專利名稱：一株銅綠假單胞菌及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株銅綠假單胞菌及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
受啟于地球“自凈”過程的生物治理具有成本低、二次污染輕、環(huán)境相容性好等優(yōu)勢(shì)，生物治理技術(shù)現(xiàn)已成為污染治理技術(shù)中的首選方案之一，如現(xiàn)已產(chǎn)生良好效果的可用于污水/廢水處理的活性污泥法、氧化溝法等。決定生化處理工藝成功、有效、適用的因素，除了工藝條件和操作管理外，用于污染物降解、轉(zhuǎn)化等過程的功能微生物群體的作用也是十分重要的。因此，對(duì)特種微生物的分離、篩選，功能基因的分離、提取，以及借此構(gòu)建各種環(huán)境工程菌已成為環(huán)境科學(xué)、生命科學(xué)中的研究熱點(diǎn)。
應(yīng)運(yùn)而生的生物強(qiáng)化技術(shù)(Bioaugmentation，簡(jiǎn)稱BA技術(shù))、基因強(qiáng)化技術(shù)(Gene-Enhanced-Technology，簡(jiǎn)稱GET技術(shù))是向污染體系中投加人工培育的功能菌株/菌群，導(dǎo)入功能基因，以增強(qiáng)體系中目標(biāo)底物的降解、轉(zhuǎn)化。美國(guó)、日本、英國(guó)等一些國(guó)外的科研機(jī)構(gòu)，現(xiàn)已成功開發(fā)出商品化的環(huán)境生物制劑，其中著名的有日本的EM制劑，美國(guó)的AM制劑。
我國(guó)的污染情況與其它國(guó)家明顯不同，現(xiàn)有的商品化生物制劑對(duì)“三廢”難以起到有效的治理效果，嚴(yán)重的污染情況亟待解決，基于這樣的客觀需要，我們從一些被有毒/有害物質(zhì)長(zhǎng)期浸染的環(huán)境中采集、分離、篩選可用于降解特定污染物的功能微生物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一株可用于環(huán)境治理的銅綠假單胞菌及其培養(yǎng)方法。
本發(fā)明所提供的用于環(huán)境治理的銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1，已于2005年08月25日保藏于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.1445。
銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445屬革蘭氏陰性桿菌，嚴(yán)格好氧，有鞭毛，運(yùn)動(dòng)性極強(qiáng)；有較強(qiáng)的絮凝性，絮凝率大于80％；在LB固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的該菌可產(chǎn)生可溶性藍(lán)綠色或茶色色素，該菌在LB液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)、繁殖速度較快，生長(zhǎng)曲線如圖1所示，代時(shí)30-40min，進(jìn)入對(duì)數(shù)期的時(shí)間為8-12小時(shí)，平衡期細(xì)胞濃度可達(dá)109-1010個(gè)細(xì)胞/L。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445的大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)方法。
本發(fā)明所提供的銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445的大規(guī)模發(fā)酵培養(yǎng)方法，是將銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445接種到其專用液體培養(yǎng)基中，在30-35℃下通氣培養(yǎng)；所述專用液體培養(yǎng)基的配方為每1000mL水中含酵母浸粉12-18g，胰蛋白胨8-12g，KH2PO41.2-1.8g，NaCN 320-480mg，pH值為7.0-7.8。
在上述培養(yǎng)方法中，接種比例為5-10％，優(yōu)選為7％；培養(yǎng)液中的溶解氧含量為3-5mg/L；培養(yǎng)40-45小時(shí)即可停止發(fā)酵，收集菌體。培養(yǎng)溫度優(yōu)選為35℃。
優(yōu)選的專用液體培養(yǎng)基的配方為每1000mL水中含酵母浸粉15g，胰蛋白胨10g，KH2PO41.5g，NaCN 400mg，pH值為7.6(固體培養(yǎng)基再添加15g瓊脂)。
實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1CGMCC No.1445，可以有效地降解或利用苯、甲苯、苯酚、吡啶、氰化物等有機(jī)污染物，對(duì)初始濃度為1000mg/L的NaCN降解率可達(dá)90％以上(72小時(shí)內(nèi))；并具有廣譜的抗生素抗性及較高的重金屬耐受性，對(duì)抗生素氯霉素、壯觀霉素、卡那霉素、四環(huán)素、潮霉素等的抗性均可達(dá)到100mg/L，對(duì)重金屬鹽Pb(NO3)2的耐受濃度可達(dá)到20mg/L；該菌的胞內(nèi)酶對(duì)氰化物具有較高的降解能力；此外，該菌的培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，生長(zhǎng)、繁殖速度快，具有擴(kuò)大化生產(chǎn)的可行性。
基于上述特點(diǎn)，本發(fā)明的銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1CGMCC No.1445可用于含苯、甲苯、苯酚、吡啶、氰化物等有機(jī)污染物的污染源的生物治理，并借此開發(fā)出相應(yīng)的環(huán)保生物制劑，具有較高的研究、應(yīng)用及市場(chǎng)價(jià)值。


圖1為銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445在LB液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線。
圖2為銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)NaCN的降解曲線圖。
具體實(shí)施例方式
