專利名稱：生產(chǎn)輔酶q10的細菌菌種及生產(chǎn)輔酶q10的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生產(chǎn)輔酶Q10的新菌株。另外，本發(fā)明涉及包含所述微生物的發(fā)酵肉湯及用于輔酶Q10的技術生產(chǎn)的合適的培養(yǎng)系統(tǒng)。本發(fā)明還涉及通過培養(yǎng)本發(fā)明的菌株以有利地生產(chǎn)輔酶Q10的方法。本發(fā)明的另一方面還涉及所述微生物的16srRNA。
輔酶Q(也稱作CoQ、Q或泛醌)被發(fā)現(xiàn)普遍存在于微生物、植物、真菌和動物細胞的膜中。該分子在結構上是由共價附著于2，3-二甲氧基-5-甲基-苯醌的聚異戊二烯基側鏈組成。側鏈的長度在不同物種之間有所不同，其主要形式包括6-10個異戊二烯亞單位。所得泛醌同源物被分別稱為輔酶Q6-10。通過人工合成的主要形式是輔酶Q10。
輔酶Q10(也稱作CoQ10)對人類健康有一定益處，因此其在化妝品、藥物和保健品中有廣泛應用。CoQ10是一種脂溶性苯醌，具有兩種主要的生物學功能(i)在有氧呼吸期間在線粒體中通過電子傳遞而產(chǎn)生ATP/能量，和(ii)通過清除自由基而保護各種細胞成分，例如脂質、蛋白質和DNA。CoQ10目前被用于不同目的-作為膳食補劑(保健品)以改善某些器官/組織的CoQ10供給。這對老年人尤其重要，因為科學研究已經(jīng)表明CoQ10水平隨著年齡的增加而下降，最終導致許多與老年相關的疾病。
-CoQ10與已知可以降低細胞CoQ10水平的降低膽固醇的藥物(他汀類(statins))組合使用。另外，CoQ10被用于治療心肌病，且已經(jīng)推測CoQ10缺陷參與神經(jīng)變性疾病如Huntington′s疾病、帕金森氏病和肌萎縮性脊髓側索硬化。
-CoQ10在化妝品制劑中被用作活性組分，以使皮膚免于因細胞代謝或外因影響例如太陽輻射而產(chǎn)生自由基的損害。臨床研究表明CoQ10在皮膚上局部應用有效地降低了皺紋形成并導致皮膚細胞代謝的活化。
在工業(yè)上，輔酶Q10是半合成產(chǎn)生的，或者通過發(fā)酵微生物及隨后從生物量中提取產(chǎn)生的。輔酶Q10的完全化學合成途徑已經(jīng)建立。然而，這一途徑成本高昂并且與發(fā)酵或半合成生產(chǎn)相比都無競爭力，因此無法以商業(yè)規(guī)模應用。
CoQ10的商業(yè)生產(chǎn)由Kanegafuchi在1977年左右始于日本(DE2740614；DE 2747510)。這些專利描述了通過發(fā)酵不同的酵母菌株生產(chǎn)和回收CoQ10。然而，在那之前和自那之后已經(jīng)申請了描述使用不同的微生物(細菌、酵母、絲狀真菌)生產(chǎn)和提取CoQ10的大量專利。對專利和/或論文中提及的生產(chǎn)CoQ10的微生物所做的綜述在1981年由Kanegafuchi公布(Coenzyme Q10 by fermentation.Kanazawa，Morishige；Takahashi，Tamio.Pharm.Div.，KanegafuchiChem.Ind.Co.，Ltd.，Osaka，Japan.Biomedical and Clinical Aspects of輔酶Q(1981)，3，31-42)。
在過去的幾年里，越來越多的科技出版物和專利申請?zhí)接懥擞脤儆诘鞍拙?proteobacteria)的α-亞組的細菌經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)CoQ10。盡管CoQ10作為主要的泛醌在大多數(shù)微生物中相對罕見，但所述組中卻有極高比例生產(chǎn)CoQ10。另外，屬于該組的許多細菌，尤其是光養(yǎng)菌，建立了胞內膜結構，在此可貯存相對高量的CoQ10。然而，這些光養(yǎng)菌中許多都顯示出低生長速度并因此需要較長時間以積聚CoQ10，導致發(fā)酵過程的成本增加。
