體基因插入到噬菌粒載體中，再轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，通過(guò)大腸桿菌的繁殖，即可獲得大量的單鏈抗體P1D3。本發(fā)明是利用噬菌體抗體展示技術(shù)和對(duì)蝦淋巴細(xì)胞原代培養(yǎng)技術(shù)找到能中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體，制備簡(jiǎn)單，可以規(guī)模化生產(chǎn)，且費(fèi)用低廉。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案一種中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3的DNA序列為SEQ ID NO1所示的序列。
一種中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3的制備方法為首先從感染了對(duì)蝦白斑綜合癥的斑節(jié)對(duì)蝦的血淋巴液中分離純化白斑綜合癥病毒，用純化病毒免疫小鼠，從免疫了的小鼠脾臟中提取mRNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再用PCR擴(kuò)增其重鏈和輕鏈的可變區(qū)，并用一段可彎曲的短肽連接起來(lái)，形成單鏈抗體。將單鏈抗體片斷插入pCANTAB 5E(Pharmacia公司產(chǎn)品)載體中，再電轉(zhuǎn)化至大腸桿菌中，從而構(gòu)建抗對(duì)蝦白斑綜合癥病毒噬菌體展示抗體庫(kù)。用固相化在塑料管壁上的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒，從該庫(kù)中淘選能與病毒特異性結(jié)合的噬菌體。通過(guò)再感染大腸桿菌，及菌體擴(kuò)增培養(yǎng)，獲得與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒特異性結(jié)合的一批單鏈抗體。在從這一批單鏈抗體中進(jìn)一步篩選具有中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒作用的單鏈抗體。
該篩選方法為先在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)對(duì)蝦淋巴原代細(xì)胞，使之貼壁。將前述能與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒特異性結(jié)合的一批單鏈抗體分別與等量的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒混合，室溫下預(yù)保溫1小時(shí)，再分別加入有貼壁對(duì)蝦淋巴原代細(xì)胞的96孔板的孔中，室溫下保溫15-30分鐘，洗去不能與細(xì)胞結(jié)合的病毒，而結(jié)合在對(duì)蝦細(xì)胞上的病毒則可用單鏈抗體A1(專(zhuān)利號(hào)ZL00131231.6)檢測(cè)。能夠與病毒結(jié)合并使其失去與細(xì)胞結(jié)合能力的抗體稱(chēng)為中和抗體，而能與病毒結(jié)合但并不影響其與細(xì)胞結(jié)合的抗體則是非中和抗體。單鏈抗體P1D3與病毒保溫后，檢測(cè)到的能與細(xì)胞結(jié)合的病毒確實(shí)比等量的病毒與細(xì)胞結(jié)合的值低，并且隨著P1D3量的增加，檢測(cè)到的病毒就越少。多次重復(fù)該實(shí)驗(yàn)，得到的結(jié)果基本相同，這些結(jié)果表明P1D3確實(shí)具有阻止對(duì)蝦白斑綜合癥病毒與對(duì)蝦淋巴原代細(xì)胞結(jié)合的能力，因此可以確定P1D3是能夠中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的中和抗體。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是該單鏈抗體P1D3是由天然抗體重鏈和輕鏈的可變區(qū)通過(guò)一段可彎曲的短肽連接起來(lái)的，因此稱(chēng)為單鏈可變區(qū)抗體。通過(guò)將該單鏈抗體基因插入到噬菌粒載體中，再轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，從而通過(guò)大腸桿菌的繁殖，即可獲得大量的單鏈抗體P1D3，相對(duì)于多克隆抗體和雜交瘤制備的單克隆抗體，制備過(guò)程更為簡(jiǎn)單，可以工廠化生產(chǎn)，而且費(fèi)用低廉。另一方面，設(shè)計(jì)了直接測(cè)定是否影響病毒與原代培養(yǎng)細(xì)胞結(jié)合的方法，確定抗體的中和效應(yīng)。本方法繞開(kāi)了目前對(duì)蝦細(xì)胞系沒(méi)有成功建立的難點(diǎn)，避免了用傳統(tǒng)的細(xì)胞空斑法用于對(duì)蝦白斑綜合癥病毒中和抗體的篩選和鑒定，操作更簡(jiǎn)便，不需要嚴(yán)格的細(xì)胞培養(yǎng)條件，費(fèi)用低，并可實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)，從大量單鏈抗體中篩選中和抗體。本方法還可擴(kuò)展到其他尚未建立細(xì)胞系的甲殼類(lèi)動(dòng)物病毒的中和抗體的篩選。


圖1、不同濃度的單鏈抗體P1D3抑制WSSV病毒顆粒與細(xì)胞結(jié)合的效率。
其中橫坐標(biāo)表示與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒預(yù)保溫的單鏈抗體P1D3的蛋白量；縱坐標(biāo)表示與二抗偶聯(lián)的辣根過(guò)氧化物酶與底物TMB反應(yīng)后，在450nm的光吸收值。
