專利名稱：一種淡紫色鏈霉菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新的淡紫色鏈霉菌SPRI-94166及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
由于我國(guó)境內(nèi)的地理環(huán)境、氣候條件千差萬(wàn)別，微生物資源相當(dāng)?shù)刎S富。人們通過(guò)在各種不同緯度、海拔以及氣候的地域?qū)ふ倚碌奈⑸锞N。一般地，通過(guò)菌株的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征以及生理生化特征等對(duì)微生物菌種進(jìn)行分類鑒別，同時(shí)還常常采用檢測(cè)微生物菌種的16srDNA的序列來(lái)明確該菌種的分類地位。
通過(guò)對(duì)在全國(guó)各地采集得來(lái)的微生物菌種進(jìn)行培養(yǎng)，在得到的代謝產(chǎn)物中尋找各種活性成分，并進(jìn)而研究開發(fā)成各種藥物(包括醫(yī)藥、農(nóng)藥、獸藥等)。這種技術(shù)正在被廣泛應(yīng)用，如用作醫(yī)用抗生素的青霉素、鏈霉素等，在農(nóng)用、獸用方面有防治水稻紋枯病的井岡霉素、防治多種螨蟲和夜蛾的阿維菌素等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就在于提供一種淡紫色鏈霉菌SPRI-94166。
本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供所述淡紫色鏈霉菌SPRI-94166的應(yīng)用。
本發(fā)明的一種淡紫色鏈霉菌SPRI-94166屬淡紫灰鏈霉菌(Streptomyces Lavendulae)，并已于2005年5月16日在中國(guó)普通微生物保藏中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC No.1368。
本發(fā)明的淡紫色鏈霉菌SPRI-94166，為發(fā)明人1994年6月從我國(guó)廣西采集的土壤中分離而得。該菌株的形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特征及16SrDNA的序列和菌種分類結(jié)果如下1、形態(tài)特征以插片法在高氏合成一號(hào)瓊脂，葡萄糖天門冬素瓊脂上培養(yǎng)10～15天后用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡分別觀察菌絲和孢子的形態(tài)，結(jié)果表明，該菌基內(nèi)菌絲體無(wú)橫隔、不斷裂、無(wú)分生孢子，氣生菌絲體分支長(zhǎng)，生長(zhǎng)豐茂，孢子絲較長(zhǎng)，頂端有2-5環(huán)圈螺旋，孢子橢圓形，表面光滑。
2、生理生化特征及碳源利用見(jiàn)表1
表1、SPRI-94166菌株的生理生化特征及碳源利用

3、細(xì)胞壁組成94166菌株含有LL-DAP(LL-DIAMINOPIMELIC ACID二氨基庚二酸)、甘氨酸、無(wú)特征性糖，細(xì)胞壁化學(xué)組份屬于I型。
4、本發(fā)明所述的94166菌株的16srDNA序列如SEQ ID NO1所示。
根據(jù)形態(tài)、生理生化特征以及16srDNA序列分析，該菌株屬于鏈霉菌屬(Streptomyces)的淡紫灰類群(Lavendulae)，故定為淡紫灰鏈霉菌(Streptomyces Lavendulae)。
本發(fā)明所述的淡紫灰鏈霉菌，其培養(yǎng)方法既可為深層液體培養(yǎng)，也可為圓體培養(yǎng)。為了有利于工業(yè)性的培養(yǎng)，宜將上述生產(chǎn)菌的孢子懸浮液接種到培養(yǎng)基上，并進(jìn)行通氣攪拌。
對(duì)培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)源并無(wú)特殊的規(guī)定，可使培養(yǎng)基中含有常用于微生物培養(yǎng)的碳源、氮源及其他營(yíng)養(yǎng)源。其中碳源可為淀粉、糊精、葡萄糖、甘油、蔗糖、甘露醇等，氮源可為肉胨、黃豆餅粉、花生粉、酵母、肉膏、米糠、玉米漿、麥皮、銨鹽、尿素、硝酸鹽以及其他有機(jī)或無(wú)機(jī)含氮化合物。其他營(yíng)養(yǎng)源可適當(dāng)添加一些無(wú)機(jī)鹽類，例如食鹽、磷酸鹽及鉀、鈣、錳、鐵等金屬鹽。必要時(shí)可添加一些動(dòng)、植、礦物油等作為消泡劑。
對(duì)溫度、PH、時(shí)間等培養(yǎng)條件并無(wú)嚴(yán)格的限制，以適于產(chǎn)生菌的生產(chǎn)為準(zhǔn)，并以選擇活性組份產(chǎn)量最高的條件為好。例如，培養(yǎng)基的PH范圍可為6-8，以接近中性為好；培養(yǎng)溫度在20-35℃，通氣量以通氣比1∶0.3到1比4之間(通氣比指每分鐘通過(guò)培養(yǎng)液的空氣體積與培養(yǎng)液體積之比)。這些培養(yǎng)基的組份、PH、培養(yǎng)溫度、通氣條件等均應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以獲得最好的效果。
