專利名稱：粉虱座殼孢菌培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種昆蟲(chóng)病原真菌培養(yǎng)基，特別是粉虱座殼孢菌培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
粉虱座殼孢菌(Aschersonia aleyrodis Webber)屬于絲孢菌類，腔孢綱，球殼目，鮮殼孢科，座殼孢屬，廣泛分布于拉丁美洲、南亞和東南亞。粉虱座殼孢菌作為重要的病原真菌在害蟲(chóng)(主要是粉虱和介殼蟲(chóng))的生物防治中發(fā)揮著重要作用。利用蟲(chóng)生真菌粉虱座殼孢來(lái)防治白粉虱如甘薯白粉虱和溫室白粉虱這兩種世界性經(jīng)濟(jì)害蟲(chóng)，已取得了成功。前蘇聯(lián)高加索及黑海沿岸，從我國(guó)四川引進(jìn)粉虱座殼孢防治柑桔粉虱，防治效果達(dá)95％以上。福建省用掛枝法引進(jìn)粉虱座殼孢，10多年來(lái)推廣應(yīng)用面積達(dá)10萬(wàn)畝(次)，四川省應(yīng)用推廣面積達(dá)2萬(wàn)畝(次)，有效地控制了柑桔粉虱發(fā)生。華南、西南、浙江、臺(tái)灣等省推廣這一技術(shù)，也收到明顯效果。與掛枝法相似的是四川省蘆山縣苗溪茶場(chǎng)采用在茶園中放置帶有座殼孢蟲(chóng)尸的枝葉，成功地控制了1000多畝角蠟蚧、牡蠣蚧等介殼蟲(chóng)的為害。但是，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)關(guān)于粉虱座殼孢菌培養(yǎng)基研究的報(bào)道，真菌通用的培養(yǎng)基不能很好滿足該菌生長(zhǎng)發(fā)育的需求，這極大地限制了該菌的開(kāi)發(fā)利用。
技術(shù)內(nèi)容 本發(fā)明目的是綜合利用多種碳源、氮源、金屬離子和維生素配制成適合于粉虱座殼孢菌孢子萌發(fā)、菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢的培養(yǎng)基。
本發(fā)明的粉虱座殼孢菌培養(yǎng)基，包括粉虱座殼孢菌孢子萌發(fā)培養(yǎng)基、粉虱座殼孢菌菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基和粉虱座殼孢菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基。
本發(fā)明的粉虱座殼孢菌培養(yǎng)基，除水外各原料為干燥化合物，純度為分析純。
一種粉虱座殼孢菌孢子萌發(fā)培養(yǎng)基，由肌醇、胰蛋白胨、七水硫酸鋅、維生素B5、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、瓊脂和水組成，各種原料及其含量的關(guān)系如下原料 原料重量比百分率(％)肌醇 0.21～11.47胰蛋白胨 0.05～2.61七水硫酸鋅 0～0.08
維生素B50～0.08氯化鉀 0.04～0.05硫酸鎂 0.04～0.05磷酸二氫鉀 0.04～0.05磷酸氫二鈉 0.05～0.06瓊脂1.95～4.07水 81.48～97.62一種粉虱座殼孢菌菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基，由可溶性淀粉、胰蛋白胨、氯化鈣、葉酸、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉和水組成，各種原料及其含量的關(guān)系如下原料 原料重量比百分率(％)可溶性淀粉 0.20～11.00胰蛋白胨 0.05～2.75氯化鈣 0～0.04葉酸 0～0.09氯化鉀 0.04～0.05硫酸鎂 0.04～0.05磷酸二氫鉀 0.04～0.05磷酸氫二鈉 0.05～0.06水 85.91～99.58一種粉虱座殼孢菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，由可乳糖、胰蛋白胨、七水硫酸亞鐵、維生素B1、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉和水組成，各種原料及其含量的關(guān)系如下原料 原料重量比百分率(％)乳糖 0.28～14.59胰蛋白胨 0.05～2.52七水硫酸亞鐵 0～0.08維生素B1 0～0.08氯化鉀 0.04～0.05硫酸鎂 0.04～0.05磷酸二氫鉀 0.04～0.05磷酸氫二鈉 0.05～0.06瓊脂 1.95～3.93
