專利名稱：含乳清蛋白、來自乳的抗體或抗體的功能性組合物或食品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含乳清蛋白、來自乳的抗體或抗體的功能性組合物或食品。
背景技術(shù)：
類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是始于手或足的關(guān)節(jié)發(fā)紅、疼痛、腫脹，進(jìn)展為關(guān)節(jié)的破壞、變形，直到伴隨疼痛出現(xiàn)關(guān)節(jié)功能麻痹的炎癥性關(guān)節(jié)疾病。在其藥物療法中，為了消炎，實施了將腎上腺皮質(zhì)激素藥、免疫抑制劑、酸性抗炎劑、有機(jī)金化合物、抗細(xì)胞因子抗體等藥劑組合進(jìn)行的治療。這些藥物療法均為所謂的對癥療法。
類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病因尚不明了，目前正在開展基于自身免疫與作為關(guān)節(jié)軟骨主要成分的II型膠原的相關(guān)的學(xué)說的研究。
飲食中有許多抗原物質(zhì)，但通常經(jīng)口攝取時不產(chǎn)生相對于這些抗原的抗體。該現(xiàn)象稱為口服免疫耐受。
抗體產(chǎn)生通過對抗體產(chǎn)生起促進(jìn)作用的淋巴細(xì)胞(輔助性T細(xì)胞，Th)和起抑制作用的淋巴細(xì)胞(抑制性T細(xì)胞，Ts)進(jìn)行調(diào)節(jié)。抑制性T細(xì)胞為優(yōu)勢的狀態(tài)時，抗體生成受到抑制，因此為了抑制II型膠原的自身抗體的產(chǎn)生，正在嘗試以活化II型膠原的抑制性T細(xì)胞為目的，給予動物由來的來自II型膠原的肽、II型膠原的改性物。作為其例子，例如有JP-A 07-138187、JP-A 09-059176、JP-A 09-255581，這些均為以口服免疫耐受為目的的現(xiàn)有技術(shù)。
本發(fā)明人等為了有助于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的預(yù)防、治療，進(jìn)行了病因的解析?；谝韵录僬f，對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病因開始了研究內(nèi)在要因是患者的體質(zhì)；遺傳要因是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中有口服免疫破綻；外在要因是飲食中的來自不同種動物的II型膠原、以及細(xì)菌內(nèi)毒素從腸道的吸收。
口服免疫的破錠為以下狀態(tài)?？梢哉J(rèn)為對于經(jīng)口攝取的抗原，口服免疫耐受為正常的免疫應(yīng)答，但由于內(nèi)因的、體質(zhì)的、環(huán)境的要因，不能誘導(dǎo)正常的免疫耐受，產(chǎn)生了自身抗體。為了驗證該假說，使用小鼠，對有關(guān)小鼠的膠原性關(guān)節(jié)炎，進(jìn)行了類似抗原和細(xì)菌內(nèi)毒素的關(guān)節(jié)炎誘發(fā)活性的研究。DBA/1系小鼠為具有容易發(fā)生II型膠原關(guān)節(jié)炎的具有遺傳性狀的小鼠。若將來自雞的II型膠原、或經(jīng)熱改性的II型膠原經(jīng)口給予該小鼠，則在小鼠的血液中產(chǎn)生小鼠的II型膠原的抗體，同時關(guān)節(jié)炎發(fā)病。該關(guān)節(jié)炎在結(jié)合應(yīng)用細(xì)菌內(nèi)毒素(也稱脂聚糖或LPS)時加重。另外即使去除來自雞的II型膠原，僅長期給予細(xì)菌內(nèi)毒素也誘發(fā)了關(guān)節(jié)炎(K.Terato等.Br.J.Rheum.35，828-838，1996)。
這些結(jié)果顯示類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病與II型膠原的抗體，同時與細(xì)菌內(nèi)毒素引起的免疫系統(tǒng)的非特異性活化或疲憊相關(guān)聯(lián)，并且有口服免疫耐受不成立的情況。該實驗顯示對上述JP-A 07-138187、JP-A 09-059176、JP-A 09-255581中所示的試圖調(diào)節(jié)為免疫耐受的熱改性II型膠原也有不能誘導(dǎo)免疫耐受的情況。
消化道免疫是免疫的第一線，全身免疫的百分之七十集中在消化道。如果能強(qiáng)化消化道免疫，則全身免疫系統(tǒng)也可以得到強(qiáng)化。如果免疫系統(tǒng)被強(qiáng)化，消化道中分泌的抗體量增多，可以防止有害菌的增殖，腸內(nèi)環(huán)境良好，即顯示出整腸作用。而且，如果腸內(nèi)環(huán)境良好，則可以活化消化道免疫。這樣，免疫調(diào)節(jié)作用與整腸作用相關(guān)，通過使它們分別提高、良性循環(huán)，可以使身體更健康。
即使抗體在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生，但隨著年齡的增加產(chǎn)生量減少，因此高齡者的免疫功能降低。另外，由于應(yīng)激反應(yīng)或使用具有免疫抑制作用的藥品也使抗體產(chǎn)生降低。
通過攝取來自乳的抗體，可以提高免疫系統(tǒng)的第一線——消化道免疫，可以期待增進(jìn)健康，疾病的早日恢復(fù)，健康長壽。例如，有人報道了通過使人、動物攝取來自乳的抗體，對消化道內(nèi)因病原菌或病毒引起的疾病的治療和預(yù)防有效、或者保持消化道內(nèi)的微生物平衡、有利于增進(jìn)健康(Korhonen H等.Bovine milk antibodies forhealth，British J.Nutrition，84，suppl.1，S135-S146(2000))。另外，已知消化道中寄生大腸桿菌以外的革蘭陰性菌，作為革蘭陰性菌的菌體成分——內(nèi)毒素(endotoxin)轉(zhuǎn)移到體內(nèi)，會出現(xiàn)內(nèi)毒素性休克或血栓形成等重癥的病態(tài)，但有人報道通過在外科手術(shù)之前攝取來自乳的抗體，該抗體可以使內(nèi)毒素的毒性無害化，防止因內(nèi)毒素引起的傷害(Bolke E，等.Shock 17，9-12(2002))。
成人中，消化道、呼吸器官等粘膜中分泌的抗體的合成速度是每1kg體重為24mg/日(ウイリアムE.ポ-ル編/多田富雄監(jiān)譯、基礎(chǔ)免疫學(xué)(東京大學(xué)出版會)1986年，上181頁)，成人消化道內(nèi)每日分泌約1000mg，因此為了使疾病快速恢復(fù)、增進(jìn)健康，優(yōu)選攝取補(bǔ)充該量的幾成的抗體。
通常，從外部給予抗體而成立的免疫稱為被動免疫，在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生抗體而成立的免疫稱為主動免疫。上述的抗體攝取相當(dāng)于被動免疫。
另一方面，以往的免疫活化物質(zhì)是使主動免疫活化的物質(zhì)。例如，已知落葉松蕈、桑黃、冬菇、平菇、光帽鱗傘蘑菇、松蘑等所謂的菇類或面包酵母、啤酒酵母、圓酵母等酵母類含有β-葡聚糖，顯示其作用。另外，酵母中也有含有大量谷胱甘肽的酵母，谷胱甘肽也具有免疫活化作用。乳酸菌、雙歧桿菌、納豆菌等細(xì)菌類作為益生菌直接攝取活菌，則具有免疫活化作用或整腸作用。并且，即使細(xì)菌類作為滅活菌攝取也看到同樣的作用，作為其有效成分，已知有細(xì)胞壁和其構(gòu)成成分的肽聚糖等。本發(fā)明人等已經(jīng)公布了通過酶分解細(xì)胞壁，可以進(jìn)一步增強(qiáng)免疫活化作用(JP-A 2000-4830號、JP-A 2000-210050)。本發(fā)明人等還公布了通過口服來自細(xì)菌的DNA(脫氧核糖核酸)也具有免疫活化作用(JP-A 2000-262247)。
但是，這些菌類因攝取方法不同其效果有很大不同，而且，個體之間的效果差異大。還已知谷胱甘肽、乳鐵蛋白等也具有免疫活化作用，但其效果不能令人充分滿足。也發(fā)現(xiàn)將多種免疫活化物質(zhì)組合使用的情況，因均為活化主動免疫的組合，攝取者自身抗體產(chǎn)生有一定極限，因此不能實現(xiàn)大的協(xié)同效果。特別是攝取者為高齡者時，自身的抗體產(chǎn)生能力變?nèi)?，因此難以得到效果。為此，強(qiáng)烈希望有具有更強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用或整腸作用的功能性組合物出現(xiàn)。
已知乳酸菌或雙歧桿菌具有整腸作用、降低血中膽固醇的作用、降壓作用、抗癌作用等，同時具有免疫活化作用(高野俊明等，乳酸菌的科學(xué)與技術(shù)，311-334頁，1996年，學(xué)會出版中心)，通過在食品中至少含有107/g以上可以期待免疫活化作用。通過使乳酸菌或/和雙歧桿菌在食品中含有107/g以上，還可以看到抑制其它雜菌、特別是食物中毒菌的增殖的效果。
含有乳酸菌、雙歧桿菌的食品包括以酸乳酪為首的多種食品，但是使乳酸菌、雙歧桿菌所具有的功能與抗體所具有的功能組合的食品還是未知的。
乳清蛋白的氨基酸序列接近于人乳，營養(yǎng)價值豐富、包含全部必須氨基酸、吸收率非常好，而且支鏈氨基酸的含有率也高，因此作為用于補(bǔ)充蛋白質(zhì)的營養(yǎng)輔助食品，主要針對體育選手或運動負(fù)荷高的人，已實現(xiàn)商品化。但是，乳清蛋白有風(fēng)味上的問題(JP-A2003-23963)，這些商品中也大多殘留因乳清蛋白而引起奶臭或澀味、收斂味。因此，也有施加香草等風(fēng)味來改善風(fēng)味、容易攝取的商品，這些商品也只是遮蔽了強(qiáng)烈的風(fēng)味，仍然殘留乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味。而且，乳清蛋白添加到水、牛乳等中時吸水性差，容易成為“面疙瘩”狀態(tài)。
成人消化道中每日分泌超過1000mg的免疫抗體，但中年過后隨著年齡的增加抗體的分泌量減少，因此就高齡者而言攝取含抗體的乳清蛋白來補(bǔ)充抗體，這對維持健康非常有益。但是，高齡者可以每日美味攝取的使用乳清蛋白的食品還未商品化。
就降低乳臭而言，例如有人提出了以下的方法JP-A 11-178506中，用于改良粉乳類或由粉乳類制備的飲料食物的風(fēng)味而添加二氫查爾酮的方法；JP-A 2002-2531413、JP-A 2002-2531644中，添加磷酸化糖、磷酸化低聚糖或它們的無機(jī)化合物來提高含乳、粉乳的食品的乳感的方法；JP-A 2002-335903中，為了改善含乳類的飲料食物的味質(zhì)而添加β-葡糖低聚糖的方法；JP-A 2003-210119中，為了抑制奶或動物性蛋白質(zhì)的臭氣而添加綠原酸的方法，它們使乳臭降低，最終改善為接近于牛乳的香味。
另外，作為降低澀味的方法，有人提出了添加α-結(jié)合半乳糖低聚糖的方法(JP-A 2003-250486)，其主要降低果汁、咖啡、啤酒的澀味、苦味，沒有涉及來自乳清蛋白的澀味。
即使在乳制品中，從乳清蛋白的制備步驟中推定、抗體轉(zhuǎn)移可以期待提高其含量。但是，就抗體相對于全部乳清蛋白的比率為10％(桑田有，月刊フ-ドケミカル7(2)，68-77(1991)，為蛋白質(zhì)含量80％質(zhì)量的WPC時，總量不失活地轉(zhuǎn)移，則WPC中含有8.0％質(zhì)量)，市售的乳清蛋白幾乎不包含抗體。對于市售的乳清蛋白、WPC(乳清蛋白濃縮物、蛋白含量80％質(zhì)量)、WPI(乳清蛋白分離物、蛋白含量90％質(zhì)量)中的抗體含量，WPC中最大為5.5％質(zhì)量、WPI中最大為2.4％質(zhì)量，制造步驟中抗體的30％以上熱滅活。另外，市場上有含有10％質(zhì)量以上抗體的IgG濃縮乳清蛋白銷售，這是通過色譜裝置由乳清蛋白進(jìn)一步將抗體組分分離，雖然裝置規(guī)模大，但是單位時間可處理的量少，因此非常昂貴。如果僅使用現(xiàn)有的WPC或WPI的制造設(shè)備即可以制備比抗體含量以往的乳清蛋白高的物質(zhì)，則容易享受上述的抗體所帶來的功能。
大部分來自乳的粉末蛋白即使分散、溶解于水中，也容易在水中成“團(tuán)”，難以均勻分散。即，容易產(chǎn)生“面疙瘩”，為難分散性，使其均勻分散需要較強(qiáng)的、長時間的攪拌。
作為改善水分散性的方法，有人提出了將難分散性食品在單糖類、二糖類或糖醇的水溶液中練合，或者噴霧后進(jìn)行干燥，使這些糖類在表面被覆的方法(JP-A 61-134319)，但被覆上述糖液則需要長時間干燥。這些糖類為吸濕性強(qiáng)的物質(zhì)，有保存上不優(yōu)選等各種的課題。
還有人提出了在難分散性食品中混合粒徑為149μm篩下的赤蘚糖醇結(jié)晶，改善水分散性的方法(JP-A 11-18698)，這樣的微粉赤蘚糖醇容易產(chǎn)生結(jié)塊，難以操作，分散性的改善效果也不十分令人滿意。JP-A 11-123053中記載了制備與糖醇粉末的粉體混合物，可以改良乳清蛋白的分散溶解性，但該混合物的分散性改善效果也不充分。
附圖簡述

