專利名稱：純物理法提取高純度sod的方法
所屬領域本發(fā)明涉及一種提取SOD的方法，特別是純物理法提取高純度SOD的方法。
背景技術：
SOD即超氧化歧化酶，英文全稱Super Oxide Dismutase，它是國際界公認的能夠有效清除自由基的酶，是人體中不可缺少的具有特殊生物活性的酶，它能分解自由基，是保護健康細胞不受自由基侵害的安全網(wǎng)，當SOD與自由基相遇時，就會將自由基變成對人體無害的水分子和氧分子，進而提高人體的免疫力，人體中的SOD會隨著年齡的增長而減少，為了保持健康，我們就需要從體外攝取SOD，但我們所吃普通食物，由于烹飪、加工和食用后胃酸的破壞，再加之含量極少，我們無法從食物中攝取SOD。
SOD還是一種廣泛存在于動植物中的藥用酶，在各國醫(yī)學上有極為廣泛的用途?？茖W研究發(fā)現(xiàn)，SOD在防止癌細胞擴散和延緩衰老方面的功效顯著，這一研究結果使SOD在醫(yī)學界引起廣泛關注?，F(xiàn)有SOD的提取方法，大部分都采用有毒藥劑和有毒的有機溶劑，對人們的人身安全造成威脅，同時帶來環(huán)境污染，而且工藝復雜，成本高，提取的SOD純度不高，不適宜于大規(guī)模生產(chǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的即在于克服現(xiàn)有技術的缺點，提供一種成本低，無毒、無害，工藝簡單的純物理法提取高純度SOD的方法，不使用化學溶劑，可大規(guī)模生產(chǎn)。
本發(fā)明的目的通過以下技術方案來實現(xiàn)純物理法提取高純度SOD的方法，它包括以下步驟(1)溶血熱變首先取新鮮動物血液為原料，用鈷60輻照10～15分鐘，用于預防瘋牛病、禽流感等高致病性傳染病的傳播，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝15～25∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置1～5小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素C、維生素K、維生素E一種或一種以上的復合維生素保護劑，800～1200轉/分攪拌破碎約1小時，在70～80℃水浴或恒溫器中熱變25～35分鐘，速凍，靜置1～5小時，除去沉淀物，收集清明濾液；(2)超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；(3)純化濃縮液在水浴或恒溫器中，70～80℃熱變15～25分鐘后，調PH值為5.5，3～8分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
通過上面的敘述可以看出，本發(fā)明具有以下優(yōu)點采用純物理法提取，沒有化學溶劑，無毒無害，可作為藥用、注射用，保證了人身安全，同時保護了環(huán)境，工藝簡單，成本低廉，可大規(guī)模進行工業(yè)化生產(chǎn)，制得的SOD純度高，每毫克比活性高達6000單位。
通過實驗證實1、試驗材料1.1樣品(A)SOD樣品市場上購買用沉淀法提取的藍綠色粉末，人體推薦量為6000μ/人；樣品(B)SOD樣品由西藏天使藏醫(yī)科技有限公司用純物理法提取的藍綠色粉末，人體推薦量為6000μ/人；1.2實驗動物SD種大鼠由國家醫(yī)藥總局四川抗菌素工業(yè)研究所實驗動物中心提供(合格證號川實動管質第95000247號)；2、實驗方法2.1 150-180g成年大鼠，全雌，隨機分為兩組，每組20只，樣品(A)(B)分別配置成活性為1000μ/M重蒸水溶液，按IMI/100gbw空腹灌胃。分別于灌胃后1小時、2小時、4小時、7小時分批處死大鼠，收集血液進行SOD測試；2.2檢測方法SOD測試盒由南京建成生物工程研究所一分所提供；測試方法取血清0.4ml加0.1SDS水溶液，混勻后置37℃水浴30分鐘，取出后冰箱冷至4℃，加入KCL0.05ml，充分混勻后放入冰箱4℃冷凍30分鐘，取出后以3000轉/分離心。10分鐘后，取上清液測試，取上清液30μl，分別加入上述2.1中不同時間取的試劑，用旋渦混勻器充分混勻，37℃水浴中恒溫40分鐘，再加入顯色劑，10分鐘后蒸餾水調零在752分光光度計波長550mm處比色。
3、實驗結果見下表SOD活性測試結果單位Nμ/ml
實驗結果表明，兩組SOD活力于2小時后在血液中逐漸升高，其中，A組活力在7小時時呈下降，而B組活力7小時后保存較穩(wěn)定。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發(fā)明做進一步的描述實施例1首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照10分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝15∶1的體積比加入肝素，靜置1小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素C、維生素K的復合維生素保護劑，800轉/分攪拌破碎1.1小時，在70℃水浴中熱變35分鐘，速凍，靜置1小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在恒溫器中，70℃熱變25分鐘后，調PH值為5.5，8分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
實施例2首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照15分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝20∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置2小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素C、維生素K、維生素E的復合維生素保護劑，1000轉/分攪拌破碎1小時，在75℃恒溫器中熱變30分鐘，速凍，靜置2小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在水浴中，75℃熱變20分鐘后，調PH值為5.5，5分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
實施例3首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照12分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝25∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置5小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素C、維生素E的復合維生素保護劑，1200轉/分攪拌破碎0.9小時，在80℃水浴中熱變25分鐘，速凍，靜置5小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在水浴中，80℃熱變15分鐘后，調PH值為5.5，3分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
實施例4首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照14分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝18∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置3小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為維生素C保護劑，900轉/分攪拌破碎1.05小時，在72℃恒溫器中熱變32分鐘，速凍，靜置3小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在恒溫器中，78℃熱變17分鐘后，調PH值為5.5，4分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
實施例5首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照13分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝23∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置4小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素K、維生素E的復合維生素保護劑，1100轉/分攪拌破碎約0.95小時，在77℃水浴中熱變27分鐘，速凍，靜置4小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在恒溫器中，73℃熱變23分鐘后，調PH值為5.5，7分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
實施例6首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照11分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝17∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置1.5小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為維生素K保護劑，850轉/分攪拌破碎1小時，在73℃水浴中熱變28分鐘，速凍，靜置2小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在恒溫器中，77℃熱變18分鐘后，調PH值為5.5，6分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