水78.61～97.55生防制劑在商業(yè)化之前，培養(yǎng)基的選擇尤為重要，合適的培養(yǎng)基能充分發(fā)揮其致病力和毒力。同樣地，培養(yǎng)基能影響真菌殺蟲(chóng)劑的孢子萌發(fā)、菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢。本發(fā)明各物質(zhì)性能穩(wěn)定，分別以肌醇、可溶性淀粉和乳糖為碳源，以胰蛋白胨為氮源，提供了該菌生長(zhǎng)繁殖所需的碳元素和氮元素；加入的生長(zhǎng)因子—維生素則是調(diào)節(jié)微生物正常代謝所必需的；加入的無(wú)機(jī)鹽是微生物細(xì)胞內(nèi)分子的結(jié)構(gòu)成分，并具有生理調(diào)節(jié)物質(zhì)和酶激活劑的功能；還使用磷酸氫鹽調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的酸堿度，維持該菌生長(zhǎng)所需的最適pH值；滿足了該菌不同發(fā)育期的營(yíng)養(yǎng)需要。本發(fā)明的粉虱座殼孢菌培養(yǎng)基能顯著促進(jìn)粉虱座殼孢菌的生長(zhǎng)發(fā)育，其中，使用粉虱座殼孢菌孢子萌發(fā)培養(yǎng)基，孢子24小時(shí)的萌發(fā)率可達(dá)82％；使用粉虱座殼孢菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)7天菌絲干重可達(dá)0.355克/100毫升培養(yǎng)基；使用粉虱座殼孢菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，培養(yǎng)28天產(chǎn)孢量可達(dá)4.79×107個(gè)孢子/20毫升培養(yǎng)基。
具體實(shí)施例 為了更充分地公開(kāi)本發(fā)明的一種粉虱座殼孢菌培養(yǎng)基，下面結(jié)合實(shí)施例加以說(shuō)明。
實(shí)施例一一種粉虱座殼孢菌孢子萌發(fā)培養(yǎng)基，各種原料及其含量的關(guān)系如下原料原料重量比百分率(％)肌醇0.21胰蛋白胨0.38七水硫酸鋅 0.02維生素B50.01氯化鉀 0.05硫酸鎂 0.05磷酸二氫鉀 0.05磷酸氫二鈉 0.06瓊脂3.35蒸餾水 95.82實(shí)施例二一種粉虱座殼孢菌菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基，各種原料及其含量的關(guān)系如下原料 原料重量比百分率(％)可溶性淀粉 1.50
胰蛋白胨3.01氯化鈣 0.01葉酸0.01氯化鉀 0.05硫酸鎂 0.05磷酸二氫鉀 0.05磷酸氫二鈉 0.06蒸餾水 95.26實(shí)施例三一種粉虱座殼孢菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，各種原料及其含量的關(guān)系如下原料 原料重量比百分率(％)乳糖 1.10胰蛋白胨 0.37七水硫酸亞鐵 0.01維生素B1 0.01氯化鉀0.05硫酸鎂0.05磷酸二氫鉀0.05磷酸氫二鈉0.06瓊脂 3.32蒸餾水94.98按上述各種培養(yǎng)基配方混合溶解后高壓滅菌30分鐘即可使用。
具體培養(yǎng)方法如下孢子萌發(fā)將固體培養(yǎng)基倒入直徑7.5厘米的培養(yǎng)皿中(5毫升/皿)，冷卻后每皿接孢子液0.05毫升，涂布均勻，置于相對(duì)濕度、溫度分別為74％、25±1℃下培養(yǎng)。
菌絲生長(zhǎng)將0.1毫升孢子液接種于裝有100毫升液體培養(yǎng)基的250毫升錐形瓶中，置于恒溫?fù)u床(150轉(zhuǎn)/分鐘)上25±1℃培養(yǎng)7天。
產(chǎn)孢用0.2毫升孢子液接種到盛有15毫升固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中(9毫升)，在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(相對(duì)濕度74％、溫度25±1℃)28天。
權(quán)利要求
1.一種粉虱座殼孢菌孢子萌發(fā)培養(yǎng)基，其特征在于由肌醇、胰蛋白胨、七水硫酸鋅、維生素B5、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、瓊脂和水組成，各種原料及其含量的關(guān)系如下原料原料重量比百分率(％)肌醇0.21～11.47胰蛋白胨0.05～2.61七水硫酸鋅 0～0.08維生素B50～0.08氯化鉀 0.04～0.05硫酸鎂 0.04～0.05磷酸二氫鉀 0.04～0.05磷酸氫二鈉 0.05～0.06瓊脂1.95～4.07水 81.48～97.62
