專利名稱：Glp-1激動(dòng)劑、組合物、方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)生物活性蛋白、片段或配體特異性的哺乳動(dòng)物胰 高血糖素樣肽-1 (GLP-1)激動(dòng)劑(例如GLP-1模擬體)、特定部分和變 體、GLP-1激動(dòng)劑編碼核酸和互補(bǔ)核酸、宿主細(xì)胞，及其制備和使 用方法，包括糖尿病相關(guān)治療配方、使用和裝置。
相關(guān)技術(shù)
重組蛋白是一類新興的治療劑。重組蛋白作為潛在治療劑的用 途已提供了 一個(gè)發(fā)展治療性蛋白制劑的機(jī)會(huì)，還包括化學(xué)修飾的用 途。此修飾可潛在地增強(qiáng)治療性蛋白質(zhì)的治療效用，例如潛在地通 過增加血清半衰期(例如通過阻斷其接觸蛋白水解酶)、增強(qiáng)生物活性 和/或減少有害副作用。 一種這樣的修飾是使用融合至受體蛋白的免 疫球蛋白片段如enteracept。還已使用抗體Fc結(jié)構(gòu)域構(gòu)建融合蛋白， 試圖提供較長(zhǎng)的半衰期或整合例如Fc受體結(jié)合、A蛋白結(jié)合和補(bǔ)體 結(jié)合的功能。
糖尿病是一種正在增長(zhǎng)的流行病，估計(jì)在有效的藥物治愈之前 到2025年有超過3億人受影響。大部分糖尿病屬于兩種臨床類型。 1型也稱為青年發(fā)作糖尿病或胰島素依賴性糖尿病(IDDM)， 2型也稱 為成年發(fā)作糖尿病，占全部病例的90-95%。
EDDM的特征在于部分或完全無能力生產(chǎn)胰島素。 一般認(rèn)為，1 型糖尿病由進(jìn)行性自身免疫應(yīng)答產(chǎn)生，其在有遺傳傾向的個(gè)體中選 擇性破壞產(chǎn)胰島素的Langerhans胰島P細(xì)胞。
診斷為2型糖尿病的患者的胰腺仍能夠合成和分泌胰島素。但是，胰島素針對(duì)其發(fā)揮作用的組織的敏感性受損。另外，許多2型 糖尿病患者在晚期是胰島素依賴性的，需要注射胰島素來改善其胰 島素抗性。
由持續(xù)升高的血漿葡萄糖水平產(chǎn)生的并發(fā)癥包括心血管疾病、 腎病、神經(jīng)病和視網(wǎng)膜病。通過胰島素注射或胰島素泵進(jìn)行的胰島
素替代療法是EDDM的標(biāo)準(zhǔn)治療。但是，此胰島素的傳遞不受控， 經(jīng)常導(dǎo)致患者血糖在正常范圍的上下波動(dòng)。胰島素需要型糖尿病治 療研究中的潛在替代療法是將正常供體的胰腺或胰島移植給糖尿病 患者。如果可使用免疫抑制療法或其它手段在某種程度上改善移植 排斥問題，則胰腺或胰島細(xì)胞可潛在地正?；撬?，恢復(fù)其中 胰島響應(yīng)于葡萄糖分泌胰島素的生理方式。但是，除并發(fā)癥伴隨需 要免疫抑制方案來防止移植排斥之外，限制該方法的主要因素是人 供體組織的缺乏。另外，用于移植的活供體策略應(yīng)有可能使供體變 成糖尿病患者。
對(duì)于大部分2型糖尿病患者，使用口服藥物，試圖通過部分地 增加胰島素敏感性、降低胰島素抗性和/或增加胰島素生產(chǎn)來降低血 糖。然而，這樣的療法最終是無效的，例如，在許多情況下，口服 藥劑是無效的或隨著時(shí)間推移而變得無效，在某些階段需要注射胰 島素來維持合適的葡萄糖水平。
大部分當(dāng)前的糖尿病治療伴有各種嚴(yán)重副作用，包括低血糖和 體重增加。另外，盡管所有的干預(yù)都可用，但仍有顯著數(shù)量的患者 不能將其血糖保持在可接受的范圍內(nèi)。因此，需要提供治療1型和/ 或2型糖尿病以及由其產(chǎn)生的并發(fā)癥的替代方法。
胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)是一種37個(gè)氨基酸的肽，在口服葡 萄糖挑戰(zhàn)后由腸L細(xì)胞分泌。隨后在第6和第7位之間的內(nèi)源切割 產(chǎn)生生物活性的GLP-1 (;37)肽。GLP-1 (7-37)肽序列可分為2個(gè)結(jié) 構(gòu)域。所述肽的氨基末端結(jié)構(gòu)域可參與信號(hào)傳導(dǎo)，而所述肽的其余 部分似乎結(jié)合螺旋構(gòu)象中GLP-1受體的胞外環(huán)?；钚訥LP-1似乎響應(yīng)于葡萄糖結(jié)合胰腺上的GLP-1受體，引起胰島素分泌增力口(促胰島
素作用)。另外，已經(jīng)表明，GLP-1減少胃排空，這降低了釋放入循 環(huán)中的大量葡萄糖，并可減少食物攝取。還已表明，GLP-1抑制胰 高血糖素分泌，由此減少肝臟中的儲(chǔ)存葡萄糖的內(nèi)源釋放。這些作 用單獨(dú)或組合地降低血糖水平。還已在體外和體內(nèi)研究中表明，GLP-1 抑制凋亡，增加胰腺中(3細(xì)胞的增殖。另外，還已表明，GLP-1活性 受控于血糖水平。當(dāng)血糖水平降至一定閾值水平時(shí)，GLP-1無活性。 因此，看起來幾乎沒有與給予動(dòng)物GLP-1相關(guān)的低血糖風(fēng)險(xiǎn)。
但是，GLP-1在體內(nèi)被蛋白酶二肽基-肽酶IV (DPP-IV)快速失 活。因此，涉及GLP-1肽的治療潛在有用性受限于其快速清除和短 半衰期。例如，GLP-1 (7-37)具有僅3-5分鐘的血清半衰期。GLP-l (;36) 酰胺在皮下給予時(shí)具有約50分鐘的時(shí)間作用。甚至抗內(nèi)源蛋白酶切 割的類似物和衍生物也不具有足夠長(zhǎng)的半衰期以避免在24小時(shí)時(shí)間 段內(nèi)重復(fù)給予。例如，exenatide抗DPP-IV,但由于短半衰期和體內(nèi)
藥代動(dòng)力學(xué)方面的明顯可變性而仍需要每日兩次餐前給藥。目前處 于臨床實(shí)驗(yàn)中的另一種化合物NN2211是脂化GLP-1類似物。預(yù)期 每曰給藥1次。
對(duì)于期望在長(zhǎng)時(shí)間段內(nèi)保持高藥物血液水平的情況，治療劑的 快速清除是不適合的，因?yàn)槟菢泳捅仨氈貜?fù)給予。而且，長(zhǎng)效化合 物對(duì)其過去治療方案已包括僅采用口服藥物的糖尿病患者特別重 要。這些患者經(jīng)常具有極其困難的一段時(shí)間過渡到包含多次藥物注 射的方案。具有增加的半衰期的GLP-1治療應(yīng)具有超出GLP-1肽和 開發(fā)中化合物的明顯優(yōu)勢(shì)。
因此，需要提供改良和/或修飾形式的GLP-1治療性蛋白，其克 月艮了一個(gè)或多個(gè)這些難題以及本領(lǐng)域已知的其它難題。
發(fā)明概述
如本文所述和/或本文能實(shí)現(xiàn)的，并結(jié)合本領(lǐng)域所知，本發(fā)明提供人GLP-1激動(dòng)劑，包括GLP-l模擬體(mimetibody),包括修飾的蛋 白、肽、免疫球蛋白、裂解產(chǎn)物和其它特定部分及其變體，以及GLP-1 激動(dòng)劑或模擬體組合物、編碼核酸或互補(bǔ)核酸、載體、宿主細(xì)胞、 組合物、制劑、裝置、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、轉(zhuǎn)基因植物，及其制備和使用 方法。
本發(fā)明還提供如本文所述和/或本領(lǐng)域已知的至少 一種分離的 GLP-1模擬體或特定部分或變體。該GLP-1模擬體任選可包含至少 一個(gè)CH3區(qū)，該CH3區(qū)與至少一個(gè)CH2區(qū)直接相連，該CH2區(qū)與 至少一個(gè)鉸鏈區(qū)的至少 一部分或其片段(H)直接相連，(H)與至少 一部 分可變區(qū)(V)直接相連，(V)與任選的接頭序列(L)直接相連，(L)與至 少一個(gè)GLP-1治療性肽(P)直接相連。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中， 一對(duì)CH3-CH2-鉸鏈-部分V區(qū)序列-接 頭-治療肽序列任選地通過締合或共價(jià)鍵(例如但不限于至少 一個(gè)Cys-Cys 二硫鍵或至少一個(gè)CH4或其它免疫球蛋白序列)連接成對(duì)。在一 個(gè)實(shí)施方案中，GLP-1模擬體包含式(I):
(I) (P(n)-L(o)國(guó)V(p)國(guó)H(q)-CH2(r)-CH3(s))(t)
其中P是至少一種生物活性GLP-1肽、變體或衍生物，L是至
少一個(gè)接頭序列，該接頭序列可為通過使模擬體具有可變方向和結(jié) 合特性而提供結(jié)構(gòu)柔性的多肽，V是免疫球蛋白可變區(qū)C末端的至 少一部分，H是免疫球蛋白可變鉸鏈區(qū)的至少一部分，CH2是免疫 球蛋白CH2恒定區(qū)的至少一部分，CH3是免疫球蛋白CH3恒定區(qū)的 至少一部分，n是l-10的整數(shù)，而o、 p、 q、 r、 s和t可獨(dú)立地為0-10的整數(shù)，模擬不同類型的免疫球蛋白分子，例如但不限于IgGl、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgAl、 IgA2、 IgM、 IgD、 IgE或其任何亞型等 或其任何組合。
抗體序列的可變區(qū)序列可為但不限于SEQ ID NO 47-55中至少 一個(gè)的至少一部分或其片段，任選還包含至少一個(gè)置換、插入或缺 失。CH2、 CH3和鉸鏈區(qū)可為但不限于SEQ ID NO 56-64中至少一個(gè)的至少一部分或其片段，任選還包含至少一個(gè)置換、插入或缺失。
(Kevin,這些序列被納入到序列表中，但如果你想通過引用并入，那 么我們不需要它們)。
因此，本發(fā)明的GLP-1模擬體模擬抗體或免疫球蛋白結(jié)構(gòu)或功 能的至少一部分連同其固有特性和功能，同時(shí)提供了 GLP-1治療性 肽及其固有或獲得的體外、體內(nèi)或原位特性或活性。如本文所述并 結(jié)合本領(lǐng)域所知，可改變所述抗體的不同部分和本發(fā)明GLP-1模擬 體的治療性肽部分。
如本文所述或本領(lǐng)域所知，本發(fā)明還提供至少一種分離的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體，其具有至少一種活性，例如但 不限于與式(I)的P部分對(duì)應(yīng)的至少一種生物活性GLP-1肽或多肽的 已知生物活性。
在一個(gè)方面，本發(fā)明提供至少一種分離的人GLP-1激動(dòng)劑或模 擬體，其包含SEQ ID NO 1的至少一種多肽序列，或任選地具有如 本文所述或本領(lǐng)域已知的一個(gè)或多個(gè)置換、缺失或插入。在另一方 面，本發(fā)明的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體模 擬對(duì)應(yīng)于式(I)模擬體P部分的至少一種GLP-1肽或多肽與含至少一 種配體(例如但不限于GLP-1受體)或其片段的至少1-3至完整M酸 序列的至少一個(gè)表位結(jié)合，其中所述配體結(jié)合SEQ ID NO 1的至少 一部分，或任選地具有如本文所述或本領(lǐng)域已知的一個(gè)或多個(gè)置換、 缺失或插入。所述至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體任選地可以至少 10 — 9 M、至少10 —1C M、至少10 —11 M、至少10 —12 M的親和性結(jié)合 GLP-1受體。由此可按照已知方法篩選GLP-1激動(dòng)劑或才莫擬體的對(duì) 應(yīng)活性，例如但不限于針對(duì)受體或其片段的結(jié)合活性。
本發(fā)明還提供針對(duì)本發(fā)明的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體的 至少一種抗獨(dú)特型抗體?？躬?dú)特型抗體或片段特異性結(jié)合本發(fā)明的 至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體。抗獨(dú)特型抗體包括含任何分子的 蛋白或肽，其含免疫球蛋白分子的至少一部分，例如但不限于重鏈或輕鏈或其配體結(jié)合部分的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)、重鏈或輕鏈
可變區(qū)、重鏈或輕鏈恒定區(qū)、構(gòu)架區(qū)或其任何部分，它們竟?fàn)幗Y(jié)合
本發(fā)明的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體的GLP-1配體結(jié)合區(qū)。本 發(fā)明的這種獨(dú)特型抗體可包括或來源于任何哺乳動(dòng)物，例如但不限 于人、小鼠、兔、大鼠、嚙齒動(dòng)物、靈長(zhǎng)類動(dòng)物等。
在一個(gè)方面，本發(fā)明提供分離的核酸分子，所述核酸分子含有 編碼至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或GLP-1激動(dòng)劑或模擬體抗獨(dú) 特型抗體或其特定部分或變體的多核苷酸和與該多核苷酸互補(bǔ)、具 有顯著同一性或與該多核苷酸雜交的多核苷酸，包括其至少一種特 定序列、結(jié)構(gòu)域、部分或變體。本發(fā)明還提供重組載體，其包含至 少一種所述分離的編碼GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或GLP-1激動(dòng)劑或模 擬體抗獨(dú)特型抗體的核酸分子、含此核酸和/或重組載體的宿主細(xì)胞， 以及制備和/或使用此GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或GLP-1激動(dòng)劑或模擬 體抗獨(dú)特型抗體核酸、栽體和/或宿主細(xì)胞的方法。
還提供一種分離核酸、含分離核酸的分離核酸栽體和/或含分離 核酸的原核或真核宿主細(xì)胞，所述分離核酸編碼至少一種分離的哺 乳動(dòng)物GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或GLP-1激動(dòng)劑或模擬體抗獨(dú)特型抗 體。所述宿主細(xì)胞任選為選自以下的至少一種COS-l、 COS-7、 HEK293、 BHK21、 CHO、 BSC-1、 HepG2、 653、 SP2/0、 293、 HeLa、 骨髓瘤或淋巴瘤細(xì)胞或其任何衍生物、無限增殖化或轉(zhuǎn)化細(xì)胞。
本發(fā)明還提供至少一種在宿主細(xì)胞中表達(dá)至少一種GLP-1激動(dòng) 劑或模擬體或GLP-1激動(dòng)劑或模擬體抗獨(dú)特型抗體或特定部分或變 體的方法，所述方法包括如本文所述和/或本領(lǐng)域已知在以下條件下 培養(yǎng)宿主細(xì)胞其中至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或GLP-1激動(dòng)
表達(dá)。還提供生產(chǎn)至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或GLP-1激動(dòng)劑 或模擬體抗獨(dú)特型抗體的方法，所述方法包括在體外、體內(nèi)或原位 條件下翻譯編碼GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或GLP-1激動(dòng)劑或才莫擬體抗獨(dú)特型抗體的核酸，使得GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或GLP-1激動(dòng)劑或 模擬體抗獨(dú)特型抗體以可檢測(cè)或可回收量表達(dá)。
還提供一種用于生產(chǎn)本發(fā)明的至少一種分離的人GLP-1激動(dòng)劑 或模擬體或GLP-1抗獨(dú)特型抗體的方法，所述方法包括提供一種能 夠以可回收量表達(dá)GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或GLP-1抗獨(dú)特型抗體的 宿主細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或轉(zhuǎn)基因植物。
本發(fā)明還提供通過以上方法生產(chǎn)的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或才莫 擬體。
本發(fā)明還提供至少一種組合物，其包含(a)本文所述的分離的 GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的編碼核酸和/或GLP-1激 動(dòng)劑或模擬體，和(b)合適的載體或稀釋劑。所述載體或稀釋劑按照 已知方法任選可為藥物可接受的。所述組合物任選地還可含有至少 一種其它化合物、蛋白或組合物。
還提供一種組合物，其包含至少一種分離的人GLP-1激動(dòng)劑或 模擬體和至少一種藥物可接受載體或稀釋劑。該組合物任選地還可 包含有效量的至少一種化合物或蛋白質(zhì)，其選自至少一種糖尿病藥 物、胰島素代謝相關(guān)藥物、葡萄糖代謝相關(guān)藥物、可檢測(cè)的標(biāo)記或 報(bào)告物、抗感染藥物、心血管(CV)系統(tǒng)藥物、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)藥 物、自主神經(jīng)系統(tǒng)(ANS)藥物、呼吸道藥物、胃腸(GI)道藥物、激素 藥物、用于流體或電解質(zhì)平衡的藥物、血液學(xué)藥物、抗腫瘤藥物、 免疫調(diào)節(jié)藥物、眼、耳或鼻藥物、局部藥物、營(yíng)養(yǎng)藥物、TNF拮抗 劑、抗風(fēng)濕藥物、肌肉松弛劑、麻醉劑、非類固醇抗炎藥物(NTHE)、 鎮(zhèn)痛藥、麻醉藥、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉藥、神經(jīng)肌肉阻斷劑、抗微生 物劑、抗銀屑病藥、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、促紅細(xì)胞生 成素、免疫、免疫球蛋白、免疫抑制劑、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、 放射性藥物、抗抑郁藥、抗精神病藥、興奮劑、哮喘藥、P激動(dòng)劑、 吸入類固醇、腎上腺素或類似物、細(xì)胞因子或細(xì)胞因子拮抗劑。
本發(fā)明還提供送遞治療或預(yù)防有效量的至少一種本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的至少一種組合物、裝置和/或方 法。
本發(fā)明還提供至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體方法或組合物， 用于在細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者中和/或如本領(lǐng)域所知和/或本 文所述在相關(guān)病癥之前、之后或期間給予治療有效量，以調(diào)節(jié)或治
療至少一種GLP-1相關(guān)病癥。
本發(fā)明還在一種方法或組合物中提供至少一種GLP-1激動(dòng)劑或 模擬體、特定部分或變體，其在以治療有效量給予時(shí)用于調(diào)節(jié)、治 療或緩解細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者中的下述至少一種癥狀 ^r謝疾病、免疫疾病、心血管疾病、感染性疾病、惡性疾病和/或神 經(jīng)疾病，和/或如本領(lǐng)域所知根據(jù)多種不同病癥的需要，例如但不僅 限于在相關(guān)疾病或治療條件之前、之后或期間進(jìn)行。
本發(fā)明還在一種方法或組合物中提供至少一種GLP-1激動(dòng)劑或 模擬體、特定部分或變體，其在以治療有效量給予時(shí)用于調(diào)節(jié)、治 療或緩解下述至少一種癥狀糖尿病或胰島素代謝相關(guān)疾病、葡萄 糖代謝相關(guān)疾病、骨和關(guān)節(jié)疾病、心血管疾病、牙或口腔疾病、皮 膚病、耳、鼻或咽喉疾病、內(nèi)分泌或代謝疾病、胃腸疾病、婦科疾 病、肝或膽疾病、產(chǎn)科疾病、血液疾病、免疫或變應(yīng)性疾病、感染 性疾病、肌與骨疾病、腫瘤疾病、神經(jīng)疾病、營(yíng)養(yǎng)疾病、眼疾病、 兒科疾病、中毒疾病、精神疾病、腎疾病、肺疾病或任何其它已知 疾病(參見例如The Merck Manual,笫 17版，Merck Research Laboratories, Merck and Co, Whitehouse Station, NJ (1999),其通過引 用整體結(jié)合到本文中)，所迷給予如本領(lǐng)域所知根據(jù)多種不同病癥的 需要例如但不限于在相關(guān)疾病或治療條件之前、之后或期間進(jìn)行。
本發(fā)明還提供送遞本發(fā)明的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或^^莫擬體的 至少一種組合物、裝置和/或方法，用于診斷GLP-1相關(guān)病癥。
本發(fā)明還提供至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體方法或組合物， 用于在細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者中和/或在本領(lǐng)域已知和/或本文描述在相關(guān)病癥之前、之后或期間診斷至少一種GLP-1相關(guān)病癥。 本發(fā)明還提供用于診斷或治療細(xì)胞、組織、器官或動(dòng)物中的病
癥的方法，包括(a)使含有效量的至少一種本發(fā)明分離人GLP-1激動(dòng)