實施例7首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照15分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝22∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置2.5小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為維生素E保護劑，1050轉/分攪拌破碎1小時，在76℃恒溫器中熱變26分鐘，速凍，靜置3.5小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在水浴中，74℃熱變22分鐘后，調PH值為5.5，5分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
權利要求
1.純物理法提取高純度SOD的方法，其特征在于它包括以下步驟(1)溶血熱變首先取新鮮動物血液為原料，用鈷60輻照10～15分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝15～25∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置1～5小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素C、維生素K、維生素E一種或一種以上的復合維生素保護劑，800～1200轉/分攪拌破碎約1小時，在70～80℃水浴或恒溫器中熱變25～35分鐘，速凍，靜置1～5小時，除去沉淀物，收集清明濾液；(2)超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；(3)純化濃縮液在水浴或恒溫器中，70～80℃熱變15～25分鐘后，調PH值為5.5，3～8分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
2.根據(jù)權利要求1所述的純物理法提取高純度SOD的方法，其特征在于它包括以下步驟首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照10分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝15∶1的體積比加入肝素，靜置1小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素C、維生素K的復合維生素保護劑，800轉/分攪拌破碎1.1小時，在70℃水浴中熱變35分鐘，速凍，靜置1小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在恒溫器中，70℃熱變25分鐘后，調PH值為5.5，8分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
3.根據(jù)權利要求1所述的純物理法提取高純度SOD的方法，其特征在于它包括以下步驟首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照15分鐘在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝20∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置2小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素C、維生素K、維生素E的復合維生素保護劑，1000轉/分攪拌破碎1小時，在75℃恒溫器中熱變30分鐘，速凍，靜置2小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在水浴中，75℃熱變20分鐘后，調PH值為5.5，5分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
4.根據(jù)權利要求1所述的純物理法提取高純度SOD的方法，其特征在于它包括以下步驟首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照12分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝25∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置5小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素C、維生素E的復合維生素保護劑，1200轉/分攪拌破碎0.9小時，在80℃水浴中熱變25分鐘，速凍，靜置5小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在水浴中，80℃熱變15分鐘后，調PH值為5.5，3分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
5.根據(jù)權利要求1所述的純物理法提取高純度SOD的方法，其特征在于它包括以下步驟首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照14分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝18∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置3小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為維生素C保護劑，900轉/分攪拌破碎1.05小時，在72℃恒溫器中熱變32分鐘，速凍，靜置3小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在恒溫器中，78℃熱變17分鐘后，調PH值為5.5，4分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
6.根據(jù)權利要求1所述的純物理法提取高純度SOD的方法，其特征在于它包括以下步驟首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照13分鐘在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝23∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置4小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為包含維生素K、維生素E的復合維生素保護劑，1100轉/分攪拌破碎約0.95小時，在77℃水浴中熱變27分鐘，速凍，靜置4小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在恒溫器中，73℃熱變23分鐘后，調PH值為5.5，7分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
7.根據(jù)權利要求1所述的純物理法提取高純度SOD的方法，其特征在于它包括以下步驟首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照11分鐘在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝17∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置1.5小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為維生素K保護劑，850轉/分攪拌破碎1小時，在73℃水浴中熱變28分鐘，速凍，靜置2小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在恒溫器中，77℃熱變18分鐘后，調PH值為5.5，6分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
8.根據(jù)權利要求1所述的純物理法提取高純度SOD的方法，其特征在于它包括以下步驟首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照15分鐘，在此血液中按新鮮血液∶抗凝劑＝22∶1的體積比加入抗凝劑，抗凝劑為肝素，靜置2.5小時后，倒去上層血清，在紅細胞中加入1倍體積的維生素保護劑，維生素保護劑為維生素E保護劑，1050轉/分攪拌破碎1小時，在76℃恒溫器中熱變26分鐘，速凍，靜置3.5小時，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)截留分子量為6000的中孔纖維超濾機不斷加入凍純水，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液在水浴中，74℃熱變22分鐘后，調PH值為5.5，5分鐘后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。
全文摘要
本發(fā)明公開了純物理法提取高純度SOD的方法，首先溶血熱變?nèi)⌒迈r動物血液為原料，用鈷60輻照10～15分鐘，再加入肝素作為抗凝劑，靜置，倒去上層血清，在紅細胞中加入維生素保護劑，攪拌破碎，熱變，速凍，靜置，除去沉淀物，收集清明濾液；超濾濃縮將清明濾液經(jīng)中孔纖維超濾機，除去小分子雜質后再經(jīng)濃縮得濃縮液；純化濃縮液熱變后，調pH值后速凍離心，超濾濃縮，即得高純度SOD。本發(fā)明具有以下優(yōu)點采用純物理法提取，沒有化學溶劑，無毒無害，可作為藥用、注射用，保證了人身安全，同時保護了環(huán)境，工藝簡單，成本低廉，可大規(guī)模進行工業(yè)化生產(chǎn)，制得的SOD純度高，每毫克比活性高達6000單位。
文檔編號C12N9/08GK1884504SQ20061002124
公開日2006年12月27日 申請日期2006年6月26日 優(yōu)先權日2006年6月26日
發(fā)明者陳穎敏 申請人:陳穎敏