本發(fā)明所述的淡紫灰鏈霉菌經(jīng)過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)，得到的培養(yǎng)物可用于防除多種農(nóng)田雜草，具體來(lái)說(shuō)，可防除鱧腸、反枝莧、藜、稗草、牛筋草、香附子、千金子、莎草等各種雜草。


圖1為淡紫色鏈霉菌SPRI-94166(Streptomyces Lavendulae)CGMCC No.1368的菌株生長(zhǎng)形態(tài)的掃描電鏡照片。
具體實(shí)施例方式
下面通過(guò)具體實(shí)施例，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
本發(fā)明的淡紫色鏈霉菌SPRI-94166已于2005年5月16日提交中國(guó)普通微生物保藏中心保藏，保藏號(hào)為CGMCC No.1368。
以下涉及到的原材料皆可通過(guò)市售得到，且以下涉及到的濃度均為重量濃度。
實(shí)施例1、淡紫色鏈霉菌SPRI-94166的培養(yǎng)將淡紫色鏈霉菌SPRI-94166 Streptomyces caviscabies CGMCC No.1369以插片法在高氏合成一號(hào)瓊脂，葡萄糖天門冬素瓊脂上，于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10～15天，取出用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡分別觀察菌絲和孢子的形態(tài)，電子顯微鏡掃描結(jié)果如圖1所示。
由圖1可見(jiàn)，本發(fā)明的淡紫色鏈霉菌SPRI-94166的菌基內(nèi)菌絲體無(wú)橫隔、不斷裂、無(wú)分生孢子，氣生菌絲體分支長(zhǎng)，生長(zhǎng)豐茂，孢子絲較長(zhǎng)，頂端有2-5環(huán)圈螺旋，孢子橢圓形，表面光滑。
實(shí)施例2、淡紫色鏈霉菌SPRI-94166的發(fā)酵以葡萄糖3％、淀粉5％、花生餅粉1％、黃豆餅粉2％、蛋白胨0.1％、酵母膏0.4％、氯化鈉0.2％、硫酸鎂0.5％、硝酸胺0.2％、磷酸氫二鉀0.05％的比例制成培養(yǎng)基，PH調(diào)節(jié)到7.2，消毒滅菌。將生長(zhǎng)于高氏斜面的淡紫灰鏈霉菌(Streptomyces Lavendulae)SPRI-94166 CGMCC No.1368菌種接種于該培養(yǎng)基中，在28℃下培養(yǎng)36-40小時(shí)；以此培養(yǎng)物為種子，以5-20％的比例接種于上述培養(yǎng)基組成的發(fā)酵培養(yǎng)液中，28℃通氣攪拌培養(yǎng)90-96小時(shí)。
實(shí)施例3、淡紫色鏈霉菌SPRI-94166的應(yīng)用在20ml水中加入1-2g瓊脂粉，加熱至60-100℃，使瓊脂粉充分溶解。趁熱加入實(shí)施例2培養(yǎng)得到的發(fā)酵液1ml，搖勻，待冷卻凝固后分別將鱧腸、反枝莧、藜、稗草、牛筋草、香附子、千金子、莎草等雜草的種子撒在凝固瓊脂的表面，同時(shí)按上述方法制備八組不加入發(fā)酵液的瓊脂，并分別撒入上述八種雜草種子作為空白對(duì)照。在28℃培養(yǎng)7天，觀察雜草種子發(fā)芽及生長(zhǎng)情況，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2、淡紫色鏈霉菌SPRI-94166的發(fā)酵液對(duì)植物病害試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)實(shí)施例3的結(jié)果表明，本發(fā)明所述的淡紫色鏈霉菌SPRI-94166(StreptomycesLavendulae)CGMCC No.1368經(jīng)過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)，其培養(yǎng)物中含有除草活性物質(zhì)，可用于防除多種農(nóng)田雜草，具體來(lái)說(shuō)，可防除鱧腸、反枝莧、藜、稗草、牛筋草、香附子、千金子、莎草等各種雜草?？梢赃M(jìn)一步開發(fā)為一種新型的農(nóng)用除草劑。
序列表<110>上海市農(nóng)藥研究所<120>一種淡紫色鏈霉菌及其應(yīng)用<130>051571C<160>1<170>PatentIn version 3.3<210>1<211>1481<212>DNA<213>Streptomyces lavendulae<220>