劑或模擬體的組合物接觸或給予細(xì)胞、組織、器官或動(dòng)物。該方法 任選地還可包括每0-24小時(shí)、1-7天、1-52周、1-24個(gè)月、1-50年 使用0.001-50 mg/kg細(xì)胞、組織、器官或動(dòng)物的有效量或其間的任何 范圍或值，或者在體外或原位進(jìn)行的情況下使用等同的濃度或摩爾 濃度。該方法任選地還可包括通過選自以下的至少一種模式接觸或 給予體外、腸胃外、皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、 腹內(nèi)、嚢內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、大腸內(nèi)、 宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、 胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸內(nèi)、腎內(nèi)、^f見網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑 膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、藥團(tuán)、陰道、直腸、口腔含化、舌 下、鼻內(nèi)或透皮。該方法任選地還可包括在(a)接觸或給予之前、同 時(shí)或之后給予至少一種組合物，該組合物含有效量的至少一種化合 物或蛋白質(zhì)，其選自以下的至少一種糖尿病藥物、胰島素代謝相 關(guān)藥物、葡萄糖代謝相關(guān)藥物、可檢測(cè)的標(biāo)記或報(bào)告物、抗感染藥 物、心血管(CV)系統(tǒng)藥物、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)藥物、自主神經(jīng)系統(tǒng) (ANS)藥物、呼吸道藥物、胃腸(GI)道藥物、激素藥物、用于流體或 電解質(zhì)平4軒的藥物、血液學(xué)藥物、抗腫瘤藥物、免疫調(diào)節(jié)藥物、目艮、 耳或鼻藥物、局部藥物、營(yíng)養(yǎng)藥物、TNF拮抗劑、抗風(fēng)濕藥物、肌 肉松弛劑、麻醉劑、非類固醇抗炎藥物(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉藥、 鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉藥、神經(jīng)肌肉阻斷劑、抗微生物劑、抗銀屑病藥、 皮質(zhì)類固醇、促蛋白合成類固醇、促紅細(xì)胞生成素、免疫、免疫球 蛋白、免疫抑制劑、生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、放射性藥物、抗抑 郁藥、抗精神病藥、興奮劑、哮喘藥、P激動(dòng)劑、吸入類固醇、腎上 腺素或類似物、細(xì)胞因子、細(xì)胞因子拮抗劑、維生素、生長(zhǎng)因子或 抗氧化劑。還提供一種醫(yī)學(xué)裝置，其包含本發(fā)明的至少一種分離的人GLP-1激動(dòng)劑或模擬體，其中所述裝置適于通過選自以下的至少一種才莫式 接觸或給予至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體體外、腸胃外、皮下、 肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、嚢內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、 體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、大腸內(nèi)、宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、 骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸 內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、 藥團(tuán)、陰道、直腸、口腔含化、舌下、鼻內(nèi)或透皮。
還提供用于人類藥物或診斷用途的制品，其包括包裝材料和容 器，該容器含溶液或凍干形式的至少一種本發(fā)明分離人GLP-1激動(dòng) 劑或模擬體。該制品任選可包括將容器作為體外、腸胃外、皮下、 肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、支氣管內(nèi)、腹內(nèi)、嚢內(nèi)、軟骨內(nèi)、腔內(nèi)、 體腔內(nèi)、小腦內(nèi)、腦室內(nèi)、大腸內(nèi)、宮頸內(nèi)、胃內(nèi)、肝內(nèi)、心肌內(nèi)、 骨內(nèi)、骨盆內(nèi)、心包內(nèi)、腹膜內(nèi)、胸膜內(nèi)、前列腺內(nèi)、肺內(nèi)、直腸 內(nèi)、腎內(nèi)、視網(wǎng)膜內(nèi)、脊柱內(nèi)、滑膜內(nèi)、胸內(nèi)、子宮內(nèi)、膀胱內(nèi)、 藥團(tuán)、陰道、直腸、口腔含化、舌下、鼻內(nèi)或透皮送遞裝置或系統(tǒng) 的組成部分。
本發(fā)明還提供本文描述的任何發(fā)明。
附圖簡(jiǎn)述


圖1圖示了 IgGl支架中的GLP-1模擬體的核苷酸和肽序列，顯
示了重要功能結(jié)構(gòu)域。
圖2A-2C圖解了 GLP-1模擬體的FACS結(jié)合測(cè)定。
圖2A表明，GLP-1模擬體結(jié)合過表達(dá)GLP-1R的HEK293細(xì)胞。
灰色GLP-1模擬體但無二抗；黑色僅二抗；紅色陰性對(duì)照模
擬體和二抗；藍(lán)色GLP-1模擬體和二抗。
圖2B表明，GLP-1模擬體不結(jié)合對(duì)照HEK293細(xì)胞?；疑獹LP-1
模擬體但無二抗；黑色僅二抗；藍(lán)色GLP-1 ^^莫擬體和二抗。圖2C表明，GLP-1肽類似物(A2S)能夠與GLP-1模擬體竟?fàn)幗Y(jié) 合過表達(dá)GLP-1R的HEK293細(xì)胞?；疑獹LP-1模擬體但無二抗； 黑色GLP-1模擬體和二抗；橙色GLP-1模擬體、0.2 nM竟?fàn)巹?二抗；藍(lán)色GLP-1模擬體、20nM竟?fàn)巹?、二抗；紅色GLP-1模 擬體、lOOnM竟?fàn)巹?、二抗?br> 圖3A-3E圖解了 GLP-1模擬體的cAMP測(cè)定。圖3A: IgGl支 架中的野生型GLP-1模擬體；圖3B: GLP-1肽；圖3C: IgG4 (Ala/Ala, Ser—Pro)支架中的GLP-1 (A2G)模擬體；圖3D: IgG4 (Ala/Ala， Ser—Pro)支架中的GLP-1 (A2S)模擬體；圖3E: IgG4 (Ala/Ala， Ser—Pro) 支架中的野生型GLP-1模擬體。
圖4圖解了 GLP-1模擬體對(duì)DPP-IV裂解的抗性。
圖5顯示了在人血清中與GLP-1肽相比GLP-1模擬體的提升的 穩(wěn)定性。
圖6表明，GLP-1模擬體在RINm細(xì)胞中引起胰島素分泌。圖6A 表明，GLP-1 (7-36)肽和exendin-4肽在RINm細(xì)胞中刺激胰島素釋 放。圖6B表明，IgGl或IgG4 (AWAla， Ser—Pro)支架中的GLP-1 (A2S) 才莫擬體或IgG4 (Ala/Ala， Ser—Pro)支架中的GLP-1 (A2G)模擬體對(duì)于 刺激RINm細(xì)胞中的胰島素分泌有活性。
圖7顯示了 GLP-1模擬體對(duì)糖尿病小鼠中的禁食血糖的影響。 圖7A表明GLP-1模擬體降低了禁食血糖。圖7B表明所述影響是劑 量依賴性的。
圖8A顯示了 GLP-1模擬體在體外對(duì)分離的大鼠胰島增殖的作 用。圖8B顯示了 GLP-1模擬體劑量對(duì)大鼠胰島增殖的影響。
圖9顯示了 GLP-1模擬體在體外對(duì)分離的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(NHP)
胰島增殖的影響。
圖10A顯示了 GLP-1模擬體在體外對(duì)分離的人胰島增殖的影 響。圖IOB顯示了 GLP-1模擬體劑量對(duì)人胰島增殖的影響。
圖11顯示了 GLP-1模擬體在體外對(duì)分離的大鼠胰島的胰島素分泌的影響。
圖12顯示了與小鼠中的GLP-1 (A2S)模擬體(圖12B)相比GLP畫1 肽(圖12A)的藥代動(dòng)力學(xué)模式。
圖13顯示了小鼠(圖UA)、大鼠(圖l犯)、獼猴(圖DC)和人(圖 13D)血液中的GLP-1模擬體的穩(wěn)定性。
圖14顯示了 GLP-1模擬體在獼猴中的體內(nèi)穩(wěn)定性。
圖15圖示了在db/db小鼠(圖15A)和DIO小鼠(圖15B)中口服葡 萄糖挑戰(zhàn)之后GLP-1模擬體治療對(duì)血糖的影響。
圖16表明GLP-1模擬體以劑量依賴性方式抑制細(xì)胞因子誘導(dǎo)的 凋亡。相對(duì)于未治療對(duì)照的凋亡百分率對(duì)GLP-1 MMB濃度作圖。
圖17表明，GLP-1模擬體在INS-1E細(xì)胞中增加葡萄糖依賴性 的胰島素分泌。A.柱形圖顯示了在5.5 mM葡萄糖存在下于各個(gè) GLP-1 MMB濃度分泌的胰島素量。另外，僅對(duì)于3和7.5 mM葡萄 糖分泌的胰島素作圖。B.分泌的胰島素量對(duì)GLP-1 MMB濃度作圖。 數(shù)據(jù)擬合為Hill方程，獲得0.07 nM的EC50。
圖18表明，GLP-1模擬體在大鼠胰島(圖"A)和人胰島(圖l犯) 中增加葡萄糖依賴性的胰島素分離。
圖19顯示了 GLP-1 MMB治療對(duì)正常C57/BLK6小鼠的血糖水 平的影響。
圖20顯示了在STZ治療的糖尿病棵小鼠中GLP-1 MMB治療對(duì) 血糖水平(圖20A)和葡萄糖耐受(圖20B)的影響，所述棵小鼠移植邊 際量的人胰島。在圖20A中，血糖對(duì)接受每日IP注射的PBS治療的 對(duì)照小鼠(X)和GLP-1 MMB治療小鼠O)的時(shí)間(天數(shù))作圖。在第0 天移植邊際量的人胰島(50 IEQ/g),此后監(jiān)測(cè)動(dòng)物中的血糖。箭頭表 示在去除移植的胰島時(shí)導(dǎo)致迅速回復(fù)到糖尿病狀態(tài)。在圖20B中， 血糖對(duì)PBS治療的對(duì)照小鼠(X)和GLP-1 MMB (0.5 mg/kg)0)的時(shí)間 (分鐘)作圖。在小鼠接受每日IP注射達(dá)30天以上后進(jìn)行IVGTT。動(dòng) 物過夜禁食，之后進(jìn)行IV葡萄糖注射(1.5 g/kg)。監(jiān)測(cè)小鼠的血糖，并對(duì)注射后時(shí)間作圖。插圖陳述了對(duì)照和GLP-1 MMB治療小鼠的曲 纟戔下面禾口、。
圖21顯示了 GLP-l MMB對(duì)非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(NHP)胰島中的葡
萄糖誘導(dǎo)性胰島素分泌的影響。
圖22顯示了 GLP-l MMB對(duì)移植邊際量的STZ糖尿病NHP的 外源胰島素需求(圖22A)和血紅蛋白Alc(HgbAlc)(圖22B)的影響。
發(fā)明詳述
本發(fā)明提供分離的、重組的和/或合成的模擬體或特定部分或變 體，以及包含至少一種多核普酸的組合物和編碼核酸分子，該多核 香酸編碼至少一種GLP-l激動(dòng)劑或模擬體。本發(fā)明的這種模擬體或 特定部分或變體含特定的GLP-l激動(dòng)劑或模擬體序列、其結(jié)構(gòu)域、 片段及特定變體，以及制備和應(yīng)用所述核酸和模擬體或特定部分或 變體的方法，包括治療性組合物、方法和裝置。
本發(fā)明還提供如本文所述和/或本領(lǐng)域已知的至少一種分離的 GLP-l激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體。該GLP-l模擬體可任選 包含至少一個(gè)CH3區(qū)，該CH3區(qū)與至少一個(gè)CH2區(qū)直接相連，該 CH2區(qū)與至少一個(gè)鉸鏈區(qū)或其片段(H)直接相連，(H)與至少一部分可 變區(qū)(V)直接相連，(V)與任選的接頭序列(L)直接相連，(L)與至少一 個(gè)GLP-l治療性肽(P)直接相連。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，GLP-l模擬體包含式(I):
(I) ((P(n)-L(o)畫V(p)-H(q)-CH2(r)畫CH3(s))(t) 其中P是至少一種生物活性GLP-l多肽，L是至少一個(gè)接頭序
列，該接頭序列可為通過使模擬體具有可變方向和結(jié)合特性而提供
結(jié)構(gòu)柔性的多肽，V是免疫球蛋白可變區(qū)C末端的至少一部分，H
是免疫球蛋白可變鉸鏈區(qū)的至少一部分，CH2是免疫球蛋白CH2恒
定區(qū)的至少一部分，CH3是免疫球蛋白CH3恒定區(qū)的至少一部分，
m、 n、 o、 p、 q、 r、 s和t可獨(dú)立地為0-10之間并包括0和10的整數(shù)，模擬不同類型的免疫球蛋白分子，例如但不限于IgGl、 IgG2、 IgG3、 IgG4、 IgAl、 IgA2、 IgM、 IgD、 IgE或其任何亞型等或其任 何組合。
因此，本發(fā)明的GLP-1模擬體模擬抗體結(jié)構(gòu)連同抗體的固有特 性和功能，同時(shí)提供一種治療性肽及其固有或獲得的體外、體內(nèi)或 原位特性或活性。在其中t-l的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，單體CH3-CH2畫 鉸鏈-部分J (J先前未描述)序列-接頭-治療性肽可通過締合或共價(jià)健 (例如但不限于Cys-Cys 二硫鍵)連接至其它單體。如本文所述并結(jié)合 本領(lǐng)域所知，可改變所述抗體的不同部分和至少一種本發(fā)明GLP-1 模擬體的GLP-1治療性肽部分。
CH3-CH2-鉸鏈部分可被廣泛修飾，以形成符合本發(fā)明的變體， 前提是保持與補(bǔ)救受體的結(jié)合。在這種變體中，人們可去除一個(gè)或 多個(gè)提供本發(fā)明融合分子不需要的結(jié)構(gòu)特征或功能活性的天然位 點(diǎn)。人們例如可通過置換或缺失殘基、向位點(diǎn)中插入殘基或截?cái)嗪?位點(diǎn)的部分來去除這些位點(diǎn)。插入或置換的殘基還可為改變的氨基 酸，例如肽模擬物或D-氨基酸。CH3-CH2-鉸鏈變體可缺少一個(gè)或多 個(gè)天然位點(diǎn)或殘基，它們影響或參與(l)二硫鍵形成；(2)與選定宿主 細(xì)胞不相容；(3)在選定宿主細(xì)胞中表達(dá)時(shí)的不均一性；(4)糖基化；(5) 與補(bǔ)體相互作用；(6)結(jié)合補(bǔ)救受體之外的Fc受體；或(7)抗體依賴性 細(xì)胞的細(xì)胞毒性(ADCC)。代表性的CH3-CIE-鉸鏈變體包括以下的 分子和序列，其中1.去除了參與二硫鍵形成的位點(diǎn)。這樣的去除可 避免與用于生產(chǎn)本發(fā)明分子的宿主細(xì)胞中存在的其它含半胱氨酸蛋 白反應(yīng)。為此，半胱氨酸殘基可缺失或被其它氨基酸(例如丙氨酰、 絲氨酰)取代。即便在去除半胱氨酸殘基時(shí)，單鏈CH3-CH2-鉸鏈結(jié) 構(gòu)域仍可形成非共價(jià)保持在一起的二聚化CH3-CH2-鉸鏈結(jié)構(gòu)域；2. 修飾CH3-CH2-鉸鏈區(qū)，以使其與選定宿主細(xì)胞更相容。例如，當(dāng)分 子在如大腸桿菌的細(xì)菌細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，人們可去除鉸鏈中的PA序 列，該序列可由大腸桿菌中的消化酶如脯氨酸亞氨基肽酶識(shí)別；3. —部分鉸鏈區(qū)缺失或被其它氨基酸取代，以防止在選定宿主細(xì)胞中表
達(dá)時(shí)的不均一性；4.去除一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)。通常被糖基化的 殘基(例如天冬酰胺)可賦予細(xì)胞溶解響應(yīng)。這樣的殘基可缺失或被未 糖基化殘基(例如丙氨酸)取代；5.去除涉及與補(bǔ)體相互作用的位點(diǎn)， 例如Clq結(jié)合位點(diǎn)。補(bǔ)體募集可能對(duì)本發(fā)明的分子不利，所以可用 此變體避免；6.去除影響與補(bǔ)救受體之外的Fc受體結(jié)合的位點(diǎn)。 CH3-CH2-鉸鏈區(qū)可具有與某些白細(xì)胞相互作用的位點(diǎn)，它們不是本 發(fā)明的融合分子必需的，所以可被去除；7.去除ADCC位點(diǎn)。ADCC 位點(diǎn)是本領(lǐng)域已知的，關(guān)于IgGl中的ADCC位點(diǎn)參見例如Molec. Immunol 29 (5) 633-9 (1992)。這些位點(diǎn)同樣不是本發(fā)明的融合分子所 必需的，所以可去除。
接頭多肽通過使激動(dòng)劑或模擬體具有可變方向和結(jié)合特性來提 供結(jié)構(gòu)柔性。在存在時(shí)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)不關(guān)鍵。接頭優(yōu)選由通過肽鍵 連接在一起的氨基酸組成。因此，在優(yōu)選實(shí)施方案中，接頭由通過 肽鍵連接的l-20個(gè)氨基酸組成，其中所述氨基酸選自20個(gè)天然氨基 酸。這些氨基酸中有一些可糖基化，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知 的。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，1-20個(gè)氨基酸選自甘氨酸、丙氨 酸、絲氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和賴氨酸。再更優(yōu)選地， 接頭大部分由非空間位阻氨基酸如甘氨酸和丙氨酸組成。因此，優(yōu) 選的接頭是聚(Gly-Ser)、聚甘氨酸(具體地說為(Gly)4、 (Gly)5)、聚 (Gly-Ala)和聚丙氨酸。接頭的其它特定實(shí)例是(Gly)3Lys(Gly)4 (SEQ ID NO:65)、 (Gly)3AsnGlySer(Gly)2(SEQIDN0 66)、 (Gly)3Cys(Gly)4 (SEQ ID NO 67)和GlyProAsnGlyGly (SEQ ID NO 68)。
為解釋以上命名，例如(Gly)3LyS(Gly)4指Gly-Gly-Gly-Lys-Gly-Gly-Gly-Gly。還優(yōu)選Gly和Ala的組合。此處顯示的接頭是代表性 的，本發(fā)明范圍內(nèi)的接頭可長(zhǎng)得多，并可包含其它殘基。
非肽接頭也是可能的。例如，可使用烷基接頭，例如可使用其 中s = 2-20的-NH-(CH2)s-C(0)-。這些烷基接頭還可被任何非空間位阻基團(tuán)取代，所述非空間位阻基團(tuán)例如為低級(jí)烷基(例如C廣Q)、低
級(jí)酰基、鹵素(例如Cl、 Br)、 CN、 NH2、苯基等。代表性的非肽接 頭是PEG接頭，其具有100-5000 kD、優(yōu)選100-500 kD的分子量。 肽接頭可#1改變，以和上述相同的方式形成書1"生物。
本文使用的"GLP-1肽"或"GLP-1肽、變體或衍生物"可為至少一 種GLP-1肽、GLP-1片段、GLP-1同源物、GLP-1類似物或GLP-1 衍生物。GLP-1肽具有約25至約45個(gè)天然或非天然氨基酸，它們 與天然GLP-1 (7-37)具有足夠的同源性，使得它們通過結(jié)合胰腺中P 細(xì)胞上的GLP-1受體表現(xiàn)出促胰島素活性。GLP-1 (7-37)具有SEQ ID NO 15的氨基酸序列His-Ala隱Glu-Gly-Thr國(guó)Phe誦Thr-Ser-Asp-Val國(guó)Ser-Ser- Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala畫Ala陽(yáng)Lys-Glu-Phe-De-Ala國(guó)Trp-Leu-Val-Lys- Gly-Arg-Gly。
GLP-1片段是截?cái)郍LP-1 (7-37)或其類似物或衍生物的N末端 和/或C末端的一個(gè)或多個(gè)氛基酸后獲得的多肽。GLP-1同源物是其 中一個(gè)或多個(gè)氨基酸已加入到GLP-1 (7-37)或其片段或類似物的N末 端和/或C末端的肽。GLP-1類似物是其中GLP-1 (7-37)的一個(gè)或多 個(gè)氨基酸已被修飾和/或置換的肽。GLP-1類似物與GLP-1 (7-37)或 GLP-1 (7-37)的片段具有足夠的同源性，使得所述類似物具有促胰島 素活性。GLP-1衍生物被定義為以下分子其具有GLP-1肽、GLP-1 同源物或GLP-1類似物的氨基酸序列，但另外具有一個(gè)或多個(gè)其氨 基酸側(cè)基、a-碳原子、末端氨基或末端羧脧基團(tuán)的化學(xué)修飾。
本領(lǐng)域已知眾多的活性GLP-1片段、類似物和衍生物，任何這 些類似物和衍生物中也可為本發(fā)明的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體的一部 分。本領(lǐng)域已知的某些GLP-1類似物和GLP-1片賴乂>開于美國(guó)專利 第5,118,666、 5,977,071和5,545,618號(hào)，以及Adelhorst等，,編C&m 269 6275 (1994)。實(shí)例包括但不限于GLP-1 (7-34)、GLP-l (7-35)、GLP-l (7-36)、 Gln9-GLP-1 (7-37)、 D-Gln9-GLP-1 (7-37)、 Thrl6-Lysl8-GLP-1 (7畫37)和Lysl8-GLP畫1 (7-37)。"GLP-1激動(dòng)劑或模擬體"、"GLP-1激動(dòng)劑或模擬體部分"或 "GLP-1激動(dòng)劑或模擬體片段"和/或"GLP-l激動(dòng)劑或模擬體變體"等 具有、模擬或刺激至少一種GLP-1肽、變體或衍生物(例如但不僅限 于SEQE)NO: 1中的至少一種)的至少一種生物活性，例如但不僅限 于在體外、原位和/或優(yōu)選在體內(nèi)的配體結(jié)合。例如，合適的GLP-1 激動(dòng)劑或模擬體、特定部分或變體也可調(diào)節(jié)、增加、改變、活化至 少一種GLP-1受體信號(hào)傳導(dǎo)或其它可測(cè)量或可檢測(cè)活性。