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種粉虱座殼孢菌孢子萌發(fā)培養(yǎng)基，其特征在于各種原料及其含量的關(guān)系如下原料原料重量比百分率(％)肌醇0.21胰蛋白胨0.38七水硫酸鋅 0.02維生素B50.01氯化鉀 0.05硫酸鎂 0.05磷酸二氫鉀 0.05磷酸氫二鈉 0.06瓊脂3.35蒸餾水 95.82
3.一種粉虱座殼孢菌菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于由可溶性淀粉、胰蛋白胨、氯化鈣、葉酸、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉和水組成，各種原料及其含量的關(guān)系如下原料 原料重量比百分率(％)可溶性淀粉 0.20～11.00胰蛋白胨 0.05～2.75氯化鈣 0～0.04葉酸 0～0.09氯化鉀 0.04～0.05硫酸鎂 0.04～0.05磷酸二氫鉀 0.04～0.05磷酸氫二鈉 0.05～0.06水 85.91～99.58
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種粉虱座殼孢菌菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基，其特征在于各種原料及其含量的關(guān)系如下原料 原料重量比百分率(％)可溶性淀粉 1.50胰蛋白胨 3.01氯化鈣 0.01葉酸 0.01氯化鉀 0.05硫酸鎂 0.05磷酸二氫鉀 0.05磷酸氫二鈉 0.06蒸餾水 95.26
5.一種粉虱座殼孢菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，其特征在于由可乳糖、胰蛋白胨、七水硫酸亞鐵、維生素B1、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉和水組成，各種原料及其含量的關(guān)系如下原料 原料重量比百分率(％)乳糖 0.28～14.59胰蛋白胨 0.05～2.52七水硫酸亞鐵 0～0.08維生素B1 0～0.08氯化鉀 0.04～0.05硫酸鎂 0.04～0.05磷酸二氫鉀 0.04～0.05磷酸氫二鈉 0.05～0.06瓊脂 1.95～3.93水 78.61～97.55
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種粉虱座殼孢菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，其特征在于各種原料及其含量的關(guān)系如下原料 原料重量比百分率(％)乳糖 1.10胰蛋白胨 0.37七水硫酸亞鐵 0.01維生素B1 0.01氯化鉀 0.05硫酸鎂 0.05磷酸二氫鉀 0.05磷酸氫二鈉 0.06瓊脂 3.32蒸餾水 94.98
全文摘要
本發(fā)明的粉虱座殼孢菌培養(yǎng)基，包括粉虱座殼孢菌孢子萌發(fā)培養(yǎng)基、粉虱座殼孢菌菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基和粉虱座殼孢菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基。本發(fā)明的培養(yǎng)基加入了維生素和金屬離子，能滿足該菌不同發(fā)育期的營(yíng)養(yǎng)需要，顯著促進(jìn)粉虱座殼孢菌的生長(zhǎng)發(fā)育。使用粉虱座殼孢菌孢子萌發(fā)培養(yǎng)基，孢子24小時(shí)的萌發(fā)率可達(dá)82％；使用粉虱座殼孢菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)7天菌絲干重可達(dá)0.355克/100毫升培養(yǎng)基；使用粉虱座殼孢菌產(chǎn)孢培養(yǎng)基，培養(yǎng)28天產(chǎn)孢量可達(dá)4.79×10
文檔編號(hào)C12N1/14GK1970729SQ20051001990
公開(kāi)日2007年5月30日 申請(qǐng)日期2005年11月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月24日
發(fā)明者關(guān)雄, 朱炎平, 潘潔茹, 謝雪欽, 邱君志, 張鴻聲, 李世雨, 肖順, 張紹升 申請(qǐng)人:福建農(nóng)林大學(xué)