專利名稱：酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種巖藻聚糖硫酸酯的制備方法，尤其是一種提取率高的酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法。
背景技術(shù)：
巖藻聚糖硫酸酯(fucoidan)是一種存在于褐藻中的特殊硫酸多糖，國內(nèi)外研究表明其具有抗凝血、降血脂、抗腫瘤、抗病毒，增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能等多種生物學(xué)活性。由于海帶在我國養(yǎng)殖區(qū)域廣泛，產(chǎn)量巨大，占世界產(chǎn)量的89％左右，因此海帶已成為巖藻聚糖硫酸酯的主要生產(chǎn)原料之一，而目前的生產(chǎn)方法之有酸解和蒸煮兩種。酸解法破環(huán)性大，環(huán)境污染較嚴(yán)重且目的性差、提取率低；蒸煮法雖然克服了酸解法所具有的破環(huán)性大、污染嚴(yán)重等缺點，但是其提取率更低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的提取率低的缺點，提供一種無污染、破壞性小、提取率高的酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是一種酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于有如下步驟a.將纖維素酶和果膠酶，按重量比例為2～6∶1配制成復(fù)合纖維素酶；b.以褐藻為原料，向原料中加入原料重量10～20倍的水，并加入原料重量0.23～0.34％的復(fù)合纖維素酶，在pH為6.0～8.0的條件下酶解50～80分鐘，然后以90～100℃水浴加熱3～4小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入乙醇產(chǎn)生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入乙醇產(chǎn)生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所述的褐藻為海帶或裙帶菜。
所述的乙醇濃度為95％。
本發(fā)明是將纖維素酶和果膠酶按比例配制成復(fù)合纖維素酶，對褐藻進(jìn)行酶解并蒸煮以提取巖藻聚糖硫酸酯，克服了現(xiàn)有酸解法破壞性大、污染嚴(yán)重的缺點，對提取后所剩原料的綜合利用價值無任何影響；同時其目的性強(qiáng)，提取率高，其提取率在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上提高0.37～2.40％；所配制的復(fù)合纖維素酶價格低廉，降低了提取巖藻聚糖硫酸酯的成本，所提取的巖藻聚糖硫酸酯可制備具有抗凝血、降血脂、抗腫瘤、抗病毒，增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能的保健產(chǎn)品或作為藥品的先導(dǎo)物。本發(fā)明操作簡單、可操作性強(qiáng)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施例方式實施例1a.取0.46g纖維素酶和0.22g果膠酶，混合配制成0.68g復(fù)合纖維素酶；b.稱200g干海帶為原料，向干海帶中加入原料重量18倍(3600g)的水，并加入所配制的復(fù)合纖維素酶(占原料重量的0.34％)，在pH為8.0的條件下酶解50分鐘，然后以94℃水浴加熱4小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入乙醇使其產(chǎn)生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入乙醇直至產(chǎn)生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的1.2％。
實施例2a.取0.44g纖維素酶和0.08g果膠酶，混合配制成0.52復(fù)合纖維素酶；b.稱200g干海帶為原料，向干海帶中加入原料重量13倍(2600g)的水，并加入所配制的復(fù)合纖維素酶(占原料重量的0.26％)，在pH為6.0的條件下酶解80分鐘，然后以100℃水浴加熱3.5小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入95％乙醇使其產(chǎn)生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入95％乙醇直至產(chǎn)生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的1.2％。
實施例3a.取0.48g纖維素酶和0.16g果膠酶，混合配制成0.64g復(fù)合纖維素酶；b.稱200g干海帶為原料，向干海帶中加入原料重量20倍(4000g)的水，并加入所配制的復(fù)合纖維素酶(占原料重量的0.32％)，在pH為7.0的條件下酶解60分鐘，然后以96℃水浴加熱3.5小時，降至室溫，離心得上清液；
c.在上清液中加入95％乙醇使其產(chǎn)生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入95％乙醇直至產(chǎn)生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的1.3％。
實施例4a.取2g纖維素酶和1g果膠酶，混合配制成3g復(fù)合纖維素酶；b.稱1000g干裙帶菜為原料，向干裙帶菜中加入原料重量15倍(15000g)的水，并加入所配制的復(fù)合纖維素酶(占原料重量的0.3％)，在pH為6.0的條件下酶解70分鐘，然后以98℃水浴加熱3.5小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入95％乙醇使其產(chǎn)生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入95％乙醇直至產(chǎn)生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的6％。
實施例5a.取0.36g纖維素酶和0.1g果膠酶，混合配制成0.46g復(fù)合纖維素酶；b.稱200g干海帶為原料，向干海帶中加入原料重量10倍(2000g)的水，并加入所配制的復(fù)合纖維素酶(占原料重量的0.23％)，在pH為7.0的條件下酶解80分鐘，然后以100℃水浴加熱3小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入95％乙醇使其產(chǎn)生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入95％乙醇直至產(chǎn)生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
所提取的白色粉末中為巖藻聚糖硫酸酯，分子量10～25道爾頓，重量為原料重量的1.2％。
權(quán)利要求
1.一種酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，其特征是有如下步驟a.將纖維素酶和果膠酶，按重量比例為2～6∶1配制成復(fù)合纖維素酶；b.以褐藻為原料，向原料中加入原料重量10～20倍的水，并加入原料重量0.23～0.34％的復(fù)合纖維素酶，在pH為6.0～8.0的條件下酶解50～80分鐘，然后以90～100℃水浴加熱3～4小時，降至室溫，離心得上清液；c.在上清液中加入乙醇產(chǎn)生沉淀，離心得上清液；d.在c步驟所得上清液中加入乙醇產(chǎn)生沉淀，收集沉淀；e.乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述的褐藻為海帶或裙帶菜。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，其特征在于所述乙醇的濃度為95％。
全文摘要
本發(fā)明公開一種酶法水解褐藻制備巖藻聚糖硫酸酯的方法，是將纖維素酶和果膠酶，按重量比例為2～6∶1配制成復(fù)合纖維素酶；以褐藻為原料，向原料中加入原料重量10～20倍的水，并加入原料重量0.23～0.34％的復(fù)合纖維素酶，在pH為6.0～8.0的條件下酶解50～80分鐘，然后以90～100℃水浴加熱3～4小時，降至室溫，離心得上清液；在上清液中加入乙醇產(chǎn)生沉淀，離心得上清液；在c步驟所得上清液中加入乙醇產(chǎn)生沉淀，收集沉淀；乙醚清洗沉淀，真空冷凍干燥沉淀得白色粉末。克服了現(xiàn)有酸解法破壞性大、污染嚴(yán)重的缺點，對提取后所剩原料的綜合利用價值無任何影響；同時其目的性強(qiáng)，提取率高，其提取率在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上提高0.37～2.40％；所配制的復(fù)合纖維素酶價格低廉，降低了提取巖藻聚糖硫酸酯的成本。
文檔編號C12N9/42GK1763212SQ20051004758
公開日2006年4月26日 申請日期2005年10月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月28日
發(fā)明者汪秋寬, 何云海, 陳勇, 張澤宇, 康平, 謝智芬 申請人:大連水產(chǎn)學(xué)院