許多專利和出版物描述了通過關鍵的類異戊二烯生物合成基因的內源或異源過表達，或者通過失活與CoQ10競爭類異戊二烯前體的旁路的靶基因來生產(chǎn)CoQ10(例如WO02/026933、WO01/027286、WO04/047763、WO05/005650)。
目前關于發(fā)酵野生型細菌菌株或通過傳統(tǒng)誘變產(chǎn)生的突變株生產(chǎn)Q10的文獻有Yoshida、Hajime、Kotani、Yukinobu、Ochiai、Keiko、andAraki、Kazumi(1998)Production of ubiquinone-10 usingbacteria.J.Gen.Appl.Microbiol.44，19-26。在此對得自菌株保藏中心的屬于α-蛋白菌的各種菌株進行篩選并分析CoQ10生產(chǎn)情況。產(chǎn)生突變菌株以增加CoQ10產(chǎn)量。在補料分批發(fā)酵中，根癌農桿菌突變體達到180mg/l，Rhodobacter sphaeroides菌株達到350mg/l。
關于通過發(fā)酵球形紅假單胞菌生產(chǎn)CoQ10的詳細研究由Sakato、Kuniaki、Tanaka、Hisao、Shibata、Susumu和Kuratsu的研究中提供，Yoshiyuki in Agitation-aeration on Coenzym Q10 productionusing Rhodopseudomonas sphaeroides.Biotechnology And AppliedBiochemistry 1992，16，19-28。這篇論文的注意力集中在通過改變不同的發(fā)酵參數(shù)，例如氧供給、氧減少潛力、攪拌，而對方法進行最優(yōu)化。所述菌株達到770mg CoQ10/l。這是迄今為止所報道的最高效價。
關于CoQ10的生物合成、生物技術生產(chǎn)方法及應用的綜述由Choi、Jin-Ho、Ryu、Yeon-Woo和Seo、Jin-Ho在“輔酶Q10的生物技術生產(chǎn)和應用”中公布。Applied Microbiology andBiotechnology，在線公開2005年3月3日(已接受待發(fā)表)。
通過閱讀上述關于輔酶Q10合成的改良措施，所有人都不得不承認使用大多數(shù)微生物生產(chǎn)輔酶Q10的產(chǎn)量仍相對較低并且不令人滿意。已經(jīng)嘗試通過分子生物學的方法來增加輔酶Q10生產(chǎn)力，導致顯示出輔酶Q10生產(chǎn)力增加的經(jīng)遺傳修飾的菌株的產(chǎn)生。然而，在工業(yè)生產(chǎn)中通常優(yōu)選使用天然的菌株以生產(chǎn)所期望的化合物。因此，在科學界仍需要篩選用于CoQ10生產(chǎn)的更有效的菌株。
因此本發(fā)明的目的是進一步獲取在發(fā)酵期間具有生產(chǎn)高效價CoQ10的能力的微生物。
這個目的通過權利要求中所述的實施方式達到。本發(fā)明提供了一種新的微生物，其被命名為WSH-W04。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明的微生物的組合物或裝置、一種用于發(fā)酵該新菌株的方法，以及本發(fā)明的微生物的有利應用，另外，本發(fā)明還涉及一個16S rRNA基因序列及包含該序列的微生物。
在提供的新微生物WSH-W04中，技術人員擁有快速生長的生物，該微生物使得在發(fā)酵時可以生產(chǎn)高效價的CoQ10。特別地，所述新的微生物使得在旋轉震蕩發(fā)酵模式中生產(chǎn)所述輔酶的量達到64mg/l。技術人員應意識到盡管在旋轉震蕩器中發(fā)酵，現(xiàn)有技術中的菌株也僅顯示CoQ10的生產(chǎn)率低于100mg/l。因此，本發(fā)明的菌株當在優(yōu)化條件下以工業(yè)規(guī)模被發(fā)酵時具有生產(chǎn)高效價CoQ10的高度潛力。
