專利名稱：一種重組人復(fù)合α干擾素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種重組人復(fù)合α干擾素(consensus interferon，cIFN)制備方法，尤其涉及一種經(jīng)真核表達(dá)且能維持正確構(gòu)型和功能的cIFN制備方法。
背景技術(shù)：
1983年，Goedell等對(duì)當(dāng)時(shí)已知的13種人α干擾素的序列進(jìn)行比較研究，把出現(xiàn)頻率最高的氨基酸分配到各個(gè)相應(yīng)的位置上，得到一個(gè)新的由166個(gè)氨基酸組成的cIFN(US4,414,150)。臨床應(yīng)用表明，cIFN在治療慢性乙型肝炎、丙型肝炎方面有著良好的表現(xiàn)。
迄今為止，制備cIFN的方法主要分為兩類。其一是原核表達(dá)法制備cIFN即在大腸桿菌(E.coli)中進(jìn)行表達(dá)生產(chǎn)cIFN(US 4,695,623，US 4,897,471，US 5,541,293，US 5,661,009及ZL 98114663.5)。然而原核表達(dá)法制備cIFN存在著蛋白質(zhì)翻譯后修飾困難，生產(chǎn)純化工藝復(fù)雜和需要除熱源等問(wèn)題，且E.coli生產(chǎn)的cIFN是N-末端有帶甲硫氨酸、不帶甲硫氨酸和甲硫氨酸乙?；N混合物，給生物活性和臨床應(yīng)用都帶來(lái)不利的影響；其二是真核表達(dá)法制備cIFN即在酵母中進(jìn)行表達(dá)生產(chǎn)cIFN(CN 1435486A)。真核表達(dá)法制備cIFN雖克服了原核表達(dá)法的一些缺陷，但其存在著目標(biāo)蛋白(cIFN)易發(fā)生聚合和降解，致使很難分離純化得到有正確構(gòu)型和高活性的目標(biāo)蛋白cIFN單體。因此，如何克服真核表達(dá)法制備cIFN中目標(biāo)蛋白(cIFN)易發(fā)生聚合和降解的缺陷就成為本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)有利用酵母真核表達(dá)制備cIFN[發(fā)酵培養(yǎng)基為基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基]的方法，雖然能夠做到高密度高表達(dá)發(fā)酵，但是目的蛋白(cIFN)在基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基中非常不穩(wěn)定。一方面，分泌到培養(yǎng)基中的cIFN很容易形成聚合體，幾乎所有分泌到胞外的cIFN單體都聚合成了分子量大小不等的聚合體(如圖1所示)，cIFN首先聚集成可溶性聚合體，進(jìn)而形成分子量較大的聚合體，直至形成沉淀，隨細(xì)胞沉降流失，嚴(yán)重影響目的蛋白的回收和活性穩(wěn)定；另一方面，cIFN又很容易發(fā)生降解，降解由蛋白酶水解所致，cIFN在發(fā)酵液中降解形成分子量在1萬(wàn)以上相對(duì)固定的4-5個(gè)片斷和分子量低于1萬(wàn)的各種大小的蛋白小分子和多肽(如圖2A，圖2C)。由于cIFN分子內(nèi)有兩個(gè)二硫鍵，在非還原性環(huán)境中降解片斷仍由二硫鍵相連，表觀分子量與完整的cIFN單體一樣(圖2A和圖2B)，但cIFN分子的完整性和活性都受到極大破壞。
本發(fā)明的發(fā)明人認(rèn)為造成上述現(xiàn)象的原因是溶液中氣液界面的張力作用是促發(fā)蛋白質(zhì)聚合的主要因素之一。蛋白質(zhì)溶液受到攪動(dòng)時(shí)，會(huì)產(chǎn)生大量氣泡，形成氣液界面，處于界面上的蛋白質(zhì)受到表面作用發(fā)生解折疊，導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子內(nèi)部的疏水基團(tuán)暴露，增加蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)之間的相互作用機(jī)會(huì)，從而引起蛋白質(zhì)聚合。發(fā)酵過(guò)程中，為了增加溶氧和物料混合，攪拌是必不可少的參數(shù)之一，再加上發(fā)酵液本身的特性，產(chǎn)生泡沫(氣液界面)是不可避免的，因此而極易引起蛋白質(zhì)的聚合等不穩(wěn)定問(wèn)題。鑒于此，本發(fā)明人提出如下優(yōu)化發(fā)酵控制工藝。
本發(fā)明所說(shuō)的重組人復(fù)合α干擾素(cIFN)制備方法，其主要步驟是將酵母工程菌(Pichiapastoris GS115/pPIC9K-cIFN)經(jīng)種子培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及目標(biāo)蛋白純化后獲得cIFN，其特征在于，在外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)啟動(dòng)時(shí)加入Tween-20、Tween-80、SDS、TritonX-100、Triton X-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、辛匍糖苷(Octylglucoside)或/和Brij35，加入量為0.01-10g/L發(fā)酵液；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的溫度控制在20～30℃(優(yōu)選20～25℃，)；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)發(fā)酵液的pH值控制在3.0～7.0(優(yōu)選4.0～6.0，最佳為4.5～5.5)且發(fā)酵液中的甲醇含量控制在10.0g/L發(fā)酵液以下(優(yōu)選6.0g/L發(fā)酵液以下，最佳為3.0g/L發(fā)酵液以下)。