詳細(xì)說(shuō)明如下對(duì)蝦淋巴細(xì)胞原代培養(yǎng)過(guò)夜后，細(xì)胞在96孔板孔壁上貼壁生長(zhǎng)。將不同濃度的單鏈抗體P1D3與1微克對(duì)蝦白斑綜合癥病毒在26攝氏度保溫1小時(shí)后，分別加入有對(duì)蝦淋巴貼壁細(xì)胞的孔中，保溫20分鐘。再用緩沖液洗幾遍，被單鏈抗體P1D3中和的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒粒子不能與對(duì)蝦細(xì)胞結(jié)合而被洗掉，未被單鏈抗體P1D3中和的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒粒子與對(duì)蝦細(xì)胞結(jié)合，并被一種能識(shí)別對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體A1識(shí)別，通過(guò)偶聯(lián)有辣根過(guò)氧化物酶的二抗標(biāo)記，并顯色。圖中實(shí)心方塊表示，隨著P1D3的量的增加，能檢測(cè)出的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒量逐步減少，表明P1D3能夠阻止對(duì)蝦白斑綜合癥病毒與宿主細(xì)胞相結(jié)合。空心方塊表示未加病毒的陰性對(duì)照。
具體實(shí)施例方式
一種中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3的制備方法，該方法按下列步驟順序進(jìn)行1、采用蔗糖密度梯度超速離心法，從感染對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的對(duì)蝦的血淋巴液中分離純化白斑綜合癥病毒；2、用蛋白量為100μg純化的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒懸液，其完整的病毒粒子含量在50％以上，注射到小鼠(57xDBA hybrids)的腹膜間，佐劑為T(mén)itremax，21天后用相同方法進(jìn)行第二次免疫；3、4天后用酶聯(lián)免疫印跡法(Dot Blot)和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定抗體效價(jià)，取抗體效價(jià)最高的小鼠脾臟，用InvitrogenFast公司生產(chǎn)的TrackTM2.0試劑盒從中提取mRNA；
4、將此mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再用對(duì)應(yīng)于重鏈和輕鏈抗體可變部位DNA的引物，通過(guò)PCR技術(shù)將抗體的重鏈和輕鏈的可變片段的DNA擴(kuò)增；5、用一編碼可彎曲小肽的DNA小片段將重鏈和輕鏈DNA片段連接起來(lái)組成單鏈抗體(scFv)DNA，再用對(duì)應(yīng)于整段單鏈抗體DNA的引物，用PCR技術(shù)將單鏈抗體DNA片段擴(kuò)增；6、將單鏈抗體DNA片段兩端的限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)(SfiI和NotI)酶切，再與具同樣酶切位點(diǎn)的噬菌體表達(dá)載體Pcantab 5E(Pharmacia公司產(chǎn)品)連接，電轉(zhuǎn)移至E.coli NM522中；如此所獲噬菌體抗體cDNA文庫(kù)的效價(jià)為2.1×107；7、用吸附在朔料管壁上的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒對(duì)上述噬菌體抗體文庫(kù)進(jìn)行三輪淘選，用ELISA篩選到一批具抗原結(jié)合專(zhuān)一性的陽(yáng)性克??；該陽(yáng)性克隆即為可與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒特異性結(jié)合的單鏈抗體；8、將未感染白斑綜合癥的對(duì)蝦放入10％次氯酸鈉溶液中消毒8-10分鐘，在無(wú)菌條件下摘取對(duì)蝦淋巴，用含有100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的L15細(xì)胞培養(yǎng)液L15+PS潤(rùn)洗，放入有L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液的無(wú)菌管中，勻漿，用篩絹過(guò)濾，使淋巴組織在培養(yǎng)液中分散成細(xì)胞懸液；9、將細(xì)胞懸液均勻后，以40微升/孔加入細(xì)胞培養(yǎng)板，在室溫(20-25℃)下靜置1小時(shí)，加入L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液至200微升/孔，于27度培養(yǎng)過(guò)夜；10、倒掉L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS(磷酸緩沖液)洗一次，再以400微升/孔的量向細(xì)胞培養(yǎng)板各孔中加入含有3％BSA(牛血清白蛋白)的L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液，于27度保溫1小時(shí)，倒掉含有3％BSA的L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS洗一次后，為封閉的有對(duì)蝦淋巴貼壁細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)板；11、取一批可與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒特異性結(jié)合的單鏈抗體中的一個(gè)，用0.1微克、0.2微克、0.3微克、0.4微克、0.5微克、0.6微克、0.7微克、0.8微克、0.9微克、1微克的量分別與1微克的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒混勻后，在室溫下預(yù)保溫1小時(shí)，再分別加入步驟3的細(xì)胞培養(yǎng)板的孔中，于室溫下靜置20分鐘；12、先用PBST(含有0.1％吐溫的磷酸緩沖液)洗2次，再用PBS洗2次，立即加入100微升/孔的4％多聚甲醛，于4度放置10分鐘；13、用PBS洗2次，將單鏈抗體A1按1∶40加入L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液，混勻后以100微升/孔加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，于室溫下靜置1小時(shí)。