在本發(fā)明方法和組合物中有用的GLP-1模擬體的特征在于具有 與蛋白質(zhì)配體如GLP-1受體結(jié)合的合適親和性，并任選和優(yōu)選地具 有低毒性。具體而言，具有下述情況的GLP-1模擬體在本發(fā)明中有 用其中獨(dú)立組分如可變區(qū)部分、恒定區(qū)(無CH1部分)和構(gòu)架或其 任何部分(例如可變重鏈或輕鏈的J、 D或V區(qū)的一部分；至少一個(gè) 鉸鏈區(qū)、恒定重鏈或輕鏈的至少 一部分等)獨(dú)立地和/或共同地任選和 優(yōu)選具有低免疫原性?？捎糜诒景l(fā)明的模擬體任選地特征在于其以 良好到極佳的緩解癥狀且低毒性長(zhǎng)期治療患者的能力。低免疫原性 和/或高親和性以及其它未明特性均可有助于達(dá)到的治療效果。"低免 疫原性"在本文被定義為在少于約75%或優(yōu)選少于約50、 45、 40、 35、 30、 25、 20、 15、 10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2和/或1%的治療患 者中出現(xiàn)顯著的HAMA、 HACA或HAHA應(yīng)答，和/或的治療患者 中出現(xiàn)低滴度(采用雙抗原酶免疫測(cè)定法檢測(cè)為少于約300、優(yōu)選少 于約100)(參見例如Elliott等，丄a"cef 1125-1127 (1994))。
炎>^。本發(fā)明的分離核酸可用于生成至少一種GLP-1激動(dòng)劑或 模擬體、其片段或特定變體，它們可用于在細(xì)胞、組織、器官或動(dòng) 物(包括哺乳動(dòng)物和人類)中起作用，以調(diào)節(jié)、治療、緩解至少一種蛋 白質(zhì)相關(guān)病癥，幫助預(yù)防該蛋白質(zhì)相關(guān)病癥發(fā)病，或減少該蛋白質(zhì) 相關(guān)病癥的癥狀，該蛋白質(zhì)相關(guān)病癥選自但不僅限于以下的至少一 種糖尿病相關(guān)疾病、胰島素代謝相關(guān)疾病、葡萄糖代謝相關(guān)疾病、 免疫障礙或疾病、心血管障礙或疾病、感染性疾病、惡性疾病和/或神經(jīng)障礙或疾病，以及其它已知或特定的蛋白質(zhì)相關(guān)疾病。
這種方法可包括對(duì)需要該調(diào)節(jié)、治療、緩解、預(yù)防或減少癥狀、 影響或機(jī)制的細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者給予有效量的組合物 或藥物組合物，它們包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部
分或變體。該有效量可包括單次或多次給予約0.0001-500 mg/kg的 量，或單次或多次給予使血清濃度達(dá)到0.01-5000 |Lig/ml血清濃度的 量，(需要包括體外濃度)或其中的任何有效范圍或數(shù)值，所述有效量 可使用本文所述或相關(guān)領(lǐng)域已知的方法實(shí)施和測(cè)定。
f/證。本文所引用的全部出版物或?qū)＠捎隗w現(xiàn)了與本發(fā)明同 時(shí)的本領(lǐng)域現(xiàn)狀，和/或提供了本發(fā)明的描述和實(shí)現(xiàn)，因而被通過引 用整體結(jié)合到本文中。出版物指任何學(xué)術(shù)或?qū)＠霭嫖铮蚩梢匀?何媒介形式獲得的任何其它資料，包括所有記錄的、電子的或打印 的形式。下述參考文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中Ausubel等編輯， Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc, NY, NY (1987-2005); Sambrook等，Molecular Cloning A Laboratory Manual,笫 2版，Cold Spring Harbor, NY (1989), Harlow and Lane, Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan等編輯， Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc , NY (BAZOOS); Colligan等，Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY， NY, (1997-2005)。
本發(fā)明的模擬體。GLP-1模擬體任選地可包含至少一個(gè)CH3區(qū)， 該CH3區(qū)與至少一個(gè)CH2區(qū)直接相連，該CH2區(qū)與至少一個(gè)4交鏈 區(qū)片段的至少 一部分(H)(例如包含至少 一個(gè)核心鉸鏈區(qū))直接相連，(H) 與至少一部分可變區(qū)(V)直接相連，(V)與任選的接頭序列(L)直接相 連，(L)與至少一個(gè)GLP-1治療性肽(P)直接相連。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方 案中， 一對(duì)CH3-CH2-H-V-L-P可通過締合或共價(jià)鍵(例如但不限于 Cys-Cys 二硫鍵)連接。因此，本發(fā)明的GLP-1模擬體模擬抗體結(jié)構(gòu) 連同抗體的固有特性和功能，同時(shí)提供了治療性肽及其固有或獲得的體外、體內(nèi)或原位特性或活性。如本文所述并結(jié)合本領(lǐng)域所知， 可改變所述抗體的不同部分和至少一種本發(fā)明GLP-1模擬體的治療 性肽部分。
因此，本發(fā)明模擬體提供至少 一種相比已知蛋白的合適特性，
例如但不限于以下的至少一種增加的半衰期、提高的活性、更為 特異的活性、提高的親和力、提高或降低的清除率、選擇的或更為 合適的活性亞型、較小免疫原性、至少一種預(yù)期療效的質(zhì)量或時(shí)程 的提高、較少副作用等。
式(I)的模擬體片段可通過本領(lǐng)域已知和/或本文所述的酶切、合 成或重組技術(shù)制備。利用抗體基因也可生產(chǎn)多種截短形式的模擬體， 該抗體基因中的一個(gè)或多個(gè)終止密碼子已被導(dǎo)入天然終止位點(diǎn)的上 游。模擬體的多個(gè)部分可通過常規(guī)技術(shù)化學(xué)連接在一起，或者利用 遺傳工程技術(shù)制備為連續(xù)蛋白。例如，可表達(dá)編碼人類抗體鏈中至 少一個(gè)恒定區(qū)的核酸,以生成可用于本發(fā)明模擬體的連續(xù)蛋白。有 關(guān)單鏈抗體參見例如Ladner等，美國(guó)專利第4,946,778號(hào)和Bird, R.E. 等，S"e"ce, 242: 423-426 (1988)。
本文所用的術(shù)語(yǔ)"人模擬體"指抗體，其中期望該蛋白質(zhì)的基本 每一部分(例如GLP-1肽、Ch結(jié)構(gòu)域(例如Ch2、 Ch3)、鉸鏈、V)在 人中都基本無免疫原性，僅具有較少的序列變化或變異。相對(duì)于未 修飾的人抗體或本發(fā)明模擬體而言，這種變化或變異任選并優(yōu)選地 保留或降低了在人中的免疫原性。因此，人抗體和相應(yīng)的本發(fā)明GLP-1 模擬體與嵌合或人源化抗體截然不同。應(yīng)指出的是，GLP-1模擬體
可由能表達(dá)人免疫球蛋白(例如重鏈和/或輕鏈)基因的非人動(dòng)物或細(xì)胞 產(chǎn)生。
針對(duì)合適的配體，例如分離的GLP-1受體或其部分(包括合成分 子，例如合成肽)，可設(shè)計(jì)出對(duì)其至少一種蛋白配體有特異性的人模 擬體。利用鑒定并表征至少一種蛋白質(zhì)或其部分的配體結(jié)合區(qū)或序 列的已知技術(shù)，可進(jìn)行該模擬體的制備。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模
擬體或特定部分或變體由至少一種細(xì)胞系、混合細(xì)胞系、無限增殖 化細(xì)胞或無限增殖化和/或培養(yǎng)細(xì)胞的克隆群體產(chǎn)生。采用合適的方
法可產(chǎn)生無限增殖化的蛋白質(zhì)生產(chǎn)細(xì)胞。優(yōu)選地，該至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體一般通過提供核酸或載體而制 備，該核酸或載體包含來源于至少一個(gè)人免疫球蛋白基因座的DNA 或具有與其基本相似的序列，所述至少 一個(gè)人免疫球蛋白基因座被 功能重排或可接受功能重排，所述核酸或栽體可進(jìn)一步包含本文所 述的激動(dòng)劑或模擬體結(jié)構(gòu)，例如但不限于式(I)，其中如本領(lǐng)域所知， C-末端可變區(qū)部分可用作V,鉸鏈區(qū)可被用作H, CH2可用作CH2， CH3可用作CH3。
本文所用的術(shù)語(yǔ)"功能重排"指來源于免疫球蛋白基因座的核酸 節(jié)段，所述免疫球蛋白基因座已經(jīng)歷V(D)J重組，從而生成編碼免 疫球蛋白鏈(例如重鏈)或其任何部分的免疫球蛋白基因。功能重排的 免疚球蛋白基因可使用合適方法直接或間接鑒定，所述合適方法例 如為核苷酸測(cè)序、利用可退火至基因節(jié)段之間編碼結(jié)合處的探針進(jìn) 行的雜交(例如蛋白質(zhì)印跡、RNA印跡)或采用可退火至基因節(jié)段之
間編碼結(jié)合處的引物對(duì)免疫球蛋白基因進(jìn)行的酶擴(kuò)增(例如聚合酶鏈 反應(yīng))。細(xì)胞是否產(chǎn)生含特定可變區(qū)或含特定序列(例如至少一個(gè)P序 列)可變區(qū)的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或部分或變體也可使用合適方法 確定。
本發(fā)明的模擬體、特定部分和變體還可如下制備使用至少一 種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的編碼核酸，以提供轉(zhuǎn) 基因動(dòng)物或哺乳動(dòng)物，例如山羊、奶牛、馬、綿羊等，這些動(dòng)物在 其乳汁中產(chǎn)生所述^^莫擬體或特定部分或變體。使用應(yīng)用于抗體編碼 序列的已知方法可獲得所述動(dòng)物。參見例如但僅限于美國(guó)專利第 5,827,690、 5,849,992、 4,873,316、 5,849,992、 5,994,616、 5，565,362、 5,304，489號(hào)等，這些專利每個(gè)均通過引用整體結(jié)合到本文中。本發(fā)明的模擬體、特定部分和變體可另外如下制備使用至少 一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的編碼核酸，以提供 轉(zhuǎn)基因植物和培養(yǎng)的植物細(xì)胞(例如但不限于煙草和玉米)，其在植物 部分或由其所培養(yǎng)的細(xì)胞中產(chǎn)生所述模擬體、特定部分或變體。作 為非限制性實(shí)例，表達(dá)重組蛋白的轉(zhuǎn)基因煙草葉已成功地用于提供 大量的重組蛋白，例如利用"i"導(dǎo)型啟動(dòng)子。參見例如Cramer等，Curr. Top. Microbol. Immunol. 240:95-118 (1999)及其引用的參考文獻(xiàn)。此
外，轉(zhuǎn)基因玉米或谷物也已被用于以工業(yè)生產(chǎn)水平表達(dá)哺乳動(dòng)物蛋 白質(zhì)，其具有的生物學(xué)活性等同于由其它重組系統(tǒng)生產(chǎn)的或由天然 來源純化的蛋白。參見例如Hood等，Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999)及其引用的參考文獻(xiàn)。包括抗體片段如單鏈模擬體(scFv)在內(nèi) 的抗體也已被大量地從包括煙草種子和馬鈴薯塊莖在內(nèi)的轉(zhuǎn)基因植 物種子中生成。參見例如Conrad等，Plant Mol Biol. 38: 101-109 (1998) 及其引用的參考文獻(xiàn)。因此，本發(fā)明的模擬體、特定部分和變體也 可根據(jù)已知方法利用轉(zhuǎn)基因植物制備。也參見例如Fischer等， Biotechnol Appl Biochem 30 99-108 (1999年10月)；Ma等，Trends Biotechnol. 13.522-7 (1995); Ma等,Plant Physiol 109 341-6 (1995); Whitelam等，Biochem Soc. Trans 22 940-944 (1994)及其中引用的參考 文獻(xiàn)。上述參考文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。
本發(fā)明的模擬體可以廣泛的親和性(Kd)結(jié)合人蛋白配體。在一 個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，至少一種本發(fā)明人GLP-1激動(dòng)劑或模擬體可任 選地以高親和性結(jié)合至少一種蛋白配體。例如，至少一種本發(fā)明GLP-1 激動(dòng)劑或模擬體可以等于或小于約10 —7 M的KD結(jié)合至少一種蛋白 配體，或更優(yōu)選以等于或小于約0.1-9.9 (或其中的任何范圍或數(shù)值)x10 一7、 10 — 8、 10 — 9、 10 —10、 10 —u、 10 — 12或10 — 13 M或其中的任何范圍 或數(shù)值的Kd結(jié)合。
GLP-1激動(dòng)劑或模擬體對(duì)至少一種蛋白配體的親和性或親和力 可采用任何合適方法經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定，例如用于測(cè)定抗體-抗原結(jié)合親和性或親和力的方法。(參見例如Berzofsky等，"Antibody-Antigen Interactions,"載于Fw"dawe"to/ /wwwwo/ogy, Paul, W.E.編4辱，Raven Press New York, NY (1984), Kuby, Janis /m聽wo/ogy, W H Freeman and Company New York, NY (1992)，及其中其描述的方法)。在不同條件
(例如鹽濃度、pH)下檢測(cè)時(shí)，特定GLP-l激動(dòng)劑或模擬體-配體相互 作用的檢測(cè)親和性可不同。因此，優(yōu)選采用GLP-l激動(dòng)劑或模擬體 和配體的標(biāo)準(zhǔn)溶液，和例如本文所述或本領(lǐng)域已知的緩沖劑的標(biāo)準(zhǔn) 緩沖劑，測(cè)定親和性及其它配體結(jié)合參數(shù)(例如KD、 Ka、 Kd)。
核酸分子。利用本文提供的信息，采用本文描述或本領(lǐng)域已知 的方法，可獲得例如編碼SEQIDNO 1-6中至少一個(gè)的至少90-100% 連續(xù)氨基酸以及抗體的至少一部分的核苷酸序列，其中上迷序列被 作為式(I)的P序列插入，以提供本發(fā)明的GLP-l激動(dòng)劑或才莫擬體， 還包括其特定片段、變體或共有序列，或者可獲得含這些序列中的 至少一種的沉積載體(deposited vector)、編碼至少一種GLP-l激動(dòng)劑
或模擬體或特定部分或變體的本發(fā)明核酸分子。
本發(fā)明的核酸分子可以是RNA形式，例如mRNA、 hnRNA、 tRNA 或任何其它形式，或者是DNA形式，包括但不限于通過克隆獲得或 合成產(chǎn)生的cDNA和基因組DNA或其任何組合。該DNA可為三鏈、 雙鏈或單鏈或其任何組合。DNA或RNA的至少一條鏈的任何部分 均可為編碼鏈，也稱為有義鏈，或者其可為非編碼鏈，也稱為反義 鏈。
本發(fā)明的分離核酸分子可包括含有可讀框(ORF)并任選地具有一 個(gè)或多個(gè)內(nèi)含子的核酸分子、含有GLP-l激動(dòng)劑或^li擬體或特定部 分或變體的編碼序列的核酸分子以及含基本上不同于上述核苷酸序 列的核苦酸序列的核酸分子，所述不同的核苷酸序列由于遺傳密碼 簡(jiǎn)并性其仍編碼本文所述和/或本領(lǐng)域已知的至少一種GLP-l激動(dòng)劑 或模擬體。當(dāng)然，所述遺傳密碼是本領(lǐng)域周知的。因此，對(duì)本領(lǐng)域 技術(shù)人員而言，產(chǎn)生這種編碼本發(fā)明特定GLP-l激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的簡(jiǎn)并核酸變體是常規(guī)工作。參見例如上述Ausubel 等，這種核酸變體包括在本發(fā)明中。
如本文所指出的，包含GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變 體的編碼核酸的本發(fā)明核酸分子可包括但不限于自身編碼GLP-1 激動(dòng)劑或模擬體片段的氨基酸序列的核酸分子；完整GLP-1激動(dòng)劑 或模擬體或其部分的編碼序列；GLP-1激動(dòng)劑或模擬體、片段或部 分的編碼序列，以及其它序列，例如至少一種信號(hào)前導(dǎo)肽或融合肽 的編碼序列，有或沒有上述其它編碼序列，例如至少一個(gè)內(nèi)含子， 連同其它非編碼序列，包括但不僅限于非編碼5'和3'序列，例如在轉(zhuǎn) 錄、mRNA加工(包括剪接和多腺苷酸化信號(hào))中起作用(例如mRNA 的核糖體結(jié)合和穩(wěn)定性)的轉(zhuǎn)錄、非翻譯序列；編碼其它氨基酸(例如 可提供其它功能性的氨基酸)的其它編碼序列。因此，編碼GLP-1激 動(dòng)劑或才莫擬體或特定部分或變體的序列可融合至標(biāo)記序列，例如編 碼特定肽的序列，該肽有助于純化含有GLP-1激動(dòng)劑或模擬體片段 或部分的融合GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體。
與本文所述多核苷酸選擇性雜交的多核苷酸。本發(fā)明提供可在 選擇性雜交條件下與本文公開的多核苷酸或包括其特定變體或部分 的其它本文公開多核苷酸雜交的分離核酸。因此，該實(shí)施方案的多
核苦酸可用于分離、檢測(cè)和/或定量含有這種多核苷酸的核酸。
低或中等嚴(yán)格性雜交條件典型但并不專有地應(yīng)用于與互補(bǔ)序列 相比具有較低序列同 一性的序列。中等和高嚴(yán)格性條件任選地可用 于較高同一性的序列。低嚴(yán)格性條件允許具有約40-99%序列同一性 的序列的選擇性雜交，并可用于鑒定直向同源或共生同源序列。
任選地，本發(fā)明的多核苦酸編碼由本文所述多核苷酸編碼的 GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的至少一部分。本發(fā)明的 多核苷酸包含可用于與編碼本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部 分或變體的多核苷酸選擇性雜交的核酸序列。參見例如上述Ausubel; 上述Colligan,其中每個(gè)文獻(xiàn)均通過引用整體結(jié)合到本文中。核酸的構(gòu)建。本發(fā)明的分離核酸可采用本領(lǐng)域熟知的(a)重組方 法、(b)合成技術(shù)、(c)純化技術(shù)或其組合來制備。
所述核酸可方便地包含除本發(fā)明多核苷酸之外的序列。例如， 可將含 一 個(gè)或多個(gè)內(nèi)切核酸酶限制位點(diǎn)的多克隆位點(diǎn)插入該核酸 中，以幫助分離該多核苷酸。另外，可插入可翻譯序列，以幫助分 離本發(fā)明的翻譯多核苷酸。例如，六組氨酸標(biāo)記序列提供了純化本 發(fā)明蛋白質(zhì)的方便途徑。本發(fā)明核酸除為編碼序列外，還任選地為 用于克隆和/或表達(dá)本發(fā)明多核苷酸的栽體、適體或接頭。
也可加入其它序列至這種克隆和/或表達(dá)序列，以優(yōu)化其在克隆 和/或表達(dá)方面的功能、幫助分離多核苷酸或促使多核香酸導(dǎo)入細(xì)胞 中?？寺≥d體、表達(dá)載體、適體和接頭的用途在本領(lǐng)域眾所周知。 參見，H口上述Ausubel或上述Sambrook。
構(gòu)建核酸的重組方法。利用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種克隆方 法，可從生物來源中獲得本發(fā)明的分離核酸組合物，例如RNA、 cDNA、基因組DNA或其任何組合。在某些實(shí)施方案中，采用在合 適的嚴(yán)格條件下與本發(fā)明多核苷酸選擇性雜交的寡核苷酸探針來鑒 別cDNA或基因組DNA文庫(kù)中的目標(biāo)序列。RNA的分離以及cDNA 和基因組文序的構(gòu)建均是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。(參見例如上 述Ausubel或上述Sambrook)。
用于構(gòu)建核酸的合成方法。本發(fā)明的分離核酸還可通過已知方 法經(jīng)直接化學(xué)合成制備(參見例如上述Ausubel)?；瘜W(xué)合成通常生成 單鏈寡核苷酸，通過與互補(bǔ)序列雜交，或通過使用該單鏈為模板用 DNA聚合酶聚合，可將該單鏈寡核苷酸轉(zhuǎn)變?yōu)殡p鏈DNA。本領(lǐng)域技 術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，盡管DNA的化學(xué)合成可被限于約100或更多個(gè)減* 基的序列，但通過連接較短序列可獲得較長(zhǎng)序列。