在本發(fā)明中發(fā)酵培養(yǎng)酵母工程菌(Pichia pastoris GS115/pPIC9K-cIFN)的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基(發(fā)酵罐用)均為已知培養(yǎng)基，如YPD平板、BMGY液體培養(yǎng)基、基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基(參見(jiàn)“High Cell-Density Fermentation in Pichia Protocols”，edited by David R.Higgins and James M.Cregg，Vol.103，107-120，1998)和FM22培養(yǎng)基；酵母工程菌(Pichia pastorisGS115/pPIC9K-cIFN)的種子培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的方法，均為Pichiafermentation process guidelines(Invitrogen Corporation，2002)上提到的方法或在此基礎(chǔ)上修改的方法；目標(biāo)蛋白(cIFN)分離純化步驟參見(jiàn)(CN 1435486A)；所說(shuō)的Tween-20、Tween-80、SDS、Triton X-100、Triton X-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、辛匍糖苷(Octylglucoside)和Brij35均為市售品。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1.抑制了目標(biāo)蛋白(cIFN)在發(fā)酵液中聚合和降解，穩(wěn)定了cIFN的構(gòu)型和生物活性，克服了利用基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基進(jìn)行高密度高表達(dá)過(guò)程中難以得到有活性的和正確構(gòu)型的目標(biāo)蛋白(cIFN)單體的難題；2.延長(zhǎng)了表達(dá)正確構(gòu)型和有活性功能的cIFN單體的有效時(shí)間，從而提高了cIFN單批次總表達(dá)量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，穩(wěn)定表達(dá)cIFN單體的誘導(dǎo)周期延長(zhǎng)至少1倍多，即誘導(dǎo)100小時(shí)仍不見(jiàn)有明顯的聚合體形成(圖3A)或降解的加重(圖3B)，甚至從圖3看到誘導(dǎo)100小時(shí)后目的蛋白量仍然呈增加趨勢(shì)，而對(duì)照例(圖4)在21小時(shí)降解就非常明顯，并逐漸加重，50小時(shí)后幾乎徹底降解。


圖1為復(fù)合培養(yǎng)基和基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基的發(fā)酵上清液的天然電泳圖，其中(A)中泳道1為復(fù)合培養(yǎng)基培養(yǎng)上清液，2為cIFN純品，3、4為基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基培養(yǎng)上清液，箭頭指示樣品中的目標(biāo)蛋白(cIFN)條帶；(B)圖為與(A)圖中泳道3、4對(duì)應(yīng)的Western Blotting。
圖2基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基的發(fā)酵上清液的SDS-PAGE電泳圖及Western Blotting圖，其中A為基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基的發(fā)酵上清液經(jīng)還原性SDS-PAGE電泳圖，泳道1為低分子量Marker，泳道2為cIFN純品，泳道3和4為基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基的發(fā)酵上清液，箭頭指示目標(biāo)蛋白(cIFN)降解片斷；B為與A同樣的樣品經(jīng)非還原性SDS-PAGE電泳圖，泳道1、2為與A圖中泳道3、4對(duì)應(yīng)的發(fā)酵上清液，3為cIFN純品；C)泳道1、2為發(fā)酵上清液的還原性SDS-PAGE電泳圖，泳道3、4為相應(yīng)于泳道1、2樣品的Western Blotting圖。
圖3發(fā)酵液中加入Tween-20后的電泳圖，兩圖各泳道上標(biāo)注的數(shù)字表示誘導(dǎo)時(shí)間。
其中(A)天然電泳圖，示聚合體被抑制，單體出現(xiàn)；(B)還原性電泳圖，示cIFN降解產(chǎn)物明顯減少。