圖1為按照不同個體表示實施例3-2的效果試驗中的感官評價的評價分?jǐn)?shù)的圖表。
圖2為表示糖的添加時間(1～9(圖2中，帶圓圈的數(shù)字))的乳清蛋白制造步驟的作業(yè)流程圖。WPC乳清蛋白濃縮物，WPI乳清蛋白分離物，RC乳清酪素乳清，UF超濾法，IX離子交換法，MF精密過濾法。
圖3為表示在鮮乳中添加0～8％質(zhì)量乳糖，在65℃下經(jīng)30分鐘加熱時的抗體殘存率的圖表。
圖4為表示本發(fā)明的功能性組合物對實施例7-8中進(jìn)行的IL-12產(chǎn)生的影響的圖表。
圖5為表示實施例10-1、比較例10-1、比較例10-2中測定的糞便中雙歧桿菌菌數(shù)和產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌菌數(shù)的圖表。
圖6為表示在食品中添加乳清蛋白，在60～72℃下經(jīng)30分鐘加熱時的各食品中的抗體殘存率的圖表。
圖7為表示在牛乳中添加乳清蛋白和蔗糖，在60～80℃下經(jīng)30分鐘加熱時的抗體殘存率的圖表。
圖8為表示在牛乳中添加乳清蛋白和赤蘚糖醇，在60～80℃下經(jīng)30分鐘加熱時的抗體殘存率的圖表。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供含乳清蛋白、來自乳的抗體或抗體的功能性組合物或食品。包含以下發(fā)明方案。
本發(fā)明提供含有抗體和免疫活化物質(zhì)作為有效成分的功能性組合物(發(fā)明方案7)。
本發(fā)明提供具有抗類風(fēng)濕作用的抗體作為有效成分的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物(發(fā)明方案6)。
本發(fā)明提供含有抗體的發(fā)酵食品的制備方法，其特征在于該方法無需將?；蚺Ｒ酝獾牟溉閯游锏孽r乳加熱至63℃以上，在上述鮮乳中添加乳酸菌或雙歧桿菌的一種或兩種以上，使之發(fā)酵(發(fā)明方案11)。
本發(fā)明提供含有抗體的食品，其特征在于該食品含有1.5mg/g以上抗體和107/g以上選自乳酸菌和雙歧桿菌的一種或兩種以上的菌(發(fā)明方案12)。
本發(fā)明提供含有抗體的明確的食品，其特征在于該食品含有1.5mg/g以上來自乳的抗體，但是，不含107/g以上乳酸菌和雙歧桿菌類(發(fā)明方案13)。
本發(fā)明提供乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白與糖、可可粉末、粉末狀非凝固性不溶物、抹茶、蘆薈粉末、郁金粉末、南瓜粉末、紅葡萄果汁粉末或番茄粉末(發(fā)明方案4、9、15、1、2)。
本發(fā)明提供便臭改善劑，其特征在于該改善劑含有乳清蛋白(發(fā)明方案3)。
本發(fā)明提供水分散性優(yōu)異的蛋白質(zhì)組合物，其特征在于該組合物含有來自乳的粉末或顆粒狀蛋白質(zhì)以及粉末狀非凝固性不溶物(發(fā)明方案8)。
本發(fā)明提供乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白、低聚糖和水溶性食物纖維(發(fā)明方案10)。
本發(fā)明提供乳清蛋白的制備方法，其特征在于通過在乳清蛋白的制備步驟中至少一個步驟添加糖，提高抗體的殘存率(發(fā)明方案14)。
發(fā)明的詳細(xì)說明以上說明本發(fā)明方案。各發(fā)明方案中公開的材料也可以用于其它的發(fā)明方案中。
發(fā)明方案6本發(fā)明的課題在于提供對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎具有預(yù)防、治療和復(fù)發(fā)預(yù)防功能的組合物。
本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了深入的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分別將II型膠原、革蘭陰性腸內(nèi)細(xì)菌滅活菌體或者它們的混合物制成菌苗，免疫牛、山羊、綿羊、雞，使其產(chǎn)生抗體，對于牛、山羊、綿羊該抗體以乳的形式分泌，對于雞，以雞卵黃抗體的形式分泌，通過將這些抗體制成食品或藥品的組合物可以實現(xiàn)課題，從而完成本發(fā)明。即，發(fā)現(xiàn)通過攝取含有這些抗體的食品或藥品，使來自食品的II型膠原、由口腔或腸內(nèi)的細(xì)菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素分別與對應(yīng)的抗體反應(yīng)，使之失活或者可以防止從消化道吸收，結(jié)果發(fā)現(xiàn)可預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、或者改善病情、對治療有益，從而完成本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)以具有抗類風(fēng)濕作用的抗體為有效成分的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物；
2)上述1)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，其中具有抗類風(fēng)濕作用的抗體為抗II型膠原抗體；3)權(quán)利要求9的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，其中抗II型膠原抗體為抗雞II型膠原抗體、抗牛II型膠原抗體、抗豬II型膠原抗體至少其中之一；4)權(quán)利要求8的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，其中具有抗類風(fēng)濕作用的抗體為抗細(xì)菌內(nèi)毒素抗體；5)權(quán)利要求8的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，其中具有抗類風(fēng)濕作用的抗體為將抗II型膠原抗體和抗細(xì)菌內(nèi)毒素抗體以任意比例進(jìn)行混合所得；和6)權(quán)利要求8的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，該組合物含有抗II型膠原抗體和抗細(xì)菌內(nèi)毒素抗體的至少其中之一，總抗體量含有0.1％質(zhì)量以上。
本發(fā)明可以提供類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，該組合物以含有該組合物的食品或藥物等形式攝取，使組合物中的抗體與來自食品的II型膠原、由口腔或腸內(nèi)的細(xì)菌產(chǎn)生的毒素反應(yīng)，可抑制關(guān)節(jié)炎的發(fā)病，用于預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
本發(fā)明中，將類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的要因之一—上述判明的兩種抗原接種家畜動物進(jìn)行免疫，從家畜的乳、卵或血液中分離產(chǎn)生的這些抗原的抗體，將所得抗體制成用于食品或藥品的組合物。以下，逐項加以說明。
1.免疫所用的抗原本發(fā)明中，優(yōu)選使用動物的II型膠原和革蘭陰性菌或其內(nèi)毒素(LPS)作為抗原。
1)牛、豬和雞的II型膠原可以使用市售品(Chondrex公司)。抗原可以單獨也可以混合使用，將雞、牛、豬的II型膠原以任意組合的方式混合的混合疫苗有效而且經(jīng)濟(jì)。
2)在為了產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素的抗體而進(jìn)行的免疫中，所用的抗原是人體寄生性革蘭陰性菌，為相當(dāng)于以下所示屬的細(xì)菌。即，將下述細(xì)菌的福爾馬林處理或加熱滅活菌制成滅活菌疫苗，所述細(xì)菌有梭桿菌屬(Fusobacterium)、韋永氏球菌屬(Veillonella)、巨球形菌屬(Megasphaera)、奈瑟氏菌屬(Neisseria)、莫拉氏菌屬(Moraxella)、布蘭漢氏球菌屬(Branhamella)、不動桿菌屬(Acinetobacter)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)、腸桿菌屬(Enterobacter)、大腸桿菌屬(Escherichia)、哈夫尼菌屬(Hafnia)、克雷白氏桿菌屬(Klebsiella)、摩根氏菌屬(Morganella)、變形菌屬(Proteus)、普羅威登斯菌屬(Providencia)、沙門氏菌屬(Salmonella)、沙雷氏菌屬(Serratia)、志賀氏菌屬(Shigella)、耶爾森氏菌屬(Yersinia)、弧菌屬(Vibrio)、氣單胞菌屬(Aeromonas)、鄰單胞菌屬(Plesiomonas)、嗜血桿菌屬(Haemophillus)、巴斯德氏菌屬(Pasteurella)、綠膿桿菌(Pseudomonas)、軍團(tuán)菌屬(Legionella)等。疫苗可以是單獨也可以是混合疫苗，混合疫苗效率高。細(xì)菌的培養(yǎng)可以是專業(yè)書中記載的常規(guī)方法。
3)動物與微生物共生，在各動物種類的消化道中存在各動物所固有的微生物的同時，也由于人共通的微生物生存，它們成為抗原，動物產(chǎn)生抗體并保有。它們被稱為自然抗體。與人共通的革蘭陰性菌的內(nèi)毒素抗體也以自然抗體的形式存在，因此可以使用這些動物。
2.動物的選擇通常，已知對于自身或同種的抗原，即使注射，動物也不會產(chǎn)生抗體。而且，產(chǎn)生抗體的量，因抗原與免疫動物種的種差異間隔越大則有大幅度增多的傾向。因此，例如制備牛II型膠原的抗體，優(yōu)選用牛II型膠原免疫雞，以雞卵卵黃抗體的形式回收。制備雞II型膠原的抗體，則用雞II型膠原免疫牛，可以在乳汁或血清中得到抗體。如此，對于用II型膠原免疫的動物，接種來自不同種的II型膠原。如果來自不同種，則可將多種膠原混合，制成混合疫苗注射，這不僅效率高而且經(jīng)濟(jì)。
因為細(xì)菌成分對所用的動物來說都具有抗原性，可以將它們作為疫苗，混合并免疫注射。
3.抗原接種方法使動物即乳牛、乳山羊、綿羊、雞的攝取方法，抗原均可以是水溶液或懸浮液，優(yōu)選膠原這樣的蛋白性抗原與各種免疫佐劑混合給予。每次的免疫是將蛋白干燥重量10～1000μg溶解或懸浮成0.1～10ml，使用等容量的弗羅因德完全佐劑和不完全佐劑、TiterMax Gold或Ribi Adjuvant R-730等，以油包水型乳液的形式，分為皮內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)1處至10處，每處注射0.1～10ml。實施每周一次或兩個月一次注射。
制備內(nèi)毒素的抗體是將0.1～10ml的0.01％～10％濕重的一種滅活菌液乃至多種滅活菌液的混合物按照1～4周一次給予皮內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)。也可以將內(nèi)毒素的抗體的制備與佐劑一起通過免疫進(jìn)行。滅活菌液中使用弗羅因德完全佐劑和不完全佐劑、TiterMaxGold或Ribi Adjuvant R-730等，以油包水型乳液的形式，分為皮內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)1處乃至10處進(jìn)行注射。實施每周一次或兩個月一次注射。
4.抗體的采集1)乳汁抗體的采集利用通常的方法，用手或擠乳機(jī)擠乳。
因為抗體在超過72℃的加熱下失活，所以在最終制品之前要避免過度的加熱。鮮乳的滅菌適合在72℃以下的處理、紫外線照射滅菌或放射線照射滅菌。乳汁可通過離心除去脂肪，噴霧干燥，制備脫脂乳；或除去脂肪后加入鹽酸，pH值調(diào)節(jié)為4.6，將析出的酪蛋白過濾除去，再通過超濾除去乳糖、礦物質(zhì)等低分子成分，制備乳清；或再通過超濾除去乳清蛋白、乳球蛋白，將得到的以抗體蛋白為主的組分等進(jìn)行低溫噴霧干燥或冷凍干燥，制成抗體含量從0.1％水平至約含有90％的粉末狀抗體組合物。通常從除去了初乳的1噸牛鮮乳中可以得到10～100g、平均30g的總抗體。另外，還可以使用含有抗體的市售乳清、乳清蛋白濃縮物(WPC)、乳清蛋白分離物(WPI)。
2)血清抗體的采集免疫動物的血液中抗體含量高，是優(yōu)異的原料。
將采集的血液離心，制備血清，然后用硫酸銨1/3飽和沉淀，過濾采集γ-球蛋白組分，溶解于水，然后脫鹽，低溫噴霧干燥或冷凍干燥，制備粉末。通?？贵w含量70～90％、由1kg血液可以得到總抗體約15g。
3)雞卵抗體的采集使用GIT試劑盒[コスモバイオ(株)]，利用免疫雞卵的卵黃，通常由1kg雞卵可以得到0.9～1.5g純度90％的IgY抗體。將抗體溶液低溫噴霧干燥或冷凍干燥，制備粉末。
5.抗體的定量方法對于抗體的量，可以采用以下的兩種方法測定與抗體的抗原特異性沒有關(guān)系地測定總抗體量的方法；和作為相對于各抗原的抗體量的測定方法，通過ELISA法(Fujii K，等.J Immunol Methods 198912463-70)的測定方法。
1)總抗體量的測定蛋白G柱作為用于高效純化抗體的抗體純化用親和柱在市場上銷售(アマシヤムバイオサイエンス等)。使含有抗體的溶液以中性附近的pH過柱，則可以接近100％吸附抗體。洗滌柱后，用pH值為2.5～2.8的酸性溶液沖洗，抗體由柱游離、回收。由于1％抗體溶液的紫外線波長280nm的吸光度沒有種類差異，均為約14，因此可以通過吸光度求出抗體的量。
2)總IgY的測定使用市售的卵黃抗體的吸附柱(HiTrap IgY Purification HP，アマシヤムバイオサイエンス)可以容易地定量。用含有0.5M硫酸鉀的20mM磷酸緩沖液(pH7.5)使含抗體液吸附，用同液洗滌后，用20mM磷酸緩沖液(pH7.5)洗脫，利用吸光度算出回收的IgY抗體。
3)通過ELISA法測定親和純化的特異性抗體使膠原和細(xì)菌內(nèi)毒素(LPS)與アクテイゲル(ステロジ-ン)或CNBr活化(瓊脂糖アマシヤムバイオサイエン)共價結(jié)合，用作抗體純化用的抗原親和柱。將純化的抗體溶液過柱，僅使目的抗體吸附于柱，用中性緩沖劑沖洗不吸附于柱的免疫球蛋白等。用pH2.8的0.1M甘氨酸緩沖液洗脫與柱結(jié)合的抗體。將洗脫抗體再過蛋白G柱，以純化的抗體作為標(biāo)準(zhǔn)品，通過ELISA(酶聯(lián)免疫測定法)制作校準(zhǔn)曲線、進(jìn)行定量。各抗原孔的致敏條件、封閉溶液記載如下。
·抗膠原抗體的ELISA測定用0.15M磷酸鉀緩沖液(pH7.2)稀釋膠原，使其濃度為10μg/ml，取50μl該稀釋液加入到ELISA板孔中，4℃過夜進(jìn)行包被。封閉是將0.05M TRIS、0.15M NaCl加入到56℃、經(jīng)30分鐘加熱的兔血清中，pH值調(diào)節(jié)至7.8，將該液作為封閉液?？贵w測定檢體的稀釋也使用該封閉液。
·抗細(xì)菌內(nèi)毒素抗體的ELISA測定將用三氯乙酸從革蘭陰性菌菌體萃取的LPS加入到pH9.5的0.05M碳酸緩沖液中，制備分別含有5μg/ml濃度的溶液，包被ELISA平板孔。利用含0.1％牛血清白蛋白的磷酸緩沖生理鹽水進(jìn)行封閉。
抗體量按照專業(yè)書，分別使過氧化物酶標(biāo)記的抗牛抗體、抗山羊抗體、抗綿羊抗體、抗IgY抗體反應(yīng)，OPD作為底物顯色，測定吸光度，通過使用抗體的標(biāo)準(zhǔn)品制作的校準(zhǔn)曲線求出總抗體量或特異抗體量。
6.含抗體組合物的制備可以將含有抗革蘭陰性菌內(nèi)毒素的抗體的調(diào)整物與用II型膠原免疫的含抗體調(diào)整物的單獨或兩者混合，制備含抗體組合物。根據(jù)需要，還可以加入含抗體調(diào)整物以外的食品材料、賦型劑，制備食品、藥品。優(yōu)選最終制品的總抗體含量優(yōu)選為1％以上。
發(fā)明方案7本發(fā)明的課題在于提供具有更強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，具有更強(qiáng)的整腸作用的功能性組合物。
本發(fā)明人等進(jìn)行深入研究的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過將抗體與免疫活化物質(zhì)混合，同時攝取，即通過使被動免疫物質(zhì)與主動免疫活化物質(zhì)組合與分別單獨攝取相比，可以獲得更強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用和整腸作用，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)含有抗體和免疫活化物質(zhì)作為有效成分的功能性組合物；2)權(quán)利要求8的功能性組合物，其中抗體為來自乳的抗體；3)權(quán)利要求8或9的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為乳酸菌、雙歧桿菌以外的不產(chǎn)生毒素的細(xì)菌的菌體或菌體成分；4)權(quán)利要求1或2的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為霉菌·酵母的菌體或菌體成分；5)權(quán)利要求1或2的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為菇類的菌體或菌體成分；6)權(quán)利要求1或2的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為選自細(xì)菌、霉菌·酵母和菇類的菌類的菌體的酶解物；和7)權(quán)利要求1或2的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為SOD(超氧化物歧化酶)。
本發(fā)明通過將抗體與免疫活化物質(zhì)混合，同時攝取，可以獲得更強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用和整腸作用。免疫活化物質(zhì)使消化道的主動免疫活性化，而抗體在消化道中以被動免疫的形式發(fā)揮作用，因此同時攝取該兩者則表達(dá)強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用和整腸作用。
具體而言，抗體的攝取，即通過消化道內(nèi)的被動免疫減少有害菌，可以改善腸內(nèi)環(huán)境，另外，同時攝取的免疫活化物質(zhì)容易發(fā)揮功能，與單獨攝取免疫活化物質(zhì)相比，免疫活化的效果更大。而且，免疫體系的Th1/Th2平衡中，Th1更占優(yōu)勢，使掌管免疫系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)或殺傷細(xì)胞(CTL細(xì)胞)活化，增強(qiáng)白介素12(IL-12)或干擾素γ(IFN-γ)的產(chǎn)生，如此，可以改善全身的免疫功能。
本發(fā)明中，作為抗體可以使用來自卵、來自血清等的抗體，優(yōu)選使用可容易獲得的來自乳的抗體。因為乳清蛋白中高濃度含有來自乳的抗體，可以直接用作本發(fā)明的抗體。乳清蛋白可以使用通常的市售品，即乳清蛋白濃縮物(WPC)、乳清蛋白分離物(WPI)、脫鹽乳清粉等，但優(yōu)選抗體含量高的。關(guān)于從乳清中分離乳清蛋白的方法可以采用各種的方法，還可以使用超濾法、微量過濾法、交叉流微量過濾法、離子交換法等任意一種方法。
作為乳清蛋白原料的乳可以是牛、山羊、綿羊、馬、水牛等任一種哺乳動物的乳，該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采取的乳、也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采取的乳。
本發(fā)明中，作為與抗體結(jié)合使用的免疫活化物質(zhì)包含公知的免疫活化物質(zhì)的任意物質(zhì)，例如優(yōu)選乳酸菌、雙歧桿菌以外的不產(chǎn)生毒素的細(xì)菌類、霉菌·酵母類、菇類的菌體或菌體成分、選自細(xì)菌、霉菌·酵母和菇類的菌類的菌體酶分解物與SOD。
乳酸菌、雙歧桿菌以外的不產(chǎn)生毒素的細(xì)菌為乳酸菌、雙歧桿菌以外的細(xì)菌，只要是不產(chǎn)生毒素的菌即可，可以使用任一種細(xì)菌。例如，可以使用納豆菌(納豆芽孢桿菌(Bcaillus natto))、氨基酸生產(chǎn)菌(棒狀桿菌屬(Corynebacterium)、短桿菌屬(Brevibacterium)、微桿菌屬(Microbacterium))等。這些細(xì)菌類可以使用鮮菌、滅活菌、干燥物或有效成分的萃取液、其干燥物等。
霉菌·酵母類只要能食用可以使用任一種霉菌·酵母。例如可以是啤酒酵母、面包酵母、圓酵母、黑酵母、海洋性酵母、米曲霉、淀粉桿菌等?？梢允褂盟鼈兊母稍镂锘蜉腿∫夯蛘咻腿∫旱母稍镂铮€可以使用它們的酵母培養(yǎng)液、培養(yǎng)液的萃取液、其干燥物等。
菇類只要能食用即可，可以使用任一種菇。例如可以是落葉松蕈、桑黃、猴頭菇、裂褶菌、雜色革蓋菌、葡萄狀枝瑚菌、卷縮繡球菌、蛹蟲草、蜜黃色假蜜環(huán)菌、松蘑、灰樹花、小松蘑、冬蟲夏草、靈芝、鹿角靈芝、平蓋靈芝、樺褐孔菌(チヤ-ガ)、香菇、冬菇、光帽鱗傘蘑菇、聚生離褶傘、黑木耳、白黑木耳、刺芹側(cè)耳、白黑擬牛肝菌等。可以使用含有這些菇類的子實體或菌絲體的菌體干燥物或萃取液或者萃取液的干燥物等。
可以使用上述的細(xì)菌、霉菌·酵母類、菇類的菌體的酶分解物。酶可以使用任一種的酶，優(yōu)選將溶菌酶等糖苷酶型酶與菠蘿蛋白酶等肽鏈內(nèi)切酶型蛋白質(zhì)分解酶組合使用。
作為SOD可以使用來自植物、來自動物、來自微生物等任一種的SOD。其中作為SOD，使用醇溶谷蛋白處理SOD(US-B6045809)，口服時，比未處理的SOD顯示出更強(qiáng)的免疫活化作用，因此更優(yōu)選。
作為其它的免疫活化物質(zhì)還可以使用谷胱甘肽、溶菌酶、菠蘿蛋白酶等蛋白質(zhì)分解酶、乳鐵蛋白、墨角藻糖膠、酪蛋白分解物、維生素A、維生素C、維生素E、維生素B類、類胡蘿卜素、礦物質(zhì)(鐵、鋅、硒)、輔酶Q10、α-硫辛酸、蜂巢蠟?zāi)z、蜂皇漿、?；撬?、葡糖胺、薏米仁提取物、羅漢果提取物、甘草亭酸、貓爪草(Cats Claw)、紫錐菊、鋸葉棕櫚果、碧蘿芷(Pycnogenol)、兒茶酸、葡萄籽萃取物等多酚，小球藻、螺旋藻等藻類，來自谷物(大麥、燕麥、薏米仁等)的β-葡聚糖等?？梢允褂盟鼈兊氖惺燮贰?br> 還可以使用葡萄籽萃取物的酚化合物或多酚、來自橄欖的酚化合物或多酚作為免疫活化物質(zhì)。
本發(fā)明中，作為功能性素材，可以添加下述物質(zhì)天冬氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、γ-氨基丁酸、膽堿、茶氨酸、磷脂酰絲氨酸、輔酶Q、蘆丁、葉黃素、蝦青素、維生素D、維生素K、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、二十八烷醇、葡糖酸、銀杏葉萃取物、橄欖、蛇麻草萃取物、大豆異黃酮、n-3不飽和脂肪酸、n-6不飽和脂肪酸、n-9不飽和脂肪酸、ケ-ル、大麥嫩葉等。
本發(fā)明中，對抗體與免疫活化物質(zhì)的混合方法沒有限定，而且，對組合物的形狀也沒有限定。
抗體優(yōu)選在功能性組合物中含有10mg/g以上，更優(yōu)選含有10mg/g～300mg/g。免疫活化物質(zhì)優(yōu)選在功能性組合物中含有1％質(zhì)量以上，更優(yōu)選含有1％質(zhì)量～95％質(zhì)量。
發(fā)明方案11本發(fā)明的課題在于提供可以保持鮮乳原來的美味，殺滅食物中毒菌(大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等)或病原菌(結(jié)核桿菌等)等有害細(xì)菌，可在保持其活性的狀態(tài)下攝取鮮奶中所含抗體的食品及其制備方法。
本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在鮮乳中添加乳酸菌或雙歧桿菌的一種或兩種以上進(jìn)行發(fā)酵，則無需加熱滅菌即可殺滅有害細(xì)菌，同時可以保持鮮乳原來的美味，而且沒有預(yù)見到的新發(fā)現(xiàn)是，鮮乳在加熱低于63℃時，鮮乳中所含抗體可以維持其活性，由此得到含有新型抗體的發(fā)酵食品，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)含有抗體的發(fā)酵食品的制備方法，其特征在于無需將?；蚺Ｒ酝獾牟溉閯游锏孽r乳加熱至63℃以上，在上述鮮乳中添加乳酸菌或雙歧桿菌的一種或兩種以上進(jìn)行發(fā)酵；2)上述1)的含有抗體的發(fā)酵食品的制備方法，該方法是在上述鮮乳中事先添加有機(jī)酸并將pH值調(diào)節(jié)至5.8以下，然后添加乳酸菌或雙歧桿菌的一種或兩種以上；3)上述1)或2)的含有抗體的發(fā)酵食品的制備方法，該方法為使上述鮮乳脫脂并發(fā)酵；4)含有抗體的發(fā)酵食品，該食品是通過上述1)～3)中任一項的制備方法而得到的。
權(quán)利要求14的發(fā)明可以提供發(fā)酵食品的制備方法，即通過添加乳酸菌等使之發(fā)酵，使?；蚺Ｒ酝獾牟溉閯游锏孽r乳中的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等或病原菌(結(jié)核桿菌等)的有害細(xì)菌滅活，通過直接攝取鮮奶中所含的抗體可以享受抗體所具有的健康功能，而且保持了鮮乳原來的美味。權(quán)利要求15的發(fā)明通過向鮮乳中添加有機(jī)酸使之在pH5.8以下進(jìn)行發(fā)酵，可以阻害鮮奶中有害細(xì)菌的繁殖，可以為乳酸菌等的繁殖提供良好的環(huán)境。另外，權(quán)利要求16的發(fā)明通過使用脫脂的鮮乳，可以提供脂肪含量少的發(fā)酵食品。
本發(fā)明中，鮮乳是指將?；蚺Ｒ酝獾牟溉閯游锏娜閿D出后未加熱至63℃以上的乳，優(yōu)選擠乳后48小時以內(nèi)的乳。作為以牛乳為原料的代表性乳酸菌發(fā)酵食品--酸乳酪的情況，以鮮乳為原料時，通常被以混入的雜菌為首的大腸桿菌、金黃色葡萄球菌等其它食物中毒菌等有害細(xì)菌污染，事先實施超高溫滅菌等加熱處理用于將這些菌滅活。本發(fā)明中的鮮乳，由于如果加熱至63℃以上則抗體失活，鮮乳所具有的良好風(fēng)味飛散，而且還產(chǎn)生不快的加熱氣味，也使鮮乳本身味道的平衡破壞，因此無需加熱至63℃以上，供于發(fā)酵。即使大腸桿菌等有害細(xì)菌混入，通過添加的乳酸菌等的發(fā)酵，也可以抑制其繁殖，在發(fā)酵中使之滅活，因此沒有食物中毒的危險性。本發(fā)明中，由于未加熱至63℃以上，因此鮮乳中的抗體沒有失活，可以充分發(fā)揮抗體所具有的健康功能效果。
鮮乳優(yōu)選事先添加有機(jī)酸使pH值維持在5.8以下，然后添加乳酸菌等使之發(fā)酵。通過使pH值維持在5.8以下，可以抑制有害細(xì)菌的繁殖，使食物中毒等的危險(風(fēng)險)更小?？墒褂玫挠袡C(jī)酸例如可以是乳酸、檸檬酸、蘋果酸、琥珀酸、酒石酸、己二酸、乙酸、葡萄糖酸、富馬酸、磷酸，其中優(yōu)選乳酸。
如果將鮮乳脫脂后使用則可以制備脂肪含量少的發(fā)酵食品，適合用作希望低熱量食品的糖尿病患者或?qū)Ⅲw重減少作為目標(biāo)的人的食品。脫脂的方法可以是離心等通常的乳脂肪成分的分離方法。
本發(fā)明中添加的乳酸菌可以是屬于乳酸桿菌屬(Lactobacillus)的德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lb.delbrueckii subsp.bulgaricus)、德氏乳桿菌乳亞種(Lb.delbrueckii subsp.lactis)、德氏乳桿菌德氏亞種(Lb.delbrueckii subsp.delbrueckii)、嗜酸乳桿菌(Lb.acidphilus)、干酪乳桿菌(Lb.casei)、路氏乳桿菌(Lb.reuteri)、短乳桿菌(Lb.brevis)、加氏乳桿菌(Lb.gasseri)、約氏乳桿菌(Lb.johnsonii)、阿拉伯糖乳桿菌(Lb.arabinosus)、瑞士乳桿菌(Lb.helveticus)；屬于鏈球菌屬(Streptococcus)的嗜熱鏈球菌(Stc.thermophilus)；屬于乳球菌屬(Lactococcus)的乳酸乳球菌乳亞種(Lc.lactis subsp.lactis)、乳酸乳球菌乳脂亞種(Lc.lactis subsp.cremoris)、植物乳球菌(Lc.plantarum)、棉子糖乳球菌(Lc.raffinolactis)；片球菌屬(Pediococcus)的嗜鹽片球菌(P.halophilus)、戊糖片球菌(P.pentosaceus)；明串珠菌屬(Leuconostoc)的腸系膜狀明串珠菌(Leu.mesenteroides)、乳明串珠菌(Leu.lactis)；腸球菌屬(Enterococcus)的糞腸球菌(Ec.faecalis)、屎腸球菌(Ec.faecium)。
雙歧桿菌可以是雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)的兩歧雙歧桿菌(B.bifidus)、長雙歧桿菌(B.longum)、短雙歧桿菌(B.breve)、嬰兒雙歧桿菌(B.infantis)、青春雙歧桿菌(B.adolescentis)。
另外，還可以如所謂的ケフイアヨ-グルト等，添加酵母進(jìn)行復(fù)合發(fā)酵。
發(fā)酵在通常的發(fā)酵條件下、即20～50℃、8～24小時進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
發(fā)酵時，只要在不影響發(fā)酵的范圍內(nèi)，可以在發(fā)酵前的鮮乳中添加砂糖等甜味劑、香精等通常在食品中添加的副原料進(jìn)行發(fā)酵。
已知乳酸菌或雙歧桿菌有整腸作用、降低血液膽固醇的作用、降壓作用、抗癌作用、免疫活化作用等的效果(乳酸菌的科學(xué)與技術(shù)，學(xué)會出版中心)，本發(fā)明中得到的發(fā)酵食品是兼?zhèn)淙樗峋螂p歧桿菌所具有的健康功能和抗體所具有的健康功能，可以期待協(xié)同效果的非常有效的食品而且以鮮乳為原料、未加熱至高溫，因此是具有鮮乳原來美味的食品。
如上述所得的發(fā)酵食品，可以直接作為酸乳酪等食用。并且，還可以作為酸乳凍、酸乳蛋糕、凍酸乳酪或酸乳調(diào)味汁等食品原料使用。
在利用本發(fā)明的制備方法得到的含抗體發(fā)酵食品中，還可以添加砂糖等甜味劑、香精等通常在食品中添加的副原料，制備乳酸菌飲料、雙岐桿菌飲料、酸性飲料。并且，還可以使含抗體發(fā)酵食品干燥，制成粉末，得到含抗體的全粉乳、脫脂粉乳等干燥食品。
發(fā)明方案12本發(fā)明的課題在于提供含有更高濃度的抗體，并且使抗體所具有的功能與乳酸菌、雙岐桿菌所具有的功能組合而成的食品。
本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)如果配合如乳清蛋白這樣的含有更高濃度抗體的食品原料，且與乳酸菌、雙歧桿菌組合則可以解決上述課題，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)含有抗體的食品，其特征在于該食品含有1.5mg/g以上抗體和107/g以上選自乳酸菌和雙歧桿菌的一種或兩種以上的菌。
2)權(quán)利要求18的含有抗體的食品，該食品含有3mg/g以上抗體。
3)權(quán)利要求18或19的含有抗體的食品，其中抗體為乳清蛋白中的抗體。
4)權(quán)利要求18～20中任一項的含有抗體的食品，其中抗體為初乳中的抗體。
5)權(quán)利要求18～21中任一項的含有抗體的食品，該食品還含有其它的具有免疫活化功能的成分。
根據(jù)本發(fā)明，通過同時含有高濃度抗體和乳酸菌、雙歧桿菌，可以提供可以同時強(qiáng)化從體外攝取抗體獲得免疫的被動免疫和由乳酸菌、雙歧桿菌引起的激活體內(nèi)免疫的主動免疫的兩種免疫，發(fā)揮免疫活化作用的協(xié)同效果的食品。通過含有107/g以上乳酸菌、雙歧桿菌的一種或兩種以上，還可以得到抑制其它雜菌、特別是食物中毒菌的繁殖的效果。根據(jù)權(quán)利要求19的發(fā)明可以提供抗體濃度更高的食品。根據(jù)權(quán)利要求20的發(fā)明可以提供含有乳清蛋白中的高濃度抗體的食品。根據(jù)權(quán)利要求21的發(fā)明可以提供直接含有初乳中的高濃度抗體的高抗體含量的食品。根據(jù)權(quán)利要求22的發(fā)明通過進(jìn)一步混合上述以外的具有免疫活化功能的成分，可以提供發(fā)揮更優(yōu)異免疫活化功能的食品。
本發(fā)明的含抗體食品中，作為抗體優(yōu)選含有抗體濃度高的抗體原料例如乳清蛋白、初乳中所含的抗體。由于乳清蛋白、初乳的抗體濃度高，優(yōu)選作為含高濃度抗體食品的抗體原料。對于市售的乳清蛋白來說，鮮乳中所含的抗體轉(zhuǎn)移至此，以高濃度存在，無變性、失活，保持其活性。乳清蛋白可以使用市售品，但由于高溫下抗體發(fā)生變性，因此優(yōu)選在制備工序中熱歷程少的市售品，例如優(yōu)選配合用離子交換法或超濾膜法制備的乳清蛋白。更優(yōu)選的是含有1％以上的保持活性的抗體的乳清蛋白。
成為乳清蛋白的原料的乳可以是牛、山羊等任一種哺乳動物的乳。該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的奶，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的奶。
當(dāng)將初乳用作抗體原料時，可以是牛、山羊等任一種哺乳動物的初乳，該初乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的初乳，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的初乳。初乳是指分泌開始后至第4～5天期間所分泌的乳。已知初乳與常乳比較含有數(shù)十至百倍的高濃度的抗體(太田實，化學(xué)與生物37(2)，107-112(1999))。
