專利名稱：微生物轉化虎杖材料提取高純白藜蘆醇的工藝的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物轉化技術及植物有效成份提取領域，特別是提供一種利用微生物轉化虎杖材料來提取高純白藜蘆醇的工藝背景技術 虎杖(Polygonum cuspidatum Sie bet Zucc)為蓼科蓼屬小灌木，為我國傳統(tǒng)中藥，現代藥學研究證明其白藜蘆醇(Resveratrol)(3，4’，5-三羥基二苯乙烯)具有多種藥理作用，主要表現在抗癌和治療心血管疾病等方面。
查新發(fā)現，國內外關于“從虎杖中提取白藜蘆醇”方面的文獻和專利已有報道。如中國專利CN1251361與法國專利FR2795964的提取工藝為在粉末狀虎杖原料中加入復合酶在恒溫下進行酶解反應，48-72小時獲得酶解原料，再用溶劑萃取、濃縮獲得含白藜蘆醇的半成品，置24-120d時，并攪拌，然后用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，再經進一步純化處理，制得白藜蘆醇和白藜蘆醇甙。《天津藥學》(1999.11.07)發(fā)表的“虎杖的化學成份、藥理作用與提取分離”是將虎杖根粗粉用乙醇回流提取，回收乙醇至浸膏狀，加水溶解、過濾，水液濃縮，濃縮液用聚酰胺層析，再用20％乙醇洗脫得到白藜蘆醇甙?！短旖蜉p工業(yè)學院學報》(1999。04)發(fā)表的姚寶書等人的論文，介紹了從葡萄皮渣中提取白藜蘆醇的研究；中國專利CN1239141公開了一種從葡萄莖根葉提取白藜蘆醇產品。
以上可知，現有的提取白藜蘆醇的工藝方法較多，但總的來說，現有工藝均技術相對陳舊，生產周期長，成本高，產品得率和質量不高，操作繁瑣。

發(fā)明內容
為克服上述缺點，本發(fā)明提供一種從虎杖中提取白藜蘆醇的工藝，其利用生物轉化技術提高虎杖白藜蘆醇含量，利用微波低溫、快速提取技術，簡化了工藝和操作程序，縮短了生產周期，降低了生產成本，提高了產品質量。
為達到上述目的，本發(fā)明的工藝步驟包括(1)先將干燥虎杖根莖粉碎，過80目篩，加入重量為虎杖重量4-5倍的水，用專用微生物在15℃-45℃下培養(yǎng)時間為24-84小時，使虎杖白藜蘆醇類似物轉化為白藜蘆醇，專用微生物為酵母或酵母+青霉素產黃青霉種或酵母+短小芽孢桿菌。
(2)用40％乙醇與烴基醇混合溶劑微波萃取，40％乙醇∶烴基醇＝95∶5，微波頻率為3000-2000MHz，萃取時間30-60分鐘，溫度40℃-60℃。
(3)離心過濾，然后在45℃-60℃，真空度小于65cmHg進行濃縮。
(4)柱層析分離，濃縮，結品，最后得純度大于95％的白藜蘆醇和一定純度的副產物大黃索。
步驟(1)中，所述專用微生物最好為酵母時，加入量為虎杖和水混合液的1-5％。
步驟(1)中，所述專用微生物為酵母+青霉素產黃青霉種時，酵母∶青霉素產黃青霉種＝5-10∶1，酵母+青霉素產黃青霉種的加入量為虎杖和水混合液的1-5％。
步驟(1)中，所述專用微生物為酵母+短小芽孢桿菌時，酵母∶短小芽孢桿菌＝5-10∶1，酵母+短小芽孢桿菌的加入量為為虎杖和水混合液的1-5％。
步驟(2)中，所述烴基醇為5％4-甲基-2-戊醇。
本發(fā)明采用高效生物轉化技術，提高虎杖材料中白黎蘆醇含量10-20倍。同時，采用微波萃取法，與常規(guī)溶劑提取法相比，大大縮短了提取時間，且提取效率高，避免了常規(guī)溶劑提取中白藜蘆醇易分解的不足，同時采用層析、結晶等分離、精制技術，獲得大于95％的白藜蘆醇和一定純度副產物大黃素二種產品。