重組表達(dá)盒。本發(fā)明進(jìn)一步提供包含本發(fā)明核酸的重組表達(dá)盒。 本發(fā)明核酸序列，例如編碼本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部 分或變體的cDNA或基因組序列，可用于構(gòu)建可導(dǎo)入至少一種期望宿主細(xì)胞中的重組表達(dá)盒。重組表達(dá)盒典型地將包含有效連接至轉(zhuǎn) 錄起動(dòng)調(diào)節(jié)序列的本發(fā)明多核苷酸，其中該轉(zhuǎn)錄起動(dòng)調(diào)節(jié)序列將引 導(dǎo)所述多核苷酸在預(yù)期宿主細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄。異源和非異源(即內(nèi)源)啟 動(dòng)子均可用于引導(dǎo)本發(fā)明核酸的表達(dá)。
在某些實(shí)施方案中，充當(dāng)啟動(dòng)子、增強(qiáng)子或其它元件的分離核 酸可被導(dǎo)入非異源形式的本發(fā)明多核苷酸的合適位置(上游、下游或 內(nèi)含子中)，以上調(diào)或下調(diào)本發(fā)明多核芬酸的表達(dá)。例如，如本領(lǐng)域 所知，內(nèi)源啟動(dòng)子可通過突變、缺失和/或取代在體內(nèi)或體外被改變。 本發(fā)明多核苷酸可按所期望的有義或反義方向被表達(dá)。應(yīng)當(dāng)理解的 是，對(duì)有義或反義方向基因表達(dá)的控制可對(duì)可觀測(cè)特征具有直接影 響。另一種抑制方法是有義抑制。導(dǎo)入被設(shè)定為有義方向的核酸已 被證明是阻斷靶基因轉(zhuǎn)錄的 一種有效途徑。
載體和宿主細(xì)胞。本發(fā)明還涉及包含本發(fā)明分離核酸分子的載 體、經(jīng)由該重組栽體遺傳改造的宿主細(xì)胞，以及通過本領(lǐng)域熟知的
重組技術(shù)生產(chǎn)至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體。 參見例如上述Sambrook;上述Ausubel等，其中每個(gè)文獻(xiàn)均通過引 用整體結(jié)合到本文中。
所述多核苷酸任選地可連接至用于在宿主內(nèi)增殖的、含可選擇 標(biāo)記的載體。通常，采用合適的已知方法，例如電穿孔等，將質(zhì)粒 載體導(dǎo)入細(xì)胞中，其它已知方法包括利用載體作為沉淀物，如磷酸 4丐沉淀，或利用載體與帶電脂質(zhì)形成復(fù)合體。如果該載體為病毒， 則可用合適包裝細(xì)胞系將其體外包裝，并隨后將其轉(zhuǎn)導(dǎo)入宿主細(xì)胞 中。
DNA插入片段應(yīng)有效連接至合適啟動(dòng)子。該表達(dá)構(gòu)建體還含有 任選用于轉(zhuǎn)錄起始、終止中的至少 一種和轉(zhuǎn)錄區(qū)內(nèi)用于翻譯的核糖 體結(jié)合位點(diǎn)。該構(gòu)建體所表達(dá)的成熟轉(zhuǎn)錄物的編碼部分優(yōu)選包括開 始的翻譯起始密碼子和適宜地位于待翻譯mRNA末端的終止密碼子 (例如UAA、 UGA或UAG)， UAA和UAG優(yōu)選用于哺乳動(dòng)物或真核細(xì)力包表達(dá)。
表達(dá)載體優(yōu)選但任選地包括至少一種可選擇標(biāo)記。這種標(biāo)記包
括例知但不限于用于真核細(xì)胞培養(yǎng)物的氨甲蝶呤(MTX)、 二氪葉酸 還原酶(DHFR，美國(guó)專利第4,399,216、 4，634，665 、 4,656,134、 4,956,288、 5,149,636、 5,179,017號(hào))、氨千西林、新霉素(G418)、霉 酚酸或谷氨酰胺合成酶(GS,美國(guó)專利笫5,122,464、 5,770,359、 5,827,739號(hào))抗性，和用于在大腸桿菌和其它細(xì)菌或原核生物中培養(yǎng) 的四環(huán)素或氨千西林抗性基因(上述專利均通過引用整體結(jié)合到本文 中)。用于上述宿主細(xì)胞的合適培養(yǎng)基和條件是本領(lǐng)域已知的。合適 載體是技術(shù)人員容易明白的。將載體構(gòu)建物導(dǎo)入宿主細(xì)胞可通過磷 酸鈣轉(zhuǎn)染、DEAE-葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、陽(yáng)離子脂質(zhì)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、電 穿孔、轉(zhuǎn)導(dǎo)、感染或其它已知方法實(shí)現(xiàn)。本領(lǐng)域描述了這些方法， 例如上述Sambrook的1-4和16-18章；上述Ausubel的1、 9、 13、 15、 16章。
至少一種本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體可以 以修飾形式表達(dá)，例如融合蛋白，且不僅可包括分泌信號(hào)，還可包 括其它異源功能區(qū)。例如，可將附加氨基酸(尤其是帶電氨基酸)區(qū)加 入GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的N末端，以改善在宿 主細(xì)胞中、純化期間或后續(xù)處理和保存期間的穩(wěn)定性和持久性。同 樣，肽部分也可加入本發(fā)明的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或 變體，以利于純化。最終制備GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或其至少一種 片段之前可將該區(qū)域除去。這種方法在許多標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)中有描 述，例如上述Sambrook的17.29-17.42和18.1-18.74章；上述Ausubel 的16、 17和18章。
本領(lǐng)域一般技術(shù)人員熟知用于表達(dá)本發(fā)明蛋白質(zhì)編碼核酸的眾 多表達(dá)系統(tǒng)。用于生產(chǎn)所述模擬體、其特定部分或變體的示例性細(xì) 胞培養(yǎng)物是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。哺乳動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)通常為單層細(xì)胞形式， 但也可采用哺乳動(dòng)物細(xì)胞懸浮液或生物反應(yīng)器。本領(lǐng)域已發(fā)展出能夠表達(dá)完整糖基化蛋白的大量合適宿主細(xì)胞系，包括COS-l (例如
ATCCCRL 1650)、 C0S畫7 (例如ATCC CRL-1651)、 HEK293、 BHK21 (例如ATCC CRL-IO)、 CHO (例如ATCC CRL 1610， DG-44)和BSC-1 (例知ATCC CRL-26)細(xì)胞系、hepG2細(xì)胞、P3X63Ag8.653、 SP2/0-Agl4、 細(xì)胞、HeLa細(xì)胞等，均可容易地從例如美國(guó)典型培養(yǎng)物 保藏中心(American Type Culture Collection, Manassas, Va)獲得。優(yōu)選 宿主細(xì)胞包括淋巴來源的細(xì)胞，例如骨髓瘤和淋巴瘤細(xì)胞。尤其優(yōu) 選的宿主細(xì)胞為P3X63Ag8.653細(xì)胞(ATCC登記號(hào)CRL-1580)和 SP2/0-Agl4細(xì)胞(ATCC登記號(hào)CRL-1851)。
用于這些細(xì)胞的表達(dá)載體可包括一個(gè)或多個(gè)下述表達(dá)控制序 列，例如但不限于復(fù)制起點(diǎn)；啟動(dòng)子(例如晚期或早期SV40啟動(dòng)子、 CMV啟動(dòng)子(例如美國(guó)專利第5,168,062號(hào)、第5,385,839號(hào))、HSVtk 啟動(dòng)子、pgk (磷酸甘油酸激酶)啟動(dòng)子、EF-la啟動(dòng)子(例如美國(guó)專利 笫5,266,491號(hào))、至少一種人免疫球蛋白啟動(dòng)子)；增強(qiáng)子和/或加工 信息位點(diǎn)，例如核糖體結(jié)合位點(diǎn)、RNA剪接位點(diǎn)、聚腺苷酸化位點(diǎn)(例 如SV40大T抗原聚腺苷酸加入位點(diǎn))和轉(zhuǎn)錄終止子序列。參見例如 上述Ausubel等；上述Sambrook等。用于本發(fā)明核酸或蛋白質(zhì)的生 產(chǎn)的其它細(xì)胞是已知的和/或可獲得的，如來自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏 中心細(xì)月包系和雜交瘤目錄(American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas)(www.atcc.org)或其它已知或商業(yè)來源。
當(dāng)應(yīng)用真核宿主細(xì)胞時(shí)，典型地將聚腺苷酸化或轉(zhuǎn)錄終止序列 整合入載體中。終止序列實(shí)例是牛生長(zhǎng)激素基因來源的聚腺苷酸化 序列。也可包括用于準(zhǔn)確剪接轉(zhuǎn)錄物的序列。剪接序列實(shí)例是SV40 來源的VP1內(nèi)含子(Sprague等，J. Virol 45 773-781 (1983))。另外，如 本領(lǐng)域已知，可將宿主細(xì)胞內(nèi)控制復(fù)制的基因序列整合入載體中。
GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或其特定部分或變體的純化。GLP-1激 動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體可通過眾所周知的方法由重組細(xì)胞 培養(yǎng)物回收及純化，所述方法包括但不限于A蛋白純化、硫酸銨或乙醇沉淀、酸提取、陰離子或陽(yáng)離子交換層析、磷酸纖維素層析、 疏水作用層析、親和層析、羥磷灰石層析和凝集素層析。也可應(yīng)用
高效液相層析("HPLC")進(jìn)行純化。參見例如Colligan, Current Protocols in Immunology, 或Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2002)，例如l、 4、 6、 8、 9、 10章，每個(gè)文獻(xiàn) 均通過引用整體結(jié)合到本文中。
本發(fā)明的模擬體或特定部分或變體包括天然純化產(chǎn)物、化學(xué)合 成方法的產(chǎn)物和通過重組技術(shù)由真核宿主(包括例如酵母、高等植物、 昆蟲和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)產(chǎn)生的產(chǎn)物。根據(jù)重組生產(chǎn)方法中應(yīng)用的宿主， 本發(fā)明GLP-l激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體可為糖基化或非糖 基化的，優(yōu)選糖基化的。這種方法在許多標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)中有描迷， 例如上述Sambrook的17.37-17.42節(jié)；上述Ausubel的10、 12、 13、 16、 18和20章，上述Colligan, Protein Science, 12-14章，它們?nèi)?通過引用整體結(jié)合到本文中。
模擬體、特定片段和/或變體。本發(fā)明的分離模擬體包括由本文 更完整論述的本發(fā)明任何一種多核苷酸編碼的GLP-l激動(dòng)劑或模擬 體或特定部分或變體，或任何分離或制備的GLP-l激動(dòng)劑或模擬體 或其特定部分或變體。
優(yōu)選GLP-l激動(dòng)劑或模擬體或配體結(jié)合部分或變體結(jié)合至少一 個(gè)GLP-l蛋白配體，由此提供相應(yīng)蛋白質(zhì)或其片段的至少一種GLP-1生物活性。在治療或診斷方面具有重要作用的不同蛋白質(zhì)是本領(lǐng)域 熟知的，該蛋白質(zhì)的合適測(cè)定或生物活性也是本領(lǐng)域熟知的。
對(duì)于本發(fā)明，合適的GLP-l肽、變體和衍生物的非限制性實(shí)例 為SEQ ID NO 1: His-Xaa2-Xaa3-Gly-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaal0畫Xaall誦Xaal2國(guó)Xaal3-Xaal4畫Xaal5-Xaal6國(guó)Xaal7-Xaal8-Xaal9-Xaa20畫Xaa21 -Phe-Xaa23-Xaa24-Xaa25-Xaa26-Xaa27-Xaa28-Xaa29-Xaa30畫Xaa31，其中Xaa2是Ala、 Gly、 Ser、 Thr、 Leu、 Ile、 Val、 Glu、
Asp或Lys; Xaa3是Glu、 Asp或Lys; Xaa5是Thr、 Ala、 Gly、 Ser、Leu、 Ile、 Val、 Arg、 His、 Glu、 Asp或Lys; Xaa6是Phe、 His、 Trp 或Tyr; Xaa7是Thr或Asn; Xaa8是Ser、 Ala、 Gly、 Thr、 Leu、 Ile、 Val、 Glu、 Asp或Lys; Xaa9是Asp或Glu; XaalO是Val、 Ala、 Gly、 Ser、 Thr、 Leu、 Ile、 Met、 Tyr、 Trp、 His、 Phe、 Glu、 Asp或Lys; Xaall是Ser、 Val、 Ala、 Gly、 Thr、 Leu、 Ile、 Glu、 Asp或Lys; Xaal2 是Ser、 Val、 Ala、 Gly、 Thr、 Leu、 Ile、 Glu、 Asp或Lys; Xaal3 是Tyr、 Phe、 Trp、 Glu、 Asp或Lys; Xaal4是Leu、 Ala、 Met、 Gly、 Ser、 Thr、 Leu、 Ile、 Val、 Glu、 Asp或Lys; Xaal5是Glu、 Ala、 Thr、 Ser、 Gly、 Gln、 Asp或Lys; Xaal6是Gly、 Ala、 Ser、 Thr、 Leu、 Ile、 Val、 Gln、 Asn、 Arg、 Cys、 Glu、 Asp或Lys; Xaal7是Gln、 Asn、 Arg、 His、 Glu、 Asp或Lys; Xaal8是Ala、 Gly、 Ser、 Thr、 Leu、 Ile、 Val、 Arg、 Glu、 Asp或Lys; Xaal9是Ala、 Gly、 Ser、 Thr、 Leu、 Ile、 Val、 Met、 Glu、 Asp或Lys; Xaa20是Lys、 Arg、 His、 Gln、 Trp、 Tyr、 Phe、 Glu或Asp; Xaa21是Glu、 Leu、 Ala、 His、 Phe、 Tyr、 Trp、 Arg、 Gln、 Thr、 Ser、 Gly、 Asp或Lys; Xaa23是Ile、 Ala、 Val、 Leu或Glu; Xaa24是Ala、 Gly、 Ser、 Thr、 Leu、 Ile、 Val、 His、 Glu、 Asp或Lys; Xaa25是Trp、 Phe、 Tyr、 Glu、 Asp或Lys; Xaa26是Leu、 Gly、 Ala、 Ser、 Thr、 Ile、 Val、 Glu、 Asp或Lys; Xaa27是Val、 Leu、 Gly、 Ala、 Ser、 Thr、 Ile、 Arg、 Glu、 Asp或Lys; Xaa28是Lys、 Asn、 Arg、 His、 Glu或Asp; Xaa29是Gly、 Ala、 Ser、 Thr、 Leu、 Ile、 Val、 Arg、 Trp、 Tyr、 Phe、 Pro、 His、 Glu、 Asp或Lys; Xaa30是Arg、 His、 Thr、 Ser、 Trp、 Tyr、 Phe、 Glu、 Asp或Lys;以及Xaa31是Gly、 Ala、 Ser、 Thr、 Leu、 Ile、 Val、 Arg、 Trp、 Tyr、 Phe、 His、 Glu、 Asp、 Lys。
另一組優(yōu)選的GLP-1肽、變體或衍生物示例于SEQ ED NO 6: His-Xaa2畫Xaa3畫Gly畫Thr-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaal O畫Ser-Xaal 2-Tyr-Xaal4-Glu-Xaal 6-Xaal 7-Xaal 8-Xaal 9-Lys-Xaa21 -Phe-XaaSS-Ala-Trp-Leu-XaaZT-XaaZS-Gly-XaaSO, 其中Xaa2是Ala、 Gly或Ser; Xaa3是Glu或Asp; Xaa6是Phe或Tyr; Xaa7是Thr或Asn; Xaa8是Ser、 Thr或Ala; Xaa9是Asp或Glu; XaalO是Val、 Leu、 Met或lie; Xaal2 是Ser或Lys; Xaal4是Leu、 Ala或Met; Xaal6是Gly、 Ala、 Glu 或Asp; Xaal7是Gln或Glu; Xaal8是Ala或Lys; Xaal9是Ala、 Val、 Ile、 Leu或Met; Xaa21是Glu或Leu; Xaa23是Ile、 Ala、 Val、 Leu或Glu; Xaa27是Val或Lys; Xaa28是Lys或Asn;而Xaa30是 Arg或Glu。
這些肽可通過已公開和/或本領(lǐng)域已知的方法制備。序列中(以及 在整個(gè)說明書中，除非在特定情況下另有說明)的Xaa包括特定氨基 酸殘基、衍生物或其修飾的氨基酸。因?yàn)槊付幕?肽酶FV(DPP-IV) 可能是導(dǎo)致所觀察到的給予GLP-1在體內(nèi)快速失活的原因，所以優(yōu) 選在激動(dòng)劑或模擬體背景下受保護(hù)免遭DPP-IV活性的GLP-1肽、同 源物、類似物和衍生物。
部分地或優(yōu)選基本上提供至少一種GLP-1生物活性的GLP-1激 動(dòng)劑或模擬體或其特定部分或變體，可結(jié)合GLP-1配體，由此提供 至少一種活性，否則該活性是由GLP-1與至少一種配體如GLP-1受 體結(jié)合或其它蛋白質(zhì)依賴或介導(dǎo)的機(jī)制所介導(dǎo)的。此處所用的術(shù)語(yǔ) "GLP-1激動(dòng)劑或模擬體活性"指GLP-1激動(dòng)劑或模擬體，取決于測(cè) 定，其可以以約20-10,000%、優(yōu)選至少約60、 70、 80、 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98、 99、 100、 110、 120、 130、 140、 150、 160、 170、 180、 190、 200、 250、 300、 350、 400、 450、 500、 550、 600、 700、 800、 900、 1000、 2000、 3000、 4000、 5000、 6000、 7000、 8000、 9000%或以上調(diào)節(jié)或引起至少一種GLP-1依賴性活性。
GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體提供至少一種蛋白質(zhì) 依賴性活性的能力優(yōu)選地通過本文所述和/或本領(lǐng)域已知的至少 一 種 合適的蛋白質(zhì)生物測(cè)定來評(píng)價(jià)。本發(fā)明的人GLP-1激動(dòng)劑或模擬體 或特定部分或變體可與任何類(IgG、 IgA、 IgM等)或同種型相似，并 可包含至少一部分K或人輕鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，人GLP-1激動(dòng)劑或才莫擬體或特定部分或變體包含至少一種同種型(例如IgGl、 IgG2、 IgG3或IgG4)的IgG重鏈可變區(qū)片段、鉸鏈區(qū)、CH2和CH3。
至少一種本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體結(jié)合 至少一種配體、亞單位、片段、部分或其任何組合。至少一種本發(fā) 明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體、特定部分或變體的至少一種GLP-1肽、 變體或衍生物任選地可結(jié)合該配體的至少一個(gè)特定表位。該結(jié)合表 位可包含蛋白配體(例如GLP-1受體或其部分)序列連續(xù)氨基酸的至少 1-3個(gè)氨基酸至完整指定部分的至少一種氨基酸序列的任何組合。
這種模擬體可通過下述方法制備采用已知技術(shù)將GLP-1激動(dòng)
劑或模擬體的式(I)不同部分連接在一起；采用已知的重組DNA技術(shù) 或使用其它任何合適方法，例如化學(xué)合成法，制備并表達(dá)編碼GLP-1激動(dòng)劑或^i擬體的至少一種核酸分子。
采用本領(lǐng)域已知的合適方法，例如噬菌體展示(Katsube, Y等,/"〃 Mo/MW, 1(5) 863-868 (1998))或使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的方法，可制備與人 GLP-1配體(例如受體)結(jié)合并包含限定重鏈或輕鏈可變區(qū)或其部分的 模擬體。GLP-1激動(dòng)劑或模擬體、特定部分或變體可利用編碼核酸 或其部分在合適宿主細(xì)胞中表達(dá)。
本發(fā)明還涉及含有與本文所述氨基酸序列基本相同的序列中氨 基酸的模擬體、配體結(jié)合片段和免疫球蛋白鏈。優(yōu)選地，該模擬體 或其配體結(jié)合片段可以高親和性(例如小于或等于約10 —7 M的Kd)結(jié)