乳清蛋白、初乳和含有它們的食品原料只要在不降低抗體含量的范圍內(nèi)可以加熱滅菌，但加熱溫度優(yōu)選物品溫度不能在76℃以上。還可以實施利用過濾或電子射線、γ射線、紫外線、高電壓脈沖、振動磁場、閃光脈沖、超聲波、高壓處理等的非加熱滅菌。
本發(fā)明的含抗體食品中，在1g食品中含有1.5mg以上抗體。優(yōu)選含量為1.5～500mg/g?？贵w含量在3mg/g以上時，可以更期待抗體的免疫活化功能，也提高與乳酸菌或雙歧桿菌的協(xié)同效果，更優(yōu)選。更優(yōu)選的含量為3～500mg/g。
本發(fā)明中，作為乳酸菌可以使用發(fā)明方案11中的乳酸菌。還可以利用其他乳酸菌。
作為雙歧桿菌可以使用發(fā)明方案11中的雙歧桿菌。還可以利用其他雙歧桿菌。
乳酸菌和雙歧桿菌可以是細(xì)菌素生產(chǎn)株，也可以是不生產(chǎn)細(xì)菌素的菌株。另外，乳酸菌和雙歧桿菌無論是活菌還是滅活菌只要判明具有免疫活化作用，可以添加其任意一種。
本發(fā)明的含抗體食品，在1g食品中含有107/g以上選自乳酸菌和雙歧桿菌的菌的一種或兩種以上。通過使這些乳酸菌或/和雙歧桿菌的含量為107/g以上，可以期待免疫活化作用等效果。優(yōu)選的含量為107～1012/g。
本發(fā)明的含抗體食品中，只要是含有抗體和選自乳酸菌與雙歧桿菌的任意一種或兩種以上的菌類的食品，對這些菌類添加形態(tài)沒有特別限定，可以是添加到成為含抗體食品的主要原料的牛乳或豆乳等中進(jìn)行發(fā)酵的發(fā)酵食品，也可以是在主要原料中混合菌體培養(yǎng)液或干燥菌體的非發(fā)酵食品。此外，還可以將本發(fā)明的含抗體食品的成分作為主要成分。
本發(fā)明的含抗體食品可以進(jìn)一步含有抗體、乳酸菌、雙歧桿菌以外的具有免疫活化功能的成分(以下稱為其它免疫活化成分)。通過進(jìn)一步含有其他免疫活化成分，可以進(jìn)一步提高免疫活化功能。其他免疫活化成分可以是落葉松蕈、桑黃、靈芝等擔(dān)子菌類；DNA、核苷酸等核酸組合物；蜂膠；殼多糖；殼聚糖；乳鐵蛋白；墨角藻聚糖；紫錐菊；タヒボ；米糠；酵母；維生素C、維生素E、β-胡蘿卜素、多酚等類SOD樣物質(zhì)；SOD；石蓮花等免疫活化功能的已知成分。
另外，本發(fā)明可以添加上述發(fā)明方案7中記載的功能性素材。
本發(fā)明的含抗體食品為發(fā)酵食品時，對其制備方法沒有限定，可通過通常的制備方法制備。此時，乳清蛋白或初乳等的抗體原料優(yōu)選將發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)加熱滅菌后再添加。只要是加熱滅菌后，可以在發(fā)酵前添加，也可以在發(fā)酵后添加，還可以在發(fā)酵中途添加。
當(dāng)發(fā)酵前將乳清蛋白或初乳等添加到發(fā)酵培養(yǎng)基中時，隨后通常添加乳酸菌等發(fā)酵引子，在20～50℃下發(fā)酵培養(yǎng)8～24小時。還可以如所謂的ケフイアヨ-グルト等這樣，添加酵母進(jìn)行復(fù)合發(fā)酵。
當(dāng)為非發(fā)酵食品時，可以只將乳清蛋白或初乳和菌體培養(yǎng)液或干燥菌體添加到含抗體食品的其它原料中進(jìn)行制備。對這些菌類的添加方法沒有制限。這里所說的非發(fā)酵食品是指與其他原料分開，使乳酸菌或/和雙歧桿菌增殖，將得到的這些菌類制成非發(fā)酵狀態(tài)添加到其他原料中。非發(fā)酵狀態(tài)可以舉出菌體培養(yǎng)液的冷卻或菌體的干燥等。
本發(fā)明中，作為食品，除了可以作為發(fā)酵的食品、酸乳酪等食用之外，還包含酸乳凍、酸乳蛋糕、凍酸乳酪、干燥發(fā)酵乳或酸乳調(diào)味汁等。另外，在非發(fā)酵的情形中有各種形態(tài)的食品，例如可以舉出加工乳、冰淇淋、點心類、清涼飲料水、片劑、粉末食品等。
本發(fā)明的含抗體食品可以含有砂糖等甜味劑、香精、增粘多糖類等通常在食品中添加的副原料。
發(fā)明方案13本發(fā)明的課題在于提供含有高濃度抗體的食品及其制備方法，其中所述食品為可以保持味道并食用的明確的食品。
本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)通過將如乳清蛋白這樣的含有更高濃度抗體的食品原料在一定條件下配合在加工食品中，可以解決上述課題，還發(fā)現(xiàn)根據(jù)加熱條件可以使抗體不失活、50％以上殘存，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)含抗體的明確的食品，其特征在于該食品含有1.5mg/g以上來自乳的抗體，但是不含有107/g以上乳酸菌和雙歧桿菌類。
2)上述1)的含抗體的明確的食品，該食品含有3mg/g以上來自乳的抗體。
3)上述1)的含抗體的明確的食品，該食品含有10mg/g以上來自乳的抗體。
4)上述1)～3)中任一項的含抗體的明確的食品，其中來自乳的抗體為乳清蛋白中的抗體。
5)上述1)～4)中任一項的含抗體的明確的食品，該食品還含有來自乳的抗體以外的具有免疫活化功能的成分。
6)上述1)～5)中任一項的含抗體的明確的食品，其中含抗體的明確的食品為乳制品或冰點心。
7)上述1)～6)的含抗體的明確的食品的制造方法，其特征在于該方法在50％以上抗體殘存的條件下對含有來自乳的抗體的明確的食品或者該明確的食品中含有來自乳抗體的部分進(jìn)行加熱滅菌。
8)上述7)的含抗體的明確的食品的制造方法，其中加熱滅菌在使含有抗體部分的糖含量調(diào)節(jié)為7.5％質(zhì)量以上的條件下進(jìn)行。
根據(jù)權(quán)利要求23的發(fā)明，通過含有高濃度的抗體，可以提供能夠期待免疫活化作用的食品。根據(jù)權(quán)利要求24的發(fā)明可以提供抗體濃度更高的食品。另外，根據(jù)權(quán)利要求25的發(fā)明可以提供抗體濃度特別高的食品。根據(jù)權(quán)利要求26的發(fā)明可以提供含有乳清蛋白中的高濃度抗體的食品。并且，根據(jù)權(quán)利要求27的發(fā)明，通過進(jìn)一步混合來自乳的抗體以外的具有免疫活化功能的成分，可以提供可以發(fā)揮更優(yōu)異免疫活化功能的食品。按權(quán)利要求28的發(fā)明，含抗體的明確的食品既可以保持作為乳制品、冰點心的美味又可以享受免疫活化效果。根據(jù)權(quán)利要求29的發(fā)明可以制備即使加熱也使抗體50％殘存的食品。根據(jù)權(quán)利要求30的發(fā)明，在7.5％質(zhì)量的糖存在下可以提高抗體的穩(wěn)定性，因此可以制備抗體殘存量高的明確的食品。
本發(fā)明的含抗體食品中，作為來自乳的抗體優(yōu)選含有抗體濃度高的抗體原料，例如乳清蛋白、初乳中所含的抗體。由于乳清蛋白、初乳的抗體濃度高，優(yōu)選作為含高濃度抗體食品的抗體原料。市售的乳清蛋白中，鮮乳所含的抗體轉(zhuǎn)移到其中，以高濃度存在，無變性、失活保持其活性。乳清蛋白可以使用市售品，但由于高溫下抗體發(fā)生變性，因此優(yōu)選在制備工序中熱歷程少的市售品，例如將用離子交換法或超濾膜法制備的乳清蛋白進(jìn)行混合。更優(yōu)選的是保持活性的抗體含有1％以上的乳清蛋白。
成為乳清蛋白原料的乳可以是牛、山羊、綿羊、馬等任一種哺乳動物的乳。該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的奶。
當(dāng)將初乳用作原料時，可以是牛、山羊、綿羊、馬等任一種哺乳動物的初乳，該初乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的初乳，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的初乳。初乳是指分泌開始后至第4～5天期間所分泌的乳。已知初乳與常乳比較含有數(shù)十至百倍的高濃度的抗體(太田實，化學(xué)與生物37(2)，107-112(1999))。
本發(fā)明的含抗體的明確的食品在1g食品中含有1.5mg以上來自乳的抗體。優(yōu)選含量為1.5～200mg/g。抗體含量在3mg/g以上時，可以更期待抗體的免疫活化功能，更優(yōu)選。更優(yōu)選的含量為3～200mg/g?？贵w含量在10mg/g以上時，可以進(jìn)一步期待高抗體的免疫活化功能，進(jìn)一步優(yōu)選。進(jìn)一步優(yōu)選的含量為10～200mg/g。
本發(fā)明的含抗體食品可以進(jìn)一步含有抗體以外的具有免疫活化功能的成分。通過進(jìn)一步含有抗體以外的免疫活化成分，可以進(jìn)一步提高免疫活化功能?？贵w以外的免疫活化成分例如可以是香菇、冬菇、落葉松蕈、桑黃、靈芝等擔(dān)子菌類；原核細(xì)胞的DNA、真核細(xì)胞的DNA、核苷酸等核酸組合物；蜂巢蠟?zāi)z；殼多糖；殼聚糖；乳鐵蛋白；墨角藻聚糖；紫錐菊；タヒボ；米糠；酵母；維生素C、維生素E、類胡蘿卜素、綠茶成分、多酚等SOD樣物質(zhì)；含SOD的藥物組合物(US-B6045809)；石蓮花、人參、郁金等中藥成分等已知具有免疫活化功能的成分，只要具有免疫活化功能即可，對它們沒有特別限定。還可以使用它們的萃取物、其干燥粉末等。
本發(fā)明還可以添加上述發(fā)明方案7中記載的功能性素材。
本發(fā)明中，明確的食品是“被明確地認(rèn)知為食品的物質(zhì)”的統(tǒng)稱，從外觀、形狀和成分本質(zhì)方面看，是社會上一般的看法上被容易認(rèn)為“食品”的物質(zhì)，也是日本厚生省藥務(wù)局監(jiān)視指導(dǎo)課、東京都衛(wèi)生局藥務(wù)部監(jiān)修的“醫(yī)藥品·化妝品等廣告的實際‘94’”(藥業(yè)時報社)中記載的用語。包含不是醫(yī)藥品或營養(yǎng)輔助食品中通常使用的形態(tài)--片劑、膠囊劑、粉末等形狀的飲料食品、加工食品、烹調(diào)食品、點心、飲料、調(diào)味料等。
本發(fā)明的明確的食品有各種形態(tài)的食品，例如可以舉出加工乳、乳飲料等乳制品(乳酸菌、雙歧桿菌類的含量為不足107/g的物質(zhì))；果汁飲料、蔬菜汁飲料、清涼飲料、豆奶等嗜好飲料；調(diào)味汁、撒在飯上的粉狀食品等調(diào)味料；冰淇淋、軟冰糕等冰點心；果凍等甜點心類；人造奶油、涂味食品、頂端配料調(diào)味汁(澆頭)、煉乳、加糖后起泡的奶油、調(diào)咖啡的人造奶、巧克力、口香糖等點心等。
對本發(fā)明的含抗體的明確的食品的制備方法沒有限定，可以利用常規(guī)制備方法?？梢栽诿鞔_的食品的制備或調(diào)理時添加抗體原料的乳清蛋白或初乳作為原料之一到，通過進(jìn)行制備、調(diào)理而得到。在調(diào)理或制備時，優(yōu)選添加抗體原料后在抗體50％以上殘存的條件下進(jìn)行加熱滅菌。作為抗體50％以上殘存的加熱滅菌條件，例如可以舉出60℃、30分鐘或者與其同等以下的加熱條件，但圖6所示，根據(jù)食品不同，可以進(jìn)一步提高溫度。由于通過含有7.5％以上糖，抗體對熱變得穩(wěn)定，使在更高溫度下的加熱成為可能，所以可以添加糖進(jìn)行加熱滅菌。
另外，在將含乳清蛋白或初乳等抗體的部分添加到其它食品原料之前，事先將含該抗體的部分在抗體50％以上殘存的條件下進(jìn)行加熱滅菌，不含抗體的部分(上述其它食品原料部分)在通常的滅菌條件下進(jìn)行加熱滅菌，之后通過將兩者無菌混合，可以得到含抗體的明確的食品。
還可以實施利用過濾或電子射線、γ射線、紫外線、高電壓脈沖、振蕩磁場、閃光脈沖、超聲波、高壓處理、DP CO2(密相CO2)等的非加熱滅菌來得到含抗體的明確的食品。
圖6表示向食品中添加乳清蛋白在各溫度下加熱30分鐘時各食品中的抗體殘存率。作為食品，分別選擇市售的牛乳、肉湯、蔬菜果汁飲料，分別添加2％質(zhì)量、3％質(zhì)量、3％質(zhì)量的乳清蛋白，另外，對于乳清蛋白的10％質(zhì)量水溶液，測定在60～72℃范圍內(nèi)進(jìn)行加熱時各食品中的抗體量，算出抗體的殘存率?？贵w量的測定方法按照后述實施例中所示的方法。圖6中，●表示牛乳中添加2％質(zhì)量乳清蛋白(pH6.5)；■表示肉湯中添加3％質(zhì)量乳清蛋白(pH5.3)；▲表示蔬菜果汁飲料中添加3％質(zhì)量乳清蛋白(pH4.5)；◆表示乳清蛋白的10％質(zhì)量水溶液(pH6.4)。
從圖6中可以明確，在牛乳(乳清蛋白添加后的pH6.5)中，在68℃下加熱30分鐘，抗體50％以上殘存；在乳清蛋白的10％質(zhì)量水溶液(同pH6.4)中，在67℃下加熱30分鐘，抗體50％左右殘存；在肉湯(同pH5.3)的情況下，在66℃加熱30分鐘，抗體50％殘存。而在蔬菜果汁飲料(同pH4.5)中，60℃、30分鐘的加熱得到50％以上殘存率。這樣，通過選擇各對象食品加熱滅菌的條件可以使抗體50％以上殘存。從以上的結(jié)果來看，即使對象食品不同，通過進(jìn)行預(yù)備試驗，可以決定抗體50％以上殘存的加熱條件，優(yōu)選在與該條件同等或比該條件低的條件下進(jìn)行加熱滅菌。
另一方面，本發(fā)明人等對能使抗體的熱穩(wěn)定性提高的物質(zhì)進(jìn)行了檢索，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過添加糖可以實現(xiàn)此目的。
圖7表示向市售的牛乳中添加乳清蛋白再添加蔗糖，在各溫度下加熱30分鐘時抗體的殘存率。在該試驗中，由于蔗糖以未添加、3％質(zhì)量、5.5％質(zhì)量、10.5％質(zhì)量、25.5％質(zhì)量、40.5％質(zhì)量添加，與牛奶中原來所含4.5％質(zhì)量的糖加在一起，則在牛乳中的糖含量分別成為4.5％質(zhì)量、7.5％質(zhì)量、10％質(zhì)量、15％質(zhì)量、30％質(zhì)量、45％質(zhì)量。向這些牛乳中均添加2％質(zhì)量的乳清蛋白，測定在60～80℃范圍內(nèi)加熱時各牛乳中的抗體量，算出抗體的殘存率。圖7中，●表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加2％質(zhì)量乳清蛋白；■表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加3.0％質(zhì)量蔗糖、2％質(zhì)量乳清蛋白；▲表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加5.5％質(zhì)量蔗糖、2％質(zhì)量乳清蛋白；◆表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加10.5％質(zhì)量蔗糖、2％質(zhì)量乳清蛋白；○表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加25.5％質(zhì)量蔗糖、2％質(zhì)量乳清蛋白；□表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加40.5％質(zhì)量蔗糖、2％質(zhì)量乳清蛋白。
圖8表示使用赤蘚糖醇代替蔗糖，進(jìn)行與上述同樣的試驗的結(jié)果。除此之外，使用果糖、半乳低聚糖時也得到了同樣的穩(wěn)定性。圖8中，●表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加2％質(zhì)量乳清蛋白；■表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加3.0％質(zhì)量赤蘚糖醇、2％質(zhì)量乳清蛋白；▲表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加5.5％質(zhì)量赤蘚糖醇、2％質(zhì)量乳清蛋白；◆表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加10.5％質(zhì)量赤蘚糖醇、2％質(zhì)量乳清蛋白；○表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加25.5％質(zhì)量赤蘚糖醇、2％質(zhì)量乳清蛋白；□表示牛乳(含糖4.5％質(zhì)量)中添加40.5％質(zhì)量赤蘚糖醇、2％質(zhì)量乳清蛋白。
如圖7和圖8所示，只要糖含量為7.5％質(zhì)量，在70℃下加熱30分鐘，無論哪一種抗體都50％以上殘存。而且，隨著糖含量增加抗體的熱穩(wěn)定性也提高，糖含量為45％質(zhì)量時，即使在77℃下加熱30分鐘抗體也有50％以上殘存。
從以上的結(jié)果可以明確，在含抗體的明確的食品的制備或調(diào)理工序中，如果將含有抗體的部分的糖含量調(diào)節(jié)為7.5％質(zhì)量以上，則能夠提高抗體對熱的穩(wěn)定性，可以在更高的溫度下進(jìn)行加熱，在相同加熱溫度中可以使產(chǎn)品食品中的抗體殘存率提高。
發(fā)揮所述效果的糖可以使用葡萄糖、果糖等單糖類；蔗糖、乳糖等二糖類；果低聚糖、異麥芽低聚糖等低聚糖類；甘油、山梨糖醇、赤蘚糖醇等糖醇類。糖可以添加單獨一種或?qū)⒍喾N混合添加，也可以利用食品原料中原來含有的糖。
還可以含有甜味劑、酸味劑、香精、增粘多糖類等通常食品中添加的原料。
發(fā)明方案4發(fā)明的課題在于提供從低年齡層到高齡者均可以接受，使乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、えぐみ、收斂味減低，改善風(fēng)味，而且可以改善吸水性、分散性，使在食品中混合時的“面疙瘩”狀態(tài)短時間內(nèi)消除，容易混合容易食用的乳清蛋白食品。
本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了深入地研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過將低聚糖等糖添加到乳清蛋白中，減低乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、えぐみ、收斂味的同時，提高吸水性，可以使在水或牛乳、番茄汁等液狀食品或者酸乳酪等糊狀食品中混合時的“面疙瘩”狀態(tài)短時間內(nèi)解消，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白和糖，其中糖相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為5～1000質(zhì)量份。
2)上述1)的乳清蛋白食品，其中糖為一種或兩種以上的難消化性糖類。
3)上述2)的乳清蛋白食品，其中難消化性糖類選自果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖。
4)上述1)～3)中任一項的乳清蛋白食品，其中形狀為顆粒狀。
5)上述1)～4)中任一項的乳清蛋白食品，其中抗體的含量為5mg/g以上。
6)上述1)～5)中任一項的乳清蛋白食品，其特征在于抗體的含量為10mg/g以上。
7)上述1)～5)中任一項的乳清蛋白食品，其特征在于抗體的含量為50mg/g以上。
根據(jù)權(quán)利要求32的發(fā)明，通過將乳清蛋白與糖混合，可以減低乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、えぐみ、收斂味，改善風(fēng)味，而且使乳清蛋白更美味、在液狀食品或糊狀食品中混合時的吸水性得到改善容易混合。根據(jù)權(quán)利要求33的發(fā)明，通過使添加的糖為難消化性糖類，可以期待抗體所具有的免疫活化功能與難消化性糖類所具有的生理功能的協(xié)同效果。根據(jù)權(quán)利要求34的發(fā)明可以更顯著地改善風(fēng)味。根據(jù)權(quán)利要求36的發(fā)明，通過將含有糖的乳清蛋白食品制成顆粒狀，進(jìn)一步提高吸水性，使與液狀食品或糊狀食品的混合變得更容易、容易食用。根據(jù)權(quán)利要求37的發(fā)明，通過使抗體的含量為5mg/g以上，可以充分地得到抗體所具有的免疫活化功能。根據(jù)權(quán)利要求38的發(fā)明，通過使抗體的含量為10mg/g以上，可以更充分地得到抗體所具有的免疫活化功能。根據(jù)權(quán)利要求39的發(fā)明，通過使抗體的含量為50mg/g以上，可以進(jìn)一步充分地得到抗體所具有的免疫活化功能。
乳清蛋白通?？梢詮母衫胰榍?、酸乳清等乳清中分離(分餾)，使得到的乳清蛋白溶液干燥來制備，但本發(fā)明中的乳清蛋白可以是從任一種乳清中分餾而得到的乳清蛋白。對從乳清中將乳清蛋白分餾的方法沒有限定。除了使乳糖結(jié)晶、使之除去的方法之外，還可以使用例如微量過濾法、交叉流微量過濾法、離子交換法、超濾法等任一種方法。成為乳清的原料的乳可以是牛、山羊、綿羊、馬、水牛等任一種哺乳動物的乳，該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的奶，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的奶。
乳清蛋白可以使用市售品的乳清蛋白。這些乳清蛋白可以舉出乳清蛋白濃縮物(WPC)、乳清蛋白分離物(WPI)、脫鹽乳清粉等。
乳清蛋白中殘存鮮乳所含的抗體，由于在干燥粉末中它們被濃縮物含有，因此可以作為抗體的好的補(bǔ)充源利用。
本發(fā)明中所用的糖，除了后述的難消化性糖類之外，還可以使用葡萄糖、果糖、蔗糖、異構(gòu)糖、糊精等任一種的糖類，只要是作為食品能使用的糖即可。這些糖可以一種或兩種以上結(jié)合使用。通過含有糖，可以使乳清蛋白的乳臭或澀味、えぐみ、收斂味減輕，使吸水性提高，改善乳清蛋白在液狀食品或糊狀食品中混合時的分散性。
難消化性糖類只要是可作為食品使用的難消化性糖類即可，可以使用其任一種。例如可以舉出果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、大豆低聚糖、半乳低聚糖、大豆低聚糖、木低聚糖、密三糖、異麥芽酮糖(帕拉金糖)、黑低聚糖、龍膽低聚糖、海藻糖、偶合糖(coupling sugar)、果膠低聚糖、環(huán)糊精等低聚糖；山梨糖醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇、還原異麥芽酮糖、乳糖醇、甘露糖醇、木糖醇等糖醇；菊糖；難消化性糊精；抗性淀粉等。這些糖可以使用通常的市售品。本發(fā)明中難消化性糖類是指機(jī)體內(nèi)的消化酶難以消化的糖類，所以脂溶性物質(zhì)或被玉米蛋白、麥膠蛋白等プロミラン覆蓋的易消化性糖類，在這里也可以作為難消化性糖類使用。
難消化性糖類成為腸內(nèi)雙歧桿菌的增殖因子，該雙歧桿菌作用于消化道免疫系統(tǒng)使主動免疫活性化。另一方面，乳清蛋白中的抗體可以增強(qiáng)被動免疫，因此通過同時攝取難消化性糖類和乳清蛋白，可以使主動免疫和被動免疫同時激活，期待強(qiáng)的免疫活化作用。另外，由于難消化性糖類還具有整腸作用、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收作用、抗齲齒作用、抑制血液中膽固醇升高作用、改善肝功能作用等功能，所以可以使乳清蛋白的風(fēng)味和吸水性改善，結(jié)合免疫活化作用，有望取得這些作用的協(xié)同效果。
難消化性糖類中，由于果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖對風(fēng)味的改善優(yōu)異，因此優(yōu)選。特別是不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖即使比其它低聚糖量少也可以看到風(fēng)味的改善效果。
本發(fā)明的乳清蛋白食品中，優(yōu)選這些糖類相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為5～1000質(zhì)量份，更優(yōu)選為5～900質(zhì)量份。當(dāng)糖類的含量不足5質(zhì)量份時，乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味的降低效果和吸水性的改善效果不充分。另一方面，如果超過1000質(zhì)量份則乳清蛋白的含有比例變少，由于乳清蛋白食品中的抗體含量降低，所以攝取乳清蛋白的目的難以實現(xiàn)，因此不優(yōu)選。
本發(fā)明的乳清蛋白食品可以通過在粉末狀乳清蛋白中添加糖并混合來制備。還可以通過在從乳清中分餾的乳清蛋白溶液中添加上述糖，進(jìn)行干燥制成粉末的方法來制備。對添加糖的乳清蛋白溶液進(jìn)行干燥的方法沒有限定，例如可以通過噴霧干燥法、冷凍干燥法等方法。
本發(fā)明的乳清蛋白食品，如果將其形狀制成顆粒狀則可以進(jìn)一步提高乳清蛋白的吸水性，容易與其它食品混合。由于乳清蛋白的吸水性差，如果單獨添加到水、牛乳等中則容易形成“面疙瘩”狀態(tài)。但是，含有上述低聚糖等糖的乳清蛋白食品其吸水性得到改善，如果再將其制成顆粒狀則吸水性進(jìn)一步改善，分散性得以改善，所以即使添加到水、牛乳、番茄汁、酸乳酪等其它食品中也不形成“面疙瘩”，容易混合。
顆粒化可以通過噴霧造粒法、擠出造粒法等通常的方法進(jìn)行。雖然上述低聚糖等糖可以成為顆?；瘯r的粘結(jié)劑，但也可以添加CMC(羧基甲基纖維素)等作為粘結(jié)劑。在顆粒化中，優(yōu)選品溫在低于70℃的條件下進(jìn)行顆?；Ｈ绻窚爻^70℃則乳清蛋白中的抗體有失活的可能性。如果品溫不超過70℃，只要將處理量、送風(fēng)溫度、送風(fēng)量等設(shè)定為適宜的條件即可。
本發(fā)明的乳清蛋白食品在1g食品中含有5mg以上來自乳的抗體，可以期待抗體的免疫活化功能，因此優(yōu)選。來自乳的抗體在10mg以上時可以更期待抗體的免疫活化功能，更優(yōu)選，特別優(yōu)選含有50mg以上。在1g乳清蛋白食品中，優(yōu)選的抗體含量為5～500mg，進(jìn)一步優(yōu)選10～500mg，特別優(yōu)選50～500mg。
本發(fā)明的乳清蛋白食品可以含有高甜度甜味劑、酸味劑、香精、乳化劑、增粘多糖類等通常食品中添加的食品添加物原料。
本發(fā)明的乳清蛋白食品，通過消去乳清蛋白所具有的奶臭與澀味、えぐみ、收斂味，改善風(fēng)味，得到更美味、容易攝取的食品。另外，將其添加到其它食品中時，與乳清蛋白單獨的粉末相比吸水性良好。并且，如果將其形狀制成顆粒狀，則進(jìn)一步提高吸水性，容易與液狀食品或糊狀食品混合。此外，乳清蛋白食品中含有的糖如果使用難消化性糖類則成為腸內(nèi)雙歧桿菌的增殖因子，具有抗齲齒、低能量、整腸作用等生理功能，所以本發(fā)明的乳清蛋白食品也可以發(fā)揮這些生理功能。
發(fā)明方案9發(fā)明方案9包含4的1)～4)、還追加下述。
5)上述1)～3)中任一項的乳清蛋白食品，其中乳清蛋白為顆粒狀，糖為粉末。
6)上述5)的乳清蛋白食品，其中相對于100質(zhì)量份乳清蛋白，糖為30質(zhì)量份以上。
7)上述1)～6)中任一項的乳清蛋白食品，其中來自乳的抗體含量為5mg/g以上。
8)上述1)～7)中任一項的乳清蛋白食品，其中來自乳的抗體含量為10mg/g以上。
9)上述1)～8)中任一項的乳清蛋白食品，其中來自乳的抗體含量為50mg/g以上。
根據(jù)權(quán)利要求40的發(fā)明，通過將乳清蛋白制成顆粒狀，向其中添加糖粉末，進(jìn)一步提高吸水性，使粉末在不容易分散的牛乳中等也變得容易分散。根據(jù)權(quán)利要求41的發(fā)明，可以制成分散性更優(yōu)異的易溶性乳清蛋白食品。根據(jù)權(quán)利要求37的發(fā)明，通過使來自乳的抗體含量為5mg/g以上，可以充分地得到該抗體所具有的免疫活化功能。根據(jù)權(quán)利要求38的發(fā)明，通過使來自乳的抗體含量為10mg/g以上，可以更充分地得到該抗體所具有的免疫活化功能。根據(jù)權(quán)利要求39的發(fā)明，通過使來自乳的抗體含量為50mg/g以上，可以進(jìn)一步充分地得到該抗體所具有的免疫活化功能。
本發(fā)明中，乳清蛋白、糖可以使用發(fā)明方案4的乳蛋白、糖。糊精有各種DE(葡萄糖當(dāng)量)值的市售品，均可以使用，還可以使用環(huán)狀糊精或簇糊精(cluster dextrin)。
作為難消化性糖類，除了方案4中舉出的之外，還可以舉出海藻酸；聚葡萄糖；阿拉伯糖基木聚糖；普魯藍(lán)；カ-ドラン(西班牙葡萄酒)等。
糖類可以使用與方案4同樣的量和混合方法。
本發(fā)明的乳清蛋白食品，可以將乳清蛋白制成顆粒狀，向其中添加上述粉末狀糖。由此，乳清蛋白食品的吸水性進(jìn)一步提高，容易與其它食品混合。特別是即使將乳清蛋白粉末添加到難以分散的牛乳中等也可以迅速混合。對顆粒的粒徑?jīng)]有限定，但通常優(yōu)選平均粒徑為0.02～2mm左右。若糖相對于100質(zhì)量份顆粒狀的乳清蛋白為30質(zhì)量份以上，則可以得到吸水性優(yōu)異的乳清蛋白食品，因此優(yōu)選。糖增多則損害顆粒狀乳清蛋白的特性，因此優(yōu)選糖在300質(zhì)量份以下。
來自乳的抗體、其它添加物也可以與發(fā)明方案4同樣使用。
發(fā)明方案15本發(fā)明人等通過向乳清蛋白中添加一種或兩種以上選自果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖的低聚糖，發(fā)現(xiàn)可以降低乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味的同時，提高吸水性，使在牛乳等液狀食品或酸乳酪等糊狀食品中混合時的“面疙瘩”狀態(tài)短時間內(nèi)消除，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白和低聚糖，該低聚糖為一種或多種選自果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖，其中低聚糖相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為5～900質(zhì)量份。
2)權(quán)利要求35的乳清蛋白食品，其形狀為顆粒狀。
根據(jù)本發(fā)明，通過添加規(guī)定量的一種或兩種以上選自果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖的低聚糖，可以降低乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味，改善風(fēng)味，而且，使乳清蛋白更美味，改善在液狀食品或糊狀食品中混合時的吸水性、容易混合。通過制成顆粒狀進(jìn)一步提高吸水性，更容易與液狀食品或糊狀食品混合、容易食用。
本發(fā)明中，可以使用上述的通常的乳清蛋白。從牛乳中分離的方法可以使用微量過濾法、交叉流微量過濾法、離子交換法等任意一種方法。
本發(fā)明中，所用的乳清蛋白原料乳可以是牛、山羊、綿羊、馬等任一種哺乳動物的乳。該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳。
本發(fā)明所用的果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖的低聚糖可以使用通常的市售品。特別是，不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖的低聚糖即使以比其它低聚糖更少的量少可以看到風(fēng)味的改善效果。
本發(fā)明的乳清蛋白食品，相對于100質(zhì)量份乳清蛋白含有5～900質(zhì)量份這些低聚糖。如果低聚糖的含量不足5質(zhì)量份則乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味的降低效果和吸水性的改善效果不充分。另一方面，如果超過900質(zhì)量份則乳清蛋白的含量變低，攝取乳清蛋白的目的難以實現(xiàn)。
如果將本發(fā)明的乳清蛋白食品形狀制成顆粒狀則可以進(jìn)一步提高乳清蛋白食品的吸水性，容易與其它食品混合。由于乳清蛋白的吸水性差，如果單獨添加到水、牛乳等中則容易形成“面疙瘩”狀態(tài)。但是，含有上述低聚糖的乳清蛋白食品其吸水性得到改善，如果制成顆粒狀后再添加到牛乳或酸乳酪等其它食品中，則可以進(jìn)一步改善吸水性，不形成“面疙瘩”，容易混合。
上述低聚糖成為顆?；瘯r的粘結(jié)劑，還可以添加CMC(羧基甲基纖維素)或糖等作為粘結(jié)劑。顆?；梢岳脟婌F造粒法、擠出造粒法等通常的方法。
本發(fā)明的乳清蛋白食品可以含有方案4的通常食品中添加的原料。
發(fā)明方案3本發(fā)明的課題在于提供消臭效果高的便臭改善劑。
本發(fā)明人等從各個角度對乳清蛋白的功能性進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該乳清蛋白具有顯著的改善便臭的作用，從而完成了本發(fā)明。進(jìn)一步細(xì)查明確了乳清蛋白中所含抗體為主要的有效成分。
即，本發(fā)明如下。
1)便臭改善劑，其特征在于該便臭改善劑含有乳清蛋白。
2)上述1)的便臭改善劑，該便臭改善劑以乳清蛋白中的抗體為有效成分。
3)權(quán)利要求42或43的便臭改善劑，該便臭改善劑包含0.5％質(zhì)量以上的抗體。
4)權(quán)利要求42～44中任一項的便臭改善劑，該便臭改善劑還含有難消化性糖類。
根據(jù)本發(fā)明，通過將乳清蛋白中的抗體用作有效成分，可以提供優(yōu)異的便臭改善劑。若抗體含量為0.5％質(zhì)量以上則其改善效果顯著，進(jìn)一步混合難消化性糖類則其改善效果更大。
本發(fā)明中，乳清蛋白可以使用通常的市售品，即乳清蛋白濃縮物(WPC)、乳清蛋白分離物(WPI)、脫鹽乳清粉等，但優(yōu)選抗體含量高的。關(guān)于從乳清中分離乳清蛋白的方法可以使用微量過濾法、交叉流微量過濾法、離子交換法等任一種的方法。
本發(fā)明中，所用的乳清蛋白原料乳可以是牛、山羊、綿羊、馬、水牛等任一種哺乳動物的乳。該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳。