本發(fā)明的另一方面涉及包含本發(fā)明微生物的發(fā)酵肉湯。有利的發(fā)酵肉湯為技術人員所已知，典型地含有一種碳源、一種氮源和一種磷酸鹽源，以及鹽、維生素和微量元素，以優(yōu)化細胞生長和產(chǎn)物形成。在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明提供了一種還包含添加劑的發(fā)酵肉湯，該添加劑在發(fā)酵本發(fā)明的微生物時正向影響CoQ10生產(chǎn)。這種添加劑選自由以下所組成的組CoQ10前體對羥基苯甲酸酯(PHB)、異戊烯醇、香葉醇、酪氨酸、莽草酸酯和分支酸，及豆油、西紅柿提取物和胡蘿卜提取物的復合蔬菜提取物。通過以下段落可以獲知，在本發(fā)明中特別優(yōu)選使用的是蔬菜提取物。
本發(fā)明的另一方面還涉及一種培養(yǎng)系統(tǒng)，其包括i)一種可以進行發(fā)酵的容器；ii)一種包含本發(fā)明的微生物的發(fā)酵肉湯；iii)一種破碎所述微生物的工具；
iv)一種從發(fā)酵肉湯中分離輔酶CoQ10的裝置。
該培養(yǎng)系統(tǒng)可以根據(jù)技術人員的知識進行裝配。其中可以進行發(fā)酵的容器可以是本領域技術人員已知的任何容器。優(yōu)選的容器是存在于現(xiàn)有技術中的容器(例如在Stanbury et al，1998，Principles ofFermentation T echnology，B utterworth-Heinemann中的容器)。這種容器包括，例如，自定義大小和形狀的Erlenmeyer培養(yǎng)瓶或發(fā)酵罐。發(fā)酵肉湯如上述產(chǎn)生，優(yōu)選包含所述添加劑。在發(fā)酵完成后，將產(chǎn)生的CoQ10須從反應混合物中分離。由于CoQ10貯存在微生物內，因此細胞在分離之前被破碎。因此，本發(fā)明的培養(yǎng)系統(tǒng)還具有一種破碎微生物的工具。這個設備可以是本領域技術人員已知的任何設備，例如Hopkins，1991所提及的設備。
回收CoQ10的方法是公知的，包括通過用有機溶劑從細胞膜中提取CoQ10，任選隨后進行進一步的純化，例如通過沉淀、結晶、柱層析、薄層層析等進行純化。鑒別和量化的分析方法包括HPLC、質譜分析法、核磁共振質譜法等。然而，技術人員可以自己選擇正確的方法。
菌株的培養(yǎng)可以在Erlenmeyer培養(yǎng)瓶中小規(guī)模進行，或者在發(fā)酵罐中補料分批培養(yǎng)或持續(xù)培養(yǎng)。在發(fā)酵罐中的培養(yǎng)通常獲得較高的細胞產(chǎn)量；并且需要更嚴格控制關鍵發(fā)酵參數(shù)，例如pH、溶解氧濃度、氧化還原電位(ORP)、養(yǎng)分消耗/損耗。這些參數(shù)先前已經(jīng)顯示出對CoQ10的大量生產(chǎn)是關鍵的(Kuratsu et al.，1984；Wu et al.，2003；Urakami and Hori-Okubo，1988；Sakato et al.，1992)。
培養(yǎng)基的pH范圍在6和8之間適于發(fā)酵。優(yōu)選pH范圍在6.5和7.5之間進行發(fā)酵，最優(yōu)選pH7.2。考慮到氧供給問題，發(fā)酵應攪拌進行。對于Erlenmeyer培養(yǎng)瓶，合適的攪拌速度為100-300rpm。優(yōu)選攪拌速度在150和250rpm之間，最優(yōu)選的攪拌速度為200rpm。先前對多種CoQ10生產(chǎn)菌株進行的實驗已經(jīng)證明胞內CoQ10量隨著發(fā)酵時間而增加。使用本發(fā)明的微生物，適當?shù)陌l(fā)酵時間為至少58小時。優(yōu)選的發(fā)酵時間為72小時，更優(yōu)選的發(fā)酵時間為120小時。當然，這可以根據(jù)最佳的發(fā)酵條件的應用而改變。發(fā)酵應在20和40℃之間的一個合適的溫度進行。優(yōu)選溫度為25-35℃，特別優(yōu)選溫度為30℃。