圖4作為對(duì)照，不加Tween-20，示cIFN被嚴(yán)重降解的現(xiàn)象，方框內(nèi)條帶為目的蛋白降解產(chǎn)物。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所說(shuō)的重組人復(fù)合α干擾素(cIFN)制備方法，其包括如下步驟(1)種子培養(yǎng)將酵母工程菌(Pichia pastoris GS115/pPIC9K-cIFN)，生長(zhǎng)在YPD平板上，挑取單克隆菌株接種于BMGY液體培養(yǎng)基中，180-250rpm，20-30℃，振蕩培養(yǎng)16-24小時(shí)，使菌體OD600達(dá)到5-20％(優(yōu)選10-15％)；(2)發(fā)酵培養(yǎng)將上述50ml種子培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接于5.0L發(fā)酵液中含有1.5-2.5L基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基(參見(jiàn)Stratton，J.Chiruvolu V.and Meagher，M.“High Cell-Density Fermentation in Pichia Protocols”，edited by David R.Higgins and James M.Cregg，Vol.103，107-120，1998)或FM22培養(yǎng)基中發(fā)酵(發(fā)酵分三個(gè)階段)，第一階段甘油生長(zhǎng)期，pH控制在4-6(由28％氨水控制)，發(fā)酵溫度為25-30℃，攪拌轉(zhuǎn)速200-900rpm，空氣流量0.5-2.0L/L·min，溶解氧(DO)大于30％，當(dāng)培養(yǎng)基內(nèi)的甘油被消耗完以后(溶解氧突然反彈回升至100％左右)，開(kāi)始流加甘油，進(jìn)入第二階段甘油補(bǔ)料/分批培養(yǎng)期，補(bǔ)料甘油濃度為50％(W/V)，同時(shí)每升甘油加入0-12ml PTM1(FM22培養(yǎng)基為PTM4)，甘油補(bǔ)加速率依據(jù)溶解氧的比值，一般以控制溶解氧為30-50％飽和度。補(bǔ)料時(shí)間為2-20小時(shí)，甘油補(bǔ)料結(jié)束后進(jìn)入第三階段甲醇誘導(dǎo)期，開(kāi)始補(bǔ)入甲醇(100％)，每升甲醇加入0-12ml PTM1(FM22培養(yǎng)基為PTM4)，甲醇的流加以甲醇電極在線監(jiān)控，維持罐內(nèi)培養(yǎng)基中的甲醇濃度為不高于10g/L發(fā)酵液，在甲醇誘導(dǎo)啟動(dòng)時(shí)加入Tween-20、Tween-80、SDS、Triton X-100、Triton X-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、辛匍糖苷(Octylglucoside)或/和Brij35，加入量為0.001～1.0％0.01～10g/L發(fā)酵液；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的溫度控制在20～30℃(優(yōu)選20～25℃，最佳為22℃？？最佳需要指出來(lái)嗎？)；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)發(fā)酵液的pH值控制在3.0～7.0(優(yōu)選4.0～6.0，最佳為4.5～5.5)且發(fā)酵液中的甲醇含量控制在低于10.0g/L發(fā)酵液(優(yōu)選6.0g/L發(fā)酵液以下，最佳為3.0g/L發(fā)酵液以下)，甲醇誘導(dǎo)時(shí)間48-150小時(shí)。采用CN 1435486A所報(bào)道的分離純化方法獲得目標(biāo)蛋白(cIFN)，cIFN的含量達(dá)2g/L發(fā)酵液以上。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，應(yīng)理解，其目的僅在于更好理解本發(fā)明內(nèi)容而非限制本發(fā)明的保護(hù)范圍檢測(cè)方法發(fā)酵上清液中總蛋白的含量檢測(cè)方法采用考馬斯亮蘭染色法；發(fā)酵上清液中目的蛋白定性和定量檢測(cè)方法采用SDS-PAGE電泳、Western Blotting法，并用蛋白電泳軟件計(jì)算；發(fā)酵上清液中目的蛋白活性檢測(cè)方法采用WISH-VSV法；發(fā)酵上清液中目的蛋白聚合體形成檢測(cè)方法采用Native PAGE電泳法、Western Blotting法。
實(shí)施例1重組cIFN的制備(1)種子培養(yǎng)將1mL冷凍保藏的含有cIFN的酵母工程菌(Pichia pastoris GS115/pPIC9K-cIFN)，直接接入50mL/BMGY液體培養(yǎng)基中，或先涂布在YPD平板上，再挑取單克隆菌落一環(huán)接種于50mL/BMGY液體培養(yǎng)基中。220rpm，30℃，振蕩培養(yǎng)18小時(shí)，使菌體OD600達(dá)到10-15％，無(wú)菌接入5L發(fā)酵罐中。