通常，乳清蛋白用于火腿、腸等物性改良或制面包、酸乳酪等品質(zhì)改良中，近來，發(fā)現(xiàn)其氨基酸序列與人乳接近，營養(yǎng)價值豐富，包含所用的必需氨基酸，吸收率非常好，而且支鏈氨基酸的含有率也高，因此作為用于補(bǔ)充蛋白質(zhì)的營養(yǎng)輔助食品，主要針對體育選手或運動負(fù)荷高的人制成商品。
乳清蛋白中還殘存有來自原料鮮乳的抗體。本發(fā)明的便臭改善效果由于所述乳清蛋白中含有的抗體而發(fā)揮作用。因此，優(yōu)選本發(fā)明的便臭改善劑中含有0.5％質(zhì)量以上乳清蛋白的抗體用于改善便臭。另外，成人每日攝取50mg以上乳清蛋白的抗體則對改善便臭是有效的。
本發(fā)明的便臭改善，若混合難消化性糖類則其效果更顯著。難消化性糖類只要是能作為食品使用的難消化性糖類即可，可以使用任一種的糖類。例如可以舉出果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、大豆低聚糖、半乳低聚糖、大豆低聚糖、木低聚糖、密三糖、異麥芽酮糖(帕拉金糖)、黑低聚糖、龍膽低聚糖、海藻糖、偶合糖(coupling sugar)、果膠低聚糖、環(huán)糊精等低聚糖；山梨糖醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇、還原異麥芽酮糖、乳糖醇、甘露糖醇、木糖醇等糖醇；菊糖；難消化性糊精；抗性淀粉等。這些糖可以使用通常的市售品。本發(fā)明中難消化性糖類是指機(jī)體內(nèi)的消化酶難以消化的糖類，所以脂溶性的物質(zhì)、被プロミラン覆蓋的玉米蛋白、麥膠蛋白等易消化性糖類，在這里也可以作為難消化性糖類使用。優(yōu)選難消化性糖類相對于100質(zhì)量份乳清蛋白添加5～1000質(zhì)量份。
難消化性糖類成為腸內(nèi)雙歧桿菌的增殖因子，還具有整腸作用。若同時攝取乳清蛋白和難消化性糖類，則兩者的協(xié)同作用使便臭改善效果更顯著。
本發(fā)明的便臭改善劑除了作為有效成分的乳清蛋白之外，還可以含有賦形劑、甜味劑、酸味劑、香精、乳化劑、增粘多糖類、著色劑等通常食品中添加的食品添加物原料。
本發(fā)明中，對便臭改善劑的形態(tài)沒有限定。例如可以是片劑、粉末、顆粒、膠囊劑，也可以是糊狀、液狀。添加乳清蛋白后只要不進(jìn)行抗體失活的加熱加工工序，可以制成加工食品的形態(tài)。
發(fā)明方案1發(fā)明的課題在于提供從低年齡層到高齡者均可以接受的、使乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味減低改善風(fēng)味；而且改善吸水性，混合在食品中時的“面疙瘩”狀態(tài)短時間內(nèi)消除、容易混合；并且看起來美味的乳清蛋白食品。
本發(fā)明人等為了解決上述課題對各種的食品素材進(jìn)行了篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過將可可粉添加到乳清蛋白中，可以減低乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味的同時，改善吸水性，使在水、牛乳、豆乳等液狀食品中混合時的“面疙瘩”狀態(tài)短時間內(nèi)消除，并且因可可粉引起的著色而感到看起來美味和愉悅，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)乳清蛋白·可可食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白和可可粉，其中可可粉相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為1～10000質(zhì)量份。
2)權(quán)利要求46的乳清蛋白·可可食品，其形狀為顆粒狀。
根據(jù)本發(fā)明，通過添加規(guī)定量的可可粉，可以減低乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味改善風(fēng)味，而且由于吸水性得到了改善，在水、牛乳、豆乳等液狀食品中混合時的面疙瘩狀態(tài)消除，容易混合。另外，可可粉的褐色色調(diào)可以打動食用人的視覺，引起食欲，賦予愉悅與變化。通過制成顆粒狀進(jìn)一步提高吸水性可以更容易與其它液狀食品混合、容易食用。
本發(fā)明中，乳清蛋白可以使用通常的市售品，上述發(fā)明方案4、9、15中使用的乳清蛋白。
本發(fā)明中，所用的乳清蛋白原料乳可以是牛、山羊、綿羊、馬等任一種哺乳動物的乳，該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳、也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳。
本發(fā)明中，可可粉可以使用一般的可可粉?？煽煞劾缈梢匀缦轮苽溆脼V清器分選可可豆，用分離器將豆破碎除去皮等，用反應(yīng)釜加入堿劑使之反應(yīng)，然后用焙燒爐焙炒，用磨碎機(jī)磨碎，將所得可可塊用可可壓榨機(jī)榨油，分離一部分可可脂，用可可粉碎機(jī)粉碎，制備細(xì)的顆粒，但對其制備方法沒有限定。此外，可可粉富含多酚或食物纖維等功能性成分，是優(yōu)良的功能性食品。也可以使用這些功能性成分的含量得到提高的可可粉。
通過將可可粉添加到乳清蛋白中，可可粉所具有的苦味使乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味消失的同時，可可粉所具有的風(fēng)味和褐色的色調(diào)賦予乳清蛋白·可可食品更美味的感覺。而且，通過可可粉的添加，提高吸水性，與液狀食品容易混合。
本發(fā)明的乳清蛋白·可可食品相對于100質(zhì)量份乳清蛋白含有1～10000質(zhì)量份可可粉。如果可可粉的含量不足1質(zhì)量份，則乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味的降低效果和吸水性的改善效果不充分，著色也不充分。另一方面，如果超過10000質(zhì)量份則乳清蛋白的含量變低，攝取乳清蛋白的意義小了。
如果將本發(fā)明的乳清蛋白·可可食品的形狀制成顆粒狀，則可以使乳清蛋白·可可食品的吸水性進(jìn)一步提高，與液狀食品的混合變得容易。由于乳清蛋白的吸水性差，如果單獨添加到水、牛乳、豆乳等中則容易形成“面疙瘩”狀態(tài)。但是，含有可可粉的乳清蛋白·可可食品其吸水性得到改善，如果再將其制成顆粒狀則吸水性進(jìn)一步改善，即使添加到其它食品中也不形成“面疙瘩”，變得容易混合。
可可粉包含糖、纖維，顆?；瘯r這些成分成為粘結(jié)劑，還可以添加CMC(羧基甲基纖維素)或糖等作為粘結(jié)劑。顆?；梢岳脟婌F造粒法、擠出造粒法等通常的方法。
本發(fā)明的乳清蛋白·可可食品，可以含有脫脂粉乳、全脂粉乳、奶油粉末等乳制品；蔗糖、乳糖、赤蘚糖醇、斯特維亞菊萃取物等甜味劑，檸檬酸、蘋果酸等酸味劑，食鹽，碳酸鈣，香精，增粘多糖類等通常食品中添加的原料。
如上所述，本發(fā)明的乳清蛋白·可可食品中，乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味消失，更美味、容易攝取。添加到其它食品中時與乳清蛋白單獨的粉末相比，吸水性變佳。而且，因可可粉的著色看起來有美味的感覺。如果將其形狀制成顆粒狀，則吸水性進(jìn)一步提高，與液狀食品容易混合。
發(fā)明方案2本發(fā)明的課題在于提供從低年齡層到高齡者均可以接受的、使乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味減低改善風(fēng)味；而且改善吸水性，混合在食品中時的“面疙瘩”狀態(tài)短時間內(nèi)消除、容易混合；并且看起來美味的乳清蛋白食品。
本發(fā)明人等為了解決上述課題對各種的食品素材進(jìn)行了篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過將一種或多種選自越橘粉末、木莓粉末、烏飯樹粉末、草莓粉末的粉末添加到乳清蛋白中，可以減低乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味，同時改善吸水性，使在牛乳等液狀食品或酸乳酪對糊狀食品中混合時的“面疙瘩”狀態(tài)短時間內(nèi)消除，并且因來自天然素材的色素的著色而令人感覺到看起來美味和愉悅，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白和一種或多種選自越橘粉末、木莓粉末、烏飯樹粉末、草莓粉末的粉末，其中粉末相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為1～900質(zhì)量份。
2)權(quán)利要求48的乳清蛋白食品，其中形狀為顆粒狀。
根據(jù)本發(fā)明，通過按規(guī)定量添加一種或多種選自越橘粉末、木莓粉末、烏飯樹粉末、草莓粉末的粉末，可以減低乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味，改善風(fēng)味；而且通過改善吸水性在液狀食品或糊狀食品中混合時，面疙瘩狀態(tài)消除，容易混合。并且這些粉末的紅色～紫色的色調(diào)可以打動食用者的視覺，引起食欲，給于享受和變化。通過制成顆粒狀使吸水性進(jìn)一步提高，更容易與其它的液狀食品或糊狀食品混合，容易食用。
本發(fā)明中，乳清蛋白可以使用通常的市售品，也可以使用上述發(fā)明方案4、9、15中的乳清蛋白。
本發(fā)明中，所用的乳清蛋白原料乳可以使用與上述發(fā)明方案1同樣的原料乳。
本發(fā)明中，越橘粉末可以使用通常的市售品。通過向乳清蛋白中添加越橘粉末，越橘粉末所具有的風(fēng)味消除乳清蛋白所具有的奶臭與澀味、收斂味的同時，由于越橘粉末所具有的風(fēng)味與色調(diào)通過乳清蛋白食品而感到美味。而且，越橘粉末的添加使吸水性提高，容易與液狀食品或糊狀食品進(jìn)行混合。
本發(fā)明中，木莓粉末可以使用通常的市售品。通過向乳清蛋白中添加木莓粉末，木莓粉末所具有的風(fēng)味消除乳清蛋白所具有的奶臭與澀味、收斂味的同時，由于木莓粉末所具有的風(fēng)味與色調(diào)通過乳清蛋白食品而感到美味。而且，木莓粉末的添加使吸水性提高，容易與液狀食品或糊狀食品進(jìn)行混合。
本發(fā)明中，烏飯樹粉末可以使用通常的市售品。通過向乳清蛋白中添加烏飯樹粉末，烏飯樹粉末所具有的風(fēng)味消除乳清蛋白所具有的奶臭與澀味、收斂味的同時，由于烏飯樹粉末所具有的風(fēng)味與色調(diào)通過乳清蛋白食品而感到美味。而且，烏飯樹粉末的添加使吸水性提高，容易與液狀食品或糊狀食品進(jìn)行混合。
本發(fā)明中，草莓粉末可以使用通常的市售品。通過向乳清蛋白中添加草莓粉末，草莓粉末所具有的風(fēng)味消除乳清蛋白所具有的奶臭與澀味、收斂味的同時，由于草莓粉末所具有的風(fēng)味與色調(diào)通過乳清蛋白食品而感到美味。而且，草莓粉末的添加使吸水性提高，容易與液狀食品或糊狀食品進(jìn)行混合。
本發(fā)明的乳清蛋白食品，相對于100質(zhì)量份乳清蛋白，含有1～900質(zhì)量份一種或多種選自越橘粉末、木莓粉末、烏飯樹粉末、草莓粉末的粉末。如果上述粉末的含量不足1質(zhì)量份，則乳清蛋白所具有的奶臭或澀味、收斂味的降低效果和吸水性的改善效果不充分，著色也不充分。另一方面，如果超過900質(zhì)量份則乳清蛋白的含量變低，攝取乳清蛋白的目的難以達(dá)到。
優(yōu)選將本發(fā)明的乳清蛋白食品的形狀制成顆粒狀，這與上述發(fā)明4同樣。
上述粉末中含有各種來自植物的糖、淀粉、纖維，顆?；瘯r這些成分成為粘結(jié)劑，還可以添加CMC(羧基甲基纖維素)或糖等作為粘結(jié)劑。顆?；梢岳脟婌F造粒法、擠出造粒法等通常的方法。
本發(fā)明的乳清蛋白食品，可以含有蔗糖、赤蘚糖醇、斯特維亞菊萃取物等甜味劑；檸檬酸、蘋果酸等酸味劑；香精、增粘多糖類等通常食品中添加的原料。
如上所述，本發(fā)明的乳清蛋白食品將乳清蛋白所具有的奶臭與澀味、收斂味消除，成為更美味、更容易攝取的食品。添加到其它食品中時，與乳清蛋白單獨的粉末相比，吸水性變佳。而且，因天然素材的著色看起來有美味的感覺。如果將其形狀制成顆粒狀，則吸水性進(jìn)一步提高，容易與液狀食品或糊狀食品混合。
發(fā)明方案8本發(fā)明的課題在于提供可以更簡便地改善對于水的分散性的來自乳的蛋白質(zhì)。
本發(fā)明人等為了解決上述課題進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過向來自乳的粉末或顆粒狀蛋白中混合粉末狀非凝固性不溶解物，可以改善粉末蛋白的水分散性，通過進(jìn)一步混合難消化性糖類，可以進(jìn)一步改善分散性，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)水分散性優(yōu)異的蛋白組合物，其特征在于該組合物含有來自乳的粉末或顆粒狀蛋白和粉末狀非凝固性不溶解物。
2)上述1)的蛋白組合物，其中上述粉末狀非凝固性不溶解物為纖維素類。
3)上述1)或2)的蛋白組合物，其中上述來自乳的粉末或顆粒狀蛋白為乳清蛋白。
4)上述1)～3)中任一項的蛋白組合物，該組合物還含有難消化性糖類。
根據(jù)本發(fā)明，可以使來自乳的粉末或顆粒狀蛋白容易分散在水或飲料、咖啡等中，再添加到酸乳酪等糊狀食品中時也容易混合、分散。另外，粉末狀非凝固性不溶解物也大多具有食物纖維的作用，還可以期待整腸作用或改善便秘的效果。若進(jìn)一步含有難消化性糖類，不僅有助于改善水分散性，而且可以期待整腸作用、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收作用、抗齲齒作用、抑制血液中膽固醇升高作用、改善肝功能作用等功能。
本發(fā)明中使用的粉末狀非凝固性不溶解物可以舉出除了豆腐渣、小麥麩子、脫脂大豆、纖維素等來自植物的之外，還可以是殼聚糖、硅膠、碳酸鈣、碳酸鎂等，對它們沒有限定。特別是使用市售的アゼセル(旭化成工業(yè)公司制造)等微結(jié)晶纖維素或KCフロツフ(日本制紙ケミカル)等粉末纖維素等纖維素類可以得到高的效果。
對本發(fā)明中使用的來自乳的粉末或顆粒狀蛋白沒有限定，例如可以是脫脂粉乳、全脂粉乳、乳清粉末、乳蛋白、乳清蛋白、酪蛋白等。特別是乳清蛋白的氨基酸序列接近于人乳，營養(yǎng)價值豐富，包含全部必須氨基酸、吸收率非常好，而且支鏈氨基酸的含有率也高，因此更優(yōu)選。乳清蛋白可以使用市售的乳清蛋白，例如可以是乳清蛋白濃縮物(WPC)、乳清蛋白分離物(WPI)、脫鹽乳清粉等。
優(yōu)選使粉末狀非凝固性不溶解物在蛋白組合物中混合1～50％質(zhì)量。若少于1％質(zhì)量則分散性的改善效果不充分，若多于50％質(zhì)量則蛋白含量相對減少，粉末蛋白的價值變薄。
本發(fā)明的蛋白組合物若進(jìn)一步含有難消化性糖類則可以進(jìn)一步改善對水的分散性。難消化性糖類只要是作為食品可以使用的難消化性糖類即可，可以使用任意一種糖類。例如可以是果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、大豆低聚糖、半乳低聚糖、大豆低聚糖、木低聚糖、密三糖、異麥芽酮糖(帕拉金糖)、黑低聚糖、龍膽低聚糖、海藻糖、偶合糖(coupling sugar)、果膠、環(huán)糊精等低聚糖；山梨糖醇、麥芽糖醇、赤蘚糖醇、還原異麥芽酮糖、乳糖醇、甘露糖醇、木糖醇等糖醇；菊糖；難消化性糊精；抗性淀粉等。這些糖可以使用通常的市售品。本發(fā)明中難消化性糖類是指機(jī)體內(nèi)的消化酶難以消化的糖類，所以被玉米蛋白、麥膠蛋白等プロミラン或硬化油脂包覆的易消化性糖類，在這里也可以作為難消化性糖類使用。
通過添加難消化性糖類，不僅可以改善分散性，而且還可以期待整腸作用、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收作用、抗齲齒作用、抑制血液中膽固醇升高作用、改善肝功能作用等功能。另外，如果乳清蛋白選擇來自乳的粉末或顆粒狀蛋白，乳清蛋白中的抗體可以增強(qiáng)被動免疫，另一方面，難消化性糖類成為腸內(nèi)雙歧桿菌的增殖因子，該雙歧桿菌作用于消化道免疫系統(tǒng)使主動免疫活化，因此通過同時攝取乳清蛋白和難消化性糖類，可以使被動免疫和主動免疫同時激活，期待強(qiáng)的免疫活化作用。
本發(fā)明的蛋白組合物，可以含有高甜度甜味劑、酸味劑、香精、乳化劑、增粘多糖類等通常食品中所添加的食品原料或食品添加物原料。
粉末蛋白與粉末狀非凝固性不溶解物或消化性糖類等的混合方法可以利用通常的粉末混合的方法，例如可以是利用V型、水平圓筒型、垂直螺桿型、雙層圓錐型混合機(jī)等的混合方法。
本發(fā)明的蛋白組合物可以是粉末的組合物，但為顆粒狀時可以進(jìn)一步提高分散性?？梢允孪葘⒎勰┑鞍最w?；?，將所得顆粒狀蛋白與粉末狀非凝固性不溶解物或難消化性糖類等混合，也可以將粉末蛋白與粉末狀非凝固性不溶解物或難消化性糖類等混合后，進(jìn)行顆?；Ａ硗?，還可以將粉末蛋白與粉末狀非凝固性不溶解物或難消化性糖類等混合，顆?；?，再制成混合有粉末蛋白、粉末狀非凝固性不溶解物、難消化性糖類等的組合物。
發(fā)明方案10本發(fā)明的課題在于提供具有更強(qiáng)的整腸作用的乳清蛋白食品。
本發(fā)明人等進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過同時攝取乳清蛋白與低聚糖和水溶性食物纖維三者，可以得到更強(qiáng)的整腸作用，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白與低聚糖和水溶性食物纖維，和2)上述1)的乳清蛋白食品，其中形狀為顆粒狀。
根據(jù)權(quán)利要求54的發(fā)明，乳清蛋白本身也可以發(fā)現(xiàn)整腸作用，但通過同時攝取低聚糖和水溶性食物纖維，可以發(fā)揮乳清蛋白、低聚糖和水溶性食物纖維的協(xié)同效果，可以提供發(fā)揮更強(qiáng)的整腸作用的食品。根據(jù)權(quán)利要求55的發(fā)明，可以提供混合在其它食品中攝取時分散性好的乳清蛋白食品。
本發(fā)明中，使用的乳清蛋白原料乳可以是牛、山羊、綿羊、馬等任一種哺乳動物的乳。該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳。
這些來自乳的乳清蛋白，可以是通常市售的來自牛乳的乳清蛋白，也可以使用上述發(fā)明方案4的乳清蛋白。
乳清蛋白中殘存有來自原料鮮乳的抗體。所述乳清蛋白中所含的抗體也對本發(fā)明乳清蛋白食品的整腸效果做出貢獻(xiàn)。因此，本發(fā)明中使用的乳清蛋白優(yōu)選含有0.5％質(zhì)量以上的抗體。
本發(fā)明中使用的低聚糖為人體內(nèi)的消化酶難消化的二糖類-十糖類，只要是通常在食品中使用的低聚糖均可使用。作為它們的例子，例如可以是果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、麥芽低聚糖、異麥芽低聚糖、大豆低聚糖、半乳低聚糖、大豆低聚糖、木低聚糖、密三糖、水蘇糖、異麥芽酮糖(帕拉金糖)、黑低聚糖、龍膽低聚糖、海藻糖、偶合糖(coupling sugar)、果膠低聚糖、海藻酸低聚糖、瓜爾膠低聚糖、巖藻糖低聚糖、環(huán)糊精等。
本發(fā)明中，食物纖維是指不被人體內(nèi)的消化酶分解的不消化的碳水化合物、是超過十個分子的糖類結(jié)合而成的物質(zhì)，不同于難消化性糖類。食物纖維大致可區(qū)分水溶性食物纖維和水不溶性食物纖維，本發(fā)明中使用水溶性的食物纖維。水溶性食物纖維例如可以是果膠、瓜爾膠、サイリウム、半乳甘露聚糖、木聚葡糖、刺槐豆膠、葡甘露聚糖、聚葡萄糖、可溶性半纖維素、海藻酸鈉、硫酸軟骨素、低分子海藻酸、低分子瓜爾膠、長纖維(フアイバロン)等。含有這些水溶性食物纖維的食品素材例如可使用瓊脂、豆類加工品、薯類加工品等。
本發(fā)明的乳清蛋白食品相對于100質(zhì)量份乳清蛋白，優(yōu)選含有5～1000質(zhì)量份低聚糖、5～1000質(zhì)量份水溶性食物纖維。低聚糖、水溶性食物纖維的含量不足5質(zhì)量份則整腸效果不充分，而超過1000質(zhì)量份則乳清蛋白的含量變低，攝取乳清蛋白的目的難以達(dá)到。
如果將本發(fā)明的乳清蛋白食品的形狀制成顆粒狀，要與其它食品、特別是水分含量多的食品混合攝取時，可以提高乳清蛋白食品的分散性，容易與其它食品混合。乳清蛋白的水分散性差，本發(fā)明中，由于含有低聚糖和食物纖維，因此與乳清蛋白單獨時相比分散性有所改善。但是，若制成顆粒狀添加到牛乳或酸乳酪等其它食品中，則分散性進(jìn)一步改善，不形成“面疙瘩”，變得容易混合。
上述低聚糖成為顆?；瘯r的粘結(jié)劑，還可以添加CMC(羧基甲基纖維素)或糖等作為粘結(jié)劑。顆?；梢岳脟婌F造粒法、擠出造粒法等通常的方法來進(jìn)行。對顆粒的大小也沒有限定，優(yōu)選平均粒徑為0.02～2mm左右。
本乳清蛋白食品可以含有甜味劑、酸味劑、香精、增粘多糖類等通常食品中所添加的原料。
對本發(fā)明的乳清蛋白食品的形態(tài)沒有限定。例如除了上述的顆粒之外，可以是片劑、糖果、粉末、膠囊劑，還可以是糊狀、液狀。乳清蛋白添加后，只要是不進(jìn)行使抗體失活等的加熱加工工序，可以制成任一種加工食品的形態(tài)。
發(fā)明方案14本發(fā)明人等為了解決上述課題對各種的食品素材進(jìn)行了篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過向乳清蛋白中添加選自抹茶、蘆薈粉末、郁金粉末、南瓜粉末、紅葡萄果汁粉末、番茄粉末的粉末，可以減低乳清蛋白所具有的乳臭或澀味、收斂味的同時，改善吸水性，使在牛乳等液狀食品或酸乳酪等糊狀食品中混合時的“面疙瘩”狀態(tài)短時間內(nèi)消除，并且因來自天然素材的色素的著色而看起來美味和愉悅，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白和選自抹茶、蘆薈粉末、郁金粉末、南瓜粉末、紅葡萄果汁粉末、番茄粉末的粉末，其中粉末相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為1～900質(zhì)量份。
2)權(quán)利要求56的乳清蛋白食品，其中形狀為顆粒狀。
根據(jù)本發(fā)明，通過添加規(guī)定量選自抹茶、蘆薈粉末、郁金粉末、南瓜粉末、紅葡萄果汁粉末、番茄粉末的粉末，可以減低乳清蛋白所具有的乳臭或澀味、收斂味，改善風(fēng)味，而且，通過改善吸水性，在液狀食品或糊狀食品中混合時，面疙瘩狀態(tài)消除，容易混合。并且，抹茶、蘆薈粉末的綠色，郁金粉末、南瓜粉末的黃色，紅葡萄果汁粉末、番茄粉末的紅色可以打動食用者的視覺，引起食欲，賦予愉悅與變化。通過制成顆粒狀，進(jìn)一步提高吸水性，可以更容易與其它液狀食品或糊狀食品混合、容易食用。
本發(fā)明中，乳清蛋白可以使用通常的市售品，也可以使用上述發(fā)明方案4的乳清蛋白。
本發(fā)明中，使用的乳清蛋白原料乳可以是牛、山羊、綿羊、馬等任一種哺乳動物的乳。該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳。
本發(fā)明中，抹茶可以使用通常的市售品。通過將抹茶添加到乳清蛋白中，抹茶所具有的苦味可以消除乳清蛋白所具有的乳臭與澀味、收斂味，同時抹茶所具有的風(fēng)味和綠色的色調(diào)通過乳清蛋白食品而賦予其美味的感覺。另外，添加抹茶可以提高吸水性，與液狀食品或糊狀食品容易混合。抹茶的風(fēng)味和色調(diào)特別可以打動高齡者的嗜好，是優(yōu)選的乳清蛋白食品。
本發(fā)明中，蘆薈粉末可以使用通常的市售品。通過將蘆薈粉末添加到乳清蛋白中，蘆薈粉末所具有的苦味可以消除乳清蛋白所具有的乳臭與澀味、收斂味，同時蘆薈粉末所具有的風(fēng)味和綠色的色調(diào)通過乳清蛋白食品而賦予其美味的感覺，另外，添加蘆薈粉末可以提高吸水性，與液狀食品或糊狀食品容易混合。
本發(fā)明中，郁金粉末可以使用通常的市售品。通過將郁金粉末添加到乳清蛋白中，郁金粉末所具有的苦味可以解消乳清蛋白所具有的乳臭與澀味、收斂味，同時郁金粉末所具有的風(fēng)味和黃色的色調(diào)通過乳清蛋白食品而賦予其更美味的感覺，另外，添加郁金粉末可以提高吸水性，與液狀食品或糊狀食品容易混合。
本發(fā)明中，南瓜粉末可以使用通常的市售品。通過將南瓜粉末添加到乳清蛋白中，南瓜粉末所具有的略微甜味可以消除乳清蛋白所具有的乳臭與澀味、收斂味，同時南瓜粉末所具有的風(fēng)味和黃色的色調(diào)通過乳清蛋白食品而賦予其美味的感覺，另外，添加南瓜粉末可以提高吸水性，與液狀食品或糊狀食品容易混合。
本發(fā)明中，使用的紅葡萄果汁粉末可以由通常市售的葡萄果汁制備。對成為原料的紅葡萄沒有限定。通過將紅葡萄果汁粉末添加到乳清蛋白中，紅葡萄果汁粉末所具有的鞣酸成分可以消除乳清蛋白所具有的乳臭與澀味、收斂味，同時紅葡萄果汁粉末所具有的風(fēng)味和紅色的色調(diào)通過乳清蛋白食品而賦予其更美味的感覺。而且，吸水性提高，與液狀食品或糊狀食品容易混合。
本發(fā)明中，使用的番茄粉末可以使用通常的市售品。通過將番茄粉末添加到乳清蛋白中，番茄粉末所具有的獨特味道可以消除乳清蛋白所具有的乳臭與澀味、收斂味，同時番茄粉末所具有的風(fēng)味和紅色的色調(diào)通過乳清蛋白食品而賦予其更美味的感覺。另外，添加番茄粉末可以提高吸水性，與液狀食品或糊狀食品容易混合。
本發(fā)明的乳清蛋白食品相對于100質(zhì)量份乳清蛋白，含有1～900質(zhì)量份選自抹茶、蘆薈粉末、郁金粉末、南瓜粉末、紅葡萄果汁粉末、番茄粉末的粉末。如果上述粉末的含量不足1質(zhì)量份，則乳清蛋白所具有的乳臭或澀味、收斂味的降低效果和吸水性的改善效果不充分，著色也不充分。另一方面，如果超過900質(zhì)量份則乳清蛋白的含量變低，攝取乳清蛋白的目的難以達(dá)到。
優(yōu)選本發(fā)明的乳清蛋白食品的形狀為顆粒狀，這與上述發(fā)明方案4同樣。與液狀食品或糊狀食品的混合變得容易。
上述粉末中包含分別來自植物的糖、淀粉、纖維，顆?；瘯r這些成分成為粘結(jié)劑，還可以添加CMC(羧基甲基纖維素)或糖等作為粘結(jié)劑。顆粒化可以利用噴霧造粒法、擠出造粒法等通常的方法來進(jìn)行。
本發(fā)明的乳清蛋白食品可以含有蔗糖、赤蘚糖醇、斯特維亞菊萃取物等甜味劑；檸檬酸、蘋果酸等酸味劑；香精、增粘多糖類等通常食品中添加的原料。
本發(fā)明的乳清蛋白食品具有上述同樣的優(yōu)點。
發(fā)明方案5本發(fā)明的課題在于提供可以僅使用現(xiàn)有的制造設(shè)備即可制備在制備工序中抗體的熱失活少、可提高抗體殘存率的乳清蛋白的方法。
本發(fā)明人等進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在乳清蛋白的制備工序中，通過添加糖可以抑制抗體因熱而引起的失活，僅使用現(xiàn)有的制造設(shè)備就可以提高抗體的殘存率，從而完成了本發(fā)明。
即，本發(fā)明如下。
1)乳清蛋白的制備方法，其特征在于該方法為通過在乳清蛋白制備工序中的至少一個環(huán)節(jié)添加糖，提高抗體的殘存率；2)上述1)的乳清蛋白的制備方法，該方法為在鮮乳加熱滅菌前添加糖；
3)上述1)的乳清蛋白的制備方法，該方法為在乳清加熱前添加糖；4)上述2)或3)的乳清蛋白的制備方法，其中糖為乳糖；5)上述1)的乳清蛋白的制備方法，該方法為在乳清蛋白干燥前添加糖；6)上述5)的乳清蛋白的制備方法，其中糖為難消化性糖類；和7)上述1)～6)的乳清蛋白的制備方法，其中抗體的殘存率為原料乳中所含抗體的70％以上。
根據(jù)本發(fā)明可以提供乳清蛋白的制備方法，該方法為僅使用現(xiàn)有的制造設(shè)備，通過在乳清蛋白的制備工序中添加糖，可以提高抗體的熱穩(wěn)定性，抑制熱失活，使鮮乳中的抗體殘存率高。在鮮乳加熱滅菌前或乳清加熱前添加乳糖作為糖，可以發(fā)揮其效果，添加的乳糖可以在乳糖的分離工序中進(jìn)行回收。而且，通過在乳清蛋白干燥前添加難消化性糖類作為糖，可以制備抗體的穩(wěn)定性得到提高，同時可以期待抗體所具有的免疫活化功能和難消化性糖類所具有的生理功能的協(xié)同作用的乳清蛋白。并且，若使作為原料使用的鮮乳中所含的抗體殘存70％以上，則可以得到抗體濃度高的乳清蛋白，要攝取一定量的抗體時所需乳清蛋白的量少，容易攝取抗體。
乳清蛋白是在由動物的乳或脫脂乳制造干酪或酪蛋白時作為副產(chǎn)品而得到的乳清中的蛋白質(zhì)，通常，經(jīng)過如圖2所示的各種工序來制造。圖2表示代表性的工序圖，本發(fā)明中所說的乳清蛋白的制造工序不限定于圖2所示的工序。例如，也包含在滅菌乳中接種乳酸菌使其發(fā)酵，然后添加粗凝乳酶，分離凝固的凝乳(干酪)和干酪乳清的工序等。乳清也稱為ホエ-(乳清)，圖2中也記作ホエ-。上述的現(xiàn)有乳清蛋白的制造設(shè)備通常是圖2所示的用于制造WPC或WPI的設(shè)備，例如不包含色譜裝置等使抗體濃度提高的特別設(shè)備。
本發(fā)明中，作為乳清蛋白原料的鮮乳可以是牛、山羊、綿羊、馬、水牛等任一種哺乳動物的乳。該乳可以是從接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳，也可以是從未接受過疫苗接種的哺乳動物采集的乳。優(yōu)選使這些鮮乳中的抗體的70％以上保持活性狀態(tài)殘存于乳清蛋白中。
本發(fā)明的特征在于通過在乳清蛋白制備工序的至少其中一個工序中添加糖可以提高抗體的殘存率，除了添加糖之外，可以與如圖2所示工序的現(xiàn)有的乳清蛋白制備方法同樣地進(jìn)行制備。本發(fā)明中，添加的糖只要是乳糖、難消化性糖類、葡萄糖、果糖、蔗糖、異構(gòu)化糖、糊精等作為食品使用的糖即可，均可使用。對這些糖的添加方法沒有限定。通過添加糖可以抑制因加熱而引起的抗體的熱失活，使所得乳清蛋白中的抗體殘存量得到提高。
糖的添加量優(yōu)選設(shè)定為與本來所含糖合在一起的糖含量在6.5％質(zhì)量以上，進(jìn)一步優(yōu)選設(shè)定為糖含量在6.5～12.5％質(zhì)量的范圍內(nèi)。例如，添加到鮮乳中時，由于鮮乳中含有4.5％的糖，糖的添加量2～8％質(zhì)量成為最優(yōu)選的添加量。如果糖含量不足6.5％質(zhì)量則抑制抗體損失的效果不充分。另一方面，如果超過12.5％質(zhì)量則可能由于糖種類的不同存在糖沉淀的現(xiàn)象。
圖3表示在鮮乳中添加0～8％質(zhì)量乳糖，在65℃加熱30分鐘時的抗體殘存率。乳等的法規(guī)中(關(guān)于乳和乳制品的成分標(biāo)準(zhǔn)等的法規(guī))中，作為鮮乳加熱滅菌的規(guī)定，規(guī)定了通過保持的方法在63℃加熱滅菌30分鐘或者利用具有與該條件同等以上的滅菌效果的方法進(jìn)行加熱滅菌。由于鮮乳中含有4.5％質(zhì)量乳糖，橫坐標(biāo)表示與該量合在一起的乳糖含量。相對于不添加乳糖時抗體殘存率不足80％，添加乳糖可以提高抗體的熱穩(wěn)定性、抑制滅菌工序中的抗體損失，可以提高所得乳清蛋白中的抗體殘存率。
本發(fā)明的糖的添加時期可以在如上所述的乳清蛋白制備工序中的任一工序中添加，優(yōu)選在伴隨加熱的工序之前添加中。具體而言，優(yōu)選添加到圖2中1～9(圖2中用帶圓圈兒數(shù)字表示。以下，同樣)所示的任一時期。以下，按照工序?qū)μ堑奶砑訒r期和優(yōu)選的糖種類加以說明。
首先，可以是圖2中1所示的在鮮乳的加熱滅菌之前添加。是對鮮乳進(jìn)行清潔處理或成分調(diào)整等處理，然后在通過HTST滅菌法(高溫瞬時滅菌法，72～75℃、15秒)、LTLT滅菌法(低溫長時間滅菌法，65℃、30分鐘)等的滅菌之前添加的情形。
使用滅菌乳，利用通常的方法可以進(jìn)行之后的干酪、酪蛋白凝乳或酪素等的制造，可以從上述中分離得到干酪乳清、酸乳清或酪素乳清等乳清。
其次，作為添加時期，在上述1的時期沒有添加時，根據(jù)需要可以將分離的乳清(圖2中，乳清)在加熱前(圖2的2、3和4)添加。
上述的情形(圖2中的1和2～4所示時期的任一時期)中，如果使用乳糖作為添加的糖則可以抑制抗體的熱失活，同時添加的乳糖在之后的工序中可以與鮮乳中所含的乳糖一起被回收，因此經(jīng)濟(jì)方面也有效，優(yōu)選。
然后，根據(jù)需要從加熱的乳清(溶液)中分離乳清蛋白溶液，對該分離或餾分的方法沒有限定。例如可以是超濾法、離子交換法、精密濾法等。根據(jù)需要還可以進(jìn)行濃縮。
另外，對干燥乳清蛋白溶液的方法沒有限定。例如可以是噴霧干燥法、冷凍干燥法等?？梢栽谠摳稍镏?圖2中的5、6、7、8、9所示的時期)添加糖。通過添加糖可以抑制干燥中的抗體損失。
在乳清蛋白溶液的干燥之前添加時，作為添加的糖優(yōu)選難消化性糖類。難消化性糖類成為腸內(nèi)雙歧桿菌的增殖因子，該雙歧桿菌作用于消化道免疫系統(tǒng)，使主動免疫活性化。另一方面，乳清蛋白中的抗體可以增強(qiáng)被動免疫，因此通過同時攝取難消化性糖類和乳清蛋白，可以使主動免疫和被動免疫同時激活，期待強(qiáng)的免疫活化作用。另外，由于難消化性糖類還具有整腸作用、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收作用、抗齲齒作用、抑制血液中膽固醇升高作用、改善肝功能作用等功能，所以結(jié)合免疫活化作用，還可以期待它們的作用，所以可以期待提高了殘存率的抗體的作用與這些作用發(fā)揮協(xié)同的效果。
難消化性糖類可以使用上述發(fā)明方案4中使用的物質(zhì)。
實施例以下列舉實施例進(jìn)一步詳細(xì)地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實施例的限定。實施例編號與上述發(fā)明方案編號相對應(yīng)。
按下述表1-1所示配比(數(shù)值為質(zhì)量比)制備5種類的乳清蛋白·可可食品和不含可可粉的乳清蛋白食品(比較例1-1)用于比較。表1中，Proliant(注冊商標(biāo))8000為乳清蛋白(WPC，James Farrell & Co.制備)。
表1-1