合人GLP-1配體，例如受體。與本文所述序列基本相同的氨基酸序 列包括含保守氨基酸置換以及氨基酸缺失和/或插入的序列。保守氨 基酸置換指第一個(gè)氨基酸被具有與所述第一個(gè)氨基酸相似化學(xué)和/或 物理特性(例如電荷、結(jié)構(gòu)、極性、疏水性/親水性)的第二個(gè)氨基酸置 換。保守置換包括在以下組別內(nèi)一種氨基酸被另一種置換賴氨酸 (K)、精氨酸(R)和組氨酸(H);天冬氨酸(D)和谷氨酸(E);天冬酰胺(N)、 谷氨酰胺(Q);絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)、酪氨酸(Y)、 K、 R、 H、 D和 E;丙氨酸(A)、纈氨酸(V)、亮氨酸(L)、異亮氨酸(I)、脯氨酸(P)、苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)、蛋氨酸(M)、半胱氨酸(C)和甘氨酸(G)、 F、 W和Y; C、 S和T。
氨基酸密碼。組成本發(fā)明模擬體或特定部分或變體的氨基酸通 常被縮寫。通過由本領(lǐng)域熟知的氨基酸單字母代碼、三字母代碼、 名稱或三個(gè)核苷酸的密碼子標(biāo)明該氨基酸，可表示該氨基酸名稱(參 見Alberts, B等，Molecular Biology of The Cell,第3版，Garland Publishing, Inc, New York, 1994》
本發(fā)明的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體可包括本文 特指的來源于自然突變或人為操作的一個(gè)或多個(gè)氨基酸置換、缺失
SEQ ID NO 47-64中提出的序列。
當(dāng)然，技術(shù)人員應(yīng)根據(jù)包括上述因素在內(nèi)的許多因素來確定氨 基酸置換的數(shù)量。 一般來說，按照本文的說明，對(duì)至少一種GLP-1 激動(dòng)劑或模擬體的氨基酸置換、插入或缺失的數(shù)量不應(yīng)超過40、 30、 20、 19、 18、 17、 16、 15、 14、 13、 12、 11、 10、 9、 8、 7、 6、 5、 4、 3、 2、 l個(gè)氨基酸，例如l-30或其中的任何范圍或數(shù)值。
在本發(fā)明式I ((P(n)-L(o)-V(p)-H(q)-CH2(r)-CH3(s))(t))中，式I的 V、 H、 CH2和CH3部分可為任何合適的人或人相容的序列，例如 圖1-18和表1提供的序列，或本領(lǐng)域已知的序列，或其任何組合或 共有序列，或其任何融合蛋白，優(yōu)選為人源的，或進(jìn)行改造，以在 給予人時(shí)使免疫原性最小。
P部分可包含本領(lǐng)域已知或本文描述的至少一種GLP-1治療性 肽，例如但不限于SEQ ID NO 1提供的肽或其任何組合或共有序列 或其任何融合蛋白。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，P部分可包含至少一種 GLP-1肽，其具有SEQ ID NO 6中至少一個(gè)的序列或其任何組合或
共有序列或其任何融合蛋白。
任選的接頭序列可為本領(lǐng)域已知的任何合適肽接頭。優(yōu)選序列 包括G和S的任何組合，例如X1-X2-X3-X4-. -Xn,其中X可為G或S, n可為5-30。非限制性實(shí)例包括GS、 GGS、 GGGS(SEQIDNO 16)、 GSGGGS (SEQ ID NO 17)、 GGSGGGS (SEQ ID NO 18)、 GGSGGGSGG (SEQ ID NO 19)和GGGSGGGSGG (SEQ ID NO 20)等。
在本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體中對(duì)功能而 言必不可少的氨基酸可通過本領(lǐng)域已知方法鑒定，例如定點(diǎn)誘變或 丙氛酸掃描誘變(例如上述Ausubel, 8、 15章；Cunningham和Wells, Science 244 1081-1085 (1989))。后一方法在分子中的每一個(gè)殘基上均 導(dǎo)入單丙氨酸突變。隨后，檢驗(yàn)所獲突變分子的生物活性，例如但 不限于本文指出或本領(lǐng)域已知的至少一種蛋白質(zhì)相關(guān)活性。對(duì)GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體結(jié)合關(guān)鍵的位點(diǎn)也可通過例如結(jié) 晶、核磁共振或光親和標(biāo)記的結(jié)構(gòu)分析法來鑒定(Smith等，J Mol Biol 224:899-904 (1992)和de Vos等，Science 255.306-312 (1992))。
本發(fā)明模擬體或特定部分或變體可包含式(I)的P部分，例如但 不僅限于SEQ ID NO 1和6中至少一個(gè)的至少一部分。GLP-1激動(dòng)
劑或模擬體或特定部分或變體任選地還可包含為式(I)P部分的至少一 種多肽的至少一個(gè)功能部分，SEQ ID NO 1和6中至少一個(gè)的至少 90-100%?？稍鰪?qiáng)或保持至少 一種上述活性的非限制性變體包括但不 限于任一上述多肽，該多肽還包含至少一種突變，該突變與不顯著 影響所述GLP-1激動(dòng)劑或模擬體的合適生物活性或功能的至少一個(gè) 置換、插入或缺失相對(duì)應(yīng)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，P氨基酸序列或其部分與SEQIDNO 1和6 中至少一個(gè)的相應(yīng)部分的相應(yīng)氨基酸序列具有約90-100%同一性(即 90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98、 99、 100或其中的任何范圍 或數(shù)值)。優(yōu)選地，利用本領(lǐng)域已知的合適計(jì)算機(jī)算法確定90-100% 氨基酸同一性(即90、 91、 92、 93、 94、 95、 96、 97、 98、 99、 100 或其中的任何范圍或數(shù)值)。
本發(fā)明模擬體或特定部分或變體可包含來源于本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的任何數(shù)量的連續(xù)氨基酸殘基，其
中該數(shù)量選自GLP-1激動(dòng)劑或模擬體中連續(xù)殘基數(shù)的10-100%組成 的整數(shù)。任選地，此連續(xù)氨基酸的子序列在長(zhǎng)度上為至少約2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20、 21、 22、 23、 24、 25、 26、 27、 28、 29、 30、 40、 50、 60、 70、 80、 90、 100、 110、 120、 130、 140、 150、 160、 170、 180、 190、 200、 210、 220、 230、 240、 250或更多個(gè)氨基酸，或?yàn)槠渲腥魏畏秶驍?shù) 值的氨基酸。此外，該子序列的數(shù)量可為選自1-20的任何整數(shù)，例 如至少2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、 20或更大的整數(shù)。
技術(shù)人員應(yīng)理解的是，本發(fā)明包括本發(fā)明的至少一種生物活性 GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體。生物活性模擬體或特定 部分或變體具有的特定活性為天然(非合成)、內(nèi)源或相關(guān)和已知的插 入或融合蛋白或特定部分或變體的活性的至少20%、 30%或40%, 優(yōu)選為至少50%、 60%或70%，最優(yōu)選為至少80%、 90%或95%-100%。
測(cè)定并定量檢測(cè)酶活性和底物特異性的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知 的。
另一方面，本發(fā)明涉及本文所述通過共價(jià)連接有機(jī)部分而被修 飾的人模擬體和配體結(jié)合片段。這種修飾可產(chǎn)生具有改良藥代動(dòng)力 學(xué)特性(例如延長(zhǎng)的體內(nèi)血清半衰期)的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或配體 結(jié)合片段。有機(jī)部分可以是線性或分支親水聚合基團(tuán)、脂肪酸基團(tuán) 或脂肪酸酯基團(tuán)。在具體實(shí)施方案中，親水聚合基團(tuán)可具有約800 至約120,000道爾頓的分子量，可為聚烷二醇(例如聚乙二醇(PEG)、 聚丙二醇(PPG))、糖聚合物、氨基酸聚合物或聚乙烯吡咯烷酮，脂肪 酸或脂肪酸酯基團(tuán)可包含約8至約40個(gè)碳原子。
本發(fā)明的修飾模擬體和配體結(jié)合片段可包含一個(gè)或多個(gè)與GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體直接或間接地共價(jià)鍵合的有機(jī)部 分。與本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或配體結(jié)合片段鍵合的各有機(jī)部分均可獨(dú)立為親水聚合基團(tuán)、脂肪酸基團(tuán)或脂肪酸酯基團(tuán)。本文 所用的術(shù)語(yǔ)"脂肪酸"包括單羧酸和二羧酸。本文所用的術(shù)語(yǔ)"親 水聚合基團(tuán)"指在水中比在辛烷中更易溶的有機(jī)聚合物。例如，聚 賴氨酸在水中比在辛烷中更易溶。因此，本發(fā)明包括通過共價(jià)附著 聚賴氨酸而得以修飾的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體。適于修飾本發(fā)明模 擬體的親水聚合物可為線性的或分支的，包括例知聚鏈烷二醇(例如
PEG、單曱氧基-聚乙二醇(mPEG)、 PPG等)、糖類(例如葡聚糖、纖 維素、寡糖、多糖等)、親水氨基酸的聚合物(例如聚賴氨酸、聚精氨 酸、聚天冬氨酸等)、聚環(huán)氧烷(例如聚環(huán)氧乙烷、聚環(huán)氧丙烷等)和 聚乙烯吡咯烷酮。優(yōu)選地，修飾本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體的親 水聚合物作為單獨(dú)分子實(shí)體時(shí)具有約800至約150,000道爾頓的分子 量。例如，可采用PEG簡(jiǎn)、PEG懇、PEG漏、PEG婦、PEG畫。、PEG,房、 PEGm,和PEG2M()()，其中下標(biāo)為該聚合物的道爾頓平均分子量。
親水聚合基團(tuán)可被1至約6個(gè)烷基、脂肪酸或脂肪酸酯基團(tuán)取 代。被脂肪酸或脂肪酸酯基團(tuán)取代的親水聚合物可通過應(yīng)用合適的 方法制備。例如，包含胺基團(tuán)的聚合物可被偶聯(lián)至脂肪酸或脂肪酸 酯的羧化物，而脂肪酸或脂肪酸酯上的活性羧化物(例如經(jīng)由N,N-羰 基二咪唑活化)可被偶聯(lián)至聚合物上的羥基基團(tuán)。
適于修飾本發(fā)明模擬體的脂肪酸和脂肪酸酯可以是飽和的，或 者可含有一個(gè)或多個(gè)不飽和單位。適于修飾本發(fā)明模擬體的脂肪酸 包括例如n-十二烷酸(Cu,月桂酸)、n-十四烷酸(C！4，肉豆蔻酸)、n-十八烷酸(C^，硬脂酸)、n-二十烷酸(C2。，花生酸)、11-二十二烷酸((^22， 山崳酸)、n-三十烷酸(C3。)、 11-四十烷酸((34。)、順式-A9-十八烷酸(C,8, 油酸)、全順式-A5,8,ll,14-二十烷四烯酸(C2。，花生四烯酸)、辛二酸、 十四烷二酸、十八烷二酸、二十二烷二酸等。合適的脂肪酸酯包括 含線性或分支低級(jí)烷基的二羧酸單酯。低級(jí)烷基可包含1個(gè)至約12 個(gè)、優(yōu)選1個(gè)至約6個(gè)碳原子。
修飾的人模擬體和配體結(jié)合片段可采用合適方法制備，例如通過與一種或多種修飾劑反應(yīng)。本文所用的術(shù)語(yǔ)"修飾劑"指包含活 化基團(tuán)的合適有機(jī)基團(tuán)(例如親水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)。"活 化基團(tuán)"指一種化學(xué)部分或官能團(tuán)，其可在適當(dāng)條件下與第二化學(xué) 基團(tuán)反應(yīng)，從而在修飾劑與第二化學(xué)基團(tuán)之間形成共價(jià)健。例如， 胺反應(yīng)性活化基團(tuán)包括親電子基團(tuán)，例如甲苯磺酸酯、曱磺酸酯、
鹵素(氯、溴、氟、碘)、N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHS)等?？膳c硫醇反 應(yīng)的活化基團(tuán)包括例如馬來酰亞胺、碘乙酰、丙烯酰、吡咬基二硫 化物、5-巰基-2-硝基硫代苯曱酸(TNB-硫醇)等。醛官能團(tuán)可被偶聯(lián) 至含有胺或酰肼的分子上，且疊氮基團(tuán)可與三價(jià)磷基團(tuán)反應(yīng)，形成 氨基磷酸酯或磷酰亞胺鍵。將活化基團(tuán)導(dǎo)入分子中的合適方法是本 4頁(yè)域已^口的(參見{列3口 Hermanson， G.T.，萬(wàn)/oco"y"g加e rec/2m々w^s, Academic Press San Diego， CA (1996))。活化基團(tuán)可直接地或通過接 頭部分如二價(jià)C廣Ci2基團(tuán)(其中一個(gè)或多個(gè)碳原子可被例如氧、氮或 硫的雜原子取代)鍵合至有機(jī)基團(tuán)(例如親水聚合物、脂肪酸、脂肪酸 酯)。合適的接頭部分包括例如四乙二醇、-(CH2)3-、 -NH-(CH2)6-NH-、 -(CH2)2-NH-和-CH2-0-CH2-CHrO-CH2-CH2-0-CH-NH-。包含接頭部 分的修飾劑例如可如下產(chǎn)生在l-乙基-3-(3-二曱基氨丙基)碳二亞胺 (EDC)存在下使單-Boc-烷基二胺(例如單Boc-乙烯二胺、單Boc-二氨 基己烷)與脂肪酸反應(yīng)，以在游離胺與脂肪酸羧酸酯之間形成酰胺鍵。 可如下除去產(chǎn)物中的Boc保護(hù)基用三氟乙酸(TFA)處理，以暴露可 與所述另一羧酸酯偶聯(lián)或可與馬來酸酐反應(yīng)的伯胺，并使所獲產(chǎn)物 環(huán)化，以生成該脂肪酸的活化馬來酰亞胺衍生物(參見例如Thompson 等，W0 92/16221,其通過引用整體結(jié)合到本文中)。
本發(fā)明的修飾模擬體可通過使人GLP-l激動(dòng)劑或模擬體或配體 結(jié)合片段與修飾劑反應(yīng)而得以生成。例如，通過應(yīng)用胺反應(yīng)性修飾 劑，例如PEG的NHS酯，可以非位點(diǎn)特異性方式將有機(jī)部分鍵合至 GLP-l激動(dòng)劑或模擬體。修飾的人模擬體或配體結(jié)合片段也可通過 還原GLP-l激動(dòng)劑或模擬體或配體結(jié)合片段的二硫鍵(例如鏈內(nèi)二硫鍵)來制備。隨后，可使還原的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或配體結(jié)合片
段與硫醇反應(yīng)性修飾劑反應(yīng)，以產(chǎn)生本發(fā)明的修飾GLP-1激動(dòng)劑或 模擬體。采用合適方法，例如反向蛋白水解(Fisch等，歷oco"ywga" C72em, 3 147-153 (1992), Werlen等，說oco"7'wg加e C/2e附，5 411-417 (1994)， Kumaran等，6(10) 2233-2241 (1997), Itoh等，說oo尸g C/ 亂，24(1) 59-68 (1996)， Capellas等，5/o&c/mo/說麵g, 56(4):456-463 (1997》和Hermanson, G T,腸c呵'wg她rec/zm々wes， Academic Press: San Diego, CA (1996)中所描述的方法，可制備含有機(jī)部分的修 飾人模擬體和配體結(jié)合片段，其中所述有機(jī)部分鍵合至本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的特定位點(diǎn)。
GLP-1模擬體組合物。本發(fā)明還提供至少一種GLP-1激動(dòng)劑或 模擬體或特定部分或變體組合物，其包含本文所述和/或本領(lǐng)域已知 的至少一種、至少兩種、至少三種、至少四種、至少五種、至少六 種或更多種模擬體或其特定部分或變體，它們以非天然組合物、混 合物或形態(tài)提供。這種組合物的百分率以重量、體積、濃度、摩爾 濃度來計(jì)，或以本領(lǐng)域所知或本文所述的液體或無水溶液、混合物、 懸液、乳劑或膠體的摩爾濃度來計(jì)。
以重量、體積、濃度、摩爾濃度或本領(lǐng)域所知或本文所述的液 體、氣體或無水溶液、混合物、懸液、乳劑或膠體的摩爾濃度計(jì)， 該組合物可包含0.00001-99.9999%或其中的任何范圍或數(shù)值，例如但 不限于0.00001、 0.00003、 0.00005、 0.00009、 0.0001、 0.0003、 0.0005、 0.0009、 0.001、 0.003、 0.005、 0.009、 0.01、 0,02、 0.03、 0.05、 0.09、 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5、 0.6、 0.7、 0.8、 0,9、 1.0、 1.1、 1.2、 1.3、 1.4、
1.5、 1.6、 1.7、 1.8、 1.9、 2.0、 2.1、 2.2、 2.3、 2.4、 2.5、 2.6、 2.7、 2.8、 2.9、 3.0、 3.1、 3.2、 3.3、 3.4、 3.5、 3.6、 3.7、 3.8、 3.9、 4.0、 4.3、 4.5、
4.6、 4.7、 4.8、 4.9、 5、 6、 7、 8、 9、 10、 15、 20、 25、 30、 35、 40、 45、 50、 55、 60、 65、 70、 71、 72、 73、 74、 75、 76、 77、 78、 79、 80、 81、 82、 83、 84、 85、 86、 87、 88、 89、 90、 91、 92、 93、 94、95、 96、 97、 98、 99、 99.1、 99.2、 99.3、 99,4、 99.5、 99.6、 99.7、 99.8、 99.9%。因此，本發(fā)明的這種組合物包括但不限于0.00001-100 mg/ml 和/或0.00001-100 mg/g。
本發(fā)明提供至少一種GLP-1模擬體組合物，其在以治療有效量 給予時(shí)促進(jìn)胰島分化、增加(3-細(xì)胞量和/或增加胰島素分泌，以及減 少胰島和/或產(chǎn)胰島素細(xì)胞的凋亡、抑制胰高血糖素分泌、延遲胃排 空和減少食物攝取。本發(fā)明還提供至少一種GLP-1模擬體組合物， 其在以治療有效劑量給予時(shí)在變成糖尿病的高風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體中延遲糖尿 病發(fā)作或預(yù)防糖尿病。本發(fā)明還提供至少一種GLP-1模擬體組合物， 其在以治療有效劑量給予時(shí)調(diào)節(jié)或治療由于各種代謝障礙引起的高 血糖。本發(fā)明還提供至少一種GLP-1模擬體組合物，其在以治療有 效劑量給予時(shí)調(diào)節(jié)或治療由于疾病或障礙引起的至少一種胰腺機(jī)能 失調(diào)，所述疾病或障礙包括但不限于糖尿病、胰腺炎、胰腺腫瘤、 月夷&，癌和相關(guān)病癥。
GLP-1模擬體組合物任選地還可包括有效量的至少 一種化合物 或蛋白質(zhì)，其選自以下的至少一種糖尿病藥物、胰島素代謝相關(guān) 藥物、葡萄糖代謝相關(guān)藥物、抗感染藥物、心血管(CV)系統(tǒng)藥物、 中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)藥物、自主神經(jīng)系統(tǒng)(ANS)藥物、呼吸道藥物、 胃腸(GI)道藥物、激素藥物、用于流體或電解質(zhì)平衡的藥物、血液學(xué) 藥物、抗腫瘤藥物、免疫調(diào)節(jié)藥物、眼、耳或鼻藥物、局部藥物、 營(yíng)養(yǎng)藥物等。這種藥物均是本領(lǐng)域熟知的，包括本文所列各藥物的 配方、適應(yīng)癥、劑量和給予(參見例如Nursing 2001 Handbook of Drugs, 第21版,Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001, Health Professional's Drug Guide 2001, Shannon, Wilson, Stang編輯,Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ, Pharmcotherapy Handbook, Wells等編輯,Appleton & Lange, Stamford, CT,各個(gè)文獻(xiàn)均通過引用整體結(jié)合到本文中)。
糖尿病相關(guān)藥物可為以下的至少一種才各列酮、胰島素和衍生 物、磺酰脲、米格列奈、雙胍、a-葡糖苷酶抑制劑、蛋白酪氨酸磷酸酶-lB、糖原合酶激酶3、糖原異生抑制劑、丙酮酸脫氫酶激酶(PDH)
抑制劑、脂解抑制劑、脂肪氧化抑制劑、肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I和/
或II抑制劑、(3-3腎上腺素受體激動(dòng)劑、鈉和葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)體(SGLT) 抑制劑或?qū)σ韵碌囊环N或多種起作用的化合物T細(xì)胞的至少一種自 身免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)、活化、增殖、遷移和/或抑制細(xì)胞功能、抑 制T細(xì)胞受體/肽/MHC-II相互作用、誘導(dǎo)T細(xì)胞無反應(yīng)性、缺失自 反應(yīng)性T細(xì)胞、減少穿過血腦屏障的運(yùn)輸、改變促炎細(xì)胞因子(Thl) 和免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子(Th2)的平衡、抑制基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、神 經(jīng)保護(hù)、減少神經(jīng)膠質(zhì)增生、促進(jìn)髓鞘再生成。