本發(fā)明的再一方面涉及一種培養(yǎng)本發(fā)明微生物的方法，該方法是以在發(fā)酵期間將具有刺激CoQ10生產(chǎn)的潛力的添加劑與所述微生物接觸的方式進行的，所述添加劑選自由以下所組成的組CoQ10前體對羥基苯甲酸酯(PHB)、異戊烯醇、香葉醇、酪氨酸、莽草酸酯和分支酸，及豆油、西紅柿提取物和胡蘿卜提取物的復合蔬菜提取物。已經(jīng)證實使用這樣的添加劑，CoQ10的產(chǎn)量幾乎可以加倍(見表4)。在本發(fā)明中，優(yōu)選使用PHB、豆油、西紅柿提取物或胡蘿卜提取物。更優(yōu)選使用的是豆油、西紅柿提取物或胡蘿卜提取物。這些添加劑是可商購的。
最后，本發(fā)明涉及本發(fā)明的微生物在生產(chǎn)CoQ10中的應用。生產(chǎn)的CoQ10方法可以如在本申請中所例證的方法進行。然而，所提供的實施例不被認為是對各個發(fā)明的限制。本領域技術人員已知進行本發(fā)明方法的替代方式和方法來生產(chǎn)CoQ10。特別優(yōu)選該方法根據(jù)前面提出的微生物自身的生產(chǎn)方法進行。另外，本發(fā)明的微生物也可以被用于生產(chǎn)該菌株的突變株和變異株。同樣本領域技術人員具備怎樣獲得本發(fā)明菌株的這種突變株和變異株的知識。這樣的方法是本領域所已知的，包括將細胞暴露于紫外光、X射線或放射性物質。另外，細胞可以用誘變劑進行處理，所述誘變劑例如是N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍(NG)、甲基磺酸乙酯(EMS)、硫酸二甲酯(DMS)及所有類似的誘變劑。這樣的技術中的一些在例如Ausubel etal.，1997，Current protocols in molecular biology，John Wiley and Sons中被概述。
為獲得本發(fā)明的微生物，土壤樣品選自中國的不同區(qū)域，包括蔬菜園、花園、釀造廠及厭氧顆粒污泥。選擇這些樣品中包含的微生物并測試其生產(chǎn)泛醌的能力。
迄今為止所測試的大多數(shù)微生物菌株均不產(chǎn)生輔酶Q10，但產(chǎn)生具有較短類異戊二烯側鏈的衍生物(即輔酶Q6-輔酶Q9)。本申請發(fā)明人進行了HPLC分析以最初鑒別具有形成輔酶Q10能力的那些菌株?？偠灾?，因此分離了982個純培養(yǎng)物，隨后測試其形成輔酶Q10的能力。
共10個菌株被證實產(chǎn)生輔酶Q10作為主要泛醌。在這些菌株中，命名為WSH-WO4的菌株顯示出最高的輔酶Q10生產(chǎn)力(16mg/l)，并因此被選擇來開發(fā)發(fā)酵生產(chǎn)輔酶Q10的方法。命名為WSH-W04的菌株的分離的傳代培養(yǎng)物被送至Deutsche Sammlungvon Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(DSMZ，Braunschweig，Germany)進行分類學、形態(tài)學和生化鑒定。DSMZ對菌株WSH-W04所做的培養(yǎng)物鑒定如下形態(tài)學細胞是革蘭氏陰性，直棒狀，寬度為0.6-0.7μm，長度為1.5-2.5μm。細胞是活躍運動的并具有＞1個極性鞭毛。
生化和生理學特征表1-3顯示了菌株WSH-W04的主要生化和生理學特性。結合脂肪酸分布圖(未顯示)，WSH-W04被鑒定為蛋白菌(Proteobacteria)的α-亞組(α-subgroup)的一個成員。
表1生化和生理學測試
表2碳源利用
表3氧化酸的產(chǎn)生
通過16S rRNA序列的確定進行種系發(fā)育分析在從基因組DNA中擴增之后，對完整的16S rRNA編碼基因進行測序。相應的DNA序列如SEQ ID No1所示。因此，本發(fā)明的另一方面是一種分離的核酸序列，其具有SEQ ID No1所示序列或者相應的rRNA序列或者在嚴格條件下與這些序列雜交的序列或者與SEQ ID No1或相應的rRNA序列在核酸水平上具有＞97.1％同源性的序列。