(2)發(fā)酵培養(yǎng)將50ml種子培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接于5L發(fā)酵罐裝有2.0L基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基中，本發(fā)明所用的基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基是參照Pichia Protocols，發(fā)酵培養(yǎng)基用基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基(BSM)，無(wú)機(jī)鹽加量為1×BSM，也可以在0.1-2倍原配方之間變動(dòng)，PTM1加量為基礎(chǔ)料中加入4mL/L，補(bǔ)料甘油和甲醇中加入12mL/L，也可以在0-12mL/L之間變動(dòng)。發(fā)酵控制分三個(gè)階段第一階段為甘油生長(zhǎng)期，pH控制在5.4，由28％氨水控制，發(fā)酵溫度為30℃，攪拌轉(zhuǎn)速200-900rpm，空氣流量0.5-2.0L/L·min(vvm)，維持溶解氧(DO)大于30％，當(dāng)基礎(chǔ)鹽(合成)培養(yǎng)基內(nèi)的甘油被消耗完以后，溶解氧突然反彈回升至100％左右，開(kāi)始流加甘油，進(jìn)入第二階段——甘油補(bǔ)料-分批培養(yǎng)期，補(bǔ)料甘油濃度為50％(W/V)，同時(shí)每升甘油加入12mlPTM1甘油補(bǔ)加速率依據(jù)溶解氧的水平，一般以控制溶解氧為30-50％飽和度。補(bǔ)料時(shí)間為6小時(shí)。甘油補(bǔ)料結(jié)束后，進(jìn)入第三階段——甲醇誘導(dǎo)期，開(kāi)始補(bǔ)入甲醇(100％)，每升甲醇加入12ml PTM1，調(diào)節(jié)甲醇的流加以維持維持罐內(nèi)培養(yǎng)基中的甲醇濃度為不高于0.8％，并以甲醇電極在線監(jiān)控，甲醇誘導(dǎo)時(shí)間70小時(shí)。誘導(dǎo)后期畢赤酵母的生物量最高可達(dá)170g/L(細(xì)胞干重)，發(fā)酵上清液中目的蛋白(cIFN)含量達(dá)2g/L以上。發(fā)酵液經(jīng)多種色譜柱分離，未得到cIFN單體，收集到的蛋白質(zhì)主要分布在分子量大于80KD的大分子區(qū)域。經(jīng)天然電泳分析(圖1)證實(shí)發(fā)酵上清液中幾乎不存在cIFN單體分子，而還原性和非還原SDS-PAGE電泳(圖2)分析發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中也存在明顯的cIFN降解現(xiàn)象。測(cè)定發(fā)酵上清液的抗病毒生物活性，結(jié)果最高活性只有5.39×107IU/mL發(fā)酵液(表1)。
實(shí)施例2優(yōu)化發(fā)酵控制策略對(duì)目的蛋白cIFN的穩(wěn)定作用按照實(shí)施例1中的方法進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，從甲醇誘導(dǎo)期開(kāi)始加入蛋白穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑可以是下列幾種物質(zhì)中的一種或幾種混合物，加入方式為一次加入或多次加入，也可以采用連續(xù)流加的方式，加入量為每升發(fā)酵液中加入0.1～5.0g下列添加物之一。
穩(wěn)定劑Tween-20、Tween-80、SDS、Triton X-100、Triton X-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、辛匍糖苷(Octylglucoside)和/或Brij35等。
本例以Tween-20為穩(wěn)定劑說(shuō)明發(fā)酵過(guò)程中加入蛋白穩(wěn)定劑對(duì)目的蛋白cIFN的穩(wěn)定作用。加入方式采用一次性加入，加入量為每升發(fā)酵液中加入0.01～0.5g Tween-20。
按照實(shí)施例1中的方法進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，從甲醇誘導(dǎo)期開(kāi)始培養(yǎng)溫度下調(diào)至20-25℃。誘導(dǎo)期pH控制在4.0～6.0，最佳pH為4.5～5.5。
同實(shí)施例1，甲醇誘導(dǎo)時(shí)間為70小時(shí)。誘導(dǎo)后期畢赤酵母的生物量最高可達(dá)165g/L(細(xì)胞干重)，發(fā)酵上清液中目的蛋白(cIFN)含量達(dá)1.2g/L以上。發(fā)酵液經(jīng)與實(shí)施例相同的色譜分離步驟，得到160mgcIFN單體/發(fā)酵液。經(jīng)天然電泳分析(圖3A)證實(shí)發(fā)酵上清液中cIFN分子主要以單體形式存在，而還原性SDS-PAGE電泳(圖3B)分析發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中的cIFN降解產(chǎn)物明顯減少。測(cè)定發(fā)酵上清液的抗病毒生物活性，結(jié)果最高活性達(dá)到9.46×108IU/mL發(fā)酵液(表1)，每升發(fā)酵液中的活性是實(shí)施例1的17倍多，以兩種情況下發(fā)酵液中的cIFN比活相比，提高29.2倍。
表1 不同發(fā)酵培養(yǎng)方式cIFN的最高生物活性比較

綜上所述，本發(fā)明不僅實(shí)現(xiàn)了重組人復(fù)合α干擾素(cIFN)的高密度高發(fā)酵表達(dá)，而且使目標(biāo)蛋白(cIFN)在發(fā)酵液中維持了正確的單體分子狀態(tài)和生物活性，分離純化得到了高穩(wěn)定性、高純度的cIFN。