抗感染藥物可為選自以下的至少一種殺阿米巴藥或抗原生動(dòng) 物藥、驅(qū)腸蟲藥、抗真菌藥、抗瘧藥、抗結(jié)核藥或抗麻風(fēng)藥、氨基 糖苷類藥、青霉素、頭孢菌素、四環(huán)素、磺胺、氟喹諾酮、抗病毒 藥、大環(huán)內(nèi)酯抗感染藥和其它抗感染藥。CV藥物可為選自以下的至 少一種變力性藥、抗心律不齊藥、防心絞痛藥、抗高血壓藥、抗 血脂藥和其它心血管藥物。CNS藥物可為選自非麻醉性鎮(zhèn)痛藥中的 至少一種或選自以下的至少一種退熱劑、非類固醇抗炎藥、麻醉 藥或阿片樣鎮(zhèn)痛藥、鎮(zhèn)靜-催眠藥、抗驚厥藥、抗抑郁藥、抗焦慮藥、 抗精神病藥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激劑、抗帕金森病藥和其它中樞神經(jīng) 系統(tǒng)藥物。ANS藥物可為選自以下的至少一種膽堿能藥物(擬副交 感神經(jīng)藥)、抗膽堿能藥、腎上腺素能藥(擬交感神經(jīng)藥)、腎上腺素 能阻斷劑(抗交感神經(jīng)藥)、骨骼肌松弛藥和神經(jīng)肌肉阻斷劑。呼吸道 藥物可為選自以下的至少一種抗組胺劑、支氣管舒張藥、祛痰劑 或鎮(zhèn)咳藥和其它呼吸藥物。GI道藥物可為選自以下的至少一種抗 酸劑、吸附劑、抗氣脹藥、消化酶、膽結(jié)石增溶劑、止瀉藥、緩瀉 藥、止吐劑和抗?jié)V藥。激素藥物可為選自以下的至少一種皮質(zhì) 類固醇、雄激素、促蛋白合成類固醇、雌激素、孕酮、促性腺激素、 抗糖尿病藥物、至少一種胰高血糖素、曱狀腺激素、曱狀腺激素拮 抗劑、垂體激素和類曱狀旁腺藥物。用于體液和電解液平衡的藥物可為選自以下的至少一種利尿劑、電解質(zhì)、置換溶液、酸化劑或 ^威化劑。血液藥物可為選自以下的至少一種補(bǔ)血藥、抗凝血藥、 血液衍生物和溶栓酶?？鼓[瘤藥物可為選自以下的至少一種烷基 化藥物、抗代謝物、抗菌素抗腫瘤藥物、可改變激素平衡的抗腫瘤 藥物和其它抗肺瘤藥物。免疫調(diào)節(jié)藥物可為選自以下的至少一種 免疫抑制劑、疫苗、類毒素、抗毒素、抗蛇毒素、免疫血清和生物 反應(yīng)調(diào)節(jié)物。眼、耳和鼻用藥可為選自以下的至少一種眼科抗感 染藥、眼科抗炎癥藥、縮瞳藥、擴(kuò)瞳藥、眼部血管收縮劑和其它眼、 耳、鼻用藥。局部用藥可為選自以下的至少一種局部抗感染藥、 抗齊螨劑、抗虱劑和局部皮質(zhì)類固醇。營(yíng)養(yǎng)藥可為選自以下的至少 一種維生素、礦物質(zhì)和熱質(zhì)。參見例如上述A^wra'"g Z>wg Z/aw必ooA:中的內(nèi)容。
至少一種殺阿米巴藥或抗原生動(dòng)物藥可為選自以下的至少一 種阿托伐醌、鹽酸氯喹、磷酸氯喹、曱硝基羥乙唑、鹽酸曱硝基 羥乙唑、戊烷脒羥乙基磺酸鹽。至少一種驅(qū)腸蟲藥可為選自以下的 至少一種曱苯咪峻、雙羥萘酸壹嗜咬、p塞苯咪唑。至少一種抗真 菌劑可為選自以下的至少一種兩性霉素B、兩性霉素B膽固醇基 硫酸鹽復(fù)合物、兩性霉素B脂質(zhì)復(fù)合物、兩性霉素B脂質(zhì)體、氟康 唑、氟胞嗜啶、微小尺寸灰黃霉素、超微小尺寸灰黃霉素、伊曲康 唑、酮康唑、制霉菌素、鹽酸特比萘芬。至少一種抗疾藥可為選自 以下的至少一種鹽酸氯喹、磷酸氯喹、強(qiáng)力霉素、硫酸羥化氯喹、 鹽酸曱氟喹、磷酸伯氨喹、息疾定、含周效磺胺的息癥定。至少一 種抗結(jié)核藥或抗麻風(fēng)藥可為選自以下的至少一種氯苯吩。秦、環(huán)絲 氨酸、氨苯砜、鹽酸乙胺丁醇、異煙肼、吡，秦酰胺、利福布汀、利 福平、利福噴汀、硫酸鏈霉素。至少一種氨基糖苷類藥物可為選自 以下的至少一種硫酸卡那霉素、硫酸艮他霉素、硫酸新霉素、辟u 酸鏈霉素、硫酸妥布霉素。至少一種青霉素可為選自以下的至少一 種阿莫西林/棒酸鉀、三水合阿莫西林、氨卡西林、氨千西林鈉、三水合氨千西林、氨千西林鈉/舒巴坦鈉、氯唑西林鈉、雙氯西林鈉、 美洛西林鈉、萘夫西林鈉、苯唑西林鈉、千星青霉素G、青霉素G
鉀、青霉素G普普卡因、青霉素G鈉、青霉素V鉀、哌拉西林鈉、 哌拉西4木鈉/他唑巴坦鈉、替卡西林二鈉、替卡西林二鈉/棒酸鉀。至 少一種頭孢菌素可為選自以下的至少一種頭孢克洛、頭孢羥氨千、 頭孢唑林鈉、頭孢地尼、鹽酸頭孢吡坊、頭孢克肝、頭孢美哇鈉、 頭孢尼西鈉、頭孢派酮鈉、頭孢遙將鈉、頭孢替坦二鈉、頭孢西丁 鈉、頭孢泊肟普塞酯、頭孢丙烯、頭孢他咬、頭孢布坦、頭孢哇肝 鈉、頭孢曲松鈉、頭孢呋辛醋氧乙酯、頭孢呋辛鈉、鹽酸頭孢氨千、 一水合頭孢氨千、頭孢拉定、氯碳頭孢。上述至少一種四環(huán)素可為 選自以下的至少一種鹽酸地美環(huán)素、強(qiáng)力霉素鈣、鹽酸多西環(huán)素 (doxycycline hyclate)、 鹽酸多西環(huán)素(doxycycline hydrochloride), ~-水合強(qiáng)力霉素、鹽酸米諾環(huán)素、鹽酸四環(huán)素。至少一種磺胺可為選 自以下的至少一種增效磺胺曱基異嚼唑、磺胺嘧啶、磺胺曱基異 嗨唑、石黃胺二曱異瞎唑、石黃胺乙酰異嚼唑。至少一種氟喹諾酮可為 選自以下的至少一種曱磺酸阿拉曲伐沙星、環(huán)丙沙星、依諾沙星、 左氧呋沙星、鹽酸洛美沙星、萘啶酸、氟哌酸、氧氟沙星、司帕沙 星、曱磺酸曲伐沙星。至少一種抗病毒藥物可為選自以下的至少一 種硫酸阿巴卡韋、無環(huán)鳥苷鈉、鹽酸金剛烷胺、安普那韋、西多 福韋、曱磺酸地拉維定、去羥肌苷、依非韋倫、泛昔洛韋、福米韋 生鈉、磷曱酸鈉、更昔洛韋、硫酸茚地那韋、拉米呋啶、拉米呋啶/ 齊多呋啶、曱磺酸奈非那韋、內(nèi)維拉平、磷酸奧司他韋、三氮唑核 苷、鹽酸金剛乙胺、利托那韋、沙奎那維、曱石黃酸沙奎那維、司他 呋啶、鹽酸伐昔洛韋、扎西他濱、扎納米韋、齊多呋啶。至少一種 大環(huán)內(nèi)酯抗感染藥可為選自以下的至少一種阿奇霉素、克拉霉素、 地紅霉素、紅霉素基質(zhì)、無味紅霉素、琥珀酸乙酰紅霉素、乳糖酸 紅霉素、硬脂酸紅霉素。至少一種其它抗感染藥可為選自以下的至 少一種氨曲南、桿菌肽、琥珀酸鈉氯霉素、鹽酸氯潔霉素、鹽酸氯潔霉素棕櫚酸酯、氯潔霉素磷酸酯、亞胺培南和西司他丁鈉、美 羅培南、呋喃妥因大晶體、呋喃妥因微晶體、奎奴普丁/達(dá)福普汀、
鹽酸壯觀霉素、三曱氧千二氨嘧啶、鹽酸萬(wàn)古霉素。(參見例如JVwraZ"g 200/ Drwg 7fa"必ooA:中的24-214頁(yè))。
至少一種變力性藥物可為選自以下的至少一種乳酸氨聯(lián)吡啶 酮、地高辛、乳酸米立農(nóng)。至少一種抗心律失常藥可為選自以下的 至少一種腺苷、鹽酸乙胺碘呋酮、硫酸阿托品、曱苯磺酸溴千胺、 鹽酸硫氮酮、雙異丙吡胺、磷酸雙異丙吡胺、鹽酸艾司洛爾、乙酸 哌氟酰胺、富馬酸伊布利特、鹽酸利多卡因、鹽酸麥西雷丁、鹽酸 莫雷西。秦、苯妥英、苯妥英鈉、鹽酸普普卡因胺、鹽酸普羅帕酮、 鹽酸普奈洛爾、酸式硫酸奎尼定、葡糖酸奎尼定、聚半乳糖醛酸奎 尼定、硫酸奎尼定、梭達(dá)羅、鹽酸妥卡尼、鹽酸異搏定。至少一種 防心絞痛藥可為選自以下的至少一種苯磺酸氨氯地平、亞硝酸戊 酯、鹽酸千普地爾、鹽酸硫氮酮、二硝酸異山梨醇酯、 一硝酸異山 梨醇酯、萘情心安、鹽酸尼卡地平、硝苯吡啶、硝酸甘油、鹽酸心
得安、異搏定、鹽酸異搏定。至少一種抗高血壓藥可為選自以下的 至少一種鹽酸酯丁酰心安、苯磺酸阿姆羅赫、氨酰心安、鹽酸貝 那普利、鹽酸貝他洛爾、富馬酸比索洛爾、坎地沙坦酯、卡托普利、 鹽酸山羊豆苷、卡維地洛、可樂寧、鹽酸可樂寧、二氮嗪、鹽酸硫 氮酮、甲磺酸多沙唑"秦、依那普利拉、馬來酸依那普利、曱磺酸依 普羅沙坦、非洛地平、曱磺酸非諾多泮、福辛普利鈉、醋酸氯壓胍、 硫酸胍那決爾、鹽酸谷氨法新、鹽酸肼苯噠溱、厄貝沙坦、伊拉地 平、鹽酸柳胺節(jié)心定、賴諾普利、氯沙坦鉀、曱基多巴、鹽酸曱基 多巴鹽、琥珀酸美多心安、酒石酸美多心安、長(zhǎng)壓定、鹽酸莫昔普 利、萘羥心安、鹽酸尼卡地平、硝峭吡啶、乳鏈菌肽、硝普鹽鈉、
硫酸環(huán)戊丁心安、培哚普利、曱磺酸芬托拉明、心得靜、鹽酸哌唑 嗪、鹽酸普奈洛爾、鹽酸喹那普利、雷米普利、替米沙坦、鹽酸特 拉唑。秦、馬來酸噻嗎心安、群多普利、纈沙坦、鹽酸異搏定。至少一種抗血脂藥可為選有以下的至少一種阿托伐他汀釣、西立伐他
汀鈉、膽苯烯胺、鹽酸考來替泊、非諾貝特(孩t粉化)、氟伐他丁鈉、 吉非貝齊、洛伐他汀、煙酸、普伐他汀鈉、辛伐他汀。至少一種綜
合性CV藥物可為選自以下的至少一種阿昔單抗、前列地爾、鹽酸 阿布他明、西洛他唑、二硫酸氯吡格雷、雙嗜啶胺醇、埃替非巴肽、 鹽酸曱氧胺福林、己酮可可堿、鹽酸p塞溱氯匹定、鹽酸替羅非班。(參 見例如A^rw"g200/ Z)rwg/faw必ooA:中的215-336頁(yè))。
至少一種非麻醉性鎮(zhèn)痛藥或退熱劑可為選自以下的至少一種 醋氨酚、阿司匹林、三水楊酸膽堿鎂、二氟苯水楊酸、水楊酸酶。 至少一種非甾族抗炎藥可為選自以下的至少一種塞來昔布、環(huán)氟 拉喚鉀、環(huán)氟拉溱鈉、伊托多雷、苯氧苯丙酸鈣、氟聯(lián)苯丙酸、異 丁苯丙酸、茚曱新、三水合茚曱新鈉、酮丙酸、酮咯酸氨丁三醇、 萘丁美酮、甲氧萘丙酸、曱氧萘丙酸鈉、丙嗪、吡氧噻嗪、羅非昔 布、舒林酸。至少一種麻醉藥或阿片樣鎮(zhèn)痛藥可為選自以下的至少 一種鹽酸阿芬太尼、鹽酸丁丙諾啡、酒石酸布托啡諾、磷酸可待 因、硫酸可待因、枸櫞酸芬太尼、芬太尼透皮系統(tǒng)、芬太尼經(jīng)粘膜、 鹽酸二氬嗎啡酮、度冷丁、鹽酸美沙酮、鹽酸嗎啡、碌u酸嗎啡、酒 石酸嗎啡、鹽酸環(huán)丁甲羥氫嗎啡、鹽酸羥基二氫可待因酮、梳狀1,4-羥基二氫可待因酮、鹽酸氧嗎啡酮、鹽酸鎮(zhèn)痛新、鹽酸鎮(zhèn)痛新和鹽 酸納絡(luò)酮、乳酸鎮(zhèn)痛新、鹽酸丙氧吩、萘磺酸丙氧吩、鹽酸瑞芬太 尼、檸檬酸舒芬太尼、鹽酸曲馬多。至少一種鎮(zhèn)痛藥-催眠藥可為選 自以下的至少一種水合氯醛、三唑氮、鹽酸氟胺安定、戊巴比妥、 戊巴比妥鈉、苯巴比妥鈉、司可巴比妥鈉、雙香豆素、三唑苯二氮、 扎萊普隆、酒石酸唑吡坦。至少一種抗驚厥藥可為選自以下的至少 一種醋唑磺胺鈉、卡馬西平、氯硝安定、氯氮二鉀、安定、雙丙 戊酸鈉、乙琥胺、磷苯妥英鈉、加巴噴丁、拉莫三溱、硫酸鎂、苯 巴比妥、苯巴比妥鈉、苯妥英、苯妥英鈉、苯妥英鈉(稀釋)、普里米 酮、鹽酸替加賓、托吡酯、丙戊酸鈉、丙戊酸。至少一種抗抑郁藥可為選自以下的至少一種鹽酸阿米替林、雙羥萘酸阿米替林、氯 哌氧、鹽酸丁氨苯丙酮、氫溴酸西酞普蘭、鹽酸氯米帕明、鹽酸脫 曱丙咪嗪、鹽酸多慮平、鹽酸氟西汀、鹽酸丙咪。秦、雙羥萘酸丙咪 嗪、米氮平、鹽酸奈法唑酮、鹽酸去曱替林、鹽酸帕羅西汀、硫酸
苯乙肼、鹽酸舍曲林、硫酸反苯環(huán)丙胺、馬來酸三曱丙咪n秦、鹽酸
萬(wàn)拉法新。至少一種抗焦慮藥可為選自以下的至少一種阿普唑侖、 鹽酸丁螺旋酮、曱氨二氮、鹽酸甲氨二氮、氯氮二鉀、安定、鹽酸
多慮平、雙幾萘酸終溱、鹽酸羥溱、雙羥萘酸羥。秦、氯羥安定、曱 丙氨酯、鹽酸咪達(dá)唑侖、去曱羥安定。至少一種抗精神病藥可為選
自以下的至少一種鹽酸氯丙溱、氯氮平、癸酸氟非那溱、庚酸氟 非那溱、鹽酸氟非那嗪、氟哌啶醇、癸酸氟哌啶醇、乳酸氟哌啶醇、 鹽酸克塞平、琥珀酸克塞平、苯磺酸曱砜噠嗪、鹽酸莫林酮、奧氮 平、奮乃靜、哌迷清、普魯氯嗪、富馬酸喹硫平、利培酮、鹽酸曱 硫噠溱、氨砜噻噸、鹽酸氨砜噻噸、鹽酸三氟啦。秦。至少一種中樞 神經(jīng)系統(tǒng)刺激劑可為選自以下的至少一種硫酸安非他明、咖啡堿、 硫酸右旋安非他明、鹽酸嗎吡啉酮、鹽酸脫氧麻黃堿、鹽酸利他林、 莫達(dá)非尼、佩默林、鹽酸苯丁胺。至少一種抗帕金森病藥可為選自 以下的至少一種鹽酸金剛胺、曱磺酸苯托品、鹽酸比哌立登、乳 酸比哌立登、曱磺酸溴麥角環(huán)肽、卡比多巴-左旋多巴、恩他卡朋、 左旋多巴、曱磺酸培高利特、二鹽酸普拉克索、鹽酸羅匹尼羅、鹽 酸司來吉蘭、托卡朋、鹽酸三己芬迪。至少一種其它中樞神經(jīng)系統(tǒng) 藥物可為選自以下的至少一種鹽酸丁氨苯丙酮、鹽酸多奈哌齊、 達(dá)哌啶醇、馬來酸氟伏沙明、碳酸鋰、檸檬酸鋰、鹽酸納雷曲坦、 曱基丙烯酸煙堿、煙堿透皮系統(tǒng)、異丙酚、苯曱酸利扎曲普坦、鹽 酸西布曲明、琥珀酸舒馬普坦、鹽酸塔克林、佐米曲普坦。(參見例 如7Vwra,"g Z)rwg Z/朋必ooA:中的337-530頁(yè))。
至少 一種膽堿能藥(例如擬副交感神經(jīng)藥)可為選自以下的至少一 種氯化氨曱酰曱膽堿、氯化膝西隆、溴化新斯的明、甲基硫酸新斯的明、水楊酸毒扁豆堿、溴化3-二曱氨基甲酰氧基-l-甲基吡咬。
至少一種抗膽減能藥可為選自以下的至少一種硫酸阿托品、鹽酸
雙環(huán)胺、胃長(zhǎng)寧、莨菪堿、硫酸萊菪堿、溴化丙胺太林、東莨菪堿、 丁基溴化東茛菪^ 咸、氫溴化東茛菪^s威。至少一種腎上腺素能藥(擬交 感神經(jīng)藥)可為選自以下的至少一種鹽酸多巴酚丁胺、鹽酸多巴胺、 酸式酒石酸間羥胺、酸式酒石酸去甲腎上腺素、鹽酸苯腎上腺素、 鹽酸假麻黃堿、硫酸假麻黃堿。至少一種腎上腺素能阻斷劑(抗交感 神經(jīng)藥)可為選自以下的至少一種曱磺酸雙氫麥角胺、酒石酸麥角 胺、馬來酸二曱麥角新堿、鹽酸普奈洛爾。至少一種骨骼肌松弛劑 可為選自以下的至少一種氯苯氮丁酸、肌安寧、氯羥苯唑、鹽酸 環(huán)苯扎林、硝苯呋海因鈉、氨曱酸愈甘醚酣、鹽酸替扎尼定。至少 一種神經(jīng)肌肉阻斷劑可為選自以下的至少一種苯磺酸阿曲庫(kù)銨、 苯磺酸順阿曲庫(kù)銨、多庫(kù)氯銨、米庫(kù)氯銨、泮庫(kù)溴銨、哌庫(kù)溴銨、 雷庫(kù)溴銨、羅庫(kù)溴銨、氯琥珀膽堿、氯化筒箭毒堿、維庫(kù)溴銨。(參 見例如A^7"g200/ Dn/g7/a"必ooA:中的531-84頁(yè))。
至少一種抗組胺劑可為選自以下的至少一種馬來酸溴苯吡胺、 鹽酸西替利嗪、馬來酸氯苯吡胺、富馬酸鐵線蓮?fù)?、鹽酸二苯環(huán)庚 啶、鹽酸苯海拉明、鹽酸非索非那定、氯雷他定、鹽酸異丙嗪、茶 異丙。秦、鹽酸丙吡咯啶。至少一種支氣管擴(kuò)張藥可為選自以下的至 少一種舒喘寧、硫酸舒喘寧、氨茶堿、硫酸阿托品、硫酸麻黃堿、 腎上腺素、酒石酸氫腎上腺素、鹽酸腎上腺素、異丙托溴銨、異丙 基腎上腺素、鹽酸異丙基腎上腺素、硫酸異丙基腎上腺素、鹽酸左 旋沙丁胺醇、硫酸異丙喘寧、膽茶^5咸、醋酸吡布特羅、羥萘甲酸沙 美特羅、硫酸特普他林、茶堿。至少一種祛痰劑或鎮(zhèn)咳藥可為選自 以下的至少一種退咳露、磷酸可待因、硫酸可待因、氫溴酸右美 沙芬、鹽酸苯海拉明、愈創(chuàng)木酚甘油醚、鹽酸二氬嗎啡酮。至少一 種其它呼吸藥物可為選自以下的至少一種乙酸半胱氨酸、二丙酸 氯地米松、貝雷克坦、布地奈德、小牛表面蛋白(calfactant)、色甘酸鈉、鏈道酶Ot、前列腺環(huán)素鈉、9-去氟膚輕松、丙酸氟替卡松、孟魯 司特鈉、奈多羅米鈉、帕利珠單抗、丙炎松、扎魯司特、齊留通。(參
見例如M/ra,'"g Z>wg//a"^ooA:中的585-642頁(yè))。
至少一種抗酸劑、吸附劑或抗氣脹藥可為選自以下的至少一種 碳酸鋁、氬氧化鋁、碳酸鈣、氫氧化鎂鋁、氮氧化鎂、氧化鎂、二 曱基硅油、碳酸氫鈉。至少一種消化酶或膽結(jié)石增溶劑可為選自以 下的至少一種胰酶、胰脂肪酶、脫氧熊膽酸。至少一種止瀉藥可 為選自以下的至少一種硅鎂土、堿式水楊酸鉍、聚卡波非鈣、鹽 酸氰苯哌酯或硫酸阿托品、洛哌丁胺、醋酸奧曲肽、阿片酊、阿片 酊(含樟腦)。至少一種緩瀉藥可為選自以下的至少一種比沙可啶、 鈣聚丙烯酸樹脂、鼠李、鼠李芳香流浸膏、鼠李流浸膏、蓖麻油、 琥珀辛酯磺酸輛、琥珀辛酯磺酸鈉、甘油、乳果糖、檸檬酸鎂、氫 氧化鎂、硫酸鎂、曱基纖維素、礦物油、聚乙二醇或電解質(zhì)溶液、 歐車前、番瀉葉、磷酸鈉。至少一種止吐劑可為選自以下的至少一 種鹽酸氯丙嗪、萘苯海明、多拉司瓊曱磺酸鹽、屈大麻酚、鹽酸 格雷西隆、鹽酸氛苯千嗪、曱氧氯普胺鹽酸、鹽酸奧丹西隆、奮乃 靜、甲哌氯丙嗪、乙二磺酸甲哌氯丙嗪、馬來酸曱哌氯丙嗪、鹽酸 異丙。秦、東K菪堿、馬來酸硫乙哌丙嗪、鹽酸曲美芐胺。至少一種 抗?jié)兯幙蔀檫x自以下的至少一種曱腈咪胍、鹽酸曱腈咪胍、法 莫替丁、達(dá)克普隆、迷索前列醇、尼扎替丁、奧美拉唑、雷貝拉唑 鈉、雷尼替丁枸櫞酸鉍、鹽酸雷尼替丁 、硫糖鋁。(參見例如M/m'"g 2(^7 Drag Z/a"必ooA:的643-95頁(yè))。
至少一種皮質(zhì)類固醇可為選自以下的至少一種倍他米松、醋 酸倍他米松或倍他米松磷酸鈉、倍他米松磷酸鈉、醋酸可的松、地 塞米松、醋酸氟美松、地塞米+^疇酸鈉、醋酸氟氫可的*>、氬化可 的松、醋酸氬化可的松、氮化可的松環(huán)戊丙酸酯、氬可松磷酯鈉、 氫化可的松琥珀酸鈉、曱基強(qiáng)的松龍、醋酸曱基強(qiáng)的松龍、曱氬潑 尼松龍琥珀酸鈉、氬化潑尼松、醋酸氫化潑尼爭(zhēng)>、氮化潑尼松磷酸鈉、強(qiáng)的松龍叔丁乙酯、強(qiáng)的松、氟羥泊尼松龍、曲安奈德、雙醋 酸去炎松。至少一種雄激素或者促蛋白合成類固醇可為選自以下的
至少一種達(dá)那唑、氟羥曱睪酮、曱睪酮、癸酸諾龍、苯丙酸諾龍、 睪酮、環(huán)戊丙酸睪酮、庚酸睪酮、丙酸睪酮、睪酮透皮體系。至少 一種雌激素或孕酮可為選自以下的至少一種酯化雌激素、雌二醇、 環(huán)戊丙酸雌二醇、雌二醇/醋炔諾酮透皮體系、戊酸雌二醇、雌激素(綴 合物)、派噪站,酮、乙炔雌二醇、乙炔雌二醇和炔雌醇、乙炔雌二醇 和雙醋炔諾醇、乙炔雌二醇和炔雌醇、乙炔雌二醇和雙醋炔諾醇、 乙炔雌二醇和左旋曱炔諾酮、乙炔雌二醇和炔諾酮、乙炔雌二醉和 醋炔諾酮、乙炔雌二醇和炔肟酯、乙炔雌二醇和曱基炔諾酮、乙炔 雌二醇和炔諾酮和醋酸鹽和富馬酸鐵、左旋甲炔諾酮、醋酸曱羥孕 酮、曱氫龍和諾炔酮、炔諾酮、醋酸炔諾酮、曱基炔諾酮、黃體酮。 至少一種促性腺激素可為選自以下的至少一種乙酸加尼瑞克、醋 酸高納瑞林、乙酸希司曲林、絕經(jīng)促性素。至少一種抗糖尿病藥或 胰高血糖素可為選自以下的至少一種阿卡波糖、氯磺丙脲、谷胱 甘肽、格列曱嗪、胰高血糖素、優(yōu)降糖、胰島素、鹽酸曱福明二甲 雙胍、米格列醇、演算吡咯列酮、瑞格列奈、馬來酸羅格列酮、曲 格列酮中。至少一種甲狀腺激素可為選自以下的至少一種左旋曱 狀腺素鈉、碘甲腺氨酸鈉、復(fù)方曱狀腺素、干曱狀腺粉。至少一種 甲狀腺激素拮抗劑可為選自以下的至少一種曱疏咪唑、坱化鉀、 碘化鉀(飽和溶液)、丙硫尿嗜啶、放射性硪(碘化鈉1311)、濃碘溶液。 至少一種垂體激素可為選自以下的至少一種促腎上腺皮質(zhì)激素、a 1-24促腎上腺皮質(zhì)激素、desmophressin acetate、乙酸亮脯利特、長(zhǎng) 效促腎上腺皮質(zhì)激素、人蛋氨生長(zhǎng)素、生長(zhǎng)激素、加壓素。至少一 種類曱狀旁腺藥物可為選自以下的至少一種骨化二醉、降鈣素(人)、 降鈣素(鮭魚)、鈣三醇、二氫速甾醇、依替膦酸二鈉。(參見例如A^"/"g DragHa"必ooA:中的696-796頁(yè))。
至少一種利尿劑可為選自以下的至少一種乙酰哇胺、乙酰p坐胺鈉、鹽酸氨氯吡脒、丁苯氧酸、氯噻酮、利尿酸鈉、利尿酸、利 尿磺胺、雙氰氯噻嗪、茚磺笨酰胺、甘露醇、美拉托宗、安體舒通、 托拉塞米、三氨苯蝶啶、脲。至少一種電解質(zhì)或置換溶液可為選自
以下的至少一種乙酸鈣、碳酸鈣、氯化鈣、檸檬酸鉤、葡乳醛酸
鈣、葡庚糖酸鈣、葡萄糖酸鈣、乳酸鈣、磷酸鈣(二元)、磷酸鈣(三
元)、葡聚糖(高分子量)、葡聚糖(低分子量)、羥乙基淀粉、氯化鎂、
硫酸鎂、乙酸鉀、碳酸氫鉀、氯化鉀、葡萄糖酸鉀、Ringer氏注射 液、Ringers氏注射液(乳酸化)、氯化鈉。至少一種酸化劑或4i化劑 可為選自以下的至少一種碳酸氫鈉、乳酸鈉、氨基丁三醇。(參見 例如iVwra/"g 200/ Dn/g/Z""必ooA:中的797-833頁(yè))。
至少一種補(bǔ)血藥可為選自以下的至少一種富馬酸鐵、葡萄糖 酸鐵、硫酸亞鐵、硫酸亞鐵(干燥)、右旋糖酐鐵、l山梨醇鐵、多糖-鐵復(fù)合物、萄糖酸鐵鈉復(fù)合物。至少一種抗凝血?jiǎng)┛蔀檫x自以下的 至少一種阿地肝素鈉、達(dá)肝素鈉、達(dá)那肝素鈉、依諾肝素鈉、肝 素鉤、肝素鈉、千丙酮香豆素鈉。至少一種血液衍生物可為選自以 下的至少一種白蛋白5%、白蛋白25%、抗血友病因子、抗抑制劑 促凝劑復(fù)合物、抗凝血酶III (人)、IX因子(人)、IX因子復(fù)合物、血 漿蛋白組分。至少一種溶血檢藥可為選自以下的至少一種阿替普 酶、阿尼鏈酶、瑞替普酶(重組)、鏈激酶、尿激酶。(參見例如A^ra/"g
i>wg//a"^ooA:中的834-66頁(yè))。
至少一種烷基化藥物可為選自以下的至少一種白消安、卡鉑、 卡氮芥、苯丁酸氮芥、順氯氨鉑、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、環(huán)己亞 硝脲、鹽酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、鹽酸苯丙氨酸氮芥、鏈脲霉素、 替莫唑胺、辟^替派。至少一種抗z氏謝物可為選自以下的至少一種 卡培他濱、克拉屈濱、阿糖胞苷、氟苷、磷酸氟達(dá)拉濱、氟尿嘧啶、 羥基脲、巰基噤呤、氨曱蝶呤、氨曱蝶呤鈉、硫鳥。票呤。至少一種 抗生素抗腫瘤藥物可為選自以下的至少一種硫酸博萊霉素、放線 菌素D、檸稼酸柔紅霉素脂質(zhì)體、鹽酸柔紅霉素、鹽酸阿霉素、鹽酸阿霉素脂質(zhì)體、鹽酸表柔比星、鹽酸伊達(dá)比星、絲裂霉素、戊糖 苷、普卡霉素、戊柔比星。至少一種可改變激素平衡的抗胂瘤藥物 可為選自以下的至少一種阿那曲唑、比卡魯胺、雌二醇氮芥磷酸 鈉、依西美坦、氟他胺、乙酸戈舍瑞林、來曲唑、乙酸亮脯利特、 醋酸曱地孕酮、尼魯米特、檸檬酸三苯氧胺、睪內(nèi)脂、枸櫞酸托瑞
米芬。至少一種其它抗腫瘤藥物可為選自以下的至少一種天冬酰 胺酶、卡介苗(BCG)(活體膀胱內(nèi))、氮烯咪胺、多烯紫衫醇、鬼臼乙 叉苷、磷酸鬼臼乙叉苷、鹽酸吉西他濱、鹽酸伊立替康、鄰氯苯對(duì) 氯苯二氯乙烷、鹽酸米托蒽醌、紫衫醇、培加帕酶、卟吩姆鈉、鹽 酸曱基下肼、利妥昔單抗、替尼泊苷、鹽酸拓樸替康、曲妥珠單抗、 全反維生素A酸、硫酸長(zhǎng)春花堿、硫酸長(zhǎng)春花新堿、酒石酸長(zhǎng)春瑞 賓。(參見例如M/rw'"g Z)rwgZ/a"必ooA:中的867-963頁(yè))。
