專利名稱：窖泥己酸菌培養(yǎng)技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物菌的培養(yǎng)方法，特別是一種窖泥己酸菌的培養(yǎng)技術(shù)。
背景技術(shù)：
己酸菌是梭狀芽孢桿菌的一種，是濃香型大曲白酒發(fā)酵中起決定作用的一種窖泥功能菌，它的數(shù)量多少和功能的強弱直接影響濃香型大曲酒發(fā)酵的質(zhì)量?，F(xiàn)在許多濃香型白酒廠分離、純化己酸菌來培養(yǎng)己酸菌液，將其應(yīng)用于白酒生產(chǎn)中。主要有培養(yǎng)人工窖泥，保養(yǎng)發(fā)酵池，噴灑底醅等方法來增加香醅中己酸含量，以達(dá)到提高己酸乙酯的目的，這些傳統(tǒng)方法生產(chǎn)的己酸菌產(chǎn)酸能力普遍偏低。己酸菌的產(chǎn)酸能力直接影響酯化效果，所以提高酯的含量首要是提高己酸含量。因為己酸菌的產(chǎn)酸能力與培養(yǎng)基的成分有很大關(guān)系，所以選擇合適的培養(yǎng)基及合理的工藝方法可以提高己酸菌的產(chǎn)酸能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出以乙酸鈉培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加一定量的碳源、微量元素，在特定的工藝流程下，來提高己酸菌的產(chǎn)酸能力。
本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的該技術(shù)以乙酸鈉培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加碳源及微量元素，采取如下工藝配制而成將乙酸鈉培養(yǎng)基在0.1Mpa，30min條件下高壓滅菌，待溫度降到30-40℃時在無菌操作條件下添加0.6％木糖和0.1％的L-抗壞血酸，并將其搖勻，然后加入碳酸鈣和乙醇，在10％→33℃條件下每天分時間段搖勻培養(yǎng)基、培養(yǎng)7天進(jìn)行接種處理，最后測定己酸含量。
乙酸鈉培養(yǎng)基為乙酸鈉0.5％；酵母膏0.1％；磷酸氫二鉀0.04％；硫酸銨0.05％；硫酸鎂0.02％；滅菌后，接種前加碳酸鈣0.8％；滅菌后，接種前加乙醇2％。
本發(fā)明的優(yōu)點與效果是目前，國內(nèi)己酸含量最高保持在400～500mg/100ml。本工藝方法所制做的窖泥己酸菌產(chǎn)酸能力明顯優(yōu)于現(xiàn)有己酸含量，具有實用價值和很強的推廣性。


圖1為本發(fā)明己酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實施例方式
工藝流程乙酸鈉培養(yǎng)基→高壓滅菌(0.1Mpa，30min)→待溫度降到30-40℃時添加0.6％木糖，0.1％的L-抗壞血酸(無菌操作，搖勻)→加入碳酸鈣，乙醇→接種10％→33℃培養(yǎng)7天(每天分時間段搖勻培養(yǎng)基)→測定己酸含量(比色法)。
乙酸鈉培養(yǎng)基乙酸鈉0.5％；酵母膏0.1％；磷酸氫二鉀0.04％；硫酸銨0.05％；硫酸鎂0.02％；碳酸鈣0.8％(滅菌后，接種前加)；乙醇2％(滅菌后，接種前加)。
己酸的比色法測定由721分光光度計；帶塞的試管；漏斗；移液管；容量瓶；濾紙等測定工具。
試劑為(1)稀釋液0.5％NaAC；0.1％酵母提取物；0.05％(NH4)2SO4；0.04％K2HPO4；0.02％MgSO4；1％乙醇，待各成分溶解后過濾即得，溶液的pH值為6.8。
(2)1％標(biāo)準(zhǔn)己酸液精確吸取1ml己酸原液(含量98％-100％比重0.93)，稀釋液定容至100ml，其PH值為4.0左右，若要用pH值為6.8之己酸液?？稍诩又?5ml左右時，用20％NaOH調(diào)pH值。
(3)5％醋酸銅溶液(4)乙醚培養(yǎng)基乙酸鈉培養(yǎng)基己酸發(fā)酵液的制備將己酸菌經(jīng)活化后接入醋酸鈉培養(yǎng)基中，在30℃厭氧培養(yǎng)10天左右，過濾即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作按表加各試劑于試管中，塞緊塞子，劇烈振蕩，靜止片刻待分層后，用吸管將上層乙醚小心地(注意勿把下部的混濁液吸入)移入5ml比色杯中，在波長660nm處測OD值，以各試管中加入的1％己酸毫升數(shù)為橫座標(biāo)，光密度為縱座標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。(見下表)。

發(fā)酵液中己酸含量的測定方法為了使樣品測定時反應(yīng)液的pH與標(biāo)準(zhǔn)曲線制作時一致。先將樣品用20％NaOH調(diào)pH至6.8，然后按下表加各試劑于試管中，反應(yīng)后測乙醚層溶液的OD值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的己酸量，求出3個數(shù)的平均值，后乘以己酸的比重(0.93)即為每毫升樣品中的己酸毫克數(shù)。

此方法己酸含量最高可以達(dá)到700mg/100ml左右，基于實驗偶然性很大的特點，重復(fù)做此實驗可以穩(wěn)定含量在600mg/100ml。目前，國內(nèi)己酸含量最高保持在400～500mg/100ml。所以，此實驗具有很大的實用價值，具有很強的推廣性。
權(quán)利要求
1.窖泥己酸菌培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于該技術(shù)以乙酸鈉培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加碳源及微量元素，采取如下工藝配制而成將乙酸鈉培養(yǎng)基在0.1Mpa，30min條件下高壓滅菌，待溫度降到30-40℃時在無菌操作條件下添加0.6％木糖和0.1％的L-抗壞血酸，并將其搖勻，然后加入碳酸鈣和乙醇，在10％→33℃條件下每天分時間段搖勻培養(yǎng)基、培養(yǎng)7天進(jìn)行接種處理，最后測定己酸含量。
2.如權(quán)利要求1所述的窖泥己酸菌培養(yǎng)技術(shù)，其特征在于乙酸鈉培養(yǎng)基為乙酸鈉0.5％；酵母膏0.1％；磷酸氫二鉀0.04％；硫酸銨0.05％；硫酸鎂0.02％；滅菌后，接種前加碳酸鈣0.8％；滅菌后，接種前加乙醇2％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物菌的培養(yǎng)方法，特別是一種窖泥己酸菌的培養(yǎng)技術(shù)。該技術(shù)以乙酸鈉培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加碳源及微量元素，采取如下工藝配制而成將乙酸鈉培養(yǎng)基在0.1Mpa，30min條件下高壓滅菌，待溫度降到30－40℃時在無菌操作條件下添加0.6％木糖和0.1％的L－抗壞血酸，并將其搖勻，然后加入碳酸鈣和乙醇，在10％→33℃條件下每天分時間段搖勻培養(yǎng)基、培養(yǎng)7天進(jìn)行接種處理，最后測定己酸含量。該制作工藝簡單實用，己酸菌的產(chǎn)酸能力較高，優(yōu)于傳統(tǒng)工藝。
文檔編號C12R1/145GK1772878SQ20051004712
公開日2006年5月17日 申請日期2005年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月1日
發(fā)明者馬榮山, 鐘甦, 任靜 申請人:馬榮山