(風(fēng)味改善的評價)將制備的各20g乳清蛋白·可可食品與6g蔗糖添加到加熱至65℃的市售的100ml超高溫滅菌牛乳(以下簡稱為“牛乳”)中，對均勻混合的物質(zhì)通過10名專業(yè)評味者按照5分法進(jìn)行感官評價。另外，將各20g乳清蛋白·可可食品與6g蔗糖添加到100ml冷水中，對均勻混合的物質(zhì)也進(jìn)行同樣地評價。表1-2表示它們的平均分。分?jǐn)?shù)高的表示風(fēng)味良好。實施例與比較例相比均為高得分，即，5種乳清蛋白·可可食品均為乳清蛋白的風(fēng)味得到改善的食品。
表1-2

在實施例1-1～1-5中，將添加有可可粉的乳清蛋白·可可食品與食用蔗糖一起加入到65℃的牛乳和冷水中，與乳清蛋白單獨的粉末相比均不容易形成“面疙瘩”狀態(tài)，吸水性得到了改善。
將實施例1-5中所示配比的40g乳清蛋白·可可食品與12g蔗糖加入到200ml 65℃的牛乳中時，不容易形成“面疙瘩”狀態(tài)，可以容易地分散混合，全量均可以美味地飲用。
將實施例1-1中所示配比的乳清蛋白·可可食品通過噴霧造粒法進(jìn)行顆?；?。當(dāng)將該40g顆粒狀乳清蛋白·可可食品加入到200ml冷的牛乳中時，可以迅速吸水、分散混合。
按下述表2-1所示配比(數(shù)值為質(zhì)量比)制備5種類的乳清蛋白食品。表2-1中，Proliant(注冊商標(biāo))8000為乳清蛋白(WPC，James Farrell&Co.制備)。此外，越橘粉末、木莓粉末、烏飯樹粉末、草莓粉末均為(株)常磐植物化學(xué)研究所制備。
表2-1