上述至少一種免疫抑制劑可為選自以下的至少一種硫唑嘌呤、 巴利昔單抗、環(huán)孢素、達(dá)克珠單抗、淋巴細(xì)胞免疫球蛋白、莫羅單 抗-CD3、霉酚酸嗎琳乙酯、鹽酸霉酚酸嗎琳乙酯、西羅莫司、他克 莫司。上述至少一種疫苗或類毒素可為選自以下的至少一種BCG 疫苗、霍亂疫苗、白喉和破傷風(fēng)類毒素(吸附型)、白喉和^^傷風(fēng)類毒 素和非細(xì)胞百曰咳疫苗吸附型、白喉和破傷風(fēng)類毒素和全細(xì)胞百曰 咳疫苗、b型嗜血桿菌結(jié)合疫苗、曱型肝炎疫苗(滅活)、乙型肝炎疫 苗(重組)、流感病毒疫苗1999-2000三聯(lián)型A&B (純化的表面抗原)、 流感病毒疫苗1999-2000三聯(lián)型A&B (亞病毒體或純化的亞病毒體)、 流感病毒疫苗1999_2000三聯(lián)型A&B (全病毒體)、日本腦炎病毒疫 苗(滅活)、Lyme氏疏螺旋體病疫苗(重組OspA)、麻滲和腮腺炎和風(fēng) 瘆病毒疫苗(活疫苗)、麻滲和腮腺炎和風(fēng)滲病毒疫苗(減毒活疫苗)、 麻療病毒疫苗(減毒活疫苗)、腦膜炎雙球菌多糖菌苗、腮腺炎病毒疫 苗(活疫苗)、鼠疫疫苗、肺炎球菌疫苗(多價(jià)疫苗)、脊髓灰質(zhì)炎病毒 疫苗疫苗(滅活)、脊髓灰質(zhì)炎病毒疫苗(口服三聯(lián)活疫苗)、狂犬病疫 苗(吸附型)、狂犬病疫苗(人類二倍體細(xì)胞)、風(fēng)滲和腮膝炎病毒疫苗(活疫苗)、風(fēng)滲病毒疫苗(減毒活疫苗)、破傷風(fēng)類毒素(吸附型)、破傷風(fēng) 類毒素(液體)、傷寒疫苗(口服)、傷寒疫苗(腸胃外給予)、傷寒Vi多 糖疫苗、水痘病毒疫苗、黃熱病疫苗。至少一種抗毒素或抗蛇毒素
可為選自以下的至少一種黑寡婦蜘蛛抗蛇毒素、響尾蛇科抗蛇毒 素(多價(jià)的)、白喉抗毒素(馬)、金黃珊瑚蛇毒血清。至少一種免疫血 清可為選自以下的至少一種巨細(xì)胞病毒免疫球蛋白(靜脈內(nèi))、乙型 肝炎免疫球蛋白(人)、免疫球蛋白肌內(nèi)、免疫球蛋白靜脈內(nèi)、狂犬病 免疫球蛋白(人)、呼吸道合胞體病毒免疫球蛋白靜脈內(nèi)(人)、Rh"D) 免疫球蛋白(人)、Rho(D)免疫球蛋白靜脈內(nèi)(人)、破傷風(fēng)免疫球蛋白 (人)、水痘-帶狀皰疹免疫球蛋白。至少一種生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物可為選 自以下的至少一種阿地流津、依泊艾汀a、非拉司汀、注射用乙酸 格拉替雷、復(fù)合干擾素-1、干擾素a-2a (重組)、干擾素a-2b (重組)、 干擾素P-la、干擾素(3-lb (重組)、干擾素y-lb、鹽酸左旋四咪唑、重 組人白介素11、沙格司亭。(參見例如M/ra"g T/朋必ooA: 中的964-1040頁(yè))。
至少一種眼科抗感染藥可選自以下的至少一種桿菌肽、氯霉 素、鹽酸環(huán)丙沙星、紅霉素、硫酸艮他霉素、吡啶羧酶0.3%、硫酸 多粘菌素B、磺胺醋酸鈉10%、磺胺醋酸鈉15%、磺胺醋酸鈉30%、 托普霉素、阿糖腺苷。上述至少一種眼科抗炎癥藥可為選自以下的 至少一種地塞米松、地塞米松磷酸鈉、二氯苯胺苯乙酸鈉0.1%、 氯曱龍、氟比洛芬鈉、酮咯酸氨丁三醇、醋酸強(qiáng)的松龍(懸液)、強(qiáng)的 松龍磷酸鈉(溶液)。上述至少 一種縮瞳劑可為選自以下的至少 一種: 氯乙酰膽堿、氯甲酰膽堿(目艮內(nèi))、氨曱酰膽堿(局部)、依可琪酯、毛 果蕓香堿、鹽酸毛果蕓香堿、硝酸毛果蕓香堿。至少一種擴(kuò)瞳劑可 為選自以下的至少一種硫酸阿托品、鹽酸環(huán)戊通、鹽酸腎上腺素、 硼酸腎上腺素、氫澳酸后馬托品、鹽酸苯腎上腺素、氫溴酸東茛菪 堿、托品酰胺。至少一種眼血管收縮劑可為選自以下的至少一種 鹽酸萘唑啉、鹽酸幾間唑啉、鹽酸四氬萘唑啉。至少一種其它眼藥可為選自以下的至少一種鹽酸阿可樂定、鹽酸倍他洛爾、酒石酸
溴莫尼定、鹽酸山羊豆苷、鹽酸地匹福林、鹽酸杜塞酰胺、富馬酸 依美斯汀、熒光素鈉、延胡索酸甲哌噻庚酮、拉坦前列素、鹽酸左 布諾洛爾、鹽酸美替卜拉格、氯化鈉(高滲)、馬來酸p塞嗎心安。至少
一種耳用藥可為選自以下的至少一種硼酸、過氧化氬脲、氯霉素、
油酸三乙醇胺多肽-冷凝液。至少一種鼻用藥可為選自以下的至少一
種二丙酸氯地米松、布地奈德、硫酸麻黃堿、鹽酸腎上腺素、9-去
氟膚輕松、丙酸氟替卡松、鹽酸萘唑啉、鹽酸羥間唑啉、鹽酸苯腎
上腺素、鹽酸四氫萘唑啉、丙炎松、鹽酸丁千唑啉。(參見例如M/raz'"g
20W Z)rag/Za"必ooA:中的1041-97頁(yè))。
至少一種局部抗感染藥可為選自以下的至少一種無環(huán)鳥苷、
兩性霉素B、壬二酸乳脂、桿菌肽、硝酸布康唑、磷酸氯林肯霉素、
克霉唑、硝酸益康唑、紅霉素、硫酸艮他霉素、酮康唑、醋酸高磺
胺、曱硝基羥乙唑(局部)、硝酸霉抗唑、莫匹羅星、鹽酸萘替芬、硫
酸新霉素、硝基糖腙、制霉菌素、磺胺嘧啶銀、鹽酸特比奈酚、特
康唑、鹽酸四環(huán)素、瘞康唑、托萘酯。至少一種抗齊螨劑或抗虱劑
可為選自以下的至少一種克羅他米通、林丹、千氯菊脂、除蟲菊
酯。至少一種局部皮質(zhì)類固醇可為選自以下的至少一種雙丙酸倍
他米松、戊酸倍他米松、丙酸氯氟美松、丙縮輕強(qiáng)龍、去氧米松、
地塞米松、地塞米松磷酸鈉、雙醋二氟松、丙酮膚輕松、氟新諾龍
酯、氟氫縮松、丙酸氟替卡松、氯氟松、氫化可的松、醋酸氫化可
的松、丁酸氫化可的松、戊酸氬化可的松、糠酸莫美他松、丙炎松。
(參見例如iVwm'"g200/ Dn^/f朋必ooA:中的1098-1136頁(yè))。
上述至少一種維生素或礦物質(zhì)可為選自以下的至少一種維生
素A、復(fù)合維生素B、氰鈷胺素、葉酸、氰鈷胺素、曱酰四氫葉酸4丐、 煙酸、煙酰胺、鹽酸吡噴醇、核黃素、鹽酸辟u胺素、維生素C、維生 素D、膽鈣化醇、麥角鈣化醇、維生素D類似物、度骨化醇、帕利 骨化醇、維生素E、維生素K類似物、維生素K1、氟化鈉、氟化鈉(局部)、痕量元素、鉻、銅、碘、錳、硒、鋅。至少一種熱質(zhì)可為選自
以下的至少一種氨基酸浸劑(晶狀)、右旋糖中的氨基酸浸劑、含電 解質(zhì)的氨基酸浸劑、右旋糖中含電解質(zhì)的氨基酸浸劑、針對(duì)肝衰竭 的氨基酸浸劑、針對(duì)高代謝壓力的氨基酸浸劑、針對(duì)腎衰竭的氨基 酸浸劑、右旋糖、脂肪乳濁液、中鏈脂肪酸甘油三酯。(參見例如7Vwra'"g 2007 Z)rwg/7a"必oc^中的1137-63頁(yè))。
本發(fā)明還提供至少一種任何合適的和/或有效量的組合物或藥物 組合物，該組合物或藥物組合物包含至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬 體或特定部分或變體，任選地還包含有效量的至少 一種其它化合物、 蛋白或組合物，所述其它化合物、蛋白或組合物選自以下的至少一 種TNF拮抗劑(例如但不限于TNF化學(xué)或蛋白質(zhì)拮抗劑、TNF單 克隆或多克隆抗體或片段、可溶性TNF受體(例如p55、 p70或p85) 或片段、其融合多肽，或小分子TNF拮抗劑，例如TNF結(jié)合蛋白I 或II (TBP-I或TBP-II)、奈瑞莫單抗、英利昔單抗、依那西普、CDP-571、 CDP-870、阿非莫單抗、來那西普等)、抗風(fēng)濕藥(例如氨曱蝶呤、 醋硫葡金、金硫代葡萄糖、硝基咪唑硫嘌呤、依那西普、硫代蘋果 酸金鈉、硫酸羥基氯喹、來氟米特、柳氮磺胺吡啶)、肌肉松弛劑、 麻醉藥、非類固醇抗炎藥(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部 麻醉劑、神經(jīng)肌肉阻斷劑、抗菌劑(例如氨基糖苷類、抗真菌劑、抗 寄生蟲藥、抗病毒藥物、氨基曱酰、頭孢菌素、氟喹諾酮、大環(huán)內(nèi) 酯、青霉素、磺胺、四環(huán)素、其它抗菌劑)、抗銀屑病藥、皮質(zhì)類固 醇、促蛋白合成類固醉、糖尿病相關(guān)藥物、礦物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、曱 狀腺藥物、維生素、鈣相關(guān)激素、止瀉藥、鎮(zhèn)咳藥、止吐劑、抗?jié)?瘍藥、緩瀉劑、抗凝血?jiǎng)⒋偌t細(xì)胞生成素(例如epoetin a)、非拉司 汀(例如G陽(yáng)CSF、 Neupogen)、沙格司亭(GM-CSF、 Leukine)、免疫、 免疫球蛋白、免疫抑制劑(例如巴利昔單抗、環(huán)孢素、達(dá)克珠單抗)、 生長(zhǎng)激素、激素替代藥物、雌激素受體調(diào)節(jié)物、擴(kuò)瞳劑、睫狀肌麻 痹藥、烷基化藥物、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、放射性藥物、抗抑郁藥、抗躁狂劑、抗精神病藥、抗焦慮藥、催眠藥、擬交感神經(jīng) 藥、興奮劑、多奈哌齊、塔克林、哮喘藥、(3激動(dòng)劑、吸入型類固醇、 白細(xì)胞三烯抑制劑、曱基黃。票呤、色甘酸、腎上腺素或類似物、鏈
球菌DNA酶a (Pulmozyme)、細(xì)胞因子或細(xì)胞因子拮抗劑。所述細(xì)
胞因子的非限制性實(shí)例包括但不限于IL-1至IL-23中的任一種。合
適劑量是本領(lǐng)域熟知的。參見例如Wells等編輯，Pharmacotherapy
Handbook,第2版，Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR
Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000)，上述參考文獻(xiàn)每個(gè)均通
過引用整體結(jié)合到本文中。
這種組合物還可包括與至少一種本發(fā)明抗體或多肽締合、結(jié)合、 共同配制或共同給予的毒素分子。該毒素任選地可起選擇性殺死病 理細(xì)胞或組織的作用。該病理細(xì)胞可為癌細(xì)胞或其它細(xì)胞。這種毒 素可為但不僅限于純化或重組毒素或含毒素的至少一個(gè)功能性細(xì)胞 毒素結(jié)構(gòu)域的毒素片段，所述毒素例如選自以下的至少一種蓖麻 毒蛋白、白喉毒素、蛇毒毒素或細(xì)菌毒素。術(shù)語(yǔ)毒素還包括由任何 天然、突變或重組細(xì)菌或病毒所產(chǎn)生的內(nèi)毒素和外毒素，所迷任何 天然、突變或重組細(xì)菌或病毒可在人類和其它哺乳動(dòng)物中引起包括 中毒性休克在內(nèi)的任何病理狀況，并可導(dǎo)致死亡。這種毒素可包括 但不限于產(chǎn)腸毒素的大腸桿菌熱不穩(wěn)定腸毒素(LT)、熱穩(wěn)定腸毒素 (ST)、志賀菌細(xì)胞毒素、氣單胞菌腸毒素、中毒性休克綜合征毒素-l (TSST-1)、葡萄球菌腸毒素A(SEA)、 B (SEB)或C (SEC)、鏈球菌腸 毒素等。這種細(xì)菌包括但不限于以下的菌抹產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC) 種、腸出血大腸桿菌(例如血清型0157:H7菌抹)、葡萄球菌種(例如 金黃色葡萄球菌、釀膿葡萄球菌)、志賀菌種(例如志賀氏痢疾桿菌、 福氏志賀桿菌、波伊德氏志賀氏菌和宋內(nèi)氏志賀氏桿菌)、沙門氏菌 種(例如傷寒桿菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌)、梭狀芽胞桿菌 種(例如產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌、艱難桿菌、肉毒桿菌)、彎曲桿菌種(例如空腸彎曲桿菌、胚胎彎曲桿菌)、螺桿菌種(例如幽門螺桿菌)、 氣單胞菌種(例如溫和氣單胞菌、嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌)、類 志賀鄰單胞菌、小腸結(jié)腸炎椰爾森菌、弧菌種(例如霍亂弧菌、副溶
血性弧菌)、克雷白桿菌種、銅綠假單胞菌和鏈球菌。參見例如Stein 編輯，INTERNAL MEDICINE,笫3版，1-13頁(yè)，Little, Brown and Co , Boston, (1990), Evans 等編輯，Bacterial Infections of Humans Epidemiology and Control,第2版，239-254頁(yè)，Plenum Medical Book Co , New York (1991), Mandell等，Principles and Practice of Infectious Diseases,笫3版，Churchill Livingstone, New York (1990)， Berkow等 編輯，7T2e A/en:A: A^f肌"/,第16版，Merck and Co, Rahway, N J, 1992; Wood等，F(xiàn)EMS Microbiology Immunology, 76.121-134 (1991), Marrack 等，Science, 248 705^11 (l"0)，上述參考文獻(xiàn)的內(nèi)容通過引用整體 結(jié)合到本文中。
本發(fā)明的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體組合物還可 含有至少一種任何的合適助劑，例如但不限于稀釋劑、粘合劑、穩(wěn) 定劑、緩沖劑、鹽、親脂溶劑、防腐劑、佐劑等。優(yōu)選藥物可接受 助劑。這些無菌溶液的非限制性實(shí)例及制備方法均是本領(lǐng)域熟知的， 例^口^f旦不卩艮于Gennaro編4專,i em/wgtow k 尸/wrmacew"ca/ 5We"ces,笫 18版，Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990。如本領(lǐng)域熟知的或本 文所描述的，可以常規(guī)方法選擇出與GLP-1激動(dòng)劑或模擬體組合物 的給予方式、溶解度和/或穩(wěn)定性相容的藥物可接受載體。
用于本發(fā)明組合物的藥物賦形劑和添加劑包括但不限于蛋白 質(zhì)、肽、氨基酸、脂質(zhì)和糖類(例如糖、包括單糖、二糖、三糖、四 糖和寡糖；衍生糖，例如醛醇、糖醛酸、酯化糖等；以及多糖或糖 聚合物)，它們可單獨(dú)或組合存在，單獨(dú)或組合地占1-99.99%的重量 或體積。代表性的蛋白質(zhì)賦形劑包括血清白蛋白，例如人血清白蛋 白(HSA)、重組人白蛋白(rHA)、明膠、酪蛋白等。也可發(fā)揮緩沖作 用的代表性氨基酸/GLP-l激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體組分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜堿、組氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、 半胱氨酸、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、苯丙氨 酸、天冬酰苯丙氨酸曱酯等。 一種優(yōu)選的氨基酸是甘氨酸。
適用于本發(fā)明的糖類賦形劑包括例如單糖，例如果糖、麥芽糖、
半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖等；二糖，例如乳糖、蔗糖、 海藻糖、纖維二糖等；多糖，例如棉子糖、松三糖、麥芽糖糊精、 葡聚糖、淀粉等；和糖醇，例如甘露糖醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳 糖醇、木糖醇、山梨糖醇(葡糖醇)、肌醇等。適用于本發(fā)明的優(yōu)選糖 類賦形劑為甘露糖醇、海藻糖和棉子糖。
GLP-1激動(dòng)劑或模擬體組合物也可包括緩沖劑或pH調(diào)節(jié)劑，典 型的緩沖劑是從有機(jī)酸或堿制得的鹽。代表性緩沖劑包括有機(jī)酸鹽， 例如檸檬酸、抗壞血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸或 苯二曱酸的鹽；Tris、鹽酸三羥曱基曱烷或磷酸鹽緩沖劑。適用于本 發(fā)明組合物的優(yōu)選緩沖劑為有機(jī)酸鹽，例如檸檬酸鹽。
另外，本發(fā)明的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體組合 物可包括聚合的賦形劑/添加劑，例如聚乙烯吡咯烷酮、ficolls (—種 聚糖)、葡萄糖結(jié)合劑(例如環(huán)糊精，例如2-羥丙基-p-環(huán)糊精)、聚乙 二醇、調(diào)味劑、抗菌劑、甜味劑、抗氧化劑、抗靜電劑、表面活性 劑(例如聚山梨醇酯，例如"TWEEN20"和"TWEEN80")、脂質(zhì)(例 如磷脂、脂肪酸)、類固醇(例如膽固醇)和螯合劑(例如EDTA)。
適用于本發(fā)明GLP-1激動(dòng)劑或模擬體組合物的這些及其它已知 藥物賦形劑和/或添加劑是本領(lǐng)域已知的，例如在"Remington The Science & Practice of Pharmacy"第 19版,Williams & Williams, (1995),和在"Physician's Desk Reference"笫52版,Medical Economics, Montvale， NJ (1"8)中所列出的藥物賦形劑和/或添加劑，上述參考文 獻(xiàn)的公開內(nèi)容通過引用整體結(jié)合到本文中。優(yōu)選的載體或賦形劑材 料為糖類(例如糖和糖醇)和緩沖劑(例如檸檬酸鹽)或聚合劑。
制劑。如上所述，本發(fā)明提供了穩(wěn)定制劑，該制劑優(yōu)選可包含含鹽水或選定鹽的合適緩沖劑，以及任選的含有防腐劑的防腐溶液 和制劑和適合藥用或獸用的多用途防腐制劑，并包含在藥物可接受
制劑中的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體。防腐 制劑含有至少一種已知的防腐劑或任選地選自以下的至少一種苯 酚、間-曱酚、對(duì)-曱酚、鄰-曱酚、氯甲酚、苯曱醇、亞硝酸苯汞、 苯氧乙醇、甲醛、氯丁醇、氯化鎂(例如六水合物)、對(duì)羥基苯曱酸烷 基酯(曱酯、乙酯、丙酯、丁酯等)、苯扎氯銨、氯化千乙氧銨、脫氫 乙酸鈉和硫柳汞，或它們?cè)谒韵♂寗┲械幕旌衔铩？蓳?jù)本領(lǐng)域所 知使用任何合適的濃度或混合物，例如0.001-5%,或其中的任何范 圍或數(shù)值，例如但不限于0.001、 0.003、 0.005、 0.009、 0.01、 0.02、 0.03、 0.05、 0.09、 0.1、 0.2、 0.3、 0.4、 0.5、 0.6、 0.7、 0.8、 0.9、 1.0、 1.1、 1.2、 1.3、 1.4、 1.5、 1.6、 1.7、 1.8、 1.9、 2.0、 2.1、 2.2、 2.3、 2.4、 2.5、 2.6、 2.7、 2.8、 2.9、 3.0、 3.1、 3.2、 3.3、 3.4、 3.5、 3.6、 3.7、 3.8、 3.9、 4.0、 4.3、 4.5、 4.6、 4.7、 4.8、 4.9、 5.0或其中的任何范圍或數(shù) 值。非限制性實(shí)例包括無防腐劑、0.1-2%間曱酚(例如0.2、 0.3、 0.4、 0.5、 0.9、 1.0%)、 0.1-3%苯曱醇(例如0.5、 0.9、 1.1、 1.5、 1.9、 2.0、 2.5%)、 0.001-0.5%硫柳汞(例如0.005、 0.01%)、 0.001-2.0%苯酚(例如 0.05、 0.25、 0.28、 0.5、 0.9、 1.0%)、 0.0005-1.0%對(duì)羥基苯甲酸烷基 酯(例如0.00075、 0.0009、 0.001、 0.002、 0.005、 0.0075、 0.009、 0.01、 0.02、 0.05、 0.075、 0.09、 0.1、 0.2、 0.3、 0.5、 0.75、 0.9、 1.0%)等。
如上所述，本發(fā)明提供一種制品，該制品包括包裝材料和至少 一個(gè)西林瓶，所述西林瓶含有至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特 定部分或變體和指定緩沖劑和/或防腐劑的溶液，任選地在水性稀釋 液中，其中所述包裝材料包括標(biāo)示了上述溶液可在1、 2、 3、 4、 5、 6、 9、 12、 18、 20、 24、 30、 36、 40、 48、 54、 60、 66、 72小時(shí)或 更長(zhǎng)時(shí)間段內(nèi)保存的標(biāo)簽。本發(fā)明還包括一種制品，該制品包括包 裝材料、含至少一種凍干的GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變 體的笫 一個(gè)西林瓶以及含指定緩沖劑或防腐劑的水性稀釋液的笫二個(gè)西林瓶，其中所述包裝材料包括一個(gè)標(biāo)簽，指示患者如何將至少 一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體在水性稀釋液中重構(gòu)
以形成可在24小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間段內(nèi)保存的溶液。
根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分 或變體可通過重組方法生產(chǎn)，包括由哺乳動(dòng)物細(xì)胞或轉(zhuǎn)基因制品生 產(chǎn)，或者可由如本文所述或本領(lǐng)域所知的其它生物來源純化。
本發(fā)明產(chǎn)品中至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變 體量的范圍包括重構(gòu)后(如果是濕/干體系的話)產(chǎn)生約10 pg/ml至約 1000 mg/ml濃度的量，但更低和更高濃度也是可行的，取決于擬定 送遞載體，例如溶液制劑不同于透皮藥貼、肺、經(jīng)粘膜或滲透或賴: 量泵法。
優(yōu)選地，上述水性稀釋液任選地還包含藥物可接受防腐劑。優(yōu) 選防腐劑包括選自下列的防腐劑苯酚、間-曱酚、對(duì)-曱酚、鄰-曱 酚、氯曱酚、苯曱醇、對(duì)羥基苯曱酸烷基酯(甲酯、乙酯、丙酯、丁 酯等)、苯扎氯銨、氯化千乙氧銨、脫氫乙酸鈉和硫柳汞，或它們的 混合物。用于制劑中的防腐劑濃度是足以產(chǎn)生抗微生物作用的濃度。 該濃度取決于所選防腐劑，且可由技術(shù)人員容易地測(cè)定。
