專利名稱：乙型肝炎基因工程靶向干擾素及其生產(chǎn)工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及制藥特別是生物制藥領域，具體為一種乙型肝炎基因工程靶向干擾素及其生產(chǎn)工藝。
背景技術：
乙型肝炎是嚴重危害人類健康的病毒性傳染病，我國是乙型肝炎高發(fā)區(qū)之一，人群中乙型肝炎表面抗原陽性率為10.3％，估計現(xiàn)有患病人數(shù)達2800萬人以上。在我國肝硬化患者中50～80％與乙肝病毒感染有關，乙肝病毒慢性感染已成為肝癌的重要病因。
干擾素一直是治療病毒性肝炎的主要藥物，具有廣泛的抗病毒活性及免疫調(diào)節(jié)活性。干擾素療法現(xiàn)仍然是HBV感染的標準療法之一。但其治療慢性乙肝的持久應答率僅在30％左右，并且在有效劑量下存在諸多毒副作用。目前抗病毒藥物所采用的給藥劑型，在病人體內(nèi)均不能區(qū)別正常和病毒感染細胞，即存在“敵我不分”的缺陷，藥物在機體內(nèi)均勻分布。為了達到抗病毒效果，藥物劑量常需要加大幾倍、十幾倍。這樣不僅浪費了大量藥物，更嚴重的是加重了藥物的不良反應，給病人帶來新的痛苦。
傳統(tǒng)藥物屬中藥類養(yǎng)肝、保肝制品。它的特點在于安全、副作用小，價格便宜，但這同時制約了此類藥物的治療功效。
在生物工程技術獨占鰲頭的當前醫(yī)藥行業(yè)中，基因工程干擾素可謂是目前國際上廣泛使用的治療慢性乙肝、丙肝、腫瘤和性病等頑癥的最新成果，它以其強大的可塑性和高療效等優(yōu)勢成為今后乙肝類制藥業(yè)的總發(fā)展趨勢。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為適應以基因工程干擾素治療乙型肝炎的發(fā)展趨勢，提供一種乙型肝炎基因工程靶向干擾素及其生產(chǎn)工藝。
本發(fā)明是采用如下技術方案實現(xiàn)的乙型肝炎基因工程靶向干擾素，采用構建人源抗HbsAg的dsFv基因，與a-干擾素(IFN-a)基因連接，運用基因工程技術表達乙肝靶向干擾素(dsFv-IFV融合蛋白)。這是目前世界上治療乙型肝炎的最新高科技藥品，靶向干擾素只攻擊感染病毒的細胞，不作用于正常細胞，因而極大地提高了療效，而副作用明顯降低。可見這種乙肝靶向干擾素今后必將成為攻克乙型肝炎的尖端武器。
本發(fā)明所述的靶向干擾素為人源抗HbsAg dsFv抗體和dsFv-IFN-a融合蛋白，屬抗HBV研究領域的首次應用；采用基因工程技術，直接表達dsFv-IFN-a融合蛋白，避免了以往制備靶向藥物通過體外化學交聯(lián)對于抗體活性的損壞。dsFV-IFN-a融合蛋白屬于人源，避免了鼠單抗的異源性帶來的危害，具有更好的應用價值。靶向干擾素對乙肝的治療效果遠遠超過常規(guī)干擾素，并且用量只有常規(guī)干擾素的三分之一，且毒副作用大大降低。因此，靶向干擾素必將替代常規(guī)干擾素，其市場價值是無法估量的。
親和層析純化后證明該融合蛋白具有干擾素活性和與乙肝病毒表面抗原的反應性。
具體實施例方式
乙型肝炎基因工程靶向干擾素，采用構建人源抗HbsAgdsFv抗體，并與a-干擾素基因連接，在大腸桿菌和CHO細胞中獲得dsFv-FIN-a的表達。
乙型肝炎基因工程靶向干擾素的生產(chǎn)工藝，將制成的培養(yǎng)基與菌株接種后送進培養(yǎng)箱培養(yǎng)，完成培養(yǎng)后的細菌在繁殖間大量繁殖，然后通過分離收集細菌，并裂解分離包涵體蛋白，在折疊液中復性，再經(jīng)純化、濃縮，最后分裝凍干。
權利要求
1.一種乙型肝炎基因工程靶向干擾素，其特征為采用構建人源抗HbsAg的dsFv基因，與a-干擾素(IFN-a)基因連接，運用基因工程技術表達乙肝靶向干擾素(dsFv-IFV融合蛋白)。
2.如權利要求1所述乙型肝炎基因工程靶向干擾素的生產(chǎn)工藝，其特征為將制成的培養(yǎng)基與菌株接種后送進培養(yǎng)箱培養(yǎng)，完成培養(yǎng)后的細菌在繁殖間大量繁殖，然后通過分離收集細菌，并裂解分離包涵體蛋白，在折疊液中復性，再經(jīng)純化、濃縮，最后分裝凍干。
全文摘要
本發(fā)明涉及制藥特別是生物制藥領域，具體為一種乙型肝炎基因工程靶向干擾素及其生產(chǎn)工藝。乙型肝炎基因工程靶向干擾素采用構建人源抗HBsAg的dsFv基因，與a－干擾素(IFN－a)基因連接，運用基因工程技術表達乙肝靶向干擾素(dsFv－IFV融合蛋白)。乙型肝炎基因工程靶向干擾素的生產(chǎn)工藝，將制成的培養(yǎng)基與菌株接種后送進培養(yǎng)箱培養(yǎng)，完成培養(yǎng)后的細菌在繁殖間大量繁殖，然后通過分離收集細菌，并裂解分離包涵體蛋白，在折疊液中復性，再經(jīng)純化、濃縮，最后分裝凍干。親和層析純化后證明該融合蛋白具有干擾素活性和與乙肝病毒表面抗原的反應性。
文檔編號C12N15/62GK1865446SQ200510069269
公開日2006年11月22日 申請日期2005年5月16日 優(yōu)先權日2005年5月16日
發(fā)明者趙耀東 申請人:趙耀東