(風(fēng)味改善的評價)將制備的各5質(zhì)量份乳清蛋白食品添加到市售的95質(zhì)量份原味酸乳酪中，使其均勻，和添加到市售的95質(zhì)量份超高溫滅菌牛乳(以下簡稱為“牛乳”)中，使其均勻，通過10名專業(yè)評味者按照5分法進(jìn)行感官評價。其平均分如表2-2所示。分?jǐn)?shù)高的表示風(fēng)味良好。實施例均為高得分，即，4種乳清蛋白食品均為乳清蛋白的風(fēng)味得到改善的食品。
表2-2

本實施例中，將添加有越橘粉末、木莓粉末、烏飯樹粉末、草莓粉末的乳清蛋白食品加入到酸乳酪中用于食用時，與乳清蛋白單獨的粉末相比均不容易形成“面疙瘩”狀態(tài)，吸水性得到了改善。
將實施例2-1～2-4中所示配比的乳清蛋白食品通過噴霧造粒法制成顆粒狀的乳清蛋白食品。分別將5質(zhì)量份這些顆粒狀乳清蛋白食品的加入到95質(zhì)量份牛乳中時，均可以迅速吸水并沉降、分散混合在牛乳中。
將實施例2-4中所示配比的4g乳清蛋白食品加入到100g酸乳酪中時，不容易形成“面疙瘩”狀態(tài)，可以容易地分散混合，可以美味的食用全量。
將作為乳清蛋白的ミラクテ-ル80(森永乳業(yè)(株)制備)在蔗糖與CMC(羧基甲基纖維素)的等量混合物中10倍分散，一邊用流化床造粒機(jī)將品溫調(diào)節(jié)到65℃一邊制成顆粒狀，以此作為便臭改善劑，用于以下的效果試驗。該顆粒的抗體含量為0.5％質(zhì)量。
(效果試驗)作為被試驗者，將20名男女(21～30歲12名；31～40歲4名；41～60歲4名)分成4組(每組5名)，試驗組1為將5g實施例1中得到的顆粒(便臭改善劑，內(nèi)含抗體25mg)、試驗組2為10g(內(nèi)含抗體50mg)、試驗組3為20g(內(nèi)含抗體100mg)，將其懸浮在100ml水中，每天早餐后飲用上述懸浮液。另外，對照組是每天早餐后將10g蔗糖與CMC的等比例(質(zhì)量)粉末懸浮在100ml水中使其飲用。
對飲用前、飲用開始3天后、7天后的便臭按5階段(0幾乎沒有臭味、1有輕度的臭味、2一般、3臭、4很臭)進(jìn)行感官評價，求出其平均值。其結(jié)果如表1所示。
表3-1

從表3-1可知，各試驗組的便臭得到了改善。特別是試驗組2、試驗組3的便臭改善效果顯著。試驗期間中，試驗組的多數(shù)被試驗者放屁的臭味也得到了改善，排便也得到了改善。
將作為乳清蛋白的8質(zhì)量份ミラクテ-ル80(森永乳業(yè)(株)制備)與作為果低聚糖的2質(zhì)量份メイオリゴCR(明治制果(株)制備)混合，用流化床造粒機(jī)一邊將品溫調(diào)節(jié)到65℃一邊制成顆粒狀，以此作為便臭改善劑，用于以下的效果試驗。該顆粒的抗體含量為4.0％。
(效果的試驗)作為被試驗者，特別選擇大便臭味強(qiáng)的4名男性(61-67歲)，以此作為試驗組4，將5g實施例3-2中得到的顆粒(便臭改善劑，內(nèi)含抗體200mg)懸浮在100ml水中，每天早餐后讓試驗組4飲用。然后，對飲用前、飲用開始3天后、7天后的便臭與實施例3-1的效果試驗同樣地按5階段進(jìn)行感官評價。其平均值如表3-2所示，個人的評價分作成圖表如圖1所示。
表3-2

表3-2和圖1與表3-1進(jìn)行對比可知，大便臭味強(qiáng)的人便臭改善的效果高。特別是其中1名通過服用7天200mg抗體，使便臭從很臭的水平(4)改善到幾乎沒有臭味的水平(0)。
以下列舉實施例進(jìn)一步具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實施例的限定。實施例中，抗體量的測定按照下面的方法。
(抗體量的測定法)取100mg乳清蛋白或含抗體顆粒化乳清蛋白食品，將其溶解在50ml磷酸緩沖液(50mM，pH6.8)中，攪拌2小時以上，然后將其中10ml以上用0.45μ膜濾器過濾。
另一方面，利用50mM磷酸緩沖液(pH6.8)平衡蛋白G柱(Amersham，HiTrap Protein G HP 1ml)，將用膜濾器過濾的10ml試樣過柱，用該緩沖液(pH6.8)洗滌，然后用100mM甘氨酸鹽酸緩沖液(pH2.7)使抗體洗脫。
測定洗脫液在280nm下的吸光度，1％抗體濃度時的吸光度為14，由此換算試樣中的抗體濃度，然后計算乳清蛋白或含抗體顆粒化乳清蛋白食品中的抗體量。
(測定乳清蛋白中的抗體含量)按照上述測定方法，測定市售的乳清蛋白中的抗體含量時，ミラクテ-ル80(森永乳業(yè)(株)制備)、TATUA 902(タツアジヤパン(株))、Proliant 8000(James Farrell & Co.)分別為50mg/g、42mg/g、55mg/g。
利用下述表1所示配比(數(shù)字為質(zhì)量比)制備5種類的乳清蛋白食品，測定了其1g中的抗體含量(mg)。表4-1中，Proliant(注冊商標(biāo))8000為乳清蛋白(WPC，James Farrell & Co.制備)、メイオリゴ(注冊商標(biāo))P為果低聚糖(明治制果(株)制備)、オリゴメイト(注冊商標(biāo))55P為不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖(ヤクルト藥品工業(yè)(株)制備)、乳果オリ ゴ(注冊商標(biāo))LS-55P為乳果低聚糖(鹽水港精糖(株)制備)、ミルクオリゴ為乳果糖(森永乳業(yè)(株)制備)、イソマルト(注冊商標(biāo))900P為異麥芽低聚糖(日研化成(株)制備)。
表4-1

(風(fēng)味改善的評價)將制備的各10質(zhì)量份乳清蛋白食品添加到市售的90質(zhì)量份原味酸乳酪中，使其均勻，還添加到市售的90質(zhì)量份超高溫滅菌牛乳(以下簡稱為“牛乳”)中，使其均勻，對其通過10名專業(yè)評味者以5階段(1不佳、2略微不佳、3一般、4稍好、5好)進(jìn)行感官評價。求出其平均值。其平均分如表2所示。實施例均為高得分，即，5種乳清蛋白食品的乳清蛋白的風(fēng)味均得到改善。
表4-2

本實施例中，添加有果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖的乳清蛋白食品，加入到酸乳酪中用于食用時，與乳清蛋白單獨的粉末相比均不容易形成“面疙瘩”狀態(tài)，吸水性得到了改善，分散性良好。
將實施例4-1、實施例4-2、實施例4-3中所示配比的乳清蛋白食品通過流化床造粒機(jī)使品溫調(diào)節(jié)到65℃進(jìn)行造粒，制成顆粒狀的乳清蛋白食品。將10質(zhì)量份該顆粒狀乳清蛋白食品加入到90質(zhì)量份牛乳中時，可以迅速吸水并沉降、分散在牛乳中。
將干酪乳清(蛋白含量0.6％)濃縮，分離結(jié)晶的乳糖，得到乳清蛋白溶液。將其用固體含量換算，相對于100質(zhì)量份乳清蛋白，添加10質(zhì)量份トレハ(注冊商標(biāo))(林原商事(株)制備的海藻糖)，噴霧干燥可以得到抗體含量為55mg/g的乳清蛋白食品的粉末。將5g該乳清蛋白食品加入到100g番茄飲料中時，迅速溶解，得到含有275mg抗體的番茄飲料。該番茄飲料的風(fēng)味沒有感覺到乳臭或澀味等。
將100質(zhì)量份ミラクテ-ル80、20質(zhì)量份菊糖富士FF(富士日本精糖(株)制備)、2質(zhì)量份聚谷氨酸(明治制果(株)制備)、1質(zhì)量份琥珀酸單甘油酯混合，利用流化床造粒機(jī)使品溫調(diào)節(jié)到65℃進(jìn)行造粒，得到抗體含量為40mg/g的顆粒狀乳清蛋白食品。將5g該顆粒狀乳清蛋白食品分散到100g酸乳酪中時，迅速均勻分散，得到含有200mg抗體的酸乳酪。該酸乳酪的風(fēng)味沒有感覺到えぐみ等。
將100質(zhì)量份TATUA902與5質(zhì)量份赤蘚糖醇混合，利用流化床造粒機(jī)使品溫調(diào)節(jié)到70℃進(jìn)行造粒，得到抗體含量為38mg/g的顆粒狀乳清蛋白食品。將5g該顆粒狀乳清蛋白食品加入到100g冷咖啡中時，迅速溶解，得到含有190mg抗體的咖啡飲料。該咖啡飲料的風(fēng)味沒有感覺到えぐみ等。
將100質(zhì)量份Proliant 8000與1000質(zhì)量份メイオリゴ(注冊商標(biāo))CR(明治制果(株)制備的果低聚糖)混合，得到抗體含量為5mg/g的乳清蛋白食品。將5g該乳清蛋白食品分散到100g豆乳中時，迅速均勻分散，得到含有25mg抗體的豆乳飲料。該豆乳飲料的風(fēng)味沒有感覺到乳臭或えぐみ等。
(抗體量的測定法)利用蛋白G柱從抗牛IgG兔免疫血清(ヤガイ制備)中分餾吸附餾分，以此作為一次抗體，HRP標(biāo)記抗牛IgG抗體(コスモバイオ制備)作為二次抗體，用通常的方法通過ELISA進(jìn)行定量。作為抗體標(biāo)品，利用蛋白G柱按照常規(guī)方法對從牛的初乳中所得乳清粉末進(jìn)行3次吸附洗脫，然后透析去除低分子餾分，使用所得蛋白G吸附餾分，用該標(biāo)品求出標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定試樣中的抗體濃度。
相對于100L鮮乳(乳脂肪3.4％、抗體含量0.21mg/ml)添加2.0kg乳糖，將其在72℃下加熱15秒鐘進(jìn)行滅菌。之后，利用通常的方法離心得到脫脂乳，添加乳酸進(jìn)行酸性化后，壓榨、分離酪蛋白凝乳，得到酸乳清，通過超濾分離乳糖，噴霧干燥得到乳清蛋白(WPC)。該乳清蛋白的抗體含量為57mg/g，從原料乳中所含的抗體量進(jìn)行換算，其中的70％殘存。

實施例5-1中所用的鮮奶不添加乳糖，利用與實施例5-1同樣的方法處理，得到乳清蛋白(WPC)。該乳清蛋白的抗體含量為15mg/g，從原料乳中所含的抗體量進(jìn)行換算，僅殘存了其中的19％。
鮮乳在72℃下加熱滅菌15秒鐘，由該部分抗體已經(jīng)損失的滅菌乳制造干酪，得到副產(chǎn)品干酪乳清(蛋白含量0.8％)。相對于100L該干酪乳清添加5.0kg乳糖，在65℃下洗滌、在53℃下超濾處理，分離乳糖。將其進(jìn)行噴霧干燥得到乳清蛋白(WPC)。該乳清蛋白的抗體含量為70mg/g。
實施例5-2中所用的干酪乳清不添加乳糖，利用與實施例5-2同樣的方法處理，得到乳清蛋白(WPC)。該乳清蛋白的抗體含量為38mg/g。
利用離子交換法從實施例5-2所用干酪乳清中得到乳清蛋白溶液。相對于100L該乳清蛋白溶液添加8.0kg果低聚糖，噴霧干燥得到乳清蛋白(WPI)。該乳清蛋白的抗體含量為62mg/g。
實施例5-2中所用的干酪乳清不添加果低聚糖，利用與實施例5-3同樣的方法處理，得到乳清蛋白(WPI)。該乳清蛋白的抗體含量為9mg/g。
鮮乳在65℃下加熱滅菌30分鐘，按照常規(guī)方法，由部分抗體已經(jīng)損失的該滅菌乳制造酪蛋白凝乳，得到副產(chǎn)品酸乳清(蛋白含量0.9％)。利用超濾法從該酸乳清中得到乳清蛋白溶液(該乳清蛋白溶液中含有3.5％質(zhì)量乳糖)。相對于100L該乳清蛋白溶液添加3.0kg海藻糖，噴霧干燥得到乳清蛋白(WPC)。該乳清蛋白的抗體含量為60mg/g。
實施例5-4中所用的酸乳清不添加海藻糖，利用與實施例5-4同樣的方法處理，得到乳清蛋白(WPC)。該乳清蛋白的抗體含量為42mg/g。
a)膠原對牛進(jìn)行的免疫將2mg雞II型膠原(コンドレツクス公司)溶解于1ml 0.05M乙酸中，制備2mg/ml的膠原乙酸溶液。將其與同量的2倍濃度的磷酸緩沖生理鹽水(PBS)混合成為2ml，將其中1ml加入到1ml TiterMaxgold中，充分?jǐn)嚢柚瞥扇閯＿x4頭妊娠牛，將2ml乳劑注射到每頭牛頸部皮下進(jìn)行免疫，每1ml分注2處，分別在預(yù)產(chǎn)前60天、30天、生產(chǎn)后30天、60天注射，共4次。
b)大腸菌O-111B4菌株對牛進(jìn)行的免疫使大腸桿菌O-111B4菌株在普通瓊脂平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)增殖，加入1％福爾馬林及生理鹽水溶液，取出，在80℃下加熱滅菌1小時。洗滌加熱菌液，然后將濁度調(diào)節(jié)為在660nm下吸光度為1.0。將1ml菌液加入到1ml TiterMax gold中，充分?jǐn)嚢柚瞥扇閯＿x3頭妊娠牛，將每1ml該菌液注射到每頭牛的頭皮下，分別在預(yù)產(chǎn)前60天、30天，共進(jìn)行2次。
c)從雞II型膠原免疫牛的初乳、大腸菌O-111B4菌株免疫牛的初乳中制備乳清將在上述a)、b)中免疫的各牛在生產(chǎn)后3天內(nèi)的鮮乳擠出并收集。對其中的8升在20000g下離心30分鐘，除去脂肪層得到脫脂乳。將脫脂乳在62.5℃加熱滅菌30分鐘，然后加入鹽酸使pH值為4.6，通過在20000g下離心30分鐘除去酪蛋白，然后加入氫氧化鈉溶液使pH值為7.0，冷凍干燥，分別得到干燥物707g、780g。
抗LPS?？贵w的特異純化在實施例1c)中制備的大腸桿菌免疫牛乳清中含有0.25％大腸桿菌內(nèi)毒素O-111的抗體。將其調(diào)制成在50L磷酸緩沖生理鹽水中含有1％的溶液，加到500ml的O-111固相親和柱上、洗滌、pH2.8洗脫、中和后，進(jìn)一步用蛋白G柱濃縮純化，得到抗原特異抗體580mg。
抗雞II型膠原?？贵w的特異純化在實施例1c)中制備的由雞II型膠原免疫牛的初乳而調(diào)制的乳清中含有0.6％雞II型膠原的抗體。將其調(diào)制成在30L磷酸緩沖生理鹽水中含有1％的溶液，加到500ml的O-111固相親和柱上、依次洗滌柱、pH2.8洗脫、中和后，進(jìn)一步用蛋白G柱濃縮純化，得到抗原特異抗體930mg。
抗LPS牛抗體對小鼠抗膠原·單克隆抗體混合物引起的關(guān)節(jié)炎發(fā)病模型中的關(guān)節(jié)炎發(fā)病的阻止效果注射給予4mg小鼠關(guān)節(jié)軟骨膠原的單克隆抗體(關(guān)節(jié)炎用雞尾酒，コンドレツクス公司)則小鼠發(fā)生關(guān)節(jié)炎，第2天關(guān)節(jié)的腫脹最大。然而，減少關(guān)節(jié)炎用雞尾酒的量，為2mg時關(guān)節(jié)炎完全不發(fā)病?？墒?，當(dāng)該口服給予小鼠大腸桿菌LPS(E.Coli O-111B4 Sigma，3mg/每小鼠/每日，關(guān)節(jié)炎用雞尾酒投藥日為0日，大腸桿菌LPS給予日分別在0、1、2日)時，小鼠發(fā)生關(guān)節(jié)炎，第6天關(guān)節(jié)的腫脹達(dá)到最高。將一組3只6周齡BALB/c雄性小鼠作為一組，設(shè)定關(guān)節(jié)炎用雞尾酒組、關(guān)節(jié)炎用雞尾酒與LPS口服并用組、關(guān)節(jié)炎用雞尾酒與LPS口服再口服抗LPS抗體的3組，通過測定雙爪容積來評價關(guān)節(jié)炎的腫脹。在LPS給藥日使抗LPS抗體即實施例6-2所示的純化特異抗體以3mg/每小鼠/每日進(jìn)行口服攝取。結(jié)果如表6-1所示。
表6-1