14、先用PBST洗2次，再用PBS洗2次，加入100微升/孔偶聯(lián)辣根過(guò)氧化物酶的二抗(1∶10000稀釋的antibody of HRP/Anti-E Tagconjugate，AMERSHAM公司的產(chǎn)品)，于室溫下靜置1小時(shí)；15、先用PBST洗2次，再用PBS洗2次，加入100微升/孔TMB(四甲基聯(lián)苯氨)底物，10-30分鐘后，加25微升2摩爾的硫酸終止反應(yīng)；16、用酶標(biāo)儀檢測(cè)A450的光吸收值，吸收值越低說(shuō)明結(jié)合在細(xì)胞上的病毒顆粒越少；17、將篩選到一批可與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒特異性結(jié)合的單鏈抗體逐一按照步驟8至步驟17的方法進(jìn)行檢測(cè)，取酶標(biāo)儀檢測(cè)A450的光吸收值最低的一個(gè)，即為本發(fā)明的一種中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3。
SEQUENCE LISTING<110>中國(guó)科學(xué)院武漢水生生物研究所<120>一種中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3及制備方法<130>一種中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3及制備方法<160>2<170>PatentIn version 3.3<210>1<211>1143<212>DNA<213>對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3<400>1ggcccagccg gccatggccg aggtgaagct gcagcagtct ggggctgagc ttgtgaggcc 60aggggcctta gtcaagttgt cctgcaaagt ttctggcttc aacattaaag actactatat120gaactgggtg aagcagaggc ctgaacaggg cctggagtgg attggatgga ttgatcctga180gaatggtaat actatatatg acccgaagtt ccagggcaag gccagtataa cagcagacac240atcctccaac acagcctacc tgcagctcag cagcctgaca tctgaggaca ctgccgtcta300ttactgtgct agtggtggta atccctggta ctggggtcaa ggcaccactc tcaccgtgtc360gacaggtgga ggcggctctg gtggcggtgg cagtggcggc ggaggttctg acgtcgtgat420gacccagtct caaaaattca tgtccacatc agtgggagac agggtcagcg tcacctgcaa480ggccagtcag aatgtgggta ctaatgtagc ctggtatcag cagaaaccag ggcgatctcc540taaaacactg atttactcgg catcctaccg gtacagtgga gtccctgatc gcttcagagg600cagtggatct gggacagatt tcactctcac catcagcaat gtgcagtctg aagacttggc660agagtatttc tgtcagcaat attacagcta tccgtacacg ttcggagggg ggaccaagct720ggaaatcaag cgcgcggccg caggtgcgcc ggtgccgtat ccggatccgc tggaaccgcg780tgccgcatag actgttgaaa gttgtttagc aaaacctcat acagaaaatt catttactaa840cgtctggaaa gacgacaaaa ctttagatcg ttacgctaac tatgagggct gtctgtggaa900tgctacaggc gttgtggttt gtactggtga cgaaactcag tgttacggta catggggttc960ttattgggct tgctattctc gaaaaatgaa gggggggggg ctctcaaggg gggcgggttc 1020
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Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Arg Ser Pro165 170 175Lys Thr Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp180 185 190Arg Phe Arg Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser195 200 205Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Tyr210 215 220Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg225 230 235 240
權(quán)利要求
1.一種能中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3，其特征在于，該單鏈抗體的DNA序列為SEQ ID NO1所示的序列。