下述實(shí)施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法，所有培養(yǎng)基中的溶劑均為水。
BS無機(jī)鹽溶液組分每1000mL水中含Na2HPO4·2H20 7.0g，KH2PO43.0g，NaCl0.25g，MgSO4·7H20 0.3g，CaCl2·2H2O 0.02g，F(xiàn)eCl3·6H2O 0.045g，MnSO4·4H2O0.01g，ZnSO4·7H20 0.01g，CuSO4·5H2O 0.002g，CoCl2·6H2O 0.003g，NiCl2·6H2O0.003g，Na2MoO4·2H2O 0.002g，pH7.5(固體培養(yǎng)基添加15g瓊脂)。
實(shí)施例1、銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445的分離、篩選、純化在選擇壓力NaCN 200mg/L下，也就是以無機(jī)氰化物為唯一碳源與氮源，從長(zhǎng)期馴養(yǎng)的活性污泥中，經(jīng)過富集、分離、篩選、純化等步驟得到銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1，該菌株已于2005年08月25日保藏于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.1445。
具體過程將采集樣品接種到含液體富集培養(yǎng)基(在BS無機(jī)鹽溶液中添加NaCN200mg/L作為唯一碳源與氮源)的搖瓶中，35℃，120rpm下振蕩培養(yǎng)一周。將富集液涂布到固體BS選擇培養(yǎng)基上，35℃，恒溫培養(yǎng)，直至長(zhǎng)出明顯可見的菌落。挑取單菌落，移接到液體BS選擇培養(yǎng)基中，35℃，120rpm下振蕩培養(yǎng)，直至細(xì)胞濃度達(dá)到107-108cells/mL。再次固體平板涂布，檢測(cè)純度，直至獲得以無機(jī)氰化物為唯一碳源與氮源生長(zhǎng)的純種菌株。
實(shí)施例2、銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445培養(yǎng)條件的優(yōu)化一、銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445培養(yǎng)基組分的優(yōu)化1、碳源的優(yōu)化考察了銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)葡萄糖，甘油，蔗糖，麥芽糖，酵母浸膏等幾種碳源的利用情況，具體方法為采取單因素實(shí)驗(yàn)，固定氮源成分胰蛋白胨2.5g/L與無機(jī)鹽組分，改變碳源成分為葡萄糖，甘油，蔗糖，麥芽糖，酵母浸膏(含量均為5g/L)，接種銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonasaeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445，35℃，150rpm，培養(yǎng)48h，測(cè)定OD600，確定細(xì)胞生長(zhǎng)情況，試驗(yàn)結(jié)果顯示，酵母浸膏為適宜的碳源。
2、氮源的優(yōu)化考察了銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)胰蛋白胨，蛋白胨，牛肉膏，尿素，(NH4)2SO4幾種氮源的利用情況，具體方法為采取單因素實(shí)驗(yàn)，固定碳源成分酵母浸膏(5g/L)與無機(jī)鹽組分，改變氮源成分為胰蛋白胨，蛋白胨，牛肉膏，尿素，(NH4)2SO4(含量均為2.5g/L)，接種銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445，35℃，150rpm，培養(yǎng)48h，測(cè)定OD600，確定細(xì)胞生長(zhǎng)情況，試驗(yàn)結(jié)果顯示，適宜的氮源為胰蛋白胨。
3、發(fā)酵培養(yǎng)基組分的正交試驗(yàn)通過正交試驗(yàn)確定銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445發(fā)酵培養(yǎng)基各組分的最佳添加量，被考察的因子與水平數(shù)如下酵母浸粉(g/L)0，5，10，15；胰蛋白胨(g/L)0，2.5，5，10；KH2PO4(g/L)0，0.5，1.0，1.5；NaCN(mg/L)0，400，800，1200。
正交試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)與分析如表1所示表1 (Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化正交試驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)分析得出的最佳組合為A4B4C4D2，各組分的方差分析結(jié)果如表2所示表2 (Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445發(fā)酵培養(yǎng)基各組分的方差分析結(jié)果

通過方差分析可知，四個(gè)因素的顯著性順序?yàn)镈＞A＞B＞C。根據(jù)上述正交試驗(yàn)的數(shù)據(jù)與分析結(jié)果，確定銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445優(yōu)選的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為酵母浸粉15g/L，胰蛋白胨10g/L，KH2PO41.5g/L，NaCN 400mg/L。試驗(yàn)結(jié)果還表明，在被考察的因子中，NaCN對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響最顯著。
二、其它培養(yǎng)條件的優(yōu)化1、最適裝樣量的確定在上述優(yōu)化的培養(yǎng)基中，采取不同的裝樣量30mL/300mL，50mL/300mL，100mL/300mL，150mL/300mL，溫度35℃，轉(zhuǎn)速150rpm，振蕩培養(yǎng)52小時(shí)后，測(cè)定OD600，試驗(yàn)結(jié)果表明，銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445搖瓶培養(yǎng)的適宜裝樣量為30mL/300mL。