如表6-1所示，口服LPS的促進(jìn)關(guān)節(jié)炎發(fā)病效果受到口服特異純化的抗LPS抗體的阻止。
抗型膠原抗體和抗LPS抗體對長期口服雞II型膠原、LPS引起的小鼠關(guān)節(jié)炎發(fā)病的阻止效果在雞II型膠原中加入LPS，口服給予小鼠，與II型膠原單獨給予組相比使抗體生成和關(guān)節(jié)炎發(fā)病增強(qiáng)(K.Terato等.Br J.Rheum.35，828-838，1996)。因此，使用DBA/1小鼠分別研究所對應(yīng)的抗體對關(guān)節(jié)炎發(fā)病的抑制作用。將關(guān)節(jié)炎易發(fā)系的6只DBA/1雄性6周齡小鼠作為一組，設(shè)定膠原(雞II型膠原、コンド レツクス公司)單獨組、膠原中加入LPS(E.Coli O-111B4 Sigma)組和在上述中進(jìn)一步添加抗膠原抗體(實施例6-3)、抗LPS抗體(實施例6-2)進(jìn)行給予的組，經(jīng)過14周、2周為一個周期，進(jìn)行4個周期的口服免疫。為了促進(jìn)膠原、LPS的口服吸收，口服免疫期間的口服給予是包括對照組1在內(nèi)的所有組中均加入40μg吲哚美辛，口服給予的總?cè)莘e為0.4ml。在16周的第1天眼底采血得到血清后，為了使之在一周內(nèi)發(fā)生關(guān)節(jié)炎，口服給予LPS誘發(fā)關(guān)節(jié)炎。在各免疫周期的第1天和17周的第1天對關(guān)節(jié)腫脹(記載文獻(xiàn)如表6-2)進(jìn)行評點。動物組的構(gòu)成與處置條件、足趾容積如表6-2所示。給予量為所有小鼠平均的口服給予量。
表6-2顯示通過膠原和LPS的長期給予引起的口服致敏，即使在分別單獨給藥時也發(fā)生關(guān)節(jié)炎，如果同時給予上述兩者則關(guān)節(jié)炎強(qiáng)烈發(fā)病。與此相對，將抗膠原抗體與抗細(xì)菌內(nèi)毒素抗體(抗LPS抗體)結(jié)合使用可以阻止關(guān)節(jié)炎發(fā)病。
表6-2

*相對于對照組的顯著差異p＜0.05；**p＜0.01@Fujii K等J Immunol Methods 1989；12463-70#Terato K等J Exp Med 1985；162637-46[實施例6-6]抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療組合物準(zhǔn)備通過市售的牛II型膠原、豬II型膠原免疫雞而得到的總抗體量為50％抗體含量的雞卵含抗體粉末以及由雞II型膠原和市售大腸桿菌疫苗(imocoliv，ゼンノウ)免疫牛而得到的鮮乳總抗體含量為5％的乳清粉末，將它們以1∶9的比例混合，添加賦形劑，在約65℃的溫度下、按照規(guī)定方法調(diào)節(jié)顆粒使總抗體含量為0.1％。
(抗體量的測定法)取100mg乳清蛋白或含有抗體的功能性組合物，將其溶解在50ml磷酸緩沖液(50mM，pH6.8)中，攪拌2小時以上，然后將其中10ml以上用0.45μ膜濾器過濾。另一方面，利用50mM磷酸緩沖液(pH6.8)平衡蛋白G柱(Amersham，HiTrap Protein G HP 1ml)，將上述用膜濾器過濾的10ml試樣過柱，用該緩沖液(pH6.8)洗滌，然后用100mM甘氨酸鹽酸緩沖液(pH2.7)使抗體洗脫。
測定洗脫液在280nm下的吸光度，1％抗體濃度時的吸光度為14由此換算試樣中的抗體濃度，然后計算乳清蛋白或功能性組合物中的抗體量。
(測定乳清蛋白中的抗體含量)按照上述測定方法，測定市售的乳清蛋白中的抗體含量時，Proliant 8000(James Farrell & Co.制備)、含IgG濃縮乳清蛋白((株)アオテアロア)分別為50.0mg/g、166mg/g。
利用下述表7-1所示配比(數(shù)字為質(zhì)量比)制備4種類的功能性組合物。表7-1中也同時顯示了功能性組合物的抗體含量。在以下的試驗中使用Proliant 8000作為比較例7-1、納豆菌的冷凍干燥菌體作為比較例7-2、蘑菇屬干燥粉末作為比較例7-3、啤酒酵母粉末作為比較例7-4、酪蛋白分解物作為比較例7-5、醇溶蛋白處理SOD作為比較例7-6(オキシカイン(注冊商標(biāo))、イゾセル公司(法國)制備)。并且調(diào)制2種的免疫活化物質(zhì)的組合物，用作比較例7-7。
表7-1
(對IgG抗體生成的作用)對6周齡的BALB/c系雄性小鼠1組6只，給予分別添加有1％質(zhì)量實施例7-1～7-5、比較例7-1～7-5的混合飼料，喂養(yǎng)2周。對照例給予不添加任何物質(zhì)的飼料，同樣喂養(yǎng)。之后，用包含10μg卵白蛋白、1mg氫氧化鋁的0.1ml生理鹽水進(jìn)行免疫，免疫的14天后從眼底靜脈叢采血分離血清。該血清中的抗卵白蛋白IgG抗體(抗EAIgG)濃度如下求出。
即，向平底96孔微量反應(yīng)板(Nunc，439454)中加入溶解于0.05M碳酸鈉緩沖液(pH9.5)的50μl 0.1mg/ml的卵白蛋白溶液，4℃下過夜。用洗滌液(0.9％氯化鈉、0.05％Tween20)洗滌后，加入200μl含有1mg/ml牛血清白蛋白的磷酸緩沖生理鹽水(PBS)，37℃放置1小時進(jìn)行封閉。洗滌后，加入利用含有10mg/ml牛血清白蛋白、0.05％Tween20、3％氯化鈉的PBS(溶液A)稀釋的上述血清，37℃放置1小時。洗滌后，加入通過溶液A稀釋10000倍的50μl過氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG山羊抗體(生化學(xué)工業(yè)制備)的稀釋液，37℃放置1小時，然后洗滌，加入100μl底物溶液(40mg鄰苯二胺、20μl 30％過氧化氫/100ml枸櫞酸-磷酸鈉緩沖液)，室溫放置，測定492nm的吸光度。
利用卵白蛋白與弗羅因德完全佐劑同時免疫的小鼠血清，由卵白蛋白結(jié)合瓊脂糖4B親和柱純化IgG抗體，使用該抗體制作標(biāo)準(zhǔn)曲線求得抗體濃度。血清中的抗EAIgG濃度的測定結(jié)果(各組的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)如表7-2所示。
(對IgE抗體生成的作用)實施例7-6中采集的血清中的抗卵白蛋白IgG抗體(抗EAIgE)濃度如下求得。即，向平底96孔微量反應(yīng)板(Nunc，439454)中加入溶解于PBS的50μl抗小鼠IgE抗體，4℃下放置過夜。用洗滌液(0.9％氯化鈉、0.05％Tween20)洗滌后，加入200μl兔血清，37℃放置1小時進(jìn)行封閉。洗滌后，加入利用含有1％兔血清、0.05％Tween20、3％氯化鈉的PBS(溶液B)稀釋的上述血清，37℃放置1小時。洗滌后，加入通過溶液B稀釋的50μl結(jié)合有生物素的卵白蛋白稀釋液，37℃放置1小時，洗滌后，加入通過溶液B稀釋2500倍的50μl過氧化物酶標(biāo)記抗生物素(西格馬公司制備)的稀釋液，37℃放置1小時，然后洗滌，加入100μl底物溶液(40mg鄰苯二胺、20μl 30％過氧化氫/100ml枸櫞酸-磷酸鈉緩沖液)，室溫放置，測定492nm的吸光度。該吸光度的值(各組的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)一并顯示于表7-2中。吸光度與抗體濃度成正相關(guān)，吸光度大表示抗體濃度高。
從表7-2可知實施例與比較例相比，血清中的抗卵白蛋白IgG濃度增高，抗卵白蛋白IgE濃度降低。IgG參與機(jī)體防御病毒或細(xì)菌等的機(jī)制，IgE參與引起變應(yīng)性癥狀的機(jī)制。IgG增高、IgE降低表示免疫體系的Th1/Th2平衡中Th1發(fā)揮優(yōu)勢作用，表示實施例7-1～7-5還較比較例7-1～7-7具有更健全的免疫調(diào)節(jié)作用。
表7-2

(對IL-12生成的影響)作為被試驗者，將男女15名(21～30歲9名；31～40歲3名；41～60歲3名)分成3組(各組5名)，將比較例7-1、比較例7-2、實施例7-1的粉末每日10g懸浮在100ml水中，每天早餐后讓各組分別飲用，連續(xù)飲用2周，對連續(xù)飲用前與連續(xù)飲用后誘導(dǎo)IL-12的生成進(jìn)行如下的測定。
即，從各被試驗者進(jìn)行肝素采血，用HISTOPAQUE-1077(西格馬公司制備)按照常規(guī)方法制備PBMC(Peripheral Blood MononuclearCells末梢血單核細(xì)胞)。利用添加有10％FCS(Fetal Calf Serum胎牛血清)的RPMI-1640培養(yǎng)基，將PBMC調(diào)整為2×106/ml，分注到24孔板上、每孔1ml。向其中添加0.01KE的OK-432，在CO2保溫箱中37℃培養(yǎng)24小時，然后冷凍過夜。將其解凍，使用人IL-12 ELISA試劑盒(R&D Systems公司制備)測定培養(yǎng)上清中的IL-12濃度。結(jié)果(各組的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)如圖4所示。
其中，已知IL-12是由巨噬細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子“生理活性物質(zhì)”，可激活直接攻擊癌細(xì)胞的自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)或殺傷-T細(xì)胞(CTL細(xì)胞)，又能增強(qiáng)干擾素(IFN-γ)的生成的非常強(qiáng)力的免疫活性物質(zhì)。
OK-432是指作為“ピシバニ-ル-”(商品名，中外制藥(株))市售的抗癌劑，是將化膿鏈球菌(A組3型)Su菌株在青霉素G的存在下、進(jìn)行一定條件的處理、冷凍干燥而得到的菌體制劑。藤本等還將OK-432用作免疫活性測定時的刺激物質(zhì)(觸發(fā)點)(J.Immunol.Jun15；158(12)5619-26)。
從圖4可知比較例7-1、比較例7-2中通過連續(xù)飲用，IL-12濃度上升，而連續(xù)飲用實施例7-1的組合物時IL-12濃度上升較比較例7-1、比較例7-2更大，認(rèn)為免疫應(yīng)答性變得更強(qiáng)。
(整腸作用的研究)作為被試驗者，將男女15名(21～30歲9名；31～40歲3名；41～60歲3名)分成3組(各組5名)，將比較例7-1、比較例7-2、實施例7-1的粉末每日10g懸浮在100ml水中，每天早餐后讓各組分別飲用，連續(xù)飲用2周，對連續(xù)飲用中的后一周進(jìn)行有關(guān)排便的問卷調(diào)查。應(yīng)說明的是，對連續(xù)飲用前的一周也進(jìn)行同樣的問卷調(diào)查。調(diào)查項目有(1)排便次數(shù)、(2)排便量、(3)糞便顏色、(4)糞便臭味，結(jié)果(各組的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)如表7-3所示。
(1)排便次數(shù)中，通過飲用比較例7-1、比較例7-2可見有次數(shù)增加的趨勢，而飲用實施例7-1則顯著增加。(2)對于排便量，通過飲用比較例7-1、比較例7-2、實施例7-1均未發(fā)現(xiàn)大的差異。(3)關(guān)于糞便顏色，通過飲用比較例7-1、比較例7-2可見顏色變得良好，而飲用實施例7-1則可以明顯改善顏色。(4)糞便臭味，比較例7-1的改善效果較比較例7-2的大，而實施例7-1可以進(jìn)一步大大改善糞便臭味。
匯總(1)～(4)，即使是比較例7-1、比較例7-2也可見一些整腸作用，而通過飲用實施例7-1的組合物可見明顯的整腸作用，顯示了抗體與菌體同時攝取的優(yōu)勢性。
表7-3中，(2)排便量是比作直徑40mm的乒乓球的個數(shù)換算的數(shù)值的平均值；(3)糞便顏色是表示黃色0、淡土黃色1、土黃色2、棕色3、深棕色4的數(shù)值的平均值；(4)糞便臭味是表示幾乎沒有臭味0、有輕度的臭味1、一般2、臭味3、很臭4的數(shù)值的平均值。
表7-3

(分散性的測定法)將15℃的水加入到200ml玻璃燒杯中，使用磁力攪拌器(アドバンテツク公司制備SR200)，用刻度3邊攪拌邊添加試樣，測定從試樣添加后開始到試樣均勻分散為止的時間。
按下述表8-1所示配比(數(shù)值為質(zhì)量比)制備5種類的乳清蛋白組合物。表8-1中，乳清蛋白(WPC)使用了James Farrell & Co.制備的Proliant 8000。此外，アビセルRC-30為旭化成工業(yè)社制的微結(jié)晶纖維素、KC フロツクW-10MG為日本制紙ケミカル社制的粉末纖維素、メイオリゴCR為明治食品マテリア社制的結(jié)晶果低聚糖。
(分散性的測定)按照上述方法，測定實施例8-1～8-5、比較例8-1中制備的粉末蛋白組合物的分散性，結(jié)果如表8-2所示。組合物的添加量調(diào)整為蛋白的量相同。由分散時間可知實施例8-1～8-5分別與比較例8-1相比分散性均得到了改善。
表8-1


表8-2
(顆?；?)按照實施例8-1的配比將乳清蛋白(WPC，粉末)與KCフロツクW-10MG混合，然后利用噴霧造粒法制備顆粒，同樣進(jìn)行分散性的測定，分散時間為2分00秒，分散性更加得到了改善。
(顆粒化2)使用采用噴霧造粒法進(jìn)行顆?；娜榍宓鞍?WPC)，按照實施例8-1的配比(KCフロツクW-1 0MG為粉末)制備蛋白組合物，同樣進(jìn)行分散性的測定，分散時間為1分50秒，分散性進(jìn)一步得到了改善。
(抗體量的測定法)與上述實施例4同樣地進(jìn)行測定。
(測定乳清蛋白中的抗體含量)與參考例4-1同樣。
與實施例4-1～4-5、表4-1同樣。
風(fēng)味改善的評價與實施例4、表4-2同樣。
與實施例4-6～4-8同樣。
與實施例4-9同樣。
與實施例4-10同樣。
與實施例4-11同樣。
與實施例4-12同樣。
以下的實施例中，吸水性的測定按照下面的方法。
(吸水性的測定法)將5℃的牛乳加入到100ml玻璃燒杯中，使用磁力攪拌器(アドバンテツク公司制備SR200)，用刻度3邊攪拌邊添加試樣使乳清蛋白含量為2.5g，測定從試樣添加后開始到試樣均勻分散為止的時間。
按下述表9-3所示配比(數(shù)值為質(zhì)量比)制備5種類的乳清蛋白食品。表9-3中，WPC顆粒通過噴霧造粒法將Proliant 8000制成顆粒狀(平均粒徑為0.2mm左右)使用。對所得乳清蛋白食品和實施例9-6～9-8中使用的顆粒狀(平均粒徑為0.2mm左右)乳清蛋白食品(實施例9-18～9-20)，按照上述方法測定了各自的吸水性。其結(jié)果如表9-4、9-5所示。
表9-3

表9-4

表9-5

如表9-4、9-5所示的那樣，通過在WPC顆粒中添加粉末的糖類，可以看到比僅WPC顆粒和WPC與糖混合而成的顆粒更加改善吸水性。
按下述表10-1所示配比(數(shù)值為質(zhì)量比)制備3種類的乳清蛋白食品。表1中，Proliant(注冊商標(biāo))8000為乳清蛋白(WPC，James Farrell& Co.制備)。メイオリゴ(注冊商標(biāo))P為果低聚糖(明治制果(株)制備)。
表10-1

(雙歧桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌的測定法)雙歧桿菌菌數(shù)的測定將BL瓊脂培養(yǎng)基“ニツスイ”(日水制藥(株))滅菌后，冷卻至50℃，添加5％BS培養(yǎng)基用添加液(30％丙酸鈉、6％氯化鋰、0.1％硫酸巴龍霉素、0.1％硫酸新霉素)、5％馬脫纖維血液，分注到培養(yǎng)皿上制成平板。用コンラ-ジ棒(CONRADISTICK)(接種環(huán))涂布稀釋的試樣，在37℃下進(jìn)行厭氧培養(yǎng)20小時，估算菌數(shù)。
產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌菌數(shù)的測定將含有卡那霉素的CW瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基“ニツスイ”(日水制藥(株))滅菌，分注到培養(yǎng)皿上制成平板。用コンラ-ジ棒涂布稀釋的試樣，在37℃下進(jìn)行厭氧培養(yǎng)20小時，估算菌數(shù)。
使實施例10-1、比較例10-1、比較例10-2的粉末按照表10-2所示的順序各2周(總計6周)，各自1天10g懸浮在100ml水中，每天早餐后讓3名被試驗者飲用。對各2周中的后1周采取糞便。應(yīng)說明的是，試驗開始前的1周也采取了糞便。用上述方法測定這些糞便中的雙歧桿菌菌數(shù)、產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌菌數(shù)，將各試驗區(qū)的值平均。這些測定結(jié)果如圖5的圖表所示。
表10-2