<221>16srDNA<222>(1)..(1481)<400>1gacgaacgct ggcggcgtgc ttaacacatg caagtcgaac gatgaaccgg cttcggtcgg 60ggattagtgg cgaacgggtg agtaacacgt gggcaatctg cccttcactc tgggacaagc120cctggaaacg gggtctaata ccggatatga cacggggtcg catgatctcc gtgtggaaag180ctccggcggt gaaggatgag cccgcggcct atcagcttgt tggtgaggta gtggctcacc240aaggcgacga cgggtagccg gcctgagagg gcgaccggcc acactgggac tgagacacgg300cccagactcc tacgggaggc agcagtgggg aatattgcac aatgggcgaa agcctgatgc360agcgacgccg cgtgagggat gacggccttc gggttgtaaa cctctttcag cagggaagaa420gcgagagtga cggtacctgc agaagaagcg ccggctaact acgtgccagc agccgcggta480atacgtaggg cgcgagcgtt gtccggaatt attgggcgta aagagctcgt aggcggcttg540tcacgtcgga tgtgaaagcc cggggcttaa ccccgggtct gcattcgata cgggcaggct600agagttcggt aggggagatc ggaattcctg gtgtagcggt gaaatgcgca gatatcagga660ggaacaccgg tggcgaaggc ggatctctgg gccgatactg acgctgagga gcgaaagcgt720
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1.一種淡紫色鏈霉菌SPRI-94166，其特征在于，該微生物分類歸屬為淡紫灰鏈霉菌屬(Streptomyces Lavendulae)，其保藏號(hào)為CGMCC No.1368。
2.如權(quán)利要求1所述的放線鏈霉菌SPRI-94166，其特征在，該菌株的種子培養(yǎng)條件為在28℃下培養(yǎng)36-40小時(shí)；培養(yǎng)基組成葡萄糖3％、淀粉5％、花生餅粉1％、黃豆餅粉2％、蛋白胨0.1％、酵母膏0.4％、氯化鈉0.2％、硫酸鎂0.5％、硝酸胺0.2％、磷酸氫二鉀0.05％，PH 7.2。
3.如權(quán)利要求1所述的放線鏈霉菌SPRI-94166，其特征在，該菌株的發(fā)酵培養(yǎng)條件為在28℃下通氣攪拌培養(yǎng)90-96小時(shí)；培養(yǎng)基組成葡萄糖3％、淀粉5％、花生餅粉1％、黃豆餅粉2％、蛋白胨0.1％、酵母膏0.4％、氯化鈉0.2％、硫酸鎂0.5％、硝酸胺0.2％、磷酸氫二鉀0.05％。
4.如權(quán)利要求1所述的淡紫色鏈霉菌SPRI-94166，其特征在于，該菌株具有SEQID NO1所示的16SrDNA序列。
5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的淡紫色鏈霉菌SPRI-94166的應(yīng)用，其特征在于，用于生產(chǎn)防除以下雜草的除草劑鱧腸、反枝莧、藜、稗草、牛筋草、香附子、干金子、莎草。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，所述淡紫色鏈霉菌SPRI-94166通過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)生產(chǎn)除草劑。
7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述淡紫色鏈霉菌SPRI-94166的發(fā)酵培養(yǎng)條件為在28℃下通氣攪拌培養(yǎng)90-96小時(shí)；培養(yǎng)基組成葡萄糖3％、淀粉5％、花生餅粉1％、黃豆餅粉2％、蛋白胨0.1％、酵母膏0.4％、氯化鈉0.2％、硫酸鎂0.5％、硝酸胺0.2％、磷酸氫二鉀0.05％。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種淡紫灰鏈霉菌SPRI－94166(Streptomyces Lavendulae)CGMCC No.1368，通過(guò)發(fā)酵培養(yǎng)該菌株得到的培養(yǎng)物可用于可防除鱧腸、反枝莧、藜、稗草、牛筋草、香附子、千金子、莎草等各種雜草。
文檔編號(hào)C12R1/465GK1928068SQ200510029519
公開日2007年3月14日 申請(qǐng)日期2005年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月8日
發(fā)明者陶黎明, 徐文平, 顧學(xué)斌, 曠文豐, 郭磊, 楊星, 陸迪生, 鄭佳玲, 王磊, 張育雷, 龐鴻昌 申請(qǐng)人:上海市農(nóng)藥研究所