本發(fā)明的序列可以被用作探針以探查釣取具有高CoQ10生產(chǎn)潛力的其它與種系發(fā)育相關的菌株。
本發(fā)明以下的實施方式涉及包含上述一個或多個序列的微生物。
術語“在嚴格條件下”在本文的含義如Sambrook et al.(Sambrook，J.；Fritsch，E.F.and Maniatis，T.(1989)，Molecular cloninga laboratory manual，2nded.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，NewYork)所述。優(yōu)選地，如果在用1×SSC(150mM氯化鈉，15mM檸檬酸鈉，pH 7.0)和0.1％SDS(十二烷基硫酸鈉)，在80℃、優(yōu)選85℃、更優(yōu)選88℃、最優(yōu)選在90℃洗滌1小時之后；更優(yōu)選在用0.2×SSC和0.1％SDS在80℃、優(yōu)選85℃、更優(yōu)選88℃、最優(yōu)選在90℃洗滌1小時之后，仍觀測到陽性的雜交信號，則說明存在根據(jù)本發(fā)明的嚴格雜交。
該DNA序列與來自參比α-蛋白菌的可利用的16S rRNA基因序列比對，與Ochrobactrum sp.有97.1％的最大相似性(Relman1999)，隨后與馬爾他布魯氏菌(Brucella melitensis)的不同亞種具有96.5％的相似性，與Ochrobactrum gallinifaecis DSM 15295和Ochrobactrum intermedium LMG3301具有96.2％的相似性?？紤]到rRNA相似性、脂肪酸分布圖、生化和生理學數(shù)據(jù)，可以將WSH-W04指定為Ochrobactrum屬的一個新種。
從上述可以看出，本發(fā)明提供了一種發(fā)酵生產(chǎn)輔酶Q10的新的及高潛力的候選菌。
菌株WSH-W04的純培養(yǎng)物于2005年6月5日根據(jù)布達佩斯條約的規(guī)定保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏號為CCTCC M 205054。
本發(fā)明的術語微生物是指包括了完整生物體形式的完整細胞以及破碎形式的細胞。
所要求保護的核酸序列根據(jù)本發(fā)明也包括與SEQ ID No1或其相應rRNA序列的同源性大于97.1％，優(yōu)選大于97.2％、97.3％或97.4％，更優(yōu)選大于97.5％或97.6％，特別優(yōu)選大于98％、98.5％或99％的序列。文中所用術語“同源性”(或相同性)可用公式H(％)＝[1-V/X]×100定義，其中H是指同源性，X是對比序列中核堿基總數(shù)，V是與對比序列相對比的序列中不同的核堿基的數(shù)目。
實施例新的大量生產(chǎn)輔酶Q10的菌株的分離土壤樣品選自中國的不同區(qū)域，包括蔬菜園、花園、釀造廠及厭氧顆粒污泥。將樣品各自于30℃，厭氧和光照條件下，在100ml富集培養(yǎng)基(1％蛋白胨、1％NH4Cl、2％NaCl、1％NaHCO3、0.5％Na2HPO4、0.2％MgCl2、pH 7.0)中培養(yǎng)168小時。將富集培養(yǎng)的樣品涂布在含有固體復合培養(yǎng)基(1％蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％NaCl、2％瓊脂，pH 7.0)的平板上。平板在30℃有氧保溫72小時。將單個的集落轉移至相同培養(yǎng)基的瓊脂斜面上以獲得純培養(yǎng)物。