如圖5所示的那樣，與試驗開始前相比，攝取比較例10-1、比較例10-2的乳清蛋白食品則作為有益菌的雙歧桿菌稍有增加，但是通過攝取實施例10-1的乳清蛋白食品而大大增加。另一方面，與試驗開始前相比，攝取比較例10-1、比較例10-2的食品則作為有害菌的產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌減少，攝取實施例10-1的食品則進(jìn)一步減少。
由上述可知，攝取實施例10-1所示的乳清蛋白食品比攝取比較例10-1、比較例10-2的食品可以大大改善腸內(nèi)環(huán)境。
(整腸作用的研究1)作為被試驗者，將男女15名(21～30歲9名；31～40歲3名；41～60歲3名)分成3組(各組5名)，將實施例10-1、比較例10-1、比較例10-2的乳清蛋白食品粉末每日10g懸浮在100ml水中，每天早餐后讓各組分別飲用，連續(xù)飲用2周，對連續(xù)飲用中的后一周進(jìn)行有關(guān)排便的問卷調(diào)查。應(yīng)說明的是，對連續(xù)飲用前的一周也進(jìn)行同樣的問卷調(diào)查。調(diào)查項目有(1)排便次數(shù)、(2)排便量、(3)糞便顏色、(4)糞便臭味，結(jié)果(各組的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差)如表10-3所示。
(1)排便次數(shù)中，通過飲用比較例10-1、比較例10-2的乳清蛋白食品粉末可見有次數(shù)增加的趨勢，而飲用實施例10-1的食品則顯著增加。(2)排便量通過飲用比較例10-1、比較例10-2、實施例10-1的食品均未發(fā)現(xiàn)大的差異。(3)糞便顏色通過飲用比較例10-1、比較例10-2可見顏色變得良好，而飲用實施例10-1的食品則可以明顯改善顏色。(4)糞便臭味可以通過比較例10-1、比較例10-2改善，而實施例10-1可以進(jìn)一步大大改善糞便臭味。
匯總(1)～(4)，即使是比較例10-1、比較例10-2的乳清蛋白食品也可見一些整腸作用，而通過飲用實施例10-1的乳清蛋白食品可見明顯的整腸作用，顯示了抗體、低聚糖和食物纖維三者同時攝取的優(yōu)勢性。
表10-3中，各數(shù)值含意如下。
(3)糞便顏色；0黃色、1淡土黃色、2土黃色、3棕色、4深棕色(4)糞便臭味；0幾乎沒有臭味、1有輕度的臭味、2一般、3臭味、4很臭表10-3
(整腸作用的研究2)將實施例10-1、比較例10-1的メイオリゴP置換為乳果糖制備乳清蛋白食品，進(jìn)行與實施例10-2同樣的試驗時，得到與實施例10-2同樣的結(jié)果，顯示了抗體、低聚糖和食物纖維三者同時攝取的優(yōu)勢性。
(整腸作用的研究3)將實施例10-1、比較例10-1的メイオリゴP置換為海藻糖制備乳清蛋白食品，進(jìn)行與實施例10-2同樣的試驗時，得到與實施例10-2同樣的結(jié)果，顯示了抗體、低聚糖和食物纖維三者同時攝取的優(yōu)勢性。
(整腸作用的研究4)將實施例10-1、比較例10-2的果膠置換為海藻酸鈉制備乳清蛋白食品，進(jìn)行與實施例10-2同樣的試驗時，得到與實施例10-2同樣的結(jié)果，顯示了抗體、低聚糖和食物纖維三者同時攝取的優(yōu)勢性。
(整腸作用的研究5)將實施例10-1、比較例10-2的果膠置換為葡甘露聚糖制備乳清蛋白食品，進(jìn)行與實施例10-2同樣的試驗時，得到與實施例10-2同樣的結(jié)果，顯示了抗體、低聚糖和食物纖維三者同時攝取的優(yōu)勢性。
(抗體量的測定法)利用蛋白G柱從抗牛IgG兔免疫血清(ヤガイ制備)中分餾吸附餾分，以此作為一次抗體，HRP標(biāo)記抗牛IgG抗體(コスモバイオ制備)作為二次抗體，用通常的方法通過ELISA進(jìn)行定量。
(大腸桿菌、大腸桿菌菌群數(shù)的測定法)使用ESコリマ-ク瓊脂培養(yǎng)基(榮研器材(株)制)測定。
(金黃色葡萄球菌數(shù)的測定法)使用食鹽卵瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基(ニツスイ(株)制)。
(利斯特氏菌的鑒定法)利用牛津(オツクスフオ-ド)瓊脂培養(yǎng)基(Difco)直接分離培養(yǎng)，對產(chǎn)生的菌落進(jìn)行鑒定試驗。
(抗體的分離)將牛的初乳離心除去脂肪成分，向該脫脂乳中添加鹽酸，在pH值為4.6的條件下使酪蛋白沉淀、去除。向上清中添加氫氧化鈉使pH值為7.0，然后冷凍干燥，得到初乳乳清粉末。將該初乳乳清粉末再溶解，利用蛋白G柱按照常規(guī)方法進(jìn)行3次吸附洗脫，然后透析去除低分子餾分得到蛋白G吸附餾分，以此作為牛乳中的抗體標(biāo)品。使用該標(biāo)品求出標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定試樣中的抗體濃度。
(對乳酸菌發(fā)酵除菌的確認(rèn)1)得到鮮乳、利用ELISA法測定抗體量時得知該鮮乳中含有151μg/ml抗體。大腸桿菌菌群數(shù)為20/ml、金黃色葡萄球菌數(shù)為50/ml。向該1L鮮乳中加入50ml事先培養(yǎng)的乳酸菌(干酪乳桿菌，Lactobacillus casei)發(fā)酵劑，在37℃下使之發(fā)酵15小時時，得到了具有良好風(fēng)味的酸乳酪。測定該酸乳酪中的抗體量時得知該酸乳酪中含有144μg/ml抗體，在發(fā)酵中抗體沒有發(fā)生損失。另外，大腸桿菌菌群數(shù)、金黃色葡萄球菌數(shù)均變成10/ml以下(檢出下限以下)，確認(rèn)了通過乳酸菌可以去除大腸桿菌菌群、金黃色葡萄球菌。
應(yīng)說明的是，鮮乳中不添加乳酸菌發(fā)酵劑在37℃下放置15小時時，大腸桿菌菌群數(shù)變成1.1×107/ml、金黃色葡萄球菌變成2.3×106/ml。
(對乳酸菌發(fā)酵除菌的確認(rèn)2)
在與實施例11-1中使用的相同鮮乳中按50/ml的濃度添加大腸桿菌。在該1L添加大腸菌的鮮乳中添加88％乳酸液(ベ-ガン通商(株)制備)，使pH值為5.8，再添加1％甘油。向其中加入50ml事先培養(yǎng)的乳酸菌(路氏乳桿菌，Lactobacillus reuteri)發(fā)酵劑，在37℃下使之發(fā)酵24小時時，大腸桿菌數(shù)、大腸桿菌菌群數(shù)、金黃色葡萄球菌數(shù)均變成10/ml以下(檢出下限以下)，確認(rèn)了通過乳酸菌可以去除這些菌。另外，該酸乳酪雖然酸味稍強(qiáng)但風(fēng)味好。
(對乳酸菌發(fā)酵除菌的確認(rèn)3)得到其它的鮮乳、分析利斯特氏桿菌時得知該鮮乳中利斯特氏桿菌為陽性。向該1L鮮乳中加入20ml事先培養(yǎng)的乳酸菌(糞腸球菌，Enterococcus faecalis)發(fā)酵劑、20ml雙歧桿菌(Bifidobacteriumbifidum)發(fā)酵劑，在37℃下使之發(fā)酵20小時時，利斯特氏桿菌變成陰性。另外，大腸桿菌數(shù)、大腸桿菌菌群數(shù)、金黃色葡萄球菌數(shù)也變成10/ml以下(檢出下限以下)，確認(rèn)了這些菌已滅活。
分別向1L超高溫滅菌(130℃、2秒鐘)牛乳、低溫滅菌(66℃、30分鐘)牛乳、未滅菌的鮮乳中各加入20ml事先培養(yǎng)的乳酸菌(干酪乳桿菌，Lactobacillus casei)發(fā)酵劑，在37℃下使之發(fā)酵15小時，得到酸乳酪。將上述酸乳酪在冰箱內(nèi)冷卻后，讓20歲年齡層的女性10人試食。選擇認(rèn)為最好吃的酸乳酪，對味道、風(fēng)味進(jìn)行評語。結(jié)果如下。
(選擇認(rèn)為最好吃的酸乳酪的人數(shù))由超高溫滅菌牛乳制作的酸乳酪(A) 0人由低溫滅菌牛乳制作的酸乳酪(B)1人由未滅菌牛乳制作的酸乳酪(C) 9人(對各酸乳酪的評語)
(A)酸味強(qiáng)；略帶煳味；味道不濃。
(B)略有ぽつたり感覺。味道醇和。
(C)味道濃厚且略帶甜味。有獨特的新鮮香味。
(抗體量的測定法)利用蛋白G柱從抗牛IgG兔免疫血清(ヤガイ制備)中分餾吸附餾分，以此作為一次抗體，HRP標(biāo)記抗牛IgG抗體(コ スモバイオ制備)作為二次抗體，用通常的方法通過ELISA進(jìn)行定量。作為抗體標(biāo)品，利用蛋白G柱按照常規(guī)方法對從牛的初乳中所得乳清粉末進(jìn)行3次吸附洗脫，然后透析去除低分子餾分，使用所得蛋白G吸附餾分，用該標(biāo)品求出標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定試樣中的抗體濃度。
(測定乳清蛋白中的抗體量)按照上述測定方法，測定市售乳清蛋白中的抗體量，結(jié)果如下。
WPC(乳清蛋白濃縮物)3.9％WPI(乳清蛋白分離物)1.1％含IgG濃縮乳清蛋白14.5％[實施例12-1](含乳清蛋白發(fā)酵食品1)向市售的超高溫加熱(130℃、2秒鐘)滅菌的1L牛乳中添加50g乳清蛋白、50gサンラクトN-5(太陽化學(xué)株式會社制備)。向其中加入50ml事先培養(yǎng)的乳酸菌(干酪乳桿菌，Lactobacillus casei)發(fā)酵劑，在37℃下使之發(fā)酵15小時時，得到具有良好風(fēng)味的酸乳酪。在該1g酸乳酪中包含1.6mg的抗體和8×109個乳酸菌。
(含乳清蛋白發(fā)酵食品2)向市售的1L調(diào)制豆乳中添加100g乳清蛋白、100gミラクテ-ル80(森永乳業(yè)株式會社制備)。向其中加入50ml事先培養(yǎng)的乳酸菌(嗜酸乳桿菌，Lactobacillus acidphilus)發(fā)酵劑，在37℃下使之發(fā)酵15小時時，得到酸乳酪狀的豆乳發(fā)酵食品。在該1g豆乳發(fā)酵食品中包含3.4mg的抗體和2×107個乳酸菌。
為了比較，在未添加乳清蛋白的1L調(diào)制豆乳中加入50ml事先培養(yǎng)的乳酸菌(嗜酸乳桿菌，Lactobacillus acidphilus)發(fā)酵劑，在37℃下使之發(fā)酵24小時時，與添加乳清蛋白的調(diào)制豆乳相比，固化度弱、脫水多。而且未能檢測出抗體。
(含乳清蛋白發(fā)酵食品3)向市售的超高溫加熱滅菌的1L牛乳中加入50ml事先培養(yǎng)的乳酸菌(加氏乳桿菌，Lactobacillus gasseri)發(fā)酵劑，在37℃下使之發(fā)酵15小時。在該發(fā)酵液中添加25g含乳-IgG濃縮乳清蛋白((株)アオテアロア)和20ml蘑菇萃取物，充分?jǐn)嚢?，得到酸乳酪飲料。在?g酸乳酪飲料中包含3.3mg的抗體和4×109個乳酸菌。
(含乳清蛋白的非發(fā)酵食品)將雙歧桿菌(長雙歧桿菌，Bifidobacterium Longum)在添加有0.2％濃度酵母萃取物的脫脂乳中培養(yǎng)。將該培養(yǎng)液冷卻至5℃制成不發(fā)酵狀態(tài)，將上述50ml與950ml市售的超高溫加熱滅菌的牛乳冷卻至5℃而得到的冷卻牛乳混合，并且添加25g含乳-IgG濃縮乳清蛋白((株)アオテアロア)，充分?jǐn)嚢?，得到非發(fā)酵飲料。在該1g非發(fā)酵飲料中包含3.5mg的抗體和3×107個雙歧桿菌。
(含初乳的發(fā)酵食品)將0.9升一般鮮乳與0.1升擠出的牛的初乳進(jìn)行混合，向其中加入50ml事先培養(yǎng)的乳酸菌(干酪乳桿菌，Lactobacillus casei)發(fā)酵劑，在37℃下使之發(fā)酵15小時，得到酸乳酪。在該1g酸乳酪中包含1.7mg的抗體和9×108個乳酸菌。
(抗體量的測定法)
利用蛋白G柱從抗牛IgG兔免疫血清(ヤガイ制備)中分餾吸附餾分，以此作為一次抗體，HRP標(biāo)記抗牛IgG抗體(コスモバイオ制備)作為二次抗體，用通常的方法通過ELISA進(jìn)行定量。作為抗體標(biāo)品，利用蛋白G柱按照常規(guī)方法對從牛的初乳中所得乳清粉末進(jìn)行3次吸附洗脫，然后透析去除低分子餾分，使用所得蛋白G吸附餾分，用該標(biāo)品求出標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定試樣中的抗體濃度。
(測定乳清蛋白中的抗體量)按照上述測定方法，測定市售的乳清蛋白中的抗體含量時，サンラクトN-5(太陽化學(xué)(株))、ミラクテ-ル80(森永乳業(yè)(株))、ALACEN 392(フオンテラジヤパン(株))、TATUA 902(タツアジヤパン(株))分別為3.9％質(zhì)量、3.9％質(zhì)量、3.7％質(zhì)量、3.8％質(zhì)量。另外，含乳-IgG濃縮乳清蛋白((株)アオテアロア)的抗體含量為15.5％質(zhì)量。
(含抗體的加工乳)向市售的超高溫加熱滅菌的1升牛乳中添加80g含乳-IgG濃縮乳清蛋白((株)アオテアロア)和20g果低聚糖、充分?jǐn)嚢?。此時的糖含量為6.2％質(zhì)量。將其在65℃下進(jìn)行30分鐘的加熱滅菌，得到含抗體的加工乳。在該1g含抗體加工乳中包含10.4mg來自乳的抗體，抗體的殘存率為90％。
(含抗體的蔬菜果汁飲料)向400g葫蘿卜汁、100g菠菜汁、300g番茄汁、150g蘋果汁、30g含乳-IgG濃縮乳清蛋白((株)アオテアロア)中添加作為其它免疫活化成分的20g蘑菇萃取物、混合。此時的糖含量為4.3％質(zhì)量。將其在60℃下加熱滅菌30分鐘，得到含抗體的蔬菜果汁飲料。在該1g含抗體蔬菜果汁飲料中包含2.4mg來自乳的抗體，抗體的殘存率為52％。
(含抗體的豆乳飲料)向市售的1升豆乳飲料中添加100gサンラクトN-5(太陽化學(xué)(株))，充分?jǐn)嚢钑r糖含量為4.5％質(zhì)量。將其在65℃下進(jìn)行30分鐘的加熱滅菌，得到含抗體的豆乳飲料。在該1g含抗體豆乳飲料中包含3.2mg來自乳的抗體，抗體的殘存率為89％。
(含抗體的巧克力)將900g切碎的巧克力(含有糖56％質(zhì)量)加熱至90℃溶解，冷卻至品溫為70℃，加入100g乳清蛋白、ミラクテ-ル80(森永乳業(yè)(株))均勻混合，得到含抗體的巧克力。在該1g含抗體巧克力中包含3.6mg來自乳的抗體，抗體的殘存率為93％。
(含抗體的冰淇淋)將2個卵黃與40g精制細(xì)砂糖充分混合，向其中添加150ml鮮奶油、50ml市售的超高溫加熱滅菌的牛乳、50ml水、15g乳清蛋白、ALACEN 392(フオンテラジヤパン(株))充分混合。此時的糖含量為13％質(zhì)量。將其在60℃下加熱滅菌30分鐘，均勻添加香草精油、冷卻后，在冰淇淋制造廠(東芝(株))成型。所得到的1g含抗體冰淇淋中包含1.7mg來自乳的抗體，抗體的殘存率為97％。
(含抗體的果凍)將200ml市售的超高溫加熱滅菌的牛乳加熱至60℃，添加50g砂糖和5g加少量水浸泡的明膠，進(jìn)一步加熱至95℃完全溶解。將其冷卻至60℃，添加25g乳清蛋白TATUA 902(タツアジヤパン(株))，在不產(chǎn)生氣泡的前提下快速攪拌，分注到果凍容器中。此時糖含量達(dá)到20％質(zhì)量。之后，60℃的狀態(tài)保持30分鐘、滅菌，然后冷卻至5℃，得到含抗體的果凍。在該1g含抗體果凍中包含3.2mg來自乳的抗體，抗體的殘存率為92％。
(含抗體的加工干酪)將1kg天然干酪(切達(dá)干酪)細(xì)切，添加30g多磷酸鈉和100g水，在80℃下加熱10分鐘使其熔融。冷卻至品溫為65℃，添加100g乳清蛋白サンラクトN-5(太陽化學(xué)(株)，充分混捏后裝入容器進(jìn)行成型。此時糖含量為1.4％質(zhì)量。將其在60℃下加熱滅菌30分鐘，得到含抗體的加工干酪。在該1g含抗體加工干酪中包含3.2mg來自乳的抗體，抗體的殘存率為96％。
(含抗體的可可飲料)使40g可可粉末、70g砂糖、25g赤蘚糖醇、120g乳清蛋白ミラクテ-ル80(森永乳業(yè)(株))溶解在1升水中。此時糖含量為7.6％質(zhì)量。在70℃下進(jìn)行30分鐘加熱滅菌，得到含抗體的可可飲料。在該1g含抗體可可飲料中包含1.9mg來自乳的抗體，抗體的殘存率為52％。
按下述表14-1所示配比制備6種類的乳清蛋白食品。表14-1中，Proliant(注冊商標(biāo))8000為乳清蛋白(WPC，James Farrell & Co.制備)。另外，抹茶使用島本(株)制備、蘆薈粉末使用蘆薈食品(株)制備的“キダチ蘆薈粉末”、郁金粉末使用(株)沖繩市場制備的“秋郁金粉末”、南瓜粉末使用天然素材(株)制備、紅葡萄果汁粉末使用アサマ化成(株)制備、番茄粉末使用サンブライト(株)制備的產(chǎn)品。
表14-1


(風(fēng)味改善的評價)將制備的各5質(zhì)量份乳清蛋白食品添加到市售的95質(zhì)量份原味酸乳酪中，使其均勻，和添加到市售的95質(zhì)量份超高溫滅菌牛乳(以下簡稱為“牛乳”)中，使其均勻，通過10名專業(yè)評味者按照5分法進(jìn)行官能評價。其平均分如表14-2所示。分?jǐn)?shù)高的表示風(fēng)味良好。實施例均為高得分，即，6種類的乳清蛋白食品均為乳清蛋白的風(fēng)味得到改善的食品。
表14-2

本實施例中，將添加了抹茶、蘆薈粉末、郁金粉末、南瓜粉末、紅葡萄果汁粉末、番茄粉末的乳清蛋白食品加入到酸乳酪中用于食用時，與乳清蛋白單獨的粉末相比均不容易形成“面疙瘩”狀態(tài)，吸水性得到了改善。
通過噴霧造粒法將實施例14-1、實施例14-3中所示配比的乳清蛋白食品制成顆粒狀乳清蛋白食品。將5質(zhì)量份這些顆粒狀乳清蛋白食品加入到95質(zhì)量份牛乳中時可以迅速吸水沉降、分散在牛乳中。
實施例15與實施例4同樣。
權(quán)利要求
1.功能性組合物，該組合物含有抗體和免疫活化物質(zhì)作為有效成分。
2.權(quán)利要求1的功能性組合物，其中抗體為來自乳的抗體。
3.權(quán)利要求1或2的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為乳酸菌、雙歧桿菌以外的不產(chǎn)生毒素的細(xì)菌的菌體或菌體成分。
4.權(quán)利要求1或2的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為霉菌·酵母的菌體或菌體成分。
5.權(quán)利要求1或2的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為菇類的菌體或菌體成分。
6.權(quán)利要求1或2的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為選自細(xì)菌、霉菌·酵母和菇類的菌類的菌體酶分解物。
7.權(quán)利要求1或2的功能性組合物，其中免疫活化物質(zhì)為SOD。
8.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，該組合物以具有抗類風(fēng)濕作用的抗體作為有效成分。
9.權(quán)利要求8的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，其中具有抗類風(fēng)濕作用的抗體為抗II型膠原抗體。
10.權(quán)利要求9的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，其中抗II型膠原抗體為抗雞II型膠原抗體、抗牛II型膠原抗體、抗豬II型膠原抗體的至少任一種。
11.權(quán)利要求8的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，其中具有抗類風(fēng)濕作用的抗體為抗細(xì)菌內(nèi)毒素抗體。
12.權(quán)利要求8的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，其中具有抗類風(fēng)濕作用的抗體為將抗II型膠原抗體與抗細(xì)菌內(nèi)毒素抗體以任意比例混合而得到的抗體。
13.權(quán)利要求8的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎治療劑組合物，其中該組合物含有抗II型膠原抗體和抗細(xì)菌內(nèi)毒素抗體的至少任一種，總抗體量含有0.1％質(zhì)量以上。
14.含有抗體的發(fā)酵食品的制造方法，其特征在于該方法無需將?；蚺Ｒ酝獾牟溉閯游锏孽r乳加熱至63℃以上，在上述鮮乳中添加乳酸菌或雙歧桿菌的一種或兩種以上，使之發(fā)酵。
15.權(quán)利要求14的含有抗體的發(fā)酵食品的制造方法，該方法是在上述鮮乳中事先添加有機(jī)酸使pH值在5.8以下，然后添加乳酸菌或雙歧桿菌的一種或兩種以上。
16.權(quán)利要求14或15的含有抗體的發(fā)酵食品的制造方法，該方法為使上述鮮乳脫脂并發(fā)酵。
17.含有抗體的發(fā)酵食品，該食品是通過權(quán)利要求14～16的制備方法而得到的。
18.含有抗體的食品，其特征在于該食品含有1.5mg/g以上抗體和107/g以上選自乳酸菌和雙歧桿菌的一種或兩種以上的菌。
19.權(quán)利要求18的含有抗體的食品，該食品含有3mg/g以上抗體。
20.權(quán)利要求18或19的含有抗體的食品，其中抗體為乳清蛋白中的抗體。
21.權(quán)利要求18～20中任一項的含有抗體的食品，其中抗體為初乳中的抗體。
22.權(quán)利要求18～21中任一項的含有抗體的食品，該食品還含有具有其它免疫活化功能的成分。
23.含有抗體的明確的食品，其特征在于該明確的食品含有1.5mg/g以上來自乳的抗體，但是不含有107/g以上乳酸菌和雙歧桿菌類。
24.權(quán)利要求23的含有抗體的明確的食品，該明確的食品含有3mg/g以上來自乳的抗體。
25.權(quán)利要求23的含有抗體的明確的食品，該明確的食品含有10mg/g以上來自乳的抗體。
26.權(quán)利要求23～25中任一項的含有抗體的明確的食品，其中來自乳的抗體為乳清蛋白中的抗體。
27.權(quán)利要求23～26中任一項的含有抗體的明確的食品，該明確的食品還含有來自乳的抗體以外的具有免疫活化功能的成分。
28.權(quán)利要求23～27中任一項的含有抗體的明確的食品，其中含有抗體的明確的食品為乳制品或冰點心。
29.權(quán)利要求28的含抗體的明確的食品的制造方法，其特征在于該方法為在50％以上抗體殘存的條件下對含有來自乳的抗體的明確的食品或者該明確的食品的含有來自乳的抗體的部分進(jìn)行加熱滅菌。
30.權(quán)利要求29的含抗體的明確的食品的制造方法，該方法為使含有抗體部分的糖含量調(diào)節(jié)為7.5％質(zhì)量以上進(jìn)行加熱滅菌。
31.乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白與糖、可可粉末、粉末狀非凝固性不溶物、抹茶、蘆薈粉末、郁金粉末、南瓜粉末、紅葡萄果汁粉末、番茄粉末、越橘粉末、木莓粉末、烏飯樹粉末或草莓粉末。
32.權(quán)利要求31的乳清蛋白食品，該食品含有乳清蛋白和糖，其中糖相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為5～1000質(zhì)量份。
33.權(quán)利要求32的乳清蛋白食品，其中糖為一種或兩種以上的難消化性糖類。
34.權(quán)利要求32的乳清蛋白食品，其中難消化性糖類選自果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖。
35.權(quán)利要求31的乳清蛋白食品，該食品含有乳清蛋白和一種或多種選自果低聚糖、乳果低聚糖(乳蔗糖)、乳果糖、異麥芽低聚糖、不含α-半乳糖基鍵的半乳低聚糖的低聚糖，其中低聚糖相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為5～900質(zhì)量份。
36.權(quán)利要求32～34中任一項的乳清蛋白食品，其中形狀為顆粒狀。
37.權(quán)利要求32～34中任一項的乳清蛋白食品，其中抗體或來自乳的抗體含量為5mg/g以上。
38.權(quán)利要求32～34中任一項的乳清蛋白食品，其特征在于抗體或來自乳的抗體含量為10mg/g以上。
39.權(quán)利要求32～34中任一項的乳清蛋白食品，其特征在于抗體或來自乳的抗體含量為50mg/g以上。
40.權(quán)利要求32～34中任一項的乳清蛋白食品，其中乳清蛋白為顆粒狀，糖為粉末。
41.權(quán)利要求32～34中任一項的乳清蛋白食品，其中糖相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為30質(zhì)量份以上。
42.便臭改善劑，其特征在于該便臭改善劑含有乳清蛋白。
43.權(quán)利要求42的便臭改善劑，該便臭改善劑以乳清蛋白中的抗體為有效成分。
44.權(quán)利要求42或43的便臭改善劑，該便臭改善劑包含0.5％質(zhì)量以上的抗體。
45.權(quán)利要求42～44中任一項的便臭改善劑，該便臭改善劑還含有難消化性糖類。
46.權(quán)利要求31的乳清蛋白食品，該食品含有乳清蛋白和可可粉末，其中可可粉末相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為1～10000質(zhì)量份。
47.權(quán)利要求46的乳清蛋白食品，其中形狀為顆粒狀。
48.權(quán)利要求31的乳清蛋白食品，該食品含有乳清蛋白和一種或多種選自越橘粉末、木莓粉末、烏飯樹粉末、草莓粉末的粉末，其中上述粉末相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為1～900質(zhì)量份。
49.權(quán)利要求48的乳清蛋白食品，其中形狀為顆粒狀。
50.水分散性優(yōu)異的蛋白組合物，其特征在于該組合物含有來自乳的粉末或顆粒狀蛋白和粉末狀非凝固性不溶解物。
51.權(quán)利要求50的蛋白組合物，其中上述粉末狀非凝固性不溶解物為纖維素類。
52.權(quán)利要求50或51的蛋白組合物，其中上述來自乳的粉末或顆粒狀蛋白為乳清蛋白。
53.權(quán)利要求50～52中任一項的蛋白組合物，該組合物還含有難消化性糖類。
54.乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白、低聚糖和水溶性食物纖維。
55.權(quán)利要求54的乳清蛋白食品，其中形狀為顆粒狀。
56.權(quán)利要求31的乳清蛋白食品，該食品含有乳清蛋白和選自抹茶、蘆薈粉末、郁金粉末、南瓜粉末、紅葡萄果汁粉末、番茄粉末的粉末，其中上述粉末相對于100質(zhì)量份乳清蛋白為1～900質(zhì)量份。
57.權(quán)利要求56的乳清蛋白食品，其中形狀為顆粒狀。
58.乳清蛋白的制備方法，其特征在于該方法通過在乳清蛋白制備工序中的至少一個環(huán)節(jié)添加糖，提高抗體的殘存率。
59.權(quán)利要求58的乳清蛋白的制備方法，該方法在鮮乳的加熱滅菌前添加糖。
60.權(quán)利要求58的乳清蛋白的制備方法，該方法在乳清加熱前添加糖。
61.權(quán)利要求59或60的乳清蛋白的制備方法，其中糖為乳糖。
62.權(quán)利要求58的乳清蛋白的制備方法，該方法在乳清蛋白干燥前添加糖。
63.權(quán)利要求62的乳清蛋白的制備方法，其中糖為難消化性糖類。
64.權(quán)利要求58～63的乳清蛋白的制備方法，其中抗體的殘存率為原料鮮乳中所含抗體的70％以上。
全文摘要
含有乳清蛋白、來自乳的抗體或抗體的功能性組合物或食品；乳清蛋白食品，其特征在于該食品含有乳清蛋白與糖、可可粉末、粉末狀非凝固性不溶物、抹茶、蘆薈粉末、郁金粉末、南瓜粉末、紅葡萄果汁粉末、番茄粉末、越橘粉末、木莓粉末、烏飯樹粉末或草莓粉末。
文檔編號A23G1/00GK101052418SQ20058003256
公開日2007年10月10日 申請日期2005年9月27日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月29日
發(fā)明者矢島瑞夫, 巖附聰, 鹽野谷博, 寺戶國昭, 赤松裕久, 鈴木秀歌, 加藤雅通 申請人:淺間化成株式會社, 靜岡縣政府