此外，本發(fā)明雖以重組酵母(Pichia pastoris GS115/pPIC9K-cIFN)為例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明內(nèi)容，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于此，即將本發(fā)明的優(yōu)化策略用于其它c(diǎn)IFN的表達(dá)系統(tǒng)均應(yīng)視為在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種重組人復(fù)合α干擾素(cIFN)制備方法，其主要步驟是將酵母工程菌(Pichiapastoris GS115/pPIC9K-cIFN)經(jīng)種子培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及目標(biāo)蛋白純化后獲得cIFN，其特征在于，在外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)啟動(dòng)時(shí)加入Tween-20、Tween-80、SDS、TritonX-100、Triton X-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、辛匍糖苷(Octylglucoside)或/和Brij35，加入量為0.01～10g/L發(fā)酵液；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的溫度控制在20～30℃；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)發(fā)酵液的pH值控制在3.0～7.0且發(fā)酵液中的甲醇含量控制在10g/L發(fā)酵液以下。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的溫度控制在20～25℃。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)發(fā)酵液的pH值控制在4.0～6.0。
4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)發(fā)酵液的pH值控制在4.5～5.5。
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)發(fā)酵液中的甲醇含量控制在6.0g/L發(fā)酵液以下。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，其中外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)發(fā)酵液中的甲醇含量控制在3.0g/L發(fā)酵液以下。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種經(jīng)真核表達(dá)制備重組人復(fù)合α干擾素(cIFN)制備方法，其主要步驟是將酵母工程菌(Pichia pastoris GS115/pPIC9K－CIFN)經(jīng)種子培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)、外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)及目標(biāo)蛋白純化后獲得cIFN，其特征在于，在外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)啟動(dòng)時(shí)加入Tween－20、Tween－80、SDS、Triton X－100、Triton X－114、NP－40、CHAPS、Zwittergent3－14、LiDS、膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、辛匍糖苷或/和Brij35，加入量為0.01～10g/L發(fā)酵液；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)的溫度控制在20～30℃；外源蛋白誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)發(fā)酵液的pH值控制在3.0～7.0且發(fā)酵液中的甲醇含量控制在1.0～10.0g/L發(fā)酵液。本發(fā)明不僅實(shí)現(xiàn)了cIFN的高密度高發(fā)酵表達(dá)，而且使cIFN在發(fā)酵液中維持了正確的單體分子狀態(tài)和生物活性，大大抑制了cIFN聚合體和降解產(chǎn)物的形成。
文檔編號(hào)C12N15/19GK1733929SQ20051002828
公開(kāi)日2006年2月15日 申請(qǐng)日期2005年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月29日
發(fā)明者儲(chǔ)炬, 郝玉有, 張嗣良, 莊英萍, 史琪琪, 王永紅, 杭海峰, 劉志敏, 楊士珍, 吳康華 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)