其它賦形劑，例如等滲劑、緩沖劑、抗氧化劑、防腐增強(qiáng)劑， 可任選和優(yōu)選地加入稀釋劑中。等滲劑，如甘油，通常以已知濃度 使用。優(yōu)選加入生理可耐受緩沖劑，以改善pH控制。所述制劑可覆 蓋大范圍的pH,如由約pH4至約pH 10，優(yōu)選范圍是約pH5至約pH 9,最優(yōu)選范圍為約pH 6.0至約pH 8.0。優(yōu)選地，本發(fā)明制劑具有約 6.8至約7.8之間的pH值。優(yōu)選的緩沖劑包括磷酸鹽緩沖劑，最優(yōu) 選磷酸鈉，尤其是磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。
其它添加劑，如藥物可接受增溶劑，如Tween20 (聚氧乙烯(20) 山梨糖醇酐單月桂酸酯)、Tween 40 (聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐單棕櫚 酸酯)、Tween 80 (聚氧乙烯pO)山梨糖醇酐單油酸酯)、Pluronic FM (聚 氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物)和PEG (聚乙二醇)或非離子表面活性劑如聚山梨醇酯20或80或泊洛沙姆184或188， Pluronic polyl、其 它嵌段共聚物和螯合劑如EDTA和EGTA,任選地可加入所述制劑 或組合物中，以減少聚集。如果使用泵或塑料容器給予所迷制劑， 那么這些添加劑尤其有用。藥物可接受的表面活性劑的存在減輕了 蛋白質(zhì)聚集的傾向。
本發(fā)明制劑可通過一種方法制備，該方法包括將至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體與選自以下的防腐劑在水性稀釋 劑中混合苯酚、間-曱酚、對(duì)-曱酚、鄰-曱酚、氯曱酚、苯曱醇、 對(duì)羥基苯曱酸烷基酯(甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等)、苯扎氯銨、氯化 千乙氧銨、脫氬乙酸鈉和硫柳汞或它們的混合物。使用常規(guī)溶解和 混合方法將至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體與防 腐劑在水性稀釋劑中混合。為制備合適制劑，例如，將測(cè)定量的至 少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的緩沖溶液與所需 防腐劑的緩沖溶液以 一定量組合，該量足以提供所需濃度的蛋白質(zhì) 和防腐劑。本領(lǐng)域一顧:技術(shù)人員應(yīng)知曉該方法的變化。例如，力口入 組分的順序、是否采用其它添加劑、制備該制劑的溫度和pH都是針 對(duì)所用濃度和給予途徑可優(yōu)化的因素。
要求保護(hù)的制劑可作為澄清溶液或雙西林瓶提供給患者，雙西 ^^f瓦含有一瓶?jī)龈傻闹辽僖环NGLP-1激動(dòng)劑或^^莫擬體或特定部分或 變體，其用含有水、防腐劑和/或賦形劑(優(yōu)選在水性稀釋液中的磷酸 鹽緩沖劑和/或鹽水和選定鹽)的笫二個(gè)西林瓶重構(gòu)。單溶液瓶或需重 構(gòu)的雙瓶均可重復(fù)使用多次，并可滿足患者治療的一個(gè)或多個(gè)周期， 因而可提供比現(xiàn)時(shí)可用治療方案更為便利的治療方案。
本發(fā)明要求保護(hù)的制品適用于在立即到24小時(shí)或以上的時(shí)間段 內(nèi)給予。因此，本發(fā)明要求保護(hù)的制品為患者提供了顯著益處。本 發(fā)明制劑任選地可在約2至4(TC的溫度下安全保存并長(zhǎng)時(shí)間保持蛋 白質(zhì)的生物活性，因而允許包裝標(biāo)簽標(biāo)示該溶液可在6、 12、 18、 24、 36、 48、 72或96小時(shí)或以上的時(shí)間段內(nèi)保存和/或使用。如采用防腐稀釋劑，則該標(biāo)簽可包括使用達(dá)1-12個(gè)月、半年、 一年半和/或兩 年中的至少一種。
可通過一種方法制備本發(fā)明的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或^^莫擬體 或特定部分或變體的溶液，所述方法包括將至少一種GLP-1激動(dòng)劑 或模擬體或特定部分或變體混合在水性稀釋液中?；旌鲜褂贸Ｒ?guī)溶 解和混合方法進(jìn)行。為制備合適的稀釋液，例如，以足以提供所需 濃度的蛋白質(zhì)和任選的防腐劑或緩沖液的量，將測(cè)定量的至少一種 GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的水溶液或緩沖液配伍。 本領(lǐng)域一般技術(shù)人員應(yīng)知曉該方法的變化。例如，加入組分的順序、 是否采用其它添加劑、制備該制劑的溫度和pH都是針對(duì)所用濃度和 給予途徑可優(yōu)化的因素。
要求保護(hù)的產(chǎn)品可以澄清溶液或雙西#木瓶提供給患者，雙西林 瓶含有一瓶?jī)龈傻闹辽僖环NGLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變 體，其用含有水性稀釋劑的第二個(gè)西林瓶重構(gòu)。單溶液瓶或需重構(gòu) 的雙瓶均可重復(fù)使用多次，并可滿足患者治療的一個(gè)或多個(gè)周期， 因而可提供比現(xiàn)時(shí)可用治療方案更為便利的治療方案。
可通過提供給藥房、診所或其它這種機(jī)構(gòu)和i殳施澄清溶液或雙 西林瓶，將要求保護(hù)的產(chǎn)品間接提供給患者，所述雙西林瓶含有一 瓶?jī)龈傻闹辽僖环NGLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體，其可 用含水性稀釋液的第二個(gè)西林瓶重構(gòu)。該情況下澄清溶液的大小可 達(dá)一升乃至更大，提供了一種大儲(chǔ)液器，可一次或多次從該儲(chǔ)液器 取回更小部分的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體 溶液，轉(zhuǎn)移到更小的西林瓶中，由藥房或診所提供給它們的顧客和/ 或患者。
含這些單瓶體系的公知裝置包括用于送遞溶液的筆式注射器裝 置，例如Humaject⑧、NovaPen 、 B-D Pen、 AutoPen⑧和OptiPen 。 含雙瓶體系的公知裝置包括可用于將凍干藥物在藥筒中重構(gòu)并送遞 該重構(gòu)溶液的筆式注射器系統(tǒng)，例如HumatroPen 。本發(fā)明要求保護(hù)的產(chǎn)品包括包裝材料。除管理機(jī)構(gòu)所要求的信 息外，該包裝材料還提供應(yīng)用該產(chǎn)品的條件。本發(fā)明的包裝材料向 患者提供說明書，指示將至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部
分或變體在水性稀釋液劑中重構(gòu)，以形成溶液和在2-24小時(shí)或更長(zhǎng) 的時(shí)間段內(nèi)使用該雙瓶、濕/干產(chǎn)品的溶液。對(duì)單瓶溶液產(chǎn)品而言， 標(biāo)簽標(biāo)示了該溶液可在2-96小時(shí)或更長(zhǎng)的時(shí)間段使用。本發(fā)明要求 保護(hù)的產(chǎn)品可用于人類藥品用途。
可通過一種方法制備本發(fā)明制劑，所述方法包括將至少 一種 GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體與選定緩沖劑混合，所述 緩沖劑優(yōu)選為含鹽水或選定鹽的磷酸緩沖劑。在水性稀釋液中混合 至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體和緩沖劑使用常 規(guī)溶解和混合方法進(jìn)行。為制備合適的制劑，例如，將測(cè)定量的至 少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的水溶液或緩沖液 與所需緩沖劑的水溶液以一定量配伍，該量足以提供所需濃度的蛋 白質(zhì)和緩沖劑。本領(lǐng)域一般技術(shù)人員應(yīng)知曉該方法的變化。例如， 加入組分的順序、是否采用其它添加劑、制備該制劑的溫度和pH都 是針對(duì)所用濃度和給予途徑可優(yōu)化的因素。
要求保護(hù)的穩(wěn)定或防腐制劑可作為澄清溶液或雙西林瓶提供給 患者，雙西林瓶含有一瓶?jī)龈傻闹辽僖环NGLP-1激動(dòng)劑或模擬體或 特定部分或變體，其用含有防腐劑或緩沖劑或賦形劑的水性稀釋液 的第二個(gè)西林瓶重構(gòu)。單溶液瓶或需重構(gòu)的雙瓶均可重復(fù)使用多次， 并可滿足患者治療的一個(gè)或多個(gè)周期，因而提供比現(xiàn)時(shí)可用治療方 案更為便利的治療方案。
本文描述的穩(wěn)定或防腐制劑或溶液中的至少一種GLP-1激動(dòng)劑 或模擬體或特定部分或變體可根據(jù)本發(fā)明通過多種送遞方法給予患
者，包括皮下(SC)或肌內(nèi)(IM)注射；透皮、肺、經(jīng)粘膜、植入、滲透 泵、藥筒、微量泵或技術(shù)人員了解、本領(lǐng)域周知的其它途徑。
治療應(yīng)用。本發(fā)明提供一種增加胰腺功能的方法，所述方法包括將有效量的至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體組合物給予需要其的 細(xì)胞、組織、器官或個(gè)體。GLP-1激動(dòng)劑或模擬體可促進(jìn)胰島分化、
增加P-細(xì)胞量和/或增加胰島素分泌。GLP-1激動(dòng)劑或模擬體可在試
管內(nèi)、體外或體內(nèi)給予。
例如，GLP-1激動(dòng)劑或模擬體治療可用于胰腺或胰島移植患者 或包含產(chǎn)胰島素細(xì)胞的其它細(xì)胞治療。在有或沒有設(shè)計(jì)用于增強(qiáng)細(xì) 胞存活或防止免疫排斥的裝置支持的情況下，可將細(xì)胞治療靜脈內(nèi)、 皮下、肌內(nèi)或腹膜內(nèi)傳送給患者。其還可用于手術(shù)去除部分胰腺后 的患者。GLP-1激動(dòng)劑或模擬體可在所述方法前或后給予活體胰腺 或胰島供體，以增加(3-細(xì)胞量和胰腺功能。其還可用于在移植前在體 外刺激P-細(xì)胞增殖，由此增加P-細(xì)胞量和防止移植后的胰島凋亡。其 還可用于培養(yǎng)產(chǎn)胰島素細(xì)胞的干細(xì)胞、祖細(xì)胞或前體細(xì)胞，以刺激 分化和增殖以及防止凋亡。
本發(fā)明提供一種在變成糖尿病的高風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體中延遲糖尿病發(fā)作 或防止糖尿病的方法，所述方法包括對(duì)需要其的個(gè)體給予有效量的 至少一種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體組合物。
本發(fā)明提供一種調(diào)節(jié)或治療至少 一種胰腺功能失調(diào)引起的疾病 或障礙的方法，所述方法包括對(duì)需要其的個(gè)體給予有效量的至少一 種GLP-1激動(dòng)劑或模擬體組合物。適合用本發(fā)明方法治療的病癥和 疾病包括但不限于糖尿病，例如l型糖尿病、2型糖尿病、妊娠期 糖尿病或青少年發(fā)病的成年型糖尿病(MODY),包括相關(guān)征兆和癥 狀，例如但不限于胰島素抗性、高血糖、低血糖、Cushing綜合癥、 黑色棘皮癥、脂肪萎縮型糖尿病、視網(wǎng)膜病、腎病、多神經(jīng)病、單 神經(jīng)病、自主神經(jīng)病變、潰瘍、腳潰瘍、關(guān)節(jié)問題、感染(例如真菌 或細(xì)菌)等。參見例如the Merck Manual,第12-17版，Merck & Company:
Rahway， NJ (1972, 1977， 1982， 1987, 1992, 1999), Pharmacotherapy Handbook, Wells等編輯,笫2版,Appleton and Lange, Stamford, Conn.
(1998,2001),每個(gè)文獻(xiàn)均通過引用整體結(jié)合到本文中。其它非限制性胰腺病癥包括胰腺炎、胰腺腫瘤或胰腺癌。
本發(fā)明提供一種用于調(diào)節(jié)或治療導(dǎo)致高血糖的至少 一種代謝障 礙的方法。這種障礙的非限制性實(shí)例包括與高血壓相關(guān)的硬化和葡 萄糖耐受受損。GLP-1激動(dòng)劑或模擬體治療還可與已知誘發(fā)高血糖 和/或糖尿病的其它藥物聯(lián)用。這種藥物的非限制性實(shí)例包括免疫抑
制藥物，例如在器官移植中給予的環(huán)孢素或FK-506,指定用于AIDS 患者的蛋白酶抑制劑和用于治療精神分裂癥的非典型抗精神病藥。
本發(fā)明還提供調(diào)節(jié)或治療細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者中的 至少 一種心血管病的方法，該心血管病包括但不限于以下的至少一 種心臟暈厥綜合征、心肌梗塞、充血性心力衰竭、中風(fēng)、缺血性 中風(fēng)、出血、動(dòng)脈硬化、動(dòng)脈粥樣石更化、糖尿病性動(dòng)脈石更化病、高 血壓、動(dòng)脈高壓、腎血管性高血壓、暈厥、休克、心血管系統(tǒng)梅毒、 心力衰竭、肺源性心臟病、原發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、心律失常、心房異 位搏動(dòng)、心房樸動(dòng)、心房顫動(dòng)(持續(xù)或陣發(fā)的)、紊亂性或多源性房性 心動(dòng)過速、規(guī)律性狹窄QRS心動(dòng)過速、特殊心律失常、心室纖顫、 His束心律失常、房室傳導(dǎo)阻滯、束支傳導(dǎo)阻滯、心肌局部缺血失調(diào)、 冠心病、心絞痛、心肌梗塞、心肌病、擴(kuò)張充血性心肌病、限制性 心肌病、辮膜心臟病、心內(nèi)膜炎、心包病、心臟腫瘤、主動(dòng)脈和周 圍動(dòng)脈瘤、主動(dòng)脈夾層、主動(dòng)脈炎癥、腹主動(dòng)脈及其分支阻塞、外 周血管失調(diào)、閉塞性動(dòng)脈失調(diào)、外周動(dòng)脈粥樣硬化病、血栓閉塞性 脈管炎、功能性外周動(dòng)脈失調(diào)、雷諾氏現(xiàn)象和疾病、手足發(fā)紺、紅 斑性肢痛癥、靜脈病、血栓靜脈炎、曲張靜脈、動(dòng)靜樂;K瘺、、淋巴水 肺、脂肪水腫、不穩(wěn)定心絞痛、再灌注損傷、體外冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù) 后綜合征、局部缺血-再灌注損傷等。這種方法任選地可包括對(duì)需要 這種調(diào)節(jié)、處理或治療的細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者給予有效 量的含至少一種GLP-激動(dòng)劑或模擬體或特定部分或變體的組合物或 藥物組合物。
本發(fā)明的任何方法都可包括對(duì)需要這種調(diào)節(jié)、處理或治療的細(xì)胞、組織、器官、動(dòng)物或患者給予有效量的含至少一種GLP-激動(dòng)劑
或模擬體或特定部分或變體的組合物或藥物組合物。這種方法任選
地還可包括共同給予或聯(lián)合療法，其中所述至少一種GLP-激動(dòng)劑或 模擬體、其特定部分或變體的給予還包括在其之前、同時(shí)和/或之后 給予選自以下的至少一種糖尿病或胰島素代謝相關(guān)藥物、TNF拮 抗劑(例如但不限于TNF抗體或片段、可溶性TNF受體或片段、其 融合蛋白，或小分子TNF拮抗劑)、抗風(fēng)濕藥、肌肉松弛劑、麻醉藥、 非類固醇抗炎藥(NSAID)、鎮(zhèn)痛藥、麻醉劑、鎮(zhèn)靜劑、局部麻醉劑、 神經(jīng)肌肉阻斷劑、抗菌劑(例如氨基糖苷類、抗真菌劑、抗寄生蟲藥、 抗病毒藥物、氨基曱酰、頭孢菌素、氟喹諾酮、大環(huán)內(nèi)酯、青霉素、 磺胺、四環(huán)素、其它抗菌劑)、抗銀屑病藥、皮質(zhì)類固醇、促蛋白合 成類固醇、糖尿病相關(guān)藥物、礦物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、曱狀腺藥物、維 生素、鈣相關(guān)激素、止瀉藥、鎮(zhèn)咳藥、止吐劑、抗?jié)兯?、緩瀉劑、 抗凝血?jiǎng)?、促紅細(xì)胞生成素(例如GLP-letin a)、非拉司汀(例如G-CSF、 Neupogen)、沙格司亭(GM-CSF、 Leukine)、免疫、免疫球蛋白、 免疫抑制劑(例如巴利昔單抗、環(huán)孢素、達(dá)克珠單抗)、生長(zhǎng)激素、激 素替代藥物、雌激素受體調(diào)節(jié)物、擴(kuò)瞳劑、睫狀肌麻痹藥、烷基化 藥物、抗代謝物、有絲分裂抑制劑、放射性藥物、抗抑郁藥、抗躁 狂劑、抗精神病藥、抗焦慮藥、催眠藥、擬交感神經(jīng)藥、興奮劑、 多奈哌齊、塔克林、哮喘藥、(3激動(dòng)劑、吸入型類固醇、白細(xì)胞三烯 抑制劑、曱基黃嘌呤、色甘酸、腎上腺素或類似物、鏈球菌DNA酶 a (Pulmozyme)、細(xì)胞因子或細(xì)胞因子拮抗劑。合適劑量是本領(lǐng)域熟 夕、口的。參見侈寸^口 Wells等編4專，Pharmacotherapy Handbook,笫2版， Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tamscon Publishing, Loma Linda, CA (2000),上述參考文獻(xiàn)每個(gè)均通過引用
整體結(jié)合到本文中。
適用于本發(fā)明組合物、聯(lián)合治療、共同給予、裝置和/或方法的TNF拮抗劑(還包括本發(fā)明的至少一種抗體、其特定部分和變體)包括 但不限于抗TNF抗體、其配體結(jié)合片段和特異性結(jié)合TNF的受體 分子；阻止和/或抑制TNF合成、TNF釋放或其對(duì)把細(xì)胞的作用的化 合物，例如沙利度胺、替尼達(dá)普、磷酸二酯酶抑制劑(例如己酮可可 堿和咯利普蘭)、A2b腺苷受體激動(dòng)劑和A2b腺苷受體增強(qiáng)劑；阻止 和/或抑制TNF受體信號(hào)傳導(dǎo)的化合物，例如促分裂原活化蛋白(MAP) 激酶抑制劑；阻斷和/或抑制膜TNF裂解的化合物，例如金屬蛋白酶 抑制劑；阻斷和/或抑制TNF活性的化合物，例如血管緊張肽轉(zhuǎn)化酶 (ACE)抑制劑(例如卡托普利)；和阻斷和/或抑制TNF生成和/或合成 的化合物，例如MAP激酶抑制劑。
本文所用的"腫瘤壞死因子抗體"、"TNF抗體"、"TNFa抗 體"或片段等降低、阻斷、抑制、消除或干擾體外、原位和/或優(yōu)選 體內(nèi)的TNFa活性。例如，合適的本發(fā)明TNF人抗體可結(jié)合TNFa， 并包括抗TNF抗體、其抗原結(jié)合片段和特異性結(jié)合TNFa的特定突 變體或其結(jié)構(gòu)域。合適的TNF抗體或片段也可降低、阻斷、消除、 干擾、阻止和/或抑制TNF RNA、 DNA或蛋白質(zhì)合成、TNF釋放、TNF 受體信號(hào)傳導(dǎo)、膜TNF裂解、TNF活性、TNF生產(chǎn)和/或合成。
嵌合抗體cA2由高親和性中和性小鼠抗人TNFa IgGl抗體(稱A2) 的抗原結(jié)合可變區(qū)和人IgGl恒定區(qū)(K免疫球蛋白)組成。人IgGl Fc 區(qū)改善同種異型抗體效應(yīng)子功能，增加抗體的循環(huán)血清半衰期，并 降低抗體的免疫原性。嵌合抗體cA2的親和力和表位特異性來源于 鼠抗體A2的可變區(qū)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，編碼鼠抗體A2可變 區(qū)的核酸的優(yōu)選來源是A2雜交瘤細(xì)胞系。
嵌合A2 (cA2)以劑量依賴方式中和天然和重組人TNFa這二者 的細(xì)胞毒效應(yīng)。由嵌合抗體cA2與重組人TNFa的結(jié)合測(cè)定計(jì)算出嵌 合抗體cA2的親和常數(shù)為1.04xl01Q M-、通過竟?fàn)幰种茰y(cè)定單克隆 抗體特異性和親和力的優(yōu)選方法可見于Harlow等，^""6o^es爿 丄aZ)orato j Mawwa/, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold SpringHarbor, New York, 1988; Colligan等編輯，C鮮eW尸ratoco/s & /m膽wo/ogy, Greene Publishing Assoc and Wiley Interscience, New York, (1992-2005), Kozbor等，/mm朋o/ To^y, 4 72-79 (1983), Ausubel等編 輯，Cw/re/^尸ratocoAs z力Mo/ecw/ar Wiley Interscience, New
York (1987-2005);和Muller, MeA.五wz少mo/., 92.589-601 (1983),這 些參考文獻(xiàn)通過引用整體結(jié)合到本文中。
在一個(gè)具體實(shí)施方案中，鼠單克隆抗體A2由稱為cl34A的細(xì) 胞系生產(chǎn)。嵌合抗體cA2由稱為cl68A的細(xì)胞系生產(chǎn)。本領(lǐng)域已描 述了可用于本發(fā)明的其它單克隆抗TNF抗體的實(shí)例(參見例如美國(guó)專 利笫5，231,024號(hào)，Moller, A等，qytoh'"e 2(3) 162-169 (1990),美國(guó)申 請(qǐng)?bào)?7/943,852號(hào)(1992年9月11日提交)，Rathjen等，國(guó)際
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