2、生長(zhǎng)pH值的優(yōu)化采用上述優(yōu)化的培養(yǎng)基，固定其他培養(yǎng)條件如溫度35℃，轉(zhuǎn)速150rpm，改變起始pH值條件7.0，7.2，7.4，7.6，振蕩培養(yǎng)52小時(shí)后，測(cè)定OD600，試驗(yàn)結(jié)果表明，銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445最適生長(zhǎng)pH值為7.6。
3、培養(yǎng)溫度的優(yōu)化采用上述優(yōu)化的培養(yǎng)基，改變培養(yǎng)溫度28℃，33℃，35℃，37℃，40℃，轉(zhuǎn)速150rpm，培養(yǎng)52小時(shí)后，測(cè)定OD600，試驗(yàn)結(jié)果表明，銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonasaeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445適宜的生長(zhǎng)溫度為30-35℃。
4、最適轉(zhuǎn)速的優(yōu)化采用上述優(yōu)化的培養(yǎng)基與其他適宜條件，如培養(yǎng)溫度35℃，pH值為7.6，改變轉(zhuǎn)速條件120rpm，150rpm，180rpm，200rpm，培養(yǎng)52小時(shí)后，測(cè)定OD600，試驗(yàn)結(jié)果表明，銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445搖瓶培養(yǎng)的適宜轉(zhuǎn)速為150rpm。
實(shí)施例3、銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445的發(fā)酵培養(yǎng)將經(jīng)過平板活化的銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445菌種接種到500mL三角瓶中(含100mL培養(yǎng)液酵母浸粉15，胰蛋白胨10，KH2PO41.5(g L-1)，NaCN 400mg/L，pH值為7.6)，在35℃、150rpm下預(yù)培養(yǎng)32-37h后，以5％接種比例接種到10L種子罐中，35℃、200rpm培養(yǎng)40h后，以7％的接種量接種到120L發(fā)酵罐(BioFlo 5000，New Brunswick Scientific Co.Inc)中(含有80L培養(yǎng)液)35℃、200rpm進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。在不同培養(yǎng)階段取樣鏡檢、測(cè)定OD600，觀測(cè)該菌的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)。在120L發(fā)酵罐中銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445采用上述最佳培養(yǎng)條件，得到活菌濃度數(shù)大于7.8×1010CFU mL-1的菌懸液，具有擴(kuò)大化生產(chǎn)的可行性。
實(shí)施例4、檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)有毒、有害污染物的降解或利用情況考察了銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)苯、甲苯、苯酚、吡啶、氰化物、喹啉的降解或利用情況。具體實(shí)驗(yàn)過程如下采用BS無機(jī)鹽瓊脂固體培養(yǎng)基，以上述待試底物作為唯一的碳源或氮源，添加的濃度分別為苯5g/L，甲苯2g/L，苯酚50mg/L，吡啶1g/L，NaCN 200mg/L和喹啉0.5 g/L，在35℃下培養(yǎng)，結(jié)果顯示，在以上底物條件下，銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonasaeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445均生長(zhǎng)良好，表明其可以有效降解或利用苯、甲苯、苯酚、吡啶、氰化物、喹啉，因此對(duì)有機(jī)污染物具有較好的降解功能。
實(shí)施例5、檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)抗生素、重金屬的抗性一、檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)抗生素的抗性檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)羧芐霉素、卡那霉素、壯觀霉素、氯霉素、潮霉素、四環(huán)素、頭孢霉素的抗性，方法為將該菌分別接種于含上述不同濃度抗生素的LB固體培養(yǎng)基中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)上述抗生素的耐受濃度均可達(dá)到100mg/L，具有較高的抗生素抗性。
二、檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)重金屬的抗性以Pb為例，檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445對(duì)重金屬的抗性，方法為將該菌接種于含不同濃度Pb(NO3)2的LB固體培養(yǎng)基中，在35℃下培養(yǎng)，結(jié)果銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445對(duì)上述Pb(NO3)2的耐受濃度可達(dá)到20mg/L，具有較高的重金屬抗性。
實(shí)施例6、檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)氰化物的生物降解能力一、檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)氰化物的微生物降解能力以NaCN為例，檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445對(duì)氰化物的微生物降解能力，具體方法為將該菌接種于含400mg/L NaCN的BS無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中，在35℃下培養(yǎng)，每隔12h測(cè)定發(fā)酵液580nm的OD值和氰化物的含量，對(duì)NaCN的降解曲線如圖2所示(空白未進(jìn)行接種)，結(jié)果表明，經(jīng)過72小時(shí)，銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)NaCN的去除率達(dá)到90％以上，因此對(duì)氰化物具有較高的降解能力。