2.制備權(quán)利要求1所述的一種能中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3的方法，其特征在于，該方法按下列步驟順序進(jìn)行a、采用蔗糖密度梯度超速離心法，從感染對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的對(duì)蝦的血淋巴液中分離純化白斑綜合癥病毒；b、用蛋白量為100μg純化的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒懸液，其完整的病毒粒子含量在50％，注射到小鼠的腹膜間，佐劑為T(mén)itremax，21天后用相同方法進(jìn)行第二次免疫；c、4天后用酶聯(lián)免疫印跡法和酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定抗體效價(jià)，取抗體效價(jià)最高的小鼠脾臟，用TrackTM2.0試劑盒從中提取mRNA；d、將此mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再用對(duì)應(yīng)于重鏈和輕鏈抗體可變部位DNA的引物，通過(guò)PCR技術(shù)將抗體的重鏈和輕鏈的可變片段的DNA擴(kuò)增；e、用一編碼可彎曲小肽的DNA小片段將重鏈和輕鏈DNA片段連接起來(lái)組成單鏈抗體DNA，再用對(duì)應(yīng)于整段單鏈抗體DNA的引物，用PCR技術(shù)將單鏈抗體DNA片段擴(kuò)增；f、將單鏈抗體DNA片段兩端的限制性?xún)?nèi)切酶位點(diǎn)SfiI和NotI酶切，再與具同樣酶切位點(diǎn)的噬菌體表達(dá)載體Pcantab 5E連接，電轉(zhuǎn)移至E.coli NM522中；如此所獲噬菌體抗體cDNA文庫(kù)的效價(jià)為2.1×107；g、用吸附在朔料管壁上的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒對(duì)上述噬菌體抗體文庫(kù)進(jìn)行三輪淘選，用ELISA篩選到一批具抗原結(jié)合專(zhuān)一性的陽(yáng)性克??；該陽(yáng)性克隆即為可與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒特異性結(jié)合的單鏈抗體；h、將未感染白斑綜合癥的對(duì)蝦放入10％次氯酸鈉溶液中消毒8-10分鐘，在無(wú)菌條件下摘取對(duì)蝦淋巴，用含有100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的L15細(xì)胞培養(yǎng)液L15+PS潤(rùn)洗，放入有L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液的無(wú)菌管中，勻漿，用篩絹過(guò)濾，使淋巴組織在培養(yǎng)液中分散成細(xì)胞懸液；i、將細(xì)胞懸液均勻后，以40微升/孔加入細(xì)胞培養(yǎng)板，在室溫下靜置1小時(shí)，加入L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液至200微升/孔，于27度培養(yǎng)過(guò)夜；j、倒掉L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS洗一次，再以400微升/孔的量向細(xì)胞培養(yǎng)板各孔中加入含有3％BSA的L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液，于27度保溫1小時(shí)，倒掉含有3％BSA的L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS洗一次后，為封閉的有對(duì)蝦淋巴貼壁細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)板；k、取一批可與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒特異性結(jié)合的單鏈抗體中的一個(gè)，用0.1微克、0.2微克、0.3微克、0.4微克、0.5微克、0.6微克、0.7微克、0.8微克、0.9微克、1微克的量分別與1微克的對(duì)蝦白斑綜合癥病毒混勻后，在室溫下預(yù)保溫1小時(shí)，再分別加入步驟c的細(xì)胞培養(yǎng)板的孔中，于室溫下靜置20分鐘；l、先用PBST洗2次，再用PBS洗2次，立即加入100微升/孔的4％多聚甲醛，于4度放置10分鐘；m、用PBS洗2次，將單鏈抗體A1按1∶40加入L15+PS細(xì)胞培養(yǎng)液，混勻后以100微升/孔加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，于室溫下靜置1小時(shí)；n、先用PBST洗2次，再用PBS洗2次，加入100微升/孔1∶10000稀釋的偶聯(lián)辣根過(guò)氧化物酶的二抗，于室溫下靜置1小時(shí)；o、先用PBST洗2次，再用PBS洗2次，加入100微升/孔TMB底物，10-30分鐘后，加25微升2摩爾的硫酸終止反應(yīng)；p、用酶標(biāo)儀檢測(cè)A450的光吸收值；q、將篩選到一批可與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒特異性結(jié)合的單鏈抗體逐一按照步驟h至步驟q的方法進(jìn)行檢測(cè)，取酶標(biāo)儀檢測(cè)A450的光吸收值最低的一個(gè)，即為本發(fā)明的一種中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種能夠中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒的單鏈抗體P1D3，給出了單鏈抗體P1D3的DNA序列以及該單鏈抗體的制備方法。由于WSSV的宿主——對(duì)蝦細(xì)胞系的建立至今尚未成功，這對(duì)篩選中和WSSV的抗體帶來(lái)了困難。為此我們建立了一種基于對(duì)蝦淋巴原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)之上的篩選中和抗體的新方法。中和抗體是研究病毒與宿主細(xì)胞相互作用機(jī)理最有用的工具，也是探尋有效防治病毒性疾病方法的關(guān)鍵。因此該具有中和對(duì)蝦白斑綜合癥病毒能力的單鏈抗體有望發(fā)展成為有效防治對(duì)蝦白斑綜合癥的抗體類(lèi)藥物。并且，相對(duì)于多克隆抗體和單克隆抗體，單鏈抗體制備更為簡(jiǎn)單，可以批量生產(chǎn)，而且費(fèi)用更加低廉。
文檔編號(hào)C12N15/11GK1733804SQ20051001934
公開(kāi)日2006年2月15日 申請(qǐng)日期2005年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月25日
發(fā)明者戴和平, 袁麗, 張曉華, 肖囡, 戴玲芬, 趙若虹, M Hanmingsen) 韓明申(Seam 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所