為了確定輔酶Q10，將每個純培養(yǎng)物接種到含有25ml的Q10生產(chǎn)培養(yǎng)基的250ml培養(yǎng)瓶中，所述Q10生產(chǎn)培養(yǎng)基由4％蔗糖、5％糖蜜、1％(NH4)2SO4、0.05％KH2PO4、0.05％K2HPO4、0.025％MgSO4·7H2O、4％玉米浸液和1ml/l微量元素溶液組成。該微量元素溶液在1升去離子水中含有88mg Na2B4O7·10H2O、37mg(NH4)6Mo7O27·4H2O、8.8mg ZnSO4·7H2O、270mg CuSO4·5H2O、7.2mg MnCl2·4H2O和970mg FeCl3·6H2O。在高壓滅菌之前，Q10生產(chǎn)培養(yǎng)基的pH用28％氨水調節(jié)為7.2。在30℃，以200rpm在旋轉搖床上培養(yǎng)72小時，之后收獲細胞并分析CoQ10形成情況(見下文)。
通過分離的菌株對輔酶Q10形成進行檢測將1毫升如上述培養(yǎng)的各培養(yǎng)物通過在10ml的玻璃管中以10,000rpm離心10分鐘收獲。棄去上清并將細胞在-70℃冷凍以促進細胞破碎。隨后，將細胞材料在冷卻的水浴超聲發(fā)生器中通過超聲處理，用3ml丙酮提取兩次。組合丙酮級分并在裝備有Zorbax-SB-C18柱的Agilent 1100系統(tǒng)上通過反向HPLC進行分析。用甲醇-乙醇50∶50(v/v)進行洗提。輔酶Q10通過與得自Sigma的可靠樣品進行對比而被鑒別，并從校準曲線中估計出它的量。
通過WSH-W04的輔酶Q10生產(chǎn)的確定和優(yōu)化基于其生產(chǎn)輔酶Q10的高度潛力，菌株WSH-W04被選擇來開發(fā)一種適于輔酶Q10生產(chǎn)的工業(yè)化方法。首先將WSH-W04在瓊脂斜面(2％蔗糖、1％蛋白胨、1％酵母提取物、0.5％NaCl，pH7.2)上，于30℃培養(yǎng)24小時。將該斜面用無菌水洗滌(每個斜面3ml)，并將懸浮液合并在一起。隨后，將無菌甘油以1∶4的比率(甘油細胞懸浮液，v/v)加入。將細胞懸浮液分為1ml的等份，并于-70℃在聚丙烯管中冷凍。為進行培養(yǎng)，將1小管原種培養(yǎng)物接種于含有25ml種植培養(yǎng)基的搖瓶中，并在30℃以200rpm在旋轉搖床上保溫，所述種植培養(yǎng)基由2％蔗糖、1％蛋白胨、1％酵母提取物和0.5％NaCl(pH7.2)組成。將2.5ml種植培養(yǎng)物轉移至含有25ml基本培養(yǎng)基的250ml培養(yǎng)瓶中，所述基本培養(yǎng)基由4％蔗糖、0.7％(NH4)2SO4、0.05％KH2PO4、0.05％K2HPO4、0.025％MgSO4.7H2O、8％玉米浸液、8mg/l硫胺、8mg/l煙酸和1ml/l微量元素溶液組成。所述微量元素溶液在1升去離子水中含有88mgNa2B4O7·10H2O、37mg(NH4)6Mo7O27·4H2O、8.8mg ZnSO4·7H2O、270mg CuSO4·5H2O、7.2mg MnCl2·4H2O和970mg FeCl3·6H2O。
發(fā)酵培養(yǎng)基在高壓滅菌之前用28％氨水調節(jié)至pH 7.2，并在30℃以200rpm在旋轉搖床上培養(yǎng)120小時。當需要時，如上述以1毫升/份進行收獲、提取并通過HPLC分析輔酶Q10。
將細菌培養(yǎng)物用蒸餾水稀釋100倍后，測定其在660nm處的光密度以監(jiān)測其生長，從校準曲線中估計出細胞干重(cdw)。
Q10產(chǎn)量的提高為增加菌株WSH-W04中的輔酶Q10生產(chǎn)，在培養(yǎng)期間將不同的復合營養(yǎng)添加劑加入基本培養(yǎng)基中，所述添加劑即對羥基苯甲酸酯(PHB)、豆油、西紅柿提取物和胡蘿卜提取物(表4)?；镜妮o酶Q10效價(無任何特異性添加劑而獲得)為37mg/l。補加不同的添加劑產(chǎn)生最多64mg/l輔酶Q10，等于增加73％。這些結果清晰地表明菌株WSH-W04特別適于用作發(fā)酵生產(chǎn)輔酶Q10的生產(chǎn)微生物。