二、檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)氰化物的酶促降解能力以NaCN為例，檢測(cè)銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445的胞內(nèi)、胞外酶對(duì)氰化物的降解能力，首先按下述步驟進(jìn)行粗酶的提取1)將細(xì)菌培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，8000rpm離心20min，收集上清和菌體；2)用pH7.5的磷酸鹽緩沖液洗滌沉淀，再8000rpm離心20min，保留兩次離心得到的上清液作為胞外酶提取物；3)用步驟2)所用的緩沖液重新懸浮沉淀，并凍融；4)超聲波破碎細(xì)胞(300W，作用10min)；5)8000rpm離心20min，保留上清，再用步驟2)所用的緩沖液洗滌，再8000rpm離心20min，保留上清，將保留的兩次上清液作為胞內(nèi)酶提取物。
然后，按下述步驟和反應(yīng)體系進(jìn)行銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445的胞內(nèi)、胞外酶酶的活性測(cè)定1)向100mL錐形瓶?jī)?nèi)加入5mL的0.1ml/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.5)，lmL的10ug/mLNaCN，4mL粗酶制品，空白對(duì)照以水代替粗酶；2)將錐形瓶置于水浴搖床內(nèi)，每隔15分鐘，分兩次測(cè)定反應(yīng)體系中的氰化物含量。
結(jié)果顯示，銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445的胞內(nèi)酶粗提物對(duì)氰化物的降解速率可達(dá)0.6g/L/h，表明該菌的胞內(nèi)酶對(duì)氰化物均具有較高的降解活力。
實(shí)施例7、基因水平上研究銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1CGMCC No.1445對(duì)氰化物的降解特性提取銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445的質(zhì)粒DNA，采用電穿孔法，將提取的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌XLOLR，將轉(zhuǎn)化子接種于含400mg/LNaCN的BS無機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中，使其以NaCN作為唯一碳源和氮源生長(zhǎng)，在35℃下培養(yǎng)，結(jié)果轉(zhuǎn)化子可正常生長(zhǎng)，從而從基因水平上證明銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonasaeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445對(duì)氰化物具有降解能力。
權(quán)利要求
1.銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445。
2.一種培養(yǎng)銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445的方法，是將銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCC No.1445接種到其專用液體培養(yǎng)基中，在30-35℃下通氣培養(yǎng)；所述專用液體培養(yǎng)基的配方為每1000mL水中含酵母浸粉12-18g，胰蛋白胨8-12g，KH2PO41.2-1.8g，NaCN 320-480mg，pH值為7.0-7.8。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于所述專用液體培養(yǎng)基的配方為每1000mL水中含酵母浸粉15g，胰蛋白胨10g，KH2PO41.5g，NaCN 400mg，pH值為7.6。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征在于所述接種比例為5-10％；培養(yǎng)溫度為35℃；培養(yǎng)過程的溶解氧為3-5mg/L，培養(yǎng)時(shí)間為40-45小時(shí)。
5.權(quán)利要求1所述的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445在治理環(huán)境污染中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1所述的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445在降解氰化物中的應(yīng)用
7.權(quán)利要求1所述的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)W7-1 CGMCCNo.1445在制備生物制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一株銅綠假單胞菌及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用。銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)W7－1 CGMCC No.1445的發(fā)酵培養(yǎng)方法，是將銅綠假單胞菌菌株(Pseudomonas aeruginosa)W7－1 CGMCC No.1445接種到其專用液體培養(yǎng)基中，在30－35℃下通氣培養(yǎng)；所述專用液體培養(yǎng)基的配方為每1000mL水中含酵母浸粉12－18g，胰蛋白胨8－12g，KH
文檔編號(hào)C12R1/385GK1730649SQ20051009367
公開日2006年2月8日 申請(qǐng)日期2005年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月1日
發(fā)明者王軍, 李毅, 喬琳, 沙圣德, 夏勉 申請(qǐng)人:北京未名凱拓農(nóng)業(yè)生物技術(shù)有限公司