具體實施例方式
實施例1一種微生物轉化虎杖材料提取高純白藜蘆醇的工藝，具體步驟為(1)將陰干虎杖根莖粉碎，過80目篩，稱500g虎杖粉末，加入2000克水，混勻；(2)在虎杖粉和水混合液中100克酵母，在溫度30℃下培養(yǎng)28小時，使虎杖白藜蘆醇類似物轉化為白藜蘆醇；(3)用40％乙醇∶5％4-甲基-2-戊醇＝95∶5作為提取溶劑，用微波萃取，萃取時間1次/min×5次，每次中間間隔10min左右，并攪拌；(4)離心過濾，過濾液在45℃-50℃溫度、65cmHg真空度下進行濃縮。
(5)柱層折分離，濃縮、結晶、冷凍干燥，最后分別得純度95.1％的白葬蘆醇2.51g，一定純度副產品大黃索3.03g。
實施例2生物轉化專用微生物采用酵母+青霉素產黃青霉種，酵母∶青霉素產黃青霉種＝5-10∶1，酵母+青霉素產黃青霉種的加入量為虎杖和水混合液的1-5％，其它步驟同實施例1。
實施例3生物轉化專用微生物采用酵母+短小芽孢桿菌，酵母∶短小芽孢桿菌＝5-10∶1，酵母+短小芽孢桿菌的加入量為為虎杖和水混合液的1-5％，其它步驟同實施例1。
權利要求
1.一種微生3物轉化虎杖材料提取高純白藜蘆醇的工藝，其特征在于，工藝步驟包括(1)先將干燥虎杖根莖粉碎，過80目篩，加入重量為虎杖重量4-5倍的水，用專用微生物在15℃-45℃下培養(yǎng)時間為24-84小時，使虎杖白藜蘆醇類似物轉化為白藜蘆醇，專用微生物為酵母或酵母+青霉素產黃青霉種或酵母+短小芽孢桿菌。(2)用40％乙醇與烴基醇混合溶劑微波萃取，40％乙醇∶烴基醇＝95∶5，微波頻率為3000-2000MHz，萃取時間30-60分鐘，溫度40℃-60℃。(3)離心過濾，然后在45℃-60℃，真空度小于65cmHg進行濃縮。(4)柱層析分離，濃縮，結品，最后得純度大于95％的白藜蘆醇和一定純度的副產物大黃索。
2.根據權利要求1所述的微生物轉化虎杖材料提取高純白藜蘆醇的工藝，其特征在于，步驟(1)中，所述專用微生物為酵母時，加入量為虎杖和水混合液的1-5％。
3.根據權利要求1所述的微生物轉化虎杖材料提取高純白藜蘆醇的工藝，其特征在于，所述專用微生物為酵母+青霉素產黃青霉種時，酵母∶青霉素產黃青霉種＝5-10∶1，酵母+青霉素產黃青霉種的加入量為虎杖和水混合液的1-5％。
4.根據權利要求1所述的微生物轉化虎杖材料提取高純白藜蘆醇的工藝，其特征在于，所述專用微生物為酵母+短小芽孢桿菌時，酵母∶短小芽孢桿菌＝5-10∶1，酵母+短小芽孢桿菌的加入量為為虎杖和水混合液的1-5％。
5.根據權利要求1所述的微生物轉化虎杖材料提取高純白藜蘆醇的工藝，其特征在于，步驟(2)中，所述烴基醇為5％4-甲基-2-戊醇。
全文摘要
本發(fā)明提供一種微生物轉化虎杖材料提取高純白藜蘆醇的工藝，其采用專用微生物對虎杖材料進行生物轉化，使虎杖白藜蘆醇類似物轉化為白藜蘆醇，利用微波低溫、快速提取技術進行白藜蘆醇提取。本發(fā)明可提高虎杖材料中白黎蘆醇含量10－20倍。同時大大縮短了提取時間，且提取效率高，避免了常規(guī)溶劑提取中白藜蘆醇易分解的不足，同時采用層析、結晶等分離、精制技術，獲得大于95％的白藜蘆醇和一定純度副產物大黃素兩種產品。
文檔編號C12P39/00GK1896255SQ200610031850
公開日2007年1月17日 申請日期2006年6月17日 優(yōu)先權日2006年6月17日
發(fā)明者曹庸, 于華忠 申請人:曹庸, 于華忠