表4營養(yǎng)添加劑對菌株WSH-W04a生產(chǎn)輔酶Q10的作用
a值是三個獨立培養(yǎng)的平均值。
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序列表<110>德古薩股份公司<120>生產(chǎn)輔酶Q10的細菌菌種及生產(chǎn)輔酶Q10的方法<130>050135 OC<160>1<170>PatentIn Version.3.1<210>1<211>1466<212>DNA<213>Proteobacteria<400>1atcctggctc agaacgaacg ctggcggcag gcttaacaca tgcaagtcga gcgccctttt60cggagggagc ggcagacggg tgagtaacgc gtgggaatct acctatctct agggaataac120tcagggaaac ttgtgctaat accctatacg tccttcggga gaaagattta tcggagatgg180atgagcccgc gttggattag ctagttggtg gggtaaaggc ctaccaaggc gacgatccat240agctggtctg agaggatgat cagccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg300gaggcagcag tggggaatat tggacaatgg gcgcaagcct gatccagcta tgccgcgtga360gtgatgaagg ccctagggtt gtaaagctct ttcaccggtg aagataatga cggtaaccgg420agaagaagcc ccggctaact tcgtgccagc agccgcggta atacgaaggg ggctagcgtt480
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1.微生物WSH-W04，保藏號CCTCC M 205054。
2.一種包含權利要求1的微生物的發(fā)酵肉湯。
3.一種培養(yǎng)系統(tǒng)，其包括i)一種其中可以進行發(fā)酵的容器；ii)一種包含權利要求1的微生物的發(fā)酵肉湯；iii)一種破碎所述微生物的工具；iv)一種從發(fā)酵肉湯中分離輔酶Q10的裝置。
4.生產(chǎn)權利要求1的微生物的方法，其中在發(fā)酵期間，具有刺激輔酶Q10生產(chǎn)潛力的添加劑與所述微生物接觸，所述添加劑選自由以下所組成的組輔酶Q10前體對羥基苯甲酸酯和豆油、西紅柿提取物及胡蘿卜提取物的復合蔬菜提取物。
5.權利要求1的微生物在生產(chǎn)輔酶Q10中的應用。
6.權利要求1的微生物在生產(chǎn)該菌株的突變株和變異株中的應用。
7.一種分離的核酸，其具有SEQ ID NO1所示序列或相應的rRNA序列、或者與這些序列在嚴格條件下雜交的序列、或者與SEQ ID NO1或相應的rRNA序列在核酸水平具有＞97.1％的同源性的序列。
8.包含權利要求7的一或多種序列的微生物。
全文摘要
本發(fā)明基于一種新的Ochrobactrum sp.類型菌株WSH－W04的分離，該菌株產(chǎn)生高基礎量的輔酶Q10。另一方面，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)輔酶Q10的方法，該方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述新的細菌使得輔酶Q10積聚，并從培養(yǎng)物中提取輔酶Q10。
文檔編號C12N15/31GK1912098SQ20051009141
公開日2007年2月14日 申請日期2005年8月10日 優(yōu)先權日2005年8月10日
發(fā)明者陳堅, 洪忠民, 劉登如 申請人:德古薩股份公司