專利名稱：一種基于體細(xì)胞育苗技術(shù)的鼠尾藻苗種繁育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藻類育苗方法，具體地說(shuō)是一種基于體細(xì)胞育苗技術(shù)的鼠尾藻苗種繁育方法。
背景技術(shù)：
鼠尾藻自然繁育是通過生殖托(繁育器官)產(chǎn)生生殖細(xì)胞，經(jīng)過有性生殖的方式發(fā)育成鼠尾藻幼苗。由于其生殖細(xì)胞發(fā)育的同步性差，因此生殖細(xì)胞發(fā)育為幼苗的比例較低，不適合大規(guī)模育苗生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種基于體細(xì)胞育苗技術(shù)的鼠尾藻苗種繁育方法，它能夠解決鼠尾藻幼苗繁育的數(shù)量較低的問題，可用于生產(chǎn)性育苗。
一種基于體細(xì)胞育苗技術(shù)的鼠尾藻苗種繁育方法，其主要是根據(jù)海藻體細(xì)胞發(fā)育的全能性，利用海藻工具酶分解鼠尾藻組織，游離出體細(xì)胞或體細(xì)胞原生質(zhì)體，然后將其附著于育苗基上，培養(yǎng)出鼠尾藻幼苗。
所述的海藻工具酶是利用海洋貝類或棘皮動(dòng)物的消化腺提取制得；在使用前還需向提取后的海藻工具酶溶液中添加甘露醇、山梨醇、葡萄糖或蔗糖為滲透劑。
本發(fā)明利用體細(xì)胞或體細(xì)胞原生質(zhì)體直接進(jìn)行育苗，無(wú)須培育鼠尾藻生殖成熟的藻體；體細(xì)胞可直接發(fā)育成植株(體細(xì)胞原生質(zhì)體再生細(xì)胞壁轉(zhuǎn)化為體細(xì)胞，再由體細(xì)胞分化為植株)，無(wú)須生殖細(xì)胞發(fā)育的過程，因而育苗周期短。
相對(duì)于有性生殖育苗技術(shù)，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是無(wú)須生殖細(xì)胞的有性生殖過程，可直接發(fā)育成植株，縮短了育苗周期；并且鼠尾藻苗種繁育效率高，適合于大規(guī)模育苗生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
本實(shí)施例實(shí)驗(yàn)材料為鼠尾藻，其直接獲得于自然海域。
本實(shí)施例是以培育鼠尾藻體細(xì)胞幼苗為目的。其關(guān)鍵在于證實(shí)利用體細(xì)胞或體細(xì)胞原生質(zhì)體再生植株的可行性。
1.取帽貝或海參的消化腺，用組織搗碎機(jī)粉碎，按照1∶1的質(zhì)量比添加淡水或海水，用高速冷凍離心機(jī)12000轉(zhuǎn)/分鐘、4℃離心10-20分鐘后取上清液，或者放置4℃冰箱內(nèi)靜置過夜后過濾取上清液；獲得的上清液即為海藻工具酶(粗酶)溶液。
2.向海藻工具酶溶液中添加甘露醇作為滲透劑(也可選用山梨醇、葡萄糖、蔗糖)，使其濃度為0.6-1.0mol/L。
3.選取鮮活的鼠尾藻，用大量的潔凈海水沖洗，洗去藻體附著的泥沙等雜質(zhì)，去掉假根、葉片等部位，僅保留“莖”部，用天平稱重5-10g備用；在常溫下，將鼠尾藻迅速研磨或剪切成細(xì)小的組織塊或小的分枝。
4.在15-35℃下，將細(xì)小的組織塊或小的分枝浸沒在海藻工具酶溶液中1-3個(gè)小時(shí)，期間用玻璃棒進(jìn)行攪拌。
5.用200-400目篩絹過濾，其濾得的溶液中即含有鼠尾藻體細(xì)胞和體細(xì)胞原生質(zhì)體，靜置30分鐘或用低速離心機(jī)以400轉(zhuǎn)/分鐘的低速離心5分鐘，倒去上層溶液，用潔凈的海水重新懸浮沉淀，制成鼠尾藻體細(xì)胞和體細(xì)胞原生質(zhì)體懸液，將其倒入一個(gè)較大的容器中，并用海水稀釋到103個(gè)細(xì)胞/ml的濃度。
6.將育苗器(或育苗簾等育苗基質(zhì))完全浸入到細(xì)胞懸液中，靜置30分鐘以上時(shí)間，使鼠尾藻體細(xì)胞和體細(xì)胞原生質(zhì)體充分附著在育苗器上，然后將育苗器取出，在18-25℃條件下進(jìn)行室內(nèi)大水體培養(yǎng)(光照可采用自然光)，靜置或充氣培養(yǎng)3-5天，即可在顯微鏡下觀察到鼠尾藻多列細(xì)胞幼苗。
權(quán)利要求
1.一種基于體細(xì)胞育苗技術(shù)的鼠尾藻苗種繁育方法，其特征是利用海藻工具酶分解鼠尾藻組織，游離出體細(xì)胞或體細(xì)胞原生質(zhì)體，然后將其附著于育苗基上，培養(yǎng)出鼠尾藻幼苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的海藻工具酶是利用海洋貝類或棘皮動(dòng)物的消化腺提取制得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是在提取后的海藻工具酶溶液中添加滲透劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征是所述的滲透劑為甘露醇、山梨醇、葡萄糖或蔗糖。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種基于體細(xì)胞育苗技術(shù)的鼠尾藻苗種繁育方法，其主要是根據(jù)海藻體細(xì)胞發(fā)育的全能性，利用海藻工具酶分解鼠尾藻組織，游離出體細(xì)胞或體細(xì)胞原生質(zhì)體，然后將其附著于育苗基上，培養(yǎng)出鼠尾藻幼苗。相對(duì)于有性生殖育苗技術(shù)，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是無(wú)須生殖細(xì)胞的有性生殖過程，可直接發(fā)育成植株，縮短了育苗周期；并且鼠尾藻苗種繁育效率高，適合于大規(guī)模育苗生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C12N5/04GK1806526SQ20051013635
公開日2006年7月26日 申請(qǐng)日期2005年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月24日
發(fā)明者劉濤, 崔競(jìng)進(jìn), 王翔宇 申請(qǐng)人:中國(